CN109694927A - 一种hpv病毒的引物体系及其检测方法和应用 - Google Patents
一种hpv病毒的引物体系及其检测方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用，该HPV病毒具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.12所示的核苷酸序列的探针二。本发明的方法采用荧光检测，对HPV病毒进行精确评估和鉴定，能够快速检测HPV病毒。
Description
技术领域
本发明涉及HPV病毒检测方法，具体涉及一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用。
背景技术
HPV病毒是多种疾病的病原体，尤其是宫颈癌恶性肿瘤的病原体，是宫颈癌的最直接诱因。全世界范围内HPV感染十分普遍，HPV亚型已超过100种，HPV是威胁全球的病毒，全球总感染率达到10％。我国HPV病毒流行率在世界范围内属于较高水平，中国HPV病毒总感染率已经超过10％，中国高危型HPV病毒流行率在30％左右。高危型HPV病毒造成宫颈癌以及其它疾病，在中国高危型HPV携带者有几千万人口，甚至感染人数仍在逐年上升。HPV病毒在中国造成的包括宫颈癌在内的各种疾病严重威胁着中国人(尤其是中国妇女们)的健康和生命，目前有近千万之多疾病患者。
从最初Harald zur Hausen博士(2008年诺贝尔生理学或医学奖获得者)在宫颈癌中发现16型和18型人类乳头状瘤病毒(HPV)开始，目前已经被定义分类的HPV亚型已超过100种，世界各地流行的亚型存在差异。HPV已经被明确为宫颈癌的病原体。
对宫颈癌的防治已基本形成了共识：(1)病因明确的癌症：HPV病毒感染所致；(2)能通过早期检测发现HPV病毒，能预防和治疗的癌症；(3)唯一有望通过免疫接种的方法来全面预防和根除的第一个恶性肿瘤。从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展成为宫颈癌大约需要5-10年，且这段时间内患者没有明显的症状，一旦发现症状时，可能已经发生了浸润性癌变。
因此，进行HPV的检测对于宫颈癌以及其它疾病的预防和早期诊断以及治疗有重要意义。
目前，国内采用的病毒诊断方法主要包括：杂交捕获、基因芯片、荧光PCR。以上方法存在对医院和第三方检测实验室条件要求较高，从病人取样不方便，检测操作复杂和价格较高的缺点，限制了对HPV病毒的健康普遍筛查。
从对HPV病毒预防性和治疗性诊断角度讲，仅中国国内现有的诊断市场就已经超过1000亿人民币。美国市场研究机构Markets and Markets发布的最新研究报告显示，2020年全球HPV病毒致病以及宫颈癌筛查市场将达到几百亿美元。
综上所述，家庭个性化HPV病毒检测尚难以实现，主要是由于现有技术(例如，杂交捕获、基因芯片、荧光PCR)的限制和存在的问题，例如样品容易污染，检测条件要求高，检测操作复杂，仪器和试剂耗材昂贵。
发明内容
本发明的目的是提供一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用，该方法解决了现有的方法检测条件要求高且耗时长的问题，能够快速、高效检测HPV病毒。
为了达到上述目的，本发明提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SEDID NO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED IDNO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED IDNO.12所示的核苷酸序列的探针二。
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
本发明还提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SED ID NO.2所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.13所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.14所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.15所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.16所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.17所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.18所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.19所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.12所示的核苷酸序列的探针二。
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
本发明还提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SED ID NO.3所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.20所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.21所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.22所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.23所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.24所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.25所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.26所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.27所示的核苷酸序列的探针二。
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
本发明还提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.28所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.29所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.30所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.31所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.32所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.33所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.34所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.27所示的核苷酸序列的探针二。
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
本发明还提供了一种HPV病毒的检测试剂盒，该试剂盒包含：如所述的引物体系。
本发明还提供了一种HPV病毒的检测方法，该方法包含：将HPV病毒的引物体系、待检测的HPV样品、等温扩增缓冲液和MgSO4预混合，将混合物加热孵育，待孵育结束后冷却；将dNTPs、dUTP、DNA聚合酶、Antarctic Thermolabile UDG、D-(+)-海藻糖和无核酸酶水混合，得到酶混合物；向所述的混合物中加入酶混合物，加热进行反应，检测荧光信号；若有荧光，则待检测的HPV样品中含有HPV病毒；若无荧光，则待检测的HPV样品中不含有HPV病毒。
其中，检测具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED ID NO.5～SED ID NO.12所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SED ID NO.2所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED IDNO.12～SED ID NO.19所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SED ID NO.3所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED ID NO.20～SED ID NO.27所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED ID NO.27～SED ID NO.34所示的核苷酸序列的引物体系。
优选地，加入酶混合物后，在60～70℃加热进行反应，检测荧光信号。
优选地，所述DNA聚合酶包含：Bst 2.0DNA聚合酶；所述混合物和酶混合物的体积比为9：16。
本发明还提供了一种HPV病毒的检测方法，该方法包含：将待检测的DNA模板、dNTPs、DNA聚合酶、甜菜碱、MgSO4、HPV病毒的引物体系和等温扩增缓冲液混合，用缓冲液和ddH2O调整反应体积，得到混合物；将混合物加热，反应在加热下进行；若有荧光，则待检测的DNA模板含有HPV病毒的核苷酸序列；若无荧光，则待检测的DNA模板不含HPV病毒的核苷酸序列。
其中，检测具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED ID NO.5～SED ID NO.12所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SED ID NO.2所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED IDNO.12～SED ID NO.19所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SED ID NO.3所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED ID NO.20～SED ID NO.27所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SED ID NO.27～SED ID NO.34所示的核苷酸序列的引物体系。
优选地，在加入DNA聚合酶之前，先将DNA模板加热至95℃，以激活酶；所述DNA聚合酶包含：Bst 2.0DNA聚合酶；所述反应在60～70℃下进行。
该方法还包含：进行阴性对照实验，将待检测的DNA模板替换为水。
本发明的HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用，解决了现有的方法检测条件要求高且耗时长的问题，具有以下优点：
(1)本发明的HPV病毒的和检测方法采用荧光检测，通过荧光或颜色观察以识别HPV病毒，还可一次性加液，操作简单；
(2)现有的荧光PCR法检测时间为2小时左右，PCR-反向点杂交法需要的时间为5小时以上，而本发明不需要PCR扩增，只需一次反应，40分钟左右，检测速度明显加快；
(3)本发明的检测灵敏度高，检测的DNA的拷贝数在一个数量级也能响应；
(4)本发明无特殊仪器即可检测，但现有的荧光PCR法需要PCR荧光定量仪器，PCR-反向点杂交法需要PCR DNA放大仪、分子杂交仪等仪器，成本高。
附图说明
图1为本发明实施例1和2的荧光结果图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种HPV病毒(表示为病毒HPV16v2-3)的引物体系，该病毒HPV16v2-3具有如SEDID NO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：上游内引物HPV16v2-3_FIP(SED ID NO.5)、下游内引物HPV16v2-3_BIP(SED ID NO.6)、上游外引物HPV16v2-3_F3(SED ID NO.7)、下游外引物HPV16v2-3_B3(SED ID NO.8)、环引物HPV16v2-3_LF(SED ID NO.9)、环引物HPV16v2-3_LB(SED ID NO.10)、HPV16v2-3_LF-tail16s-5IABkFQ(SED ID NO.11)和HPV16_Tail16s-34_Comp3FAM(SED ID NO.12)。
表1为本发明病毒HPV16v2-3的引物序列表
注：F3为上游外部引物，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补；B3为下游外部引物，由B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补；FIP为上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5’端的Flc区域序列相同；BIP为下游内部引物，由B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3’端的B2c区域互补，B1C域与靶基因5’端的Blc区域序列相同；LF-Quencher为探针一，IABkFQ为淬灭基团；Fluorophore为探针二，6-FAM为6-羧基荧光素，用于标记核苷酸和核酸。
表2为采用本发明的病毒HPV16v2-3的引物获得的扩增子序列表
一种HPV病毒(表示为HPV16v2-4)的引物体系，该病毒HPV16v2-4具有如SED IDNO.2所示的核苷酸序列，该引物体系包含：上游内引物HPV16v2-4_FIP(SED ID NO.13)、下游内引物HPV16v2-4_BIP(SED ID NO.14)、上游外引物HPV16v2-4_F3(SED ID NO.15)、下游外引物HPV16v2-4_B3(SED ID NO.16)、环引物HPV16v2-4_LF(SED ID NO.17)、环引物HPV16v2-4_LB(SED ID NO.18)和HPV16v2-4_LB-tail16s-5IaBkFQ(SED ID NO.19)、HPV16_Tail16s-34_Comp3FAM(SED ID NO.12)。
表3为本发明病毒HPV16v2-4的引物序列表
表4为采用本发明的病毒HPV16v2-4的引物获得的扩增子序列表
一种HPV病毒(表示为HPV18v2-2)的引物，该病毒HPV18v2-2具有如SED ID NO.3所示的核苷酸序列，该引物体系包含：上游内引物HPV18v2-2_FIP(SED ID NO.20)、下游内引物HPV18v2-2_BIP(SED ID NO.21)、上游外引物HPV18v2-2_F3(SED ID NO.22)、下游外引物HPV18v2-2_B3(SED ID NO.23)、环引物HPV18v2-2_LF(SED ID NO.24)、环引物HPV18v2-2_LB(SED ID NO.25)、HPV18v2-2_LF-tail10s-5IaBkFQ(SED ID NO.26)、HPV18_Tail10s-27_Comp3FA(SED ID NO.27)。
表5为本发明病毒HPV18v2-2的引物序列表
表6为采用本发明的病毒HPV18v2-2的引物获得的扩增子序列表
一种HPV病毒(表示为HPV18v2-4)的引物，该病毒HPV18v2-4具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列，该引物体系包含：上游内引物HPV18v2-4_FIP(SED ID NO.28)、下游内引物HPV18v2-4_BIP(SED ID NO.29)、上游外引物HPV18v2-4_F3(SED ID NO.30)、下游外引物HPV18v2-4_B3(SED ID NO.31)、环引物HPV18v2-4_LF(SED ID NO.32)、环引物HPV18v2-4_LB(SED ID NO.33)、HPV18v2-4_LB-tail10s-5IaBkFQ(SED ID NO.34)、HPV18_Tail10s-27_Comp3FAM(SED ID NO.27)。
表7为本发明病毒HPV18v2-4的引物序列表
表8为采用本发明的病毒HPV18v2-4的引物获得的扩增子序列表
以下结合实施例1-2对本发明提供的HPV病毒的引物体系及其检测方法进行更加详细的说明。
实施例1荧光检测HPV
荧光反应体系如下表9：
表9为本发明实施例1的荧光反应体系表：
注：D-(+)-Trehalose为D-(+)-海藻糖；LF-tail-quencher(5IaBkFQ)为探针一，LF-Comp3FAM为探针二。
其中，上述表9中的10mM dNTPs和dUTP成分，具体如下表10：
表10为表9中的10mM dNTPs和dUTP成分表
将10x LAMP混合引物(为病毒HPV16v2-3的引物体系)、待检测的HPV样品、10x等温扩增缓冲液(购自NEB公司)和100mM MgSO4在PCR管中预混合，将混合物在95℃水浴或加热中孵育2～4分钟。然后，将混合物冷却至室温(5～10分钟)。
酶混合物：将10mM dNTPs和dUTP、Bst 2.0DNA聚合酶(购自NEB公司)、1U/μL Antarctic Thermolabile UDG(购自NEB公司,M0372L)、1M D-(+)-海藻糖(37.8％)(D-(+)-Trehalose，购自SigmaAldrich公司,T9449-25G)和无核酸酶H2O混合。
向PCR管(每个反应9μL)中加入16μL上述酶混合物，将每个反应(25μL)在66℃加热40分钟(盖温度为80℃或更高)，通过检测荧光信号来识别HPV。
为了对每个HPV病毒进行精确评估和鉴定，使用荧光检测在66℃下孵育，每个测定40分钟，用荧光信号来检测和识别HPV病毒。
实施例2荧光检测HPV
将待检测的DNA模板(25ng)、四种dNTP(包括：dATP、dGTP、dTTP和dCTP，各1.4mM，最终浓度)、8单位Bst 2.0DNAPolymerase(购自NEB)、甜菜碱(400mM)、MgSO4(6mM)、F3/B3引物(0.2M)、FIP/BIP(1.6M)、LF/LB引物(0.8M)、LF-tail-quencher(5IaBkFQ)(0.2μM)、LF-Comp3FAM(0.15μM)和1x等温扩增缓冲液混合(购自NEB公司,M0538L)，用缓冲液和ddH2O把反应体积调整为25μL。其中，这些引物为病毒HPV18v2-2的引物体系。
在加入Bst 2.0WarmStart DNA Polymerase之前，将DNA模板加热至95℃，持续5分钟，以激活酶。荧光检测反应在65℃下进行40分钟。
进行阴性对照实验，其中加入水而不是DNA样品，以检查污染和/或引物自扩增问题，检测荧光信号以识别HPV病毒。
如图1所示，为本发明实施例1和2的荧光结果图，以使用HPV 16型和18型引物为例，从图中可以看出：对HPV病毒进行标准样检测，其中标准样拷贝数(HPV DNA copies)分别0、5*101、5*102、5*103，在标准样拷贝数为0时，反应后试管中没有荧光出现；标准样拷贝数为5*101、5*102、5*103时，反应后试管中出现很明递次加强的荧光信号，可以看出本发明的检测灵敏度高，拷贝数在一个数量级(10^1)也能响应。
尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。
序列表
<110> 纽奥维特（成都）生物科技有限公司
<120> 一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用
<160> 34
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<213> Artificial Sequence
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actgcgacgt gaggta 16
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 19
gccgctataa gccctggtac tgcgatctca ctgaactgcg acgtgaggta 50
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 20
ctacagacac attgtcccta actttttctg aaagttccca tgccg 45
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ttttgggctg tgcccctttt tcgcgattta caagcagtg 39
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cctttaggtg ttggcc 16
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<213> Artificial Sequence
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agccgagtcc gtctccctac gtgcgatcct cagaaacatt agacgtgg 48
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<213> Artificial Sequence
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atcgcacgta gggagacgga ctcggct 27
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<400> 34
agccgagtcc gtctccctac gtgcgatatc cagaaggtac agacgg 46
Claims (10)
1.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED IDNO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.12所示的核苷酸序列的探针二；
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
2.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SED ID NO.2所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.13所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.14所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.15所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.16所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDID NO.17所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.18所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.19所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.12所示的核苷酸序列的探针二；
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
3.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SED ID NO.3所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.20所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.21所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.22所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.23所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDID NO.24所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.25所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.26所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.27所示的核苷酸序列的探针二；
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
4.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.28所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.29所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.30所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.31所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDID NO.32所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.33所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.34所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.27所示的核苷酸序列的探针二；
其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。
5.一种HPV病毒的检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：如权利要求1-4中任意一项所述的引物体系。
6.一种HPV病毒的检测方法，其特征在于，该方法包含：
将HPV病毒的引物体系、待检测的HPV样品、等温扩增缓冲液和MgSO4预混合，将混合物加热孵育，待孵育结束后冷却；
将dNTPs、dUTP、DNA聚合酶、Antarctic Thermolabile UDG、D-(+)-海藻糖和无核酸酶水混合，得到酶混合物；
向所述的混合物中加入酶混合物，加热进行反应，检测荧光信号；
若有荧光，则待检测的HPV样品中含有HPV病毒；若无荧光，则待检测的HPV样品中不含有HPV病毒；
其中，检测具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求1所述的引物体系；检测具有如SED ID NO.2所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求2所述的引物体系；检测具有如SED IDNO.3所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求3所述的引物体系；检测具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求4所述的引物体系。
7.根据权利要求6所述的HPV病毒的检测方法，其特征在于，加入酶混合物后，在60～70℃加热进行反应，检测荧光信号。
8.根据权利要求6所述的HPV病毒的检测方法，其特征在于，所述DNA聚合酶包含：DNA聚合酶；所述混合物和酶混合物的体积比为9：16。
9.一种HPV病毒的检测方法，其特征在于，该方法包含：
将待检测的DNA模板、dNTPs、DNA聚合酶、甜菜碱、MgSO4、HPV病毒的引物体系和等温扩增缓冲液混合，用缓冲液和ddH2O调整反应体积，得到混合物；
将混合物加热，反应在加热下进行；
若有荧光，则待检测的DNA模板含有HPV病毒的核苷酸序列；若无荧光，则待检测的DNA模板不含HPV病毒的核苷酸序列；
其中，检测具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求1所述的引物体系；检测具有如SED ID NO.2所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求2所述的引物体系；检测具有如SED IDNO.3所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求3所述的引物体系；检测具有如SED ID NO.4所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：如权利要求4所述的引物体系。
10.根据权利要求9所述的HPV病毒的检测方法，其特征在于，在加入DNA聚合酶之前，先将DNA模板加热至95℃，以激活酶；所述DNA聚合酶包含：DNA聚合酶；所述反应在60～70℃下进行；
该方法还包含：进行阴性对照实验，将待检测的DNA模板替换为水。
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