CN109668885B - 一种蔬菜中腐霉利的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种蔬菜中腐霉利的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：(1)将待测物萃取，得到萃取液；(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入脱色剂进行脱色，得到脱色后的溶液；(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液在碱的作用下发生开环反应，得到开环化合物，而后开环化合物在羟胺作用下发生缩合反应，得到异羟肟酸类化合物；(4)将步骤(3)中得到的异羟肟酸类化合物酸化，加入缓冲溶液调pH，而后加入显色剂显色，通过目视比色法检测蔬菜中的腐霉利；该检测方法具有检测方法简单，分析周期短，成本低廉，适用范围广，数据准确性好，可用于腐霉利的检测，满足企业生产的要求。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，涉及一种蔬菜中腐霉利的检测方法。
背景技术
腐霉利属于内吸性杀菌剂，兼有保护和治疗作用，用于油菜、萝卜、茄子、韭菜等蔬菜作物，防止灰霉病和菌核病，低温高湿条件下使用效果明显。根据GB2763-2014《食品安全国家标准食品中最大残留限量》规定韭菜中腐霉利的最大残留限量为0.2mg/kg。据调查，引起韭菜腐霉利残留超标的主要原因是种植者施用该药剂防止灰霉病引发。韭菜灰霉病是一种在一个生长季中有多次侵染的病害，主要危害韭菜叶片，比较典型的症状包括白点、干尖和湿病等。少量的农药残留不会导致急性中毒，但长期食用农药残留超标的蔬菜，可能对人体健康产生一定的影响。
目前腐霉利的检测都需要使用大型仪器，比如HPLC、GC、GC-MS等。而这些大型仪器检测时间长、费用高、专业性强，不适合进行大量样品的筛选，故难以及时、快速地监控食品的安全状况。因此，推出简单快速的腐霉利检测技术是一种必要的趋势。当前比较常用的快速检测方法如酶抑制技术(Elisa)和免疫学技术(胶体金)，但由于抗原及抗体的限制，市场上并未发现腐霉利快检产品。
CN105806971A公开了一种农产品中腐霉利的检测方法，该方法属于农药残留分析及农产品安全检测范畴。将待测物经乙腈提取，在匀浆机上高速匀浆后过滤，5-7g氯化钠盐析，提取10.0mL滤液吹干，正已烷溶解，淋洗弗罗里硅柱，并收集淋洗液，吹干定容后进行气相色谱分析，实现腐霉利残留量的测定；该方法具有灵敏度高、检测限低等优点，但是气质联用作为比较昂贵的仪器，在工业生产中不适用进行大量样品的筛选。
基于上述的现状，提供一种方便、快捷且灵敏度高的检测方法，即开发一种蔬菜中腐霉利快速检测产品，可以用于样品的筛选，从而减少大型仪器的使用以及折旧。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蔬菜中腐霉利的检测方法，所述检测方法分析周期短，操作过程简单，成本低廉，适用范围广，数据准确性好，且可快速进行检测筛选，减少大型仪器的使用以及折旧，可满足企业生产的要求。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的目的在于提供一种蔬菜中腐霉利的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
(1)将待测物萃取，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入脱色剂进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液在碱的作用下发生开环反应，得到开环化合物，而后开环化合物在羟胺作用下发生缩合反应，得到异羟肟酸类化合物；
(4)将步骤(3)中得到的异羟肟酸类化合物酸化，加入缓冲溶液调pH，而后加入显色剂显色，通过目视比色法检测蔬菜中的腐霉利。
本发明采用目视比色法对蔬菜中腐霉利进行检测，无需使用大型仪器，检测方法简单，分析周期短，成本低廉，适用范围广，数据准确性好，在较短的时间内即可完成样品的测试，可满足企业生产的要求。
本发明通过对待测物进行萃取、脱色以及衍生化处理，将不具有显色效果的腐霉利转化为具有显色效果的腐霉利衍生物，通过腐霉利衍生物的显色效果从而判断蔬菜中的腐霉利。
在本发明中，通过目视比色法进行判断腐霉利含量时，用空白白纸作为背景，将离心管放置在白纸上，溶液呈无色或者淡黄色为阴性；溶液呈粉色或者红色为阳性，且颜色越升，含量越高。
在本发明中，所述蔬菜包括韭菜、黄瓜、番茄、茼蒿、油菜、萝卜或茄子中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中，不同的蔬菜对于腐霉利的残留都不一样，其中最为严格是韭菜，因为韭菜为辛辣物质，且叶绿素和硫化物的含量较高，测试难度较大，通过采用本发明提供的检测方法，可以对蔬菜尤其韭菜进行较好的前处理，从而准确测试韭菜中的腐霉利。
在本发明中，步骤(1)所述萃取的溶剂为乙腈和饱和盐溶液的混合物。
本发明中腐霉利在乙腈中具有较好的溶解效果，但由于蔬菜中纤维的含量较高，同时加入饱和盐溶液可以提高萃取率，减少腐霉利的损失，避免造成检测结果不准确。
优选地，所述饱和盐溶液为饱和氯化钠溶液和/或饱和氯化钾溶液。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，所述乙腈的体积为2-6mL，(例如2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、4.5mL、5mL、5.5mL、6mL等)。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，所述饱和盐溶液的体积为0.5-1.5mL，(例如0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL、1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL等)。
在本发明中，步骤(1)所述萃取包括先进行涡旋，而后进行离心。
在本发明中，所述涡旋的时间为2-5min，例如2min、2.5min、3min、3.5min、4min、4.5min、5min等。
在本发明中，所述离心的时间为1-3min，例如1min、1.2min、1.5min、1.7min、2min、2.2min、2.5min、2.7min、3min等。
在本发明中，步骤(1)还包括将得到的萃取液进行清洗。
在本发明中，所述清洗的溶剂为饱和盐溶液。
优选地，所述饱和盐溶液为饱和氯化钠溶液和/或饱和氯化钾溶液。
本发明加入饱和盐溶液清洗是为了除去萃取液中水溶性的杂质，从而影响后续检测结果的准确性。
在本发明中，所述清洗的方式包括先将萃取后得到的有机层和饱和盐溶液进行混合，而后进行离心。
优选地，所述混合的方式为振荡混合。
在本发明中，所述混合的时间为0.5-1min，例如0.5min、0.6min、0.7min、0.8min、0.9min、1min等。
在本发明中，所述离心的时间为1-3min，例如1min、1.2min、1.5min、1.7min、2min、2.2min、2.5min、2.7min、3min等。
在本发明中，步骤(2)所述脱色剂为石墨化炭黑。
本发明选用石墨化炭黑进行脱色，石墨化炭黑吸附能力强，需用的脱色时间短，相对活性炭等脱色剂具有较好的脱色效果。
在本发明中，步骤(2)所述脱色的方式包括先将萃取液和脱色剂混合，而后进行离心。
优选地，所述混合的方式为振荡混合。
在本发明中，所述混合的时间为0.5-1min，例如0.5min、0.6min、0.7min、0.8min、0.9min、1.0min、1.1min、1.2min、1.3min、1.4min、1.5min等。
在本发明中，所述离心的时间为1-3min，例如1min、1.2min、1.5min、1.7min、2min、2.2min、2.5min、2.7min、3min等。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，步骤(2)所述脱色剂的加入量为0.05-0.15g，例如0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09g、0.1g、0.11g、0.12g、0.13g、0.14g、0.15g等。
在本发明中，步骤(3)所述碱为无机强碱。
本发明中采用无机强碱使腐霉利进行开环反应，使用弱碱也是可以实现的，但是会存在使用量大，反应时间久，需要的反应温度高等问题。
优选地，步骤(3)所述碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
在本发明中，步骤(3)所述碱的浓度为0.05-0.15mol/L，例如0.05mol/L、0.06mol/L、0.07mol/L、0.08mol/L、0.09mol/L、0.1mol/L、0.11mol/L、0.12mol/L、0.13mol/L、0.14mol/L、0.15mol/L等。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，步骤(3)所述碱的体积为0.5-1.5mL，(例如0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL、1mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL等)。
在本发明中，步骤(3)所述开环反应的温度为90-120℃，例如90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃、120℃等。
在本发明中，步骤(3)所述开环反应的时间为3-8min，例如3min、3.5min、4min、4.5min、5min、5.5min、6min、6.5min、7min、7.5min、8min等。
在本发明中，步骤(3)所述羟胺为盐酸羟胺。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，步骤(3)所述羟胺的体积为0.2-0.6mL，(例如0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL等)。
在本发明中，步骤(3)所述羟胺的浓度为0.5-2mol/L，例如0.5mol/L、0.7mol/L、1mol/L、1.2mol/L、1.5mol/L、1.7mol/L、2mol/L等。
在本发明中，步骤(3)所述缩合反应的温度为90-120℃，例如90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃、120℃等。
在本发明中，步骤(3)所述缩合反应的时间为3-8min，例如3min、3.5min、4min、4.5min、5min、5.5min、6min、6.5min、7min、7.5min、8min等。
在本发明中，步骤(4)所述酸化用试剂为无机强酸。
优选地，所述无机强酸包括盐酸和/或硝酸。
本发明中，采用无机强酸进行酸化，通过弱酸也是可以实现的，但是需要弱酸的量会比较多，反应时间比较久，且可能需要在高温下反应，与无机强酸相比无机强酸是适用于工业应用。
在本发明中，步骤(4)所述酸化用试剂的浓度为1-3mol/L，例如1mol/L、1.2mol/L、1.5mol/L、1.7mol/L、2mol/L、2.2mol/L、2.5mol/L、2.7mol/L、3mol/L等。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，步骤(4)所述酸化用试剂的添加体积为0.025-0.075mL，(例如0.025mL、0.03mL、0.035mL、0.04mL、0.045mL、0.05mL、0.055mL、0.06mL、0.065mL、0.07mL、0.075mL等)。
在本发明中，步骤(4)所述缓冲溶液为pH为6.8的Tris-HCl缓冲液。
在本发明中，步骤(4)所述缓冲溶液的浓度为0.05-0.15mol/L，例如0.5mol/L、0.7mol/L、1mol/L、1.2mol/L、1.5mol/L等。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，步骤(4)所述缓冲溶液的添加体积为0.025-0.075mL，(例如0.025mL、0.03mL、0.035mL、0.04mL、0.045mL、0.05mL、0.055mL、0.06mL、0.065mL、0.07mL、0.075mL等)。
在本发明中，在步骤(4)进行所述酸化之前还包括将步骤(3)得到的异羟肟酸类化合物过滤。
优选地，所述过滤的滤头孔径为0.45μm。
在本发明中，步骤(4)所述显色剂为三价铁盐溶液。
优选地，步骤(4)所述显色剂为三氯化铁溶液和/或硝酸铁溶液。
在本发明中，步骤(4)所述显色剂的浓度为0.5-1.5％，例如0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％等。
在本发明中，以待测物的质量为1-3g(例如1g、1.2g、1.5g、1.7g、2g、2.2g、2.5g、2.7g、3g等)计，所述显色剂的添加体积为0.025-0.075mL，(例如0.025mL、0.03mL、0.035mL、0.04mL、0.045mL、0.05mL、0.055mL、0.06mL、0.065mL、0.07mL、0.075mL等)。
作为本发明的优选技术方案，所述检测方法包括如下步骤：
(1)称取1-3g待测物，加入到体积为2-6mL乙腈和0.5-1.5mL的饱和盐溶液的混合液中，涡旋2-5min，涡旋结束后离心1-3min，离心后取上清液加入饱和盐溶液混合0.5-1min，而后离心1-3min进行清洗，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入质量为0.05-0.15g的脱色剂混合0.5-1min，离心1-3min进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液中先加入0.5-1.5mL的浓度为0.05-0.15mol/L的碱，在温度为90-120℃条件下发生开环反应，反应时间3-8min，得到开环化合物；而后将得到的开环化合物中加入0.2-0.6mL浓度为0.5-2mol/L的羟胺在温度为90-120℃条件下发生缩合反应，反应时间为3-8min，得到异羟肟酸类化合物；
(4)将步骤(3)得到的衍生化物用滤径为0.45μm的滤头进行过滤，过滤后加入体积为0.025-0.075mL浓度为1-3mol/L的酸酸化，加入体积为0.025-0.075mL浓度为0.05-0.15mol/L，pH为6.8的Tris-HCl缓冲液调pH，而后加入体积为0.025-0.075mL浓度为0.5-1.5％的三价铁盐溶液进行显色，通过目视比色法检测蔬菜中的腐霉利。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明依次通过萃取、脱色以及衍生化反应对待测样品进行前处理，将待测样品中不具有显色效果的腐霉利转化为腐霉利的衍生物异羟肟酸类化合物，使其在酸性条件下加入显色剂后能够显色，通过目视比色法可检测蔬菜中腐霉利的含量；该检测方法具有检测方法简单，分析周期短，成本低廉，适用范围广，数据准确性好，且可快速进行检测筛选，减少大型仪器的使用以及折旧，可满足企业生产的要求。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
(1)称取100份质量均为2g的待测物韭菜搅碎于10mL离心管中，加入到体积为4mL乙腈和1mL的饱和氯化钠溶液的混合液中，涡旋震荡2min，涡旋结束后在速率为4000r/min条件下离心1min，离心后取上清液于另一10mL离心管中，加入1mL饱和氯化钠溶液震荡0.5min，在速率为4000r/min条件下离心1min进行清洗，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入质量为0.1g的石墨化炭黑混合，在速率为4000r/min条件下离心1min进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液置于另一10mL的离心管中，先加入1mL的浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，在温度为100℃条件下发生开环反应，反应时间5min，氮吹，得到开环化合物；而后将得到的开环化合物中加入0.4mL浓度为1mol/L的盐酸羟胺溶液在温度为100℃发生缩合反应，反应时间为5min，氮吹，得到异羟肟酸类化合物，其中该步骤涉及的反应式如下：
(4)将步骤(3)得到的衍生化物用滤径为0.45μm的滤头进行过滤，过滤后加入体积为0.05mL浓度为2mol/L的盐酸酸化，加入体积为0.05mL浓度为0.1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl缓冲液调pH，而后加入体积为0.05mL浓度为1％的氯化铁溶液进行显色，通过目视比色法检测韭菜中的腐霉利，其中该步骤涉及的反应式如下：
将显色后的100份不同的韭菜待测样以空白白纸为背景，通过目视比色法进行观察，有38份韭菜待测样出现粉色或红色，62份韭菜待测样出现淡黄色或无色，将粉色中颜色最浅的待测样用气质联用进行检测，得到其待测样品中腐霉利的含量为0.52mg/kg，则说明有38份韭菜待测样中腐霉利的含量超过0.52mg/kg，62份韭菜待测样中腐霉利的含量低于0.52mg/kg。
将同样的100份不同的韭菜待测样通过气质联用进行检测，根据GB2763-2014《食品安全国家标准食品中最大残留限量》规定韭菜中腐霉利的最大残留限量为0.2mg/kg，得出有54份韭菜待测样的含量低于0.2mg/kg，有46份韭菜待测样的含量超过0.2mg/kg，而这46份中有39份待测样的含量超过0.5mg/kg；当腐霉利的检测限为0.5mg/kg时，检测结果的相对误差为1％，证明本实施例提供的检测方法准确可靠，且该方法适用于大量样品的腐霉利含量的筛选，可减少大型仪器的使用以及折旧。
实施例2
(1)称取100份质量均为1g的待测物黄瓜搅碎于10mL离心管中，加入到体积为2mL乙腈和1.5mL的饱和氯化钾溶液的混合液中，涡旋震荡2min，涡旋结束后在速率为3000r/min条件下离心3min，离心后取上清液于另一10mL离心管中，加入1mL饱和氯化钾溶液震荡1min，在速率为3000r/min条件下离心3min进行清洗，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入质量为0.05g的石墨化炭黑混合，在速率为3000r/min条件下离心3min进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液置于另一10mL的离心管中，先加入1.5mL的浓度为0.05mol/L的氢氧化钾，在温度为90℃条件下发生开环反应，反应时间8min，氮吹，得到开环化合物；而后将得到的开环化合物中加入0.2mL浓度为2mol/L的硫酸羟胺在温度为90℃条件下发生缩合反应，反应时间为8min，氮吹，得到异羟肟酸类化合物；
(4)将步骤(3)得到的衍生化物用滤径为0.45μm的滤头进行过滤，过滤后加入体积为0.075mL浓度为1mol/L的硫酸酸化，加入体积为0.075mL浓度为0.15mol/L，pH为6.8的Tris-HCl缓冲液调pH，而后加入体积为0.075mL浓度为0.5％的硫酸铁溶液进行显色，通过目视比色法检测黄瓜中的腐霉利。
将显色后的100份不同的黄瓜待测样以空白白纸为背景，通过目视比色法进行观察，有27份黄瓜待测样出现粉色或红色，73份黄瓜待测样出现淡黄色或无色，将粉色中颜色最浅的待测样用气质联用进行检测，得到其待测样品中腐霉利的含量为0.49mg/kg，说明有27份黄瓜待测样中腐霉利的含量超过0.49mg/kg，73份黄瓜待测样中腐霉利的含量低于0.49mg/kg。
将同样的100份不同的黄瓜待测样通过气质联用进行检测，得到有71份黄瓜待测样中腐霉利的含量低于0.5mg/kg，有29份黄瓜待测样中腐霉利的含量高于0.5mg/kg，检测结果的相对误差为2％，说明检测结果准确，根据GB2763-2014《食品安全国家标准食品中最大残留限量》规定黄瓜中腐霉利的最大残留量为2mg/kg，因为可以先通过本实施例提供的检测方法进行筛选，而后再用气质联用对显色后为粉色以及红色的样品进行检测，从而起到预先筛选的作用。
实施例3
(1)称取100份质量均为3g的待测物茄子搅碎于10mL离心管中，加入到体积为6mL乙腈和0.5mL的饱和氯化钾溶液的混合液中，涡旋震荡3min，涡旋结束后在速率为6000r/min条件下离心1min，离心后取上清液于另一10mL离心管中，加入1mL饱和氯化钾溶液震荡0.5min，在速率为6000r/min条件下离心1min进行清洗，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入质量为0.15g的石墨化炭黑混合，在速率为6000r/min条件下离心1min进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液置于另一10mL的离心管中，先加入0.5mL的浓度为0.15mol/L的氢氧化钠，在温度为120℃条件下发生开环反应，反应时间3min，氮吹，得到开环化合物；而后将得到的开环化合物中加入0.6mL浓度为0.5mol/L的盐酸羟胺在温度为120℃发生缩合反应，反应时间为3min，氮吹，得到异羟肟酸类化合物；
(4)将步骤(3)得到的衍生化物用滤径为0.45μm的滤头进行过滤，过滤后加入体积为0.025mL浓度为3mol/L的硝酸酸化，加入体积为0.025mL浓度为0.05mol/L，pH为6.8的Tris-HCl缓冲液调pH，而后加入体积为0.0025mL浓度为1.5％的硝酸铁溶液进行显色，通过目视比色法检测茄子中的腐霉利。
将显色后的100份不同的茄子待测样以空白白纸为背景，通过目视比色法进行观察，有31份茄子待测样出现粉色或红色，69份茄子待测样出现淡黄色或无色，将粉色中颜色最浅的待测样用气质联用进行检测，得到其待测样品中腐霉利的含量为0.5mg/kg，说明有31份黄瓜待测样中腐霉利的含量超过0.5mg/kg，69份黄瓜待测样中腐霉利的含量低于0.5mg/kg。
将同样的100份不同的茄子待测样通过气质联用进行检测，得到有31份黄瓜待测样中腐霉利的含量低于0.5mg/kg，有69份黄瓜待测样中腐霉利的含量高于0.5mg/kg，检测结果的相对误差为0％，说明检测结果准确，根据GB2763-2014《食品安全国家标准食品中最大残留限量》规定茄子中腐霉利的最大残留量为5mg/kg，因为可以先通过本实施例提供的检测方法进行筛选，而后再用气质联用对显色后为粉色以及红色的样品进行检测，从而起到预先筛选的作用。
实施例4
与实施例1的区别仅在于将脱色剂石墨化炭黑替换为活性炭，且活性炭的质量为0.5g，脱色时间为10min，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本实施例检测结果的相对误差为4％，说明本实施例的检测方法可靠，通过和实施例1对比可知，活性炭的吸附能力相对于石墨化炭黑较差，会造成脱色效果较差，因此需要较多的活性炭的量以及较久的脱色时间，才能达到较为准确的检测结果，则相对于活性炭，石墨化炭黑更适用于工业生产应用。
实施例5
与实施例1的区别仅在于将步骤(3)中的氢氧化钠溶液替换为氨水，加入氨水的体积为0.5mL，反应时间为30min，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本实施例检测结果的相对误差为4％，说明本实施例的检测方法可靠，通过和实施例对比可知，氨水提供氢氧根离子的能力差于氢氧化钠溶液，会造成反应不完全的问题，因此需要更多的氨水去提供氢氧根离子，以及需要更久的时间去确保反应的进行，才能达到较为准确的检测结果，则相对于弱碱而言，强碱氢氧化钠更适用于工业化生产应用。
实施例6
与实施例1的区别仅在于将步骤(4)中的盐酸替换为醋酸，加入醋酸的体积为0.1mL，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本实施例检测结果的相对误差为5％，说明本实施例的检测方法可靠，通过和实施例对比可知，醋酸提供氢离子的能力差于盐酸溶液，会造成酸性太低显色效果较差的问题，因此需要更多的醋酸去提供氢离子，才能达到较为准确的检测结果，则相对于弱酸而言，强酸盐酸更适用于工业化生产应用。
对比例1
与实施例1的区别仅在于不包括加入脱色剂脱色，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本对比例无法对韭菜中腐霉利进行检测，其中不包括加入脱色剂脱色，韭菜待测样中含有大量的叶绿素，加入显色剂后不会观察到颜色的变化，从而影响检测结果。
对比例2
与实施例1的区别仅在于显色剂为氯化铅溶液，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本对比例无法对韭菜中腐霉利进行检测，因为铅离子对异羟肟酸类化合物不显色，因为不能用于检测韭菜中的腐霉利。
对比例3
与实施例1的区别仅在于步骤(4)不包括加入缓冲溶液调pH，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本对比例无法对韭菜中腐霉利进行检测，其中不加入缓冲溶液调pH，则会影响反应体系的pH，造成检测结果不准确，因此检测结存在较大误差。
对比例4
与实施例1的区别仅在于步骤(4)不包括将异羟肟酸类化合物酸化，其余原料以及检测方法均与实施例1相同。
本对比例无法对韭菜中腐霉利进行检测，其中不包括将异羟肟酸类化合物酸化，则溶液仍为碱性，加入显色剂后会产生沉淀，因为不能用于准确检测韭菜中的腐霉利。
申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (23)
1.一种蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(1)称取1-3g待测物，加入到体积为2-6mL乙腈和0.5-1.5mL的饱和盐溶液的混合液中，涡旋2-5min，涡旋结束后离心1-3min，离心后取上清液加入饱和盐溶液混合0.5-1min，而后离心1-3min进行清洗，得到萃取液得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入质量为0.05-0.15g的脱色剂混合0.5-1min，离心1-3min进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液在碱的作用下发生开环反应，得到开环化合物，而后开环化合物在羟胺作用下发生缩合反应，得到异羟肟酸类化合物；
(4)将步骤(3)得到的衍生化物用滤径为0.45μm的滤头进行过滤，过滤后进行酸化，加入体积为0.025-0.075mL浓度为0.05-0.15mol/L，pH为6.8的Tris-HCl缓冲液调pH，而后加入显色剂显色，通过目视比色法检测蔬菜中的腐霉利；
所述饱和盐溶液为饱和氯化钠溶液和/或饱和氯化钾溶液；
步骤(2)所述脱色剂为石墨化炭黑。
2.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述脱色的方式包括先将萃取液和脱色剂混合，而后进行离心。
3.根据权利要求2所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，所述混合的方式为振荡混合。
4.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述碱为无机强碱。
5.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
6.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述碱的浓度为0.05-0.15mol/L。
7.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，以待测物的质量为1-3g计，步骤(3)所述碱的体积为0.5-1.5mL。
8.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述开环反应的温度为90-120℃。
9.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述开环反应的时间为3-8min。
10.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述羟胺为盐酸羟胺。
11.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，以待测物的质量为1-3g计，步骤(3)所述羟胺的体积为0.2-0.6mL。
12.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述羟胺的浓度为0.5-2mol/L。
13.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述缩合反应的温度为90-120℃。
14.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述缩合反应的时间为3-8min。
15.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(4)所述酸化用试剂为无机强酸。
16.根据权利要求15所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，所述无机强酸包括盐酸和/或硝酸。
17.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(4)所述酸化用试剂的浓度为1-3mol/L。
18.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，以待测物的质量为1-3g计，步骤(4)所述酸化用试剂的添加体积为0.025-0.075mL。
19.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(4)所述显色剂为三价铁盐溶液。
20.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(4)所述显色剂为三氯化铁溶液和/或硝酸铁溶液。
21.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，步骤(4)所述显色剂的浓度为0.5-1.5％。
22.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，以待测物的质量为1-3g计，所述显色剂的添加体积为0.025-0.075mL。
23.根据权利要求1所述蔬菜中腐霉利的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(1)称取1-3g待测物，加入到体积为2-6mL乙腈和0.5-1.5mL的饱和盐溶液的混合液中，涡旋2-5min，涡旋结束后离心1-3min，离心后取上清液加入饱和盐溶液混合0.5-1min，而后离心1-3min进行清洗，得到萃取液；
(2)将步骤(1)得到的萃取液中加入质量为0.05-0.15g的脱色剂混合0.5-1min，离心1-3min进行脱色，得到脱色后的溶液；
(3)将步骤(2)得到的脱色后的溶液中先加入0.5-1.5mL的浓度为0.05-0.15mol/L的碱，在温度为90-120℃条件下发生开环反应，反应时间3-8min，得到开环化合物；而后将得到的开环化合物中加入0.2-0.6mL浓度为0.5-2mol/L的羟胺在温度为90-120℃条件下发生缩合反应，反应时间为3-8min，得到异羟肟酸类化合物；
(4)将步骤(3)得到的衍生化物用滤径为0.45μm的滤头进行过滤，过滤后加入体积为0.025-0.075mL浓度为1-3mol/L的酸酸化，加入体积为0.025-0.075mL浓度为0.05-0.15mol/L，pH为6.8的Tris-HCl缓冲液调pH，而后加入体积为0.025-0.075mL浓度为0.5-1.5％的三价铁盐溶液进行显色，通过目视比色法检测蔬菜中的腐霉利。
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