CN109652333A - 一种光合细菌菌剂培养方法及光合细菌菌剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种光合细菌菌剂培养方法，包括以下步骤：(1)光合菌液第一次培养：配制光合细菌培养基，将光合细菌菌液接种至培养基并混匀，用透明瓶体装满密封，置于室外自然光照条件下进行培养，至菌液转变为深红色；(2)光合菌液pH的调节：将步骤(1)深红色的光合细菌菌液用乳酸菌菌液或EM菌菌液的上清液调节pH值至6.0～6.5；(3)光合菌液第二次培养：将步骤(2)中调节好pH的光合菌液用透明瓶体再次装满密封，置于室外自然光照条件下进行培养，至菌液颜色转变为深红色即得到光合细菌菌剂。该方法生产的光合细菌菌密度高；对培养基的利用彻底，减少养殖池塘施用光合菌带入的营养污染；对水产养殖池塘水质改良效果好。

Description

一种光合细菌菌剂培养方法及光合细菌菌剂
技术领域
本发明涉及一种光合细菌菌剂培养方法，同时还涉及该方法培养得到的光合细菌菌剂。
背景技术
光合细菌是一类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的特殊菌群，具多样、灵活的代谢途径及广泛的生态意义和应用价值，它广泛分布于海洋、湖泊等自然水环境中，是所在的环境物质循环和能量流动的主要参加者之一。光合细菌应用于农业，特别是水产养殖业，在污染物降解，水质净化等方面发挥重大的作用。现有的光合细菌培养采用一次培养光合细菌的方法，刚培养好的光合菌液pH大于9.0，因一次培养培养基中的营养物质无法被光合细菌充分利用，菌液中残留较多营养物质，在养殖池塘中使用光合菌液的时候，培养基中的物质会给池塘水质带来一定的污染。此外，一次培养获得的光合细菌菌密度不高，包装时所使用的包装桶使用量大，运输成本高。基于此，有必要提供一种光合细菌菌剂培养方法，获得培养基残留少、细菌浓度高的光合细菌菌剂。
发明内容
本发明第一目的是提供一种光合细菌菌剂培养方法，解决的技术问题是现有光合细菌一次培养得到的光合细菌菌密度低，培养基利用不彻底，光合细菌菌剂使用后对养殖池塘造成污染的问题。
本发明第二目的是提供一种通过上述培养方法获得的光合细菌菌剂。
本发明的第一目的，通过以下技术方案来实现：
一种光合细菌菌剂培养方法，包括以下步骤：
(1)光合菌液第一次培养：配制光合细菌培养基，将光合细菌菌液接种至培养基并混匀，用透明瓶体装满密封，置于室外自然光照条件下进行培养，至菌液转变为深红色；
(2)光合菌液pH的调节：将步骤(1)深红色的光合细菌菌液用乳酸菌菌液或EM菌菌液的上清液调节pH值至6.0～6.5；
(3)光合菌液第二次培养：将步骤(2)中调节好pH的光合菌液用透明瓶体再次装满密封，置于室外自然光照条件下进行培养，至菌液颜色转变为深红色即得到光合细菌菌剂。
所述步骤(1)中光合细菌培养基pH为6.0～6.5，1000重量份水中包含以下重量份的组分：氯化铵0.8～1.2份、乙酸钠2.5～3.5份、酵母膏0.5～1.0份、蛋白胨0.1～0.3份、磷酸二氢钾0.3～0.7份、硫酸镁0.1～0.8份、氯化钠5～15份。
优选的，所述光合细菌培养基中1000重量份水中包含以下重量份的组分：氯化铵1份、乙酸钠3份、酵母膏0.8份、蛋白胨0.1份、磷酸二氢钾0.5份、硫酸镁0.2份、氯化钠5份。
所述步骤(1)中光合细菌菌液接种量为培养基体积分数的10～30％。
所述步骤(1)中刚接种的光合细菌菌液浓度为用纯水进行2倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.100～0.300。(ODλ＝530值为在波长λ＝530时测定的OD值)
所述步骤(1)中光合细菌室外自然光照条件下培养，温度控制在20～35℃之间，培养时间为3～10天至菌液转变为深红色。
进一步地，所述步骤(1)中光合菌液变为深红色时，光合菌液浓度为用纯水进行5倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.700～0.900。
本发明的一种实施例，所述步骤(2)中乳酸菌菌液上清液按ZL200810198474.6一种用于养殖水质调控的乳酸菌液微生态制剂的生产方法进行制备。
所述步骤(2)EM菌菌液上清液为微生物发酵生产的EM菌液上清液，pH值为4.2以下。
所述步骤(3)中光合细菌室外自然光照条件下培养温度控制在20～35℃，培养至菌液转成深红色。
进一步地，所述步骤(3)中光合菌液变为深红色时，光合菌液用纯水进行20倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.400～0.600。
本发明中透明瓶体可以选用透明的玻璃瓶或聚乙烯瓶。光合细菌放置在透明的玻璃瓶或聚乙烯瓶中，装满，排尽空气，在自然光照条件下进行厌氧培养。
本发明的一种实施例，光合细菌经过第二次培养后，光合菌液pH在8.0以上，还可以继续采用乳酸菌菌液上清液或EM菌菌液上清液调节pH值，再重复进行光照培养，使光合细菌再次生长。
本发明的第二目的，通过以下技术方案来实现：
一种通过上述光合细菌菌剂培养方法得到的光合细菌菌剂。
所述光合细菌菌剂的菌密度为光合细菌菌剂用纯水进行20倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.400～0.600。
所述光合细菌菌剂的pH值在7.0～8.0。
本发明光合细菌菌剂培养方法的机理如下：所用的乳酸菌或EM菌液，放置一段时间，取其上清液，并不需要菌体；光合细菌生长需要适当的pH值，过高或过低的pH值都是不利的，甚至会抑制其生长；光合菌在培养过程中随着菌的生长，pH会不断升高，pH高到一定程度如达到9.0以上，菌就会停止生长，本发明中在光合菌液中加入乳酸菌或EM菌的上清液，是利用其中的有机酸，有机酸一方面中和了光合菌液中的碱性物质，将pH降到6.0以上，使pH又回到光合菌适合生长的范围；再者有机酸可作为光合菌生长的碳源，促进光合菌的生长；光合菌二次或三次的再次生长，相对一次培养，更好地利用其中的营养物质，光合菌液中残留的营养物质更少。光合菌液在水产养殖中改良水质，使用方法是直接向池塘泼洒菌液，经过二次或多次培养的光合菌液在养殖池塘使用可以解决光合菌中残留营养物质污染池塘的问题。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
(1)本发明光合细菌培养方法对光合细菌进行多次培养，相较于传统的一次培养方法，其培养获得的光合细菌浓度为7～10亿/ml，本发明培养得到的光合细菌浓度高，可以达到浓度为20～30亿/ml，(光合细菌菌浓度与光密度值的关系参考文献：李林思.光合细菌计数方法的探讨.水产科技情报1993，20(5)332～333，y＝-1.6163+2.6661x，式中：y为细菌浓度，单位亿/ml；x为波长530nm、1cm比色槽条件下菌的光密度值，等于稀释倍数与稀释后测定的光密度值的乘积)，在需要相同光合细菌菌量的情况，光合细菌浓度高，所需光合细菌菌液体积相应减少，这样减少了生产厂家包装运输成本；
(2)本发明光合细菌培养方法对培养基的利用更彻底，减少养殖池塘施用光合菌带入的营养污染；
(3)本发明方法生产的光合细菌产品，在水产养殖池塘中应用，水质改良效果好。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案进行阐述，以便本领域技术人员对本发明更好地理解和实施。
实施例一
一种光合细菌菌剂培养方法，包括以下步骤：
(1)光合菌液第一次培养：配制光合细菌培养基，其中1000重量份水中包含以下重量份的组分：氯化铵1份、乙酸钠3份、酵母膏0.5份、蛋白胨0.1份、磷酸二氢钾0.5份、硫酸镁0.2份、氯化钠5份，培养基pH为6.0～6.5。将培养基各成分秤量好，分别用自来水溶解好，然后混合一起再加够自来水，将光合细菌菌液以体积分数为15％的接种量接种至培养基，并与培养基混匀，混合液装满透明的聚乙烯塑料瓶中，在自然光照，温度在28～32℃之间条件下培养4天，菌液转变为深红色，测定光合菌液的菌密度如下：将光合菌液用纯水进行5倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.736，；
(2)光合菌液pH的调节：按ZL200810198474.6一种用于养殖水质调控的乳酸菌液微生态制剂的生产方法制备乳酸菌液；将上述步骤(1)培养好的光合菌液倒入大池或大桶，用存放2个月的的乳酸菌液上清液调节pH值至6.0；
(3)光合菌液第二次培养：将(2)步骤调节好pH的光合菌液再装入透明的聚乙烯塑料瓶中，装满，置室外自然光照，温度28～33℃条件下培养，光合细菌进行再次生长，培养3天菌液转成深红色，即得到光合细菌菌剂，测定光合菌液pH为8.0，光合菌液的菌密度如下：将光合菌液用纯水进行20倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.586。
实施例二
一种光合细菌菌剂培养方法，包括以下步骤：
(1)光合菌液第一次培养：配制光合细菌培养基，其中1000重量份水中包含以下重量份的组分：氯化铵1份、乙酸钠3份、酵母膏0.5份、蛋白胨0.1份、磷酸二氢钾0.5份、硫酸镁0.2份、氯化钠5份，培养基pH为6.0～6.5。将培养基各成分秤量好，分别用自来水溶解好，然后混合一起再加够自来水，将光合细菌菌液以体积分数为20％的接种量接种至培养基，并与培养基混匀，混合液装满透明的聚乙烯塑料瓶中，自然光照，温度在30～35℃之间培养3天，菌液转变为深红色，测定光合菌液的菌密度如下：将光合菌液用纯水进行5倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.825；
(2)光合菌液pH的调节：将上述步骤(1)培养好的光合菌液倒入大池或大桶，用存放了1个月的pH值＝3.5的EM菌菌液上清液调节pH值至6.5；
(3)光合菌液第二次培养：将步骤(2)调节好pH的光合菌液再次装满透明的聚乙烯塑料瓶中，装满，置室外自然光照，温度在30～35℃条件下培养，光合细菌进行再次生长，培养3天菌液转成深红色，即得到光合细菌菌剂，测定光合菌液pH为8.0，光合菌液的菌密度如下：将光合菌液用纯水进行20倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.574。
试验例：
广东省佛山市南海某养殖户鱼塘养殖生鱼，鱼塘面积4.5亩，水深2米。采用本发明光合细菌菌剂对养殖池塘水体进行改良，使用实施例一培养的光合细菌菌剂前后鱼吃料情况、水体情况和水质指标如表1所示。泼洒光合菌剂当天天气晴朗，早上8:00左右泼洒光合菌剂10kg。
表1实施例一光合细菌菌剂使用前后效果对照表
时间 水体情况 鱼吃料情况 pH 亚硝酸氮(mg/L) 氨氮(mg/L)
使用前 黄浊 50斤 7.4 0.01 3.0
使用后7小时 —— —— 7.6 0.01 2.5
使用后第2天 清澈 160斤 7.4 0.01 1.8
由表1可见，该养殖池塘使用本发明的光合细菌菌剂后快速降低了池塘的氨氮含量，由3.0mg/L降至1.8mg/L，有效改善水体环境。本发明方法提供的产品可用于水产养殖池塘，可有效减低水体的氨氮，减轻毒性，有效改善水体环境，是生态养殖的优良改良剂。
以上实施例仅本发明的部分实施例，但不作为对本发明保护范围的限制，任何基于本发明构思基础上作出的改进和变形，均落入本发明的保护范围之内，具体保护范围以权利要求书记载的为准。

Claims (10)

1.一种光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)光合菌液第一次培养：配制光合细菌培养基，将光合细菌菌液接种至培养基并混匀，用透明瓶体装满密封，置于室外自然光照条件下进行培养，至菌液转变为深红色；
(2)光合菌液pH的调节：将步骤(1)深红色的光合细菌菌液用乳酸菌菌液或EM菌菌液的上清液调节pH值至6.0～6.5；
(3)光合菌液第二次培养：将步骤(2)中调节好pH的光合菌液用透明瓶体再次装满密封，置于室外自然光照条件下进行培养，至菌液颜色转变为深红色即得到光合细菌菌剂。
2.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中光合细菌培养基pH为6.0～6.5，1000重量份水中包含以下重量份的组分：氯化铵0.8～1.2份、乙酸钠2.5～3.5份、酵母膏0.5～1.0份、蛋白胨0.1～0.3份、磷酸二氢钾0.3～0.7份、硫酸镁0.1～0.8份、氯化钠5～15份。
3.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中光合细菌菌液接种量为培养基体积分数的10～30％。
4.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于所述步骤(1)中刚接种的光合细菌菌液浓度为用纯水进行2倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.100～0.300。
5.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中光合细菌室外自然光照条件下培养，温度控制在20～35℃之间，培养时间为3～10天至菌液转变为深红色。
6.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，所述步骤(2)EM菌菌液上清液为微生物发酵生产的EM菌液上清液，pH值为4.2以下。
7.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中光合细菌室外自然光照条件下培养温度控制在20～35℃，培养至菌液转成深红色。
8.根据权利要求1所述的光合细菌菌剂培养方法，其特征在于，光合细菌经过第二次培养后，光合菌液pH在8.0以上，还可以继续采用乳酸菌菌液上清液或EM菌菌液上清液调节pH值，再重复进行光照培养，使光合细菌再次生长。
9.一种权利要求1-8任一项所述光合细菌菌剂培养方法培养得到的光合细菌菌剂。
10.根据权利要求9所述的光合细菌菌剂，其特征在于，所述光合细菌菌剂的pH值在7.0～8.0，所述光合细菌菌剂的菌密度为光合细菌菌剂用纯水进行20倍稀释后稀释液的ODλ＝530值为0.400～0.600。
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