CN109652332B - 一种可提高水虻虫卵孵化效率的菌剂及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于农业微生物学技术领域，具体公开了一种可提高水虻虫卵孵化效率的菌剂及应用，本发明提供的枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）FE‑07和腐生性葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus）FE‑10，无论是单独使用还是复配使用都可以有效地提高亮斑扁角水虻虫卵孵化效率，解决常规条件下虫卵孵化效率不稳定或者偏低的难题，促进亮斑扁角水虻高效规模化人工繁育和转化，获得可观的经济效益。

Description

一种可提高水虻虫卵孵化效率的菌剂及应用
技术领域
本发明属于农业微生物学技术领域，具体涉及一种可提高水虻虫卵孵化效率的菌剂及应用。
背景技术
水虻作为资源型昆虫，在自然界中多以动植物残渣等腐殖质作为食物来源，水虻对有机废弃物残渣的处理能力较强，但其在废弃物处理过程中需要保持一定的种群密度才能保证最大的利用率。而虫卵的正常发育及成功孵化，对于昆虫种群繁衍及密度控制至关重要。
常规条件下水虻虫卵的发育孵化严格受到外界环境因素的影响，其中温度和湿度的较大波动常常导致水虻虫卵的孵化效率不稳定或偏低，给人工繁育带来损失。实验室饲养条件下将水虻虫卵放置于潮湿物料上，维持最佳环境温度28℃-30℃，最佳环境湿度60％-75％，孵化效率达到70％左右，该方法适用于小规模化养殖，维持水虻正常传代。高效大规模养殖面临更严苛的环境因素控制以保证稳定且较高的孵化效率，使得养殖成本不断提高。
微生物能影响昆虫种群的数量，在生态系统中作为致病菌，共生者，分解者而产生作用。总的来说，微生物与昆虫之间的相互作用分布非常广泛。已有研究结果表明微生物能显著促进水虻幼虫的生长发育及生物质积累，同时能缩短水虻发育的整个生命周期(Yuetal 2011，Zhou et al 2013)。此外，微生物还能调控水虻成虫进行交配产卵(Zheng et al2013)。但对于微生物对水虻虫卵的发育孵化过程是否同样发挥一定作用还未进行研究。
针对上述问题，申请人首次从水虻虫体分离出两株微生物，将该微生物接种在水虻虫卵表面，两株菌不同程度上提高了虫卵的孵化效率，且两菌复配将协同促进孵化效率的进一步提高。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种可提高水虻虫卵孵化效率的菌剂，所述的菌剂包括腐生性葡萄球菌FE10，所述的腐生性葡萄球菌FE10的保藏编号为CCTCC NO：M 2018891。
本发明的另一个目的在于提供了一种可提高水虻虫卵孵化效率的复配菌剂，所述的菌剂包括枯草芽胞杆菌FE07、腐生性葡萄球菌FE10；所述的枯草芽胞杆菌FE07的保藏编号为CCTCC NO：M 2018890。
本发明还有一个目的在于提供了可提高水虻虫卵孵化效率的菌剂或复配菌剂的应用。
为了达到以上目的，本发明采取以下措施：
申请人通过构建无菌水虻体系、比较水虻虫体微生物在虫卵发育孵化过程中的贡献，自水虻虫体分离出两株菌：枯草芽胞杆菌FE07、腐生性葡萄球菌FE10，这两株菌在好氧环镜中即可培养，能有效提高水虻虫卵的孵化效率，该两菌株已于2018年12月12日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)FE07、腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)FE10，保藏编号分别为：CCTCC NO：M 2018890、CCTCC NO：M 2018891，地址：中国武汉武汉大学。
枯草芽胞杆菌FE07的培养：LB培养基中，在28℃下培养；
腐生性葡萄球菌FE10的培养：LB培养基中，在28℃下培养。
一种提高水虻虫卵孵化效率的菌剂或复配菌剂的应用，包括利用腐生性葡萄球菌FE10制备促水虻虫卵发育孵化的制剂，或枯草芽胞杆菌FE07与腐生性葡萄球菌FE10复配制备促水虻虫卵发育孵化的制剂。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1.枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10为水虻虫体微生物，获取途径方便，且培养条件简易，是虫卵发育孵化过程中的关键参与者。
2.枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10对水虻虫卵发育孵化有显著的促进作用，使虫卵孵化效率分别提高到81.76％左右和85.96％左右，且两菌复配相比于单一菌对虫卵正常发育及孵化的促进作用更为明显。
3.证实微生物在水虻虫卵发育孵化过程也发挥着重要作用，水虻虫卵的正常发育及成功孵化，利于种群繁衍及密度控制，利于规模化人工繁育，促进亮斑扁角水虻高效转化，进而解决养殖及农业废弃物对环境的污染问题，获得可观的经济效益。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为报道的微生物学常规操作方法。所用试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
实施例1：
从水虻虫体分离和鉴定枯草芽胞杆菌FE07、腐生性葡萄球菌FE10：
申请人通过构建无菌水虻体系、比较水虻虫体微生物在虫卵发育孵化过程中的贡献，对水虻虫体洗液梯度稀释，采用LB培养基平板涂布，分离不同形态单菌落，继续划线培养，最终获得了两株认为对水虻虫卵孵化有作用的菌株，通过16S rDNA测序后在NCBI上进行序列同源性比对分析，鉴定出两株菌分别为枯草芽胞杆菌和腐生性葡萄球菌。该两菌株已于2018年12月12日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)FE07，保藏编号为：CCTCC NO：M2018890；腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018891，地址：中国武汉武汉大学。
实施例2：
枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10的离体培养：
将枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10在平板上划线活化，取平板上单菌落接种到装有50mLLB培养基的三角瓶中，培养温度为28℃、摇床转速180rpm、培养时间12h，得到枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10发酵菌悬液(本发明或简称FE07、FE10菌悬液)，该菌悬液的有效菌浓度为108cfu/ml(OD600值0.75)。
实施例3：
枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10单一菌对水虻虫卵发育孵化的应用：
1)卵样制备
收取新鲜水虻虫卵卵块(<2h)若干，所使用的水虻虫卵为亮斑扁角水虻武汉品系的虫卵。
2)FE07和FE10单一菌液制备
将提前接种至LB液体培养基中扩大培养的FE07和FE10菌液，经PBS磷酸盐缓冲液重悬(8000rmp/min,5min)两次后，经紫外分光光度计调节菌液浓度OD值为0.70-0.75(108cfu/ml)，再将该浓度液体梯度稀释100倍得浓度为106cfu/ml的FE07、FE10菌液。取一部分稀释菌液经细菌过滤器(0.22um)过滤得过滤FE07、FE10菌液。
3)虫卵表面消毒
将收取的新鲜虫卵一半进行表面消毒，约0.1g虫卵+1.5ml sporgon消毒液浸泡3min，重复一次，用无菌水清洗两次，滤纸吸干虫卵表面液体。
4)实验设置：
该实验设置六个处理,具体设置见表1。各处理均设立四个重复，实验使用500ml灭菌的广口组培瓶,组培瓶中提前设立保湿装置，即用铁丝缠绕一团脱脂棉悬挂于广口瓶口，脱脂棉上添加2ml无菌水。挑取约0.04g虫卵置于消毒滤纸上，使用镊子将滤纸移至组培瓶内，然后吸取300ul菌液或菌液过滤液滴加至虫卵表面，处理完成，放置于28℃恒温培养箱内培养4天，然后考察虫卵孵化情况，对照组虫卵滴加相同体积的PBS缓冲液，其它处理完全相同。
表1水虻虫体单一菌对水虻虫卵孵化影响测试方法
Figure BDA0001934657130000031
Figure BDA0001934657130000041
5)实验结果见表2，在正常情况下水虻虫卵的孵化效率一般约为70％左右，而表面消毒后虫卵孵化效率显著降低至30％左右，向正常新鲜水虻虫卵表面依次回接单一菌FE07、FE10菌液，结果显示枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球菌FE10对水虻虫卵发育孵化均有显著的促进作用，孵化效率分别达到81.76％左右和85.96％左右；向表面消毒水虻虫卵依次回接单一菌FE07、FE10菌液，结果显示对消毒虫卵的正常发育及孵化仍起着一定的促进作用，虫卵孵化效率分别达到56.99％、49.43％左右。
表2水虻虫体单一菌FE07和FE10回接至虫卵表面，虫卵孵化情况
Figure BDA0001934657130000042
注：表中数据为三次重复平均值±标准差，同行数据的不同小写字母表示在0.05水平上差异性显著(ANOVA，P＜0.05，LSD，SPSS20.0)。
实施例4：
枯草芽胞杆菌FE07和腐生性葡萄球FE10复配菌对水虻虫卵发育孵化的应用：
1)卵样制备
收取新鲜水虻虫卵卵块(<2h)若干，所使用的水虻虫卵为亮斑扁角水虻武汉品系的虫卵。
2)FE07和FE10复配菌液制备
按上述实施例3中2)步骤制备出FE07和FE10的单一菌液(菌液的有效菌浓度是106cfu/ml)后，各取相同体积(4ml)于一个新的无菌离心管(10ml)中，彻底混匀，室温下放置待用。取所制备的部分复配菌液经细菌过滤器(0.22um)过滤得过滤复配菌液。
3)虫卵表面消毒
将收取的新鲜虫卵一半进行表面消毒，约0.1g虫卵+1.5ml sporgon消毒液浸泡3min，重复一次，用无菌水清洗两次，滤纸吸干虫卵表面液体。
4)实验设置
该实验设置十四个处理，具体设置见表3。各不同处理均设立四个重复，实验使用500ml灭菌的广口组培瓶(500ml),组培瓶中提前设立保湿装置，即用铁丝缠绕一团脱脂棉悬挂于广口瓶口，脱脂棉上添加2ml无菌水，虫卵的处理及孵化方式同实施例3。
表3水虻虫体单一菌复配后对水虻虫卵孵化影响测试方法
Figure BDA0001934657130000051
5)实验结果见表4，结果显示，水虻虫体特征菌FE07和FE10复配后回接至正常水虻虫卵表面，水虻虫卵的孵化效率显著提高，达到83.37％左右，与对照组的孵化效率70.41％相比有显著性差异，且较单一菌对虫卵发育孵化的促进作用更为显著，而回接对应的过滤菌液，虫卵孵化效率与对照相比均无显著性差异。当向表面消毒水虻虫卵回接FE07、FE10复配菌后，水虻虫卵的孵化效率为37.73％左右，与不添加菌液的消毒虫卵孵化效率29.61％左右相比也有显著性差异,说明FE07、FE10复配菌对消毒虫卵的正常发育及孵化仍起着一定的促进作用。
表4水虻虫体特征菌复配后虫卵孵化情况
Figure BDA0001934657130000061
注：表中数据为三次重复平均值±标准差，相同样品下不同处理所得数据后面的不同小写字母表示在0.05水平上差异性显著(ANOVA，P＜0.05，LSD，SPSS20.0)。

Claims (4)

1.一株分离的腐生性葡萄球菌，所述的腐生性葡萄球菌为腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)FE10，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018891。
2.一种复配菌剂，包括：枯草芽胞杆菌和腐生性葡萄球菌，所述的枯草芽胞杆菌为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)FE07，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018890；腐生性葡萄球菌为腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)FE-10，保藏编号为：CCTCC NO：M2018891。
3.权利要求1所述的腐生性葡萄球菌或权利要求2所述的复配菌剂在促进水虻虫卵孵化中的应用。
4.权利要求1所述的腐生性葡萄球菌或权利要求2所述的复配菌剂在制备促进水虻虫卵孵化的药物中的应用。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101717743A (zh) * 2009-12-25 2010-06-02 扬州大学 一株腐生葡萄球菌及其在生产发酵分割猪肉中的应用
CN102703352A (zh) * 2012-06-03 2012-10-03 南京工业大学 一种非水相中糖基化制备葡萄糖基芹菜素的菌株及方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009135158A2 (en) * 2008-05-02 2009-11-05 Immunetics, Inc. Detection of microbial nucleic acids

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101717743A (zh) * 2009-12-25 2010-06-02 扬州大学 一株腐生葡萄球菌及其在生产发酵分割猪肉中的应用
CN102703352A (zh) * 2012-06-03 2012-10-03 南京工业大学 一种非水相中糖基化制备葡萄糖基芹菜素的菌株及方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Isolation and characterization of a potentially novel Siphoviridae phage (vB_SsapS-104) with lytic activity against Staphylococcus saprophyticus isolated from urinary tract infection;Yazdi Mahsa等;《Folia microbiologica》;20181004;第64卷(第3期);第283-294页，参见全文 *
卵携带的微生物对亮斑扁角水虻产卵行为和生长发育的影响;郑龙玉;《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20121115(第11期);参见全文 *

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