CN109646685A - stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用 - Google Patents

stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用 Download PDF

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CN109646685A CN201710947217.7A CN201710947217A CN109646685A CN 109646685 A CN109646685 A CN 109646685A CN 201710947217 A CN201710947217 A CN 201710947217A CN 109646685 A CN109646685 A CN 109646685A
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Abstract

本发明公开了一种stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用。本发明提供了促进stomatin基因表达在制备产品中的应用；所述产品的用途为抑制肿瘤细胞转移。本发明还保护用于抑制stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为抑制肿瘤细胞增殖。本发明通过实验证明，stomatin基因过表达可促进肺癌细胞的生长、增殖，但却能显著抑制其垂直及水平迁移扩散能力，高度提示其在肺癌发生发展中发挥重要功能，既能发挥癌基因的功能促进肿瘤增殖、生长，又有阻碍肿瘤发展的功能，抑制肿瘤转移。本发明为肺癌诊断治疗提供了一个新的靶点。

Description

stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用。
背景技术
肺癌是全球癌症相关死亡的最常见原因。尽管近年来肺癌早期诊断和综合治疗技术得到极大发展，但对肺癌患者总生存率的影响不大。因此，确定新的关键基因及其功能机制对探索和发展肺癌诊断治疗新方法至关重要。
stomatin是一个重要的脂筏蛋白，能同多种胞膜表面的离子通道蛋白及转运蛋白相互作用，是重要的胞膜组成成分。然而，stomatin在肿瘤发生及发展过程中的作用及功能还不清楚。
发明内容
本发明的目的是提供一种stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用。
本发明保护stomatin基因或用于促进stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
本发明还保护stomatin蛋白或用于提高stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
本发明还保护一种产品，其活性成分为促进stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
所述产品还包括用于抑制肿瘤增殖的物质。
本发明还保护一种产品，其活性成分为提高stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
所述产品还包括用于抑制肿瘤增殖的物质。
本发明还保护stomatin基因或用于抑制stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
本发明还保护stomatin蛋白或用于降低stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
本发明还保护一种产品，其活性成分为抑制stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
所述产品还包括用于抑制肿瘤转移的物质。
本发明还保护一种产品，其活性成分为降低stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
所述产品还包括用于抑制肿瘤转移的物质。
以上任一所述促进肿瘤细胞凋亡具体为促进肿瘤细胞早期凋亡。
本发明还保护stomatin基因或stomatin蛋白作为靶点，在筛选或开发癌症治疗药物中的应用。
本发明还保护stomatin基因或stomatin蛋白作为癌症治疗靶点的应用。
以上任一所述癌症具体可为肺癌。
以上任一所述肿瘤细胞具体可为肺癌细胞。以上任一所述肿瘤细胞具体可为人肺癌细胞。所述肺癌细胞具体可为A549细胞、H520细胞、H1299细胞或95D细胞。
以上任一所述stomatin蛋白如序列表的序列1所示。
以上任一所述stomatin基因的编码区如序列表的序列2所示。
以上任一所述抑制stomatin基因表达的物质为抑制stomatin基因表达的siRNA。
以上任一所述促进stomatin基因表达的物质为含有stomatin基因的重组质粒。所述重组质粒具体为将pcDNA3.1-myc-his(-)A质粒XhoI和EcoRI酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列2所示的DNA分子得到的重组质粒。
本发明公开了stomatin蛋白在肺癌诊断治疗中的应用。本发明通过实验证明，stomatin基因过表达可促进肺癌细胞的生长、增殖，但却能显著抑制其垂直及水平迁移扩散能力，高度提示其在肺癌发生发展中发挥重要功能，既能发挥癌基因的功能促进肿瘤增殖、生长，又有阻碍肿瘤发展的功能，抑制肿瘤转移。本发明为肺癌诊断治疗提供了一个新的靶点。
附图说明
图1为MTT检测stomatin对细胞增殖促进作用。
图2为流式检测stomatin敲降对A549细胞早期凋亡的促进作用。
图3为流式检测stomatin过表达对A549细胞早期凋亡的抑制作用。
图4为流式检测stomatin敲降对H1299细胞早期凋亡的促进作用。
图5为动物实验检测stomatin对肺癌细胞增殖促进作用。
图6为划痕检测stomatin敲降A549细胞水平迁移情况。
图7为transwell检测stomatin敲降A549细胞运动能力。
图8为Matrigel侵袭实验检测stomatin敲降A549细胞侵袭能力。
图9为动物实验检测stomatin对肺癌细胞转移抑制作用。
图10为stomatin影响肺癌细胞actin细胞骨架重塑。
图11为stomatin表达升高抑制EMT发生。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
A549细胞：美国ATCC，货号：CCL-185TM。
H520细胞：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
H1299细胞：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
95D细胞：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
pcDNA3.1-myc-his(-)A：Invitrogen，货号：V85520。
BALB/c裸鼠：北京华阜康生物技术股份有限公司，雌性，3-5周龄，体重15-20g。
stomatin蛋白如序列表的序列1所示。stomatin基因编码区如序列表的序列2所示。
实施例1、细胞制备
一、瞬时敲降stomatin表达的细胞制备
1、针对stomatin基因设计siRNA，序列如下：
正义链(5'-3')：GGAAUGUUCUGGGCACCAA dTdT；
反义链(3'-5')：dTdT CCUUACAAGACCCGUGGUU。
2、人工合成步骤1中的siRNA。
3、取步骤2合成的siRNA，采用小RNA转染试剂盒(锐博生物，货号：C10511-1)转染A549细胞(方法参照试剂盒说明书)，设置转染siRNA的实验组细胞和未转染siRNA的对照组细胞，48h后收取实验组细胞(命名为A549-sistom)和对照组细胞(命名为A549-sinc)进行检测或后续实验。
4、取步骤2合成的siRNA，采用小RNA转染试剂盒转染H520细胞(方法参照试剂盒说明书)，设置转染siRNA的实验组细胞和未转染siRNA的对照组细胞，48h后收取实验组细胞(命名为H520-sistom)和对照组细胞(命名为H520-sinc)进行检测或后续实验。
5、取步骤2合成的siRNA，采用小RNA转染试剂盒(锐博生物，货号：C10511-1)转染H1299细胞(方法参照试剂盒说明书)，设置转染siRNA的实验组细胞和未转染siRNA的对照组细胞，48h后收取实验组细胞(命名为H1299-sistom)和对照组细胞(命名为H1299-sinc)进行检测或后续实验。
二、瞬时过表达stomatin的细胞制备
1、将pcDNA3.1-myc-his(-)A质粒XhoI和EcoRI酶切位点之间的小片段取代为序列表的序列2所示的所示的DNA分子，得到重组表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)A-stomatin(已经测序验证)。
2、取步骤取步骤1制备的重组表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)A-stomatin，采用lipo2000转染试剂(Thermo Fisher Scientific，货号：11668027)转染H1299细胞(方法参照说明书)，设置转染重组表达载体的实验组细胞和未转染重组表达载体的对照组细胞，48h后收取实验组细胞(命名为H1299-STOM)和对照组细胞(命名为H1299-NC)进行检测或后续实验。
3、采用和95D细胞替代H1299细胞，按照步骤2进行操作，得到实验组细胞(95D-STOM)和对照组细胞(95D-NC)进行检测或后续实验。
三、慢病毒感染的敲降stomatin的细胞制备
1、委托上海吉凯基因化学技术有限公司设计合成敲降stomatin(gene ID：2040)的慢病毒hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin-shstomatin(Lenti-KDTM Custom，RNAi产品，简称LV-shstom)及其对照空载体(简称LV-shnc)。
2、在24孔板中接种A549细胞(约2.5×104个/孔)，采用含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基培养至细胞的融合度为20-30％，弃掉培养基，进行慢病毒感染，实验组每孔中加入500μL感染复合物A，对照组每孔加入500μL转染复合物B，8-12小时后观察细胞状态，并更换新鲜的含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基。
感染复合物A：ENi.S.(enhanced infection solution，订购病毒时附带赠送试剂)440μL+Polybrene(E)50μL+LV-shstom 10μL(MOI＝20)。
感染复合物B：ENi.S.440μL+Polybrene(E)50μL+LV-shnc 10μL(MOI＝20)。
Polybrene(E)：使用ENi.S.稀释polybrene(聚凝胺)至终浓度为50μg/ml。
3、感染后，观察荧光表达情况，正常换液传代，保持细胞活性。培养15天左右通过流式检测细胞表达的绿色荧光蛋白水平，确定细胞转染效率达到70％以上时收集实验组细胞(A549-shstom)和对照组细胞(A549-shnc)进行检测或后续实验。
四、慢病毒感染的过表达stomatin的细胞制备
1、委托上海吉凯基因化学技术有限公司设计合成过表达stomatin(gene ID：2040)的慢病毒Lentivirus Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin(GV358)-Stomatin(Lenti-OETM Custom，DNA产品，简称LV-STOM)及其对照空载体(简称LV-GFP)。
2、在24孔板中接种A549细胞(约2.5×104个/孔)，采用含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基培养至细胞的融合度为20-30％，弃掉培养基，进行慢病毒感染，实验组每孔中加入500μL感染复合物A，对照组每孔加入500μL转染复合物B，8-12小时后观察细胞状态，并更换新鲜的含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基。
感染复合物A：含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基440μL+Polybrene(M)50μL+LV-STOM 10μL(MOI＝20)。
感染复合物B：Complete Medium 440μL+Polybrene(M)50μL+LV-GFP(MOI＝20)10μL。
Polybrene(M)：使用含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基稀释polybrene(聚凝胺)至终浓度为50μg/ml。
3、感染后，观察荧光表达情况，正常换液传代，保持细胞活性。培养15天左右通过流式检测细胞表达的绿色荧光蛋白水平，确定细胞转染效率达到70％以上时，收集实验组细胞(A549-STOM或A549+LV-STOM)和对照组细胞(A549-NC或A549+LV-GFP)进行检测或后续实验。
4、采用和H1299细胞替代A549细胞，按照步骤2和步骤3进行操作，得到实验组细胞(H1299+LV-STOM)和对照组细胞(H1299+LV-GFP)进行检测或后续实验。
实施例2、stomatin对肿瘤细胞增殖的影响
一、MTT实验
采用MTT法检测A549-sinc、A549-sistom、H520-sinc和H520-sistom的增殖情况。
在96孔板中接种细胞，每孔1000-5000个细胞(每种细胞设置5孔实验孔和1孔不接种细胞的空白对照孔)，细胞贴壁后开始第1天检测，共检测5天，检测方法如下：
(1)取96孔板，吸弃上清，每孔加入100μl MTT溶液；
(2)置于孵箱，显色4h；
(3)吸弃上清，每孔加150μl DMSO，振荡10min，使结晶物溶解；
(4)490nm波长，检测各孔OD值(实验孔OD值-空白对照孔OD值)。
结果如图1所示。结果表明，stomatin对肿瘤细胞增殖有促进作用。
二、流式实验
1、用Annexin V-FITC/PI检测A549-sistom细胞和A549-sinc细胞凋亡情况，并统计早期凋亡率和晚期凋亡率。结果如图2所示。图2中，*表示p<0.05，**表示p<0.01，NS代表差异不显著。
2、用Annexin V-APC/7-AAD检测A549-STOM细胞和A549-NC细胞凋亡情况，并统计早期凋亡率和晚期凋亡率。结果如图3所示。图3中，*表示p<0.05，**表示p<0.01，NS代表差异不显著。
3、用Annexin V-FITC/PI检测H1299-sistom细胞和H1299-sinc细胞凋亡情况，并统计早期凋亡率和晚期凋亡率。结果如图4所示。图4中，*表示p<0.05，**表示p<0.01，NS代表差异不显著。
上述结果表明，stomatin能够抑制肿瘤细胞的早期凋亡。
三、裸鼠皮下成瘤实验
取A549-shnc细胞和A549-shstom细胞，制备得到细胞悬液，将BALB/c裸鼠分为两组(每组3只)，向一组BALB/c裸鼠右侧腋下脂肪垫接种A549-shnc细胞悬液(3×106个细胞/只)，另一组BALB/c裸鼠右侧腋下脂肪垫接种A549-shstom细胞悬液(3×106个细胞/只)，接种7天后，每隔3天测量一次裸鼠腋下肿瘤的长径和短径，并按照公式计算肿瘤体积，肿瘤体积V＝0.5×短径×短径×长径，43天后处死小鼠。
结果如图5所示。图5A为剥离出的小鼠腋下肿瘤组织的照片，图5B为测量计算肿瘤体积的肿瘤生长曲线(肿瘤体积单位为mm3)，每组数据以平均值±SD表示。
结果表明，stomatin在体内也能促进肿瘤细胞的生长。
实施例3、stomatin对肿瘤细胞转移和扩散的影响
一、
对A549-sistom细胞和A549-sinc细胞进行24孔板划痕实验。
取长满细胞的24孔板，先于孔板底部用记号笔画上三道横线；用枪头垂直不倾斜画三道竖线；PBS洗三次，加入无血清培养基，37℃培养，分别在0h和24h拍照5个以上相同视野。
24小时后划痕愈合情况如图6A所示(视野放大倍数为100倍)，计算8个随机选定的视野中运动细胞迁移距离，结果如图6B所示。
二、
对A549-shstom细胞和A549-shnc细胞进行细胞迁移实验。
(1)制备细胞悬液前，对细胞进行无血清培养基饥饿处理12-24h；
(2)将小室(corning，货号：3422)放入培养板中，在上室加入300μl预温的无血清F12K培养基，室温下静置30min，使基质膜再水化，吸弃剩余培养基；
(3)消化细胞，终止消化后离心，弃去培养基，加PBS洗1次；用无血清F12K培养基重悬，调整细胞密度至1×105-5×105个/ml；
(4)24孔板下室加入500μl含有10％(体积百分含量)FBS的F12K培养基，上室加入100-200μl计好数的细胞悬液，注意下层培养液和小室之间不要有气泡，培养24h；
(5)染色；用棉签擦去上室内细胞，PBS洗2次。无水甲醇固定20min，0.5％结晶紫(无水甲醇配制)染色10min，自来水洗涤，正置显微镜下白光观察。
结果如图7A所示(视野放大倍数为100倍)，计数5个随机选定的视野中迁移细胞平均数，结果如图7B所示。
三、
对A549-shstom细胞和A549-shnc细胞使用BioCoat Matrigel侵袭小室进行细胞侵袭实验。
采用预铺了Matrigel的BioCoat Matrigel invasion chambers(康宁)替代步骤二中的小室，按照步骤二进行实验。
结果如图8A所示(视野放大倍数为100倍)，计数5个随机选定的视野中侵袭细胞平均数，结果如图8B所示。
四、
培养A549-NC细胞和A549-STOM细胞，制备得到细胞悬液，将BALB/c裸鼠分为两组(每组3只)，向一组BALB/c裸鼠尾静脉注射A549-NC细胞悬液(3×106个细胞/只)，另一组BALB/c裸鼠尾静脉注射A549-STOM细胞悬液(3×106个细胞/只)，60天后引颈处死小鼠，分离肺组织并进行观察。
结果如图9所示。图9A为小鼠肺组织照片，图9B为小鼠肺组织肉眼可见结节计数统计结果。结果表明，A549-NC组小鼠肺组织表面粗糙且肉眼可见结节较多，而A549-STOM组小鼠肺组织表面相对光滑且肉眼可见结节数较少。
五、
利用鬼笔环肽-iFlour 555染色A549-sinc细胞、A549-sistom细胞、H520-sinc细胞、H520-sistom细胞、95D-NC细胞和95D-STOM细胞，检测A549、H1299和95D细胞中stomatin表达对F-actin细胞骨架重塑的影响。
结果如图10所示。鬼笔环肽-iFlour 555标记的F-actin细胞骨架为红色，DAPI标记的细胞核为蓝色，比例尺代表30μm。
六、
Western blot比较A549-NC和A549-STOM细胞中E-cadherin和Claudin-1表达情况、H1299+LV-GFP细胞和H1299+LV-STOM细胞中Vimentin和N-cadherin表达情况，以β-actin作为内参对照。
本实验所用抗体信息如下：
Claudin-1抗体：Cell Signaling Technology，美国，货号：13255P，1:1000稀释。
E-cadherin抗体：Cell Signaling Technology，美国，货号：3195，1:1000稀释。
Vimentin抗体：Santa cruz biotechnology，美国，货号：sc-6260，1:1000稀释。
N-cadherin抗体：BD，美国，货号：610921，1:1000稀释。
结果如图11所示。结果表明，stomatin能抑制细胞向间质样表型转变。
上述结果表明，stomatin能有效抑制细胞转移，且stomatin表达下调能促进actin细胞骨架重塑，同时stomatin能抑制细胞向间质样表型转变。
<110> 北京医院
<120> stomatin蛋白及其编码基因在肺癌诊断治疗中的应用
<160> 2
<210> 1
<211> 288
<212> PRT
<213> 人（ Homo sapiens）
<400> 1
Met Ala Glu Lys Arg His Thr Arg Asp Ser Glu Ala Gln Arg Leu Pro
1 5 10 15
Asp Ser Phe Lys Asp Ser Pro Ser Lys Gly Leu Gly Pro Cys Gly Trp
20 25 30
Ile Leu Val Ala Phe Ser Phe Leu Phe Thr Val Ile Thr Phe Pro Ile
35 40 45
Ser Ile Trp Met Cys Ile Lys Ile Ile Lys Glu Tyr Glu Arg Ala Ile
50 55 60
Ile Phe Arg Leu Gly Arg Ile Leu Gln Gly Gly Ala Lys Gly Pro Gly
65 70 75 80
Leu Phe Phe Ile Leu Pro Cys Thr Asp Ser Phe Ile Lys Val Asp Met
85 90 95
Arg Thr Ile Ser Phe Asp Ile Pro Pro Gln Glu Ile Leu Thr Lys Asp
100 105 110
Ser Val Thr Ile Ser Val Asp Gly Val Val Tyr Tyr Arg Val Gln Asn
115 120 125
Ala Thr Leu Ala Val Ala Asn Ile Thr Asn Ala Asp Ser Ala Thr Arg
130 135 140
Leu Leu Ala Gln Thr Thr Leu Arg Asn Val Leu Gly Thr Lys Asn Leu
145 150 155 160
Ser Gln Ile Leu Ser Asp Arg Glu Glu Ile Ala His Asn Met Gln Ser
165 170 175
Thr Leu Asp Asp Ala Thr Asp Ala Trp Gly Ile Lys Val Glu Arg Val
180 185 190
Glu Ile Lys Asp Val Lys Leu Pro Val Gln Leu Gln Arg Ala Met Ala
195 200 205
Ala Glu Ala Glu Ala Ser Arg Glu Ala Arg Ala Lys Val Ile Ala Ala
210 215 220
Glu Gly Glu Met Asn Ala Ser Arg Ala Leu Lys Glu Ala Ser Met Val
225 230 235 240
Ile Thr Glu Tyr Pro Ala Ala Leu Gln Leu Arg Tyr Leu Gln Thr Leu
245 250 255
Thr Thr Ile Ala Ala Glu Lys Asn Ser Thr Ile Val Phe Pro Leu Pro
260 265 270
Ile Asp Met Leu Gln Gly Ile Ile Gly Ala Lys His Ser His Leu Gly
275 280 285
<210> 2
<211> 867
<212> DNA
<213> 人（ Homo sapiens）
<400> 2
atggccgaga agcggcacac acgggactcc gaagcccagc ggctccccga ctccttcaag 60
gacagcccca gtaagggcct tggaccttgc ggatggattt tggtggcgtt ctcattctta 120
ttcaccgtta taactttccc aatctcaata tggatgtgca taaagattat aaaagagtat 180
gaaagagcca tcatctttag attgggtcgc attttacaag gaggagccaa aggacctggt 240
ttgtttttta ttctgccatg cactgacagc ttcatcaaag tggacatgag aactatttca 300
tttgatattc ctcctcagga gatcctcaca aaggattcag tgacaattag cgtggatggt 360
gtggtctatt accgcgttca gaatgcaacc ctggctgtgg caaatatcac caacgctgac 420
tcagcaaccc gtcttttggc acaaactact ctgaggaatg ttctgggcac caagaatctt 480
tctcagatcc tctctgacag agaagaaatt gcacacaaca tgcagtctac tctggatgat 540
gccactgatg cctggggaat aaaggtggag cgtgtggaaa ttaaggatgt gaaactacct 600
gtgcagctcc agagagctat ggctgcagaa gcagaagcgt cccgcgaggc ccgcgccaag 660
gttattgcag ccgaaggaga aatgaatgca tccagggctc tgaaagaagc ctccatggtc 720
atcactgaat atcctgcagc ccttcagctc cgatacctgc agacactgac caccattgct 780
gctgagaaaa actcaacaat tgtcttccct ctgcccatag atatgctgca aggaatcata 840
ggggcaaaac acagccatct aggctag 867

Claims (10)

1.stomatin基因或用于促进stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
2.stomatin蛋白或用于提高stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
3.一种产品，其活性成分为促进stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下((a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
4.一种产品，其活性成分为提高stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(a1)-(a7)中的至少一种：
(a1)抑制肿瘤细胞转移；
(a2)抑制肿瘤细胞扩散；
(a3)抑制肿瘤细胞向间质样表型转变；
(a4)抑制肿瘤细胞actin细胞骨架重塑；
(a5)抑制肿瘤转移；
(a6)抑制肿瘤扩散；
(a7)治疗癌症。
5.stomatin基因或用于抑制stomatin基因表达的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
6.stomatin蛋白或用于降低stomatin蛋白含量和/活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
7.一种产品，其活性成分为抑制stomatin基因表达的物质；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
8.一种产品，其活性成分为降低stomatin蛋白含量和/活性的物质；所述产品的用途为如下(b1)-(b4)中的至少一种：
(b1)抑制肿瘤细胞增殖；
(b2)促进肿瘤细胞凋亡；
(b3)抑制肿瘤生长；
(b4)治疗癌症。
9.stomatin基因或stomatin蛋白作为靶点，在筛选或开发癌症治疗药物中的应用。
10.stomatin基因或stomatin蛋白作为癌症治疗靶点的应用。
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