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重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物抗菌技术领域,具体涉及重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用。发明人经体外药敏实验发现:重楼皂苷对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有抑制作用。重楼皂苷I、VI、VII、重楼总皂苷对糠秕马拉色菌有抑制作用的MIC分别为2μg/mL,19μg/mL,39μg/mL,0.5μg/mL;重楼皂苷I、II、VI、VII、重楼总皂苷对白假丝酵母菌有抑制作用的MIC分别为0.125μg/mL,0.03125μg/mL,78μg/mL,0.625g/L,0.5g/L。相对于现有的抑菌剂,重楼皂苷对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有较小的MIC值,具有良好的抑菌活性。本发明的重楼皂苷可以作为抗菌活性成分添加于外用药物、口服药物、消毒液、洗涤剂、抗菌涂料,起到抑制马拉色菌和白色念珠菌生长的作用。

Description

重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用
技术领域
本发明涉及微生物抗菌技术领域,具体涉及重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用。
背景技术
糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌是临床上较常见的两种致病性真菌。糠秕马拉色菌属是寄生于人体表正常菌群之一,在某些条件下可致病,由于其致病谱较广而日益受到重视。目前确定与糠秕马拉色菌感染有关的疾病包括花斑糠疹、糠秕马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎、异位性皮炎等。白假丝酵母菌也是一种条件致病菌,它常侵犯皮肤、粘膜,也可引起内脏或全身系统感染,由它所致的真菌病统称为念珠菌病,其临床症状错综复杂,急缓不一,严重者甚至可危及生命。近年来随着大剂量抗生素、激素、免疫抑制剂的应用,器官移植术的开展,其发病率和致死率逐年增高。
这两类真菌病难以根治且病程易反复,治疗方法多是外用或系统使用具有抑菌作用的药物。针对糠秕马拉色菌感染、白假丝酵母菌病的治疗药物目前仍以酮康唑、氟康唑、伊曲康唑等唑类抗真菌药物为主导。其中,酮康唑是治疗糠秕马拉色菌感染的首选西药,氟康唑是临床上治疗念珠菌病应用最广泛并首选的抗真菌西药。此外,针对白假丝酵母菌病的药物还有多烯类(两性霉素B)、丙烯胺类(特比萘芬)以及棘球白素类(卡泊芬净)等,这些药物主要作为唑类药物耐药时备选。抗真菌药物的共同作用机制主要为直接抗真菌作用、通过调节免疫抗菌消炎及协同抗菌等3个方面。如伊曲康唑通过干扰细胞色素P450依赖性酶14α-去甲基酶的活性,致使真菌细胞中堆积的14α-甲固醇及麦角固醇减少,达到改变许多膜参与的细胞功能,发挥抗真菌作用。氟康唑作用机制同伊曲康唑相似,但抗菌谱较窄一些。酮康唑是细胞色素P450 3A4抑制剂,但因其系统使用的不良反应较大,如药物相互作用、胃肠道反应,尤其是肝毒性,严重者可引发中毒性肝损害等,目前在深部真菌感染中已逐渐被氟康唑和伊曲康唑所取代。随着上述药物的使用频率和用量的增多,临床耐药现象越来越普遍,耐药程度也越来越高。据统计,部分医院的白假丝酵母菌对氟康唑的耐药率已高达10.4%。因此,有必要积极寻找具有不同结构,抑菌杀菌作用不同的抗真菌药物替代治疗,从而提高敏感性,增强疗效。
随着传统中药提取、分离技术的迅速发展,且中药具有来源广泛、不易出现耐药性、副作用很低等优点,中药抗菌成分受到国内外专家学者的重视。我国药用植物种类资源丰富,广泛分布于西南地区的重楼作为极具药用价值的植物之一,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效,用于臃肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症。相较于广谱抗真菌药物,重楼属植物具有较少肝肾毒性、胃肠道不适等副作用,对机体毒副作用低,不会产生耐药性,价格成本也较广谱抗真菌类药物低廉。现已从该属植株中分离鉴定了50多种化合物,其中甾体皂苷44种,占总化合物的80%以上。现代药理研究发现,从重楼中分离鉴定出的重楼皂苷化合物具有止血、祛痰和抑菌、镇静镇痛、抗早孕杀灭精子、抗细胞毒等作用。这些药用价值引起了大家的关注,由此我们猜想重楼是否也可用于抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌。
发明内容
针对上述现有技术的不足,本发明的目的在于提供重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用,重楼皂苷对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有良好的杀菌效果,可以应用于制备治疗由这两种菌引发的疾病的药物或杀菌制品中。
为了达到上述目的,本发明的技术方案是:
重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用。
进一步,上述重楼皂苷包括重楼皂苷单体I、II、VI、VII和重楼总皂苷。
进一步,重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用,重楼皂苷的MIC值分别是:
重楼皂苷I、VI、VII、重楼总皂苷对糠秕马拉色菌有抑制作用的MIC值分别为2μg/mL,19μg/mL,39μg/mL,0.5μg/mL;
重楼皂苷I、II、VI、VII、重楼总皂苷对白假丝酵母菌有抑制作用的MIC值分别为0.125μg/mL,0.03125μg/mL,78μg/mL,0.625g/L,0.5g/L。
进一步,上述的重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用,所述抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品包括:具有抑制糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌作用的外用药物、口服药物、消毒液、洗涤剂、抗菌涂料。
所述具有抑制糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌作用的抗菌涂料是喷涂于建筑物墙面的建筑涂料。
一种治疗马拉色菌病的药物,所述药物的成分包含重楼皂苷。
进一步,上述的治疗马拉色菌病的药物可以是外用药或口服药。
优选的,所述的治疗马拉色菌病的药物中的重楼皂苷的重量占比为5~10%。
一种治疗念珠菌病的药物,所述药物的成分包含重楼皂苷。
进一步,上述的治疗念珠菌病的药物可以是外用药或口服药。
优选的,所述的治疗念珠菌病的药物中重楼皂苷的总量占比为3~5%。
有益效果:
据相关文献报道,目前常用的广谱抗真菌类药物中,糠秕马拉色菌标准株对酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬的MIC值分别为0.125μg/ml,16μg/ml,0.125μg/ml,1μg/ml。白假丝酵母菌标准株对两性霉素B、伊曲康唑、5-氟胞嘧和氟康唑的MIC值分别为32μg/mL,4μg/mL,64μg/mL,32μg/mL。
发明人经体外药敏实验发现:重楼皂苷对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有抑制作用。重楼皂苷I、VI、VII、重楼总皂苷对糠秕马拉色菌有抑制作用的MIC分别为2μg/mL,19μg/mL,39μg/mL,0.5μg/mL;重楼皂苷I、II、VI、VII、重楼总皂苷对白假丝酵母菌有抑制作用的MIC分别为0.125μg/mL,0.03125μg/mL,78μg/mL,0.625g/L,0.5g/L。
相对于现有的抑菌剂,发明人实验所用的部分重楼皂苷成分对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有较小的MIC值。对于糠秕马拉色菌,重楼皂苷I的抑菌效果是氟康唑的8倍。对于白假丝酵母菌,重楼皂苷I、II均较现有抗真菌类西药的抑菌效果更佳,重楼皂苷I的抑菌效果是氟康唑的256倍、伊曲康唑的32倍,重楼皂苷II的抑菌效果是氟康唑的1024倍、伊曲康唑的128倍。重楼皂苷来源于天然植物,对人体更为安全。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明的实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例一:重楼皂苷对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌的抑制作用
1材料与方法
1.1材料:重楼皂苷I、II、VI、VII共四种单体成分以及重楼总皂苷,相关信息如下:
Ⅰ,CAS编号:50773-41-6;分子式:C44H70O16;分子量:855.02;Ⅱ,CAS编号:76296-72-5;分子式:C44H70O16;分子量:855.017;Ⅵ,CAS编号:55916-51-3;分子式:C39H62O13;分子量:738.90;Ⅶ,CAS编号:76296-75-8;分子式:C51H84O22;分子量:1049.22均购自上海源叶生物科技有限公司。
1.2试验菌株:糠秕马拉色菌标准菌株(CBS1878)购买于中国医学科学院皮肤病研究所医学真菌保藏中心,将糠秕马拉色菌接种于含菜籽油的沙氏培养基,置于37℃恒温箱中培养3-4天;白假丝酵母菌(CGMCC 2.4144),Candida albicans,购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心,将白假丝酵母菌接种于沙氏培养基表面,置37℃恒温箱中培养1-2天。
1.3方法:检测重楼皂苷分别对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌的MIC值(最小抑菌浓度)
利用96孔板进行实验,对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌进行扩大培养后,分别将两种菌株接种于96孔板,每孔加入100uL菌液,菌液浓度为1.0~5.0×103CFU/mL;先将4种重楼单体标准品分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解,实验中确保DMSO的终浓度<1%(经对照试验,此浓度以下的DMSO不影响糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌的生长),用菌株培养液将重楼皂苷单体和总皂苷稀释成10g/L的母液,通过十倍比稀释法,将重楼皂苷单体和总皂苷稀释成不同的浓度梯度,并添加到加了菌液的培养孔中,每孔100ul,设置三个重复孔,结果取3个数的平均值。同时设置调零孔和阴性对照组。药敏实验重复两次,并调整加药浓度以获得确定的MIC值。
l.4培养及结果判读:将接种后的药敏培养板置于37℃恒温箱孵育,培养24-48h后观察结果,取真菌完全受抑制(无生长)的那一孔对应的药物浓度,即为该药的MIC值。
2结果
经体外药敏实验发现:重楼皂苷对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有抑制作用。重楼皂苷I、VI、VII、重楼总皂苷对糠秕马拉色菌有抑制作用的MIC分别为2μg/mL,19μg/mL,39μg/mL,0.5μg/mL;重楼皂苷I、II、VI、VII、重楼总皂苷对白假丝酵母菌有抑制作用的MIC分别为0.125μg/mL,0.03125μg/mL,78μg/mL,0.625g/L,0.5g/L。
据相关文献报道,目前常用的广谱抗真菌类药物中,糠秕马拉色菌标准株对酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬的MIC值分别为0.125μg/ml,16μg/ml,0.125μg/ml,1μg/ml。白假丝酵母菌标准株对两性霉素B、伊曲康唑、5-氟胞嘧和氟康唑的MIC值分别为32μg/mL,4μg/mL,64μg/mL,32μg/mL。
相对于现有的抑菌剂,发明人实验所用的部分重楼皂苷成分对糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌具有较小的MIC值。对于糠秕马拉色菌,重楼皂苷I的抑菌效果是氟康唑的8倍。对于白假丝酵母菌,重楼皂苷I、II均较现有抗真菌类西药的的抑菌效果更佳,重楼皂苷I的抑菌效果是氟康唑的256倍、伊曲康唑的32倍,重楼皂苷II的抑菌效果是氟康唑的1024倍、伊曲康唑的128倍。
本发明未详述之处,均为本技术领域技术人员的公知技术。最后说明的是,以上实施例仅用于说明解释本发明的技术方案而非限制,对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用。
2.根据权利要求1所述的重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用,其特征在于:
重楼皂苷I、VI、VII、重楼总皂苷对糠秕马拉色菌有抑制作用的MIC值分别为2μg/mL,19μg/mL,39μg/mL,0.5μg/mL;
重楼皂苷I、II、VI、VII、重楼总皂苷对白假丝酵母菌有抑制作用的MIC值分别为0.125μg/mL,0.03125μg/mL,78μg/mL,0.625g/L,0.5g/L。
3.根据权利要求1所述的重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用,其特征在于:所述重楼皂苷包括重楼皂苷单体I、II、VI、VII和重楼总皂苷。
4.根据权利要求1所述的重楼皂苷在抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品中的应用,其特征在于:所述抗糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌制品包括:具有抑制糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌作用的外用药物、口服药物、消毒液、洗涤剂、抗菌涂料;
所述具有抑制糠秕马拉色菌和白假丝酵母菌作用的抗菌涂料是喷涂于建筑物墙面的建筑涂料。
5.一种治疗马拉色菌病的药物,其特征在于:所述药物的成分包含重楼皂苷。
6.根据权利要求5所述的治疗马拉色菌病的药物,其特征在于:所述药物是外用药或口服药。
7.根据权利要求5所述的治疗马拉色菌病的药物,其特征在于:所述药物中重楼皂苷的重量占比为5~10%。
8.一种治疗念珠菌病的药物,其特征在于:所述药物的成分包含重楼皂苷。
9.根据权利要求8所述的治疗念珠菌病的药物,其特征在于:所述药物是外用药或口服药。
10.根据权利要求8所述的治疗念珠菌病的药物,其特征在于:所述药物中重楼皂苷的总量占比为3~5%。
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