CN109641023A - 用于延缓衰老,预防和治疗老年神经退行性疾病,及治疗焦虑和睡眠障碍症的中草药有效组合 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一系列组合物,是混合草本植物柴胡(“B”)、延胡索(“Y”)、夜交藤(“P”)和合欢花(“A”)制备而成。其中BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP和BYPA提取物能显著降低暴露于D‑半乳糖的小鼠的一或多种加速衰老效应,包括空间记忆缺陷及脑内氧化应激标记物丙二醛和促炎细胞因子TNF‑α与IL‑6水平增加,这显示出该系列提取物具有減少老化损伤的功效,以及能预防和/或治疗阿尔茨海默病和/或帕金森氏病。此外,BYA、BPA、YPA、BA和PA提取物的缓解焦虑功效表示其可用作治疗焦虑症;而BYA、YPA和PA提取物的镇静催眠作用,表示其可有效治疗睡眠障碍症。于最大口服剂量测试中,没有一种提取物诱发起明显的运动量改变、肌肉协调降低或顺行性遗忘症等不良副作用。
Description
技术领域
本发明涉及以多种药用植物的混合物制备而成的中药汤剂,当中有柴胡(“B”)、延胡索(“Y”)、夜交藤(“P”)和合欢花(“A”)。具体而言,本发明涉及具疗效的药剂或草本补充剂,用于延缓衰老,预防和治疗老年神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病(AD)和帕金森氏病(PD),与治疗焦虑和睡眠障碍症。
背景技术
世界人口正在迅速老化,预计到2050年60岁以上的人数会增至20亿。因此,衰老造成的认知能力下降带来了迫在眉睫的社会和健康问题。生理方面,随衰老发生的包括海马体的内侧颞叶结构受损所导致的空间记忆下降,代表了这方面的一个研究焦点(Barnes1988;von Bohlen und Halbach et al.,2006)。生化方面,活性氧(ROS)引起的氧化损伤亦与正常衰老有关联(Finkel and Holbrook 2000;Barja 2004)。人体内,促炎物如白介素-6(IL-6)、C型反应蛋白(CRP)及肿瘤坏死因子-α(TNF-alpha),与抗炎物如TNF-β和IL-10之间维持着平衡;这些促炎物给予我们高度抵抗传染病的能力,但同时亦增加了晚年患炎症的风险。在老年时,这种平衡会偏向促炎性,引致慢性低度炎症,称为“炎性衰老”;伴随着的是促炎性细胞因子水平升高,最终成为诱发疾病和死亡的重要因素(Franceschi et al.,2007;Franceschi and Campisi 2014)。长寿的人,特别是百岁老人,似乎可以通过“抗炎”细胞因子反应来应对炎症,据指出抗炎可能是长寿的关键(Minciullo et al.,2016)。由此推断,要是能够缓和空间记忆缺陷,缓解氧化应激和/或降低促炎物如TNF-α和IL-6的水平,对延缓衰老是重要的。
正常衰老与和年龄相关的神经退行性疾病的健康问题相互重叠,就如记忆丧失是阿尔茨海默病(“AD”)的主要病状(Wolbers et al.,2014;Tanila 2012)。氧化应激是阿尔茨海默病和帕金森氏病病理机制的重要因子(Lovell et al.,1995;Nunomura et al.,2001;Perry et al.,2002;Henchcliffe and Beal 2008),而抗氧化剂被认定为能预防和治疗神经退行疾病,包括阿尔茨海默氏病和帕金森氏病(Prasad et al.,1999;Moosmannand Behl 2002;Fernandez-Checa et al.,2010)。另外,AD与老年斑块、tau蛋白异常和神经炎症等现象均有着关联,据指出神经炎症不是受老年斑块和神经纤维缠结所激活的被动反应,而是同它们于发病机理中的贡献一样多或更多(Heneka et al.,2015)。对56位轻度认知障碍(MCI)患者进行9个月的前瞻性检测时,发现25位患者仍处于MCI期,但另外31位患者已进展为AD。只有后者的患者的脑脊液TNF-α水平显著高于对照组,表明了CNS炎症是AD发病的早期标示(Tarkowski et al.,2003)。TgAPPsw和PS1/APPsw两种转基因AD模型小鼠脑内的细胞因子表达情况也证实这些小鼠大脑处于炎症应激活性状态,脑切片中的TNF-α、IL-6、IL1-α和GM-CSF水平均显著增加(Patel et al.,2005)。迄今为止,以阿司匹林、类固醇类和非类固醇类抗炎药作为AD的抗炎预防试验,成果令人失望(Jaturapatporn et al.,2012;Alzheimer’s Disease Anti-inflammatory Prevention Trial Research Group2013),尽管早期有更积极的成果(Breitner 2011)。然而,从非类固醇类抗炎药(NSAID)衍生的CHF5074,却能降低轻度认知障碍患者脑脊液中神经炎症标志物TNF-α和sCD40L的浓度(Ross et al.,2016)。这样的神经炎症标志物的调节,表示使用β-淀粉样和/或tau蛋白为靶点的药物,配合调节神经炎症药物的组合疗法,可以提供有效延缓AD进程的方法(Heppner et al.,2015)。所以,能有效降低氧化应激的药剂可有助预防和/或治疗阿尔茨海默氏病和帕金森氏病,而具减少空间记忆缺陷和/或能减低大脑TNF-α或IL-6等促炎物水平的药剂提供了治疗阿尔茨海默病的药物。
由空间记忆缺陷、氧化应激、炎症、焦虑和睡眠障碍引致的健康问题在老年人中很常见,并且会对大脑造成影响,需要无副作用故可长期服用,并能穿过血脑屏障故可进入包括大脑的身体各个器官,的预防性和/或治疗性药物。因应这方面,数百年来大量中草药已被用于医疗上,并且已知适合长期使用。早前,关于抗焦虑中药汤剂的研究,开发了名为“二胡欢藤”或“BYPA”的抗焦虑中药汤剂(Xue and Wong 2008),内含四种中草药:柴胡(“B”)、延胡索(“Y”)、夜交藤(“P”)和合欢花(“A”),已通过急性及慢性毒性测试,并获香港特区政府卫生处批准以抗焦虑药剂CalmlinTM进行销售。作为抗焦虑药,当中的有效成分相信能穿过血脑屏障。有关这四种草药的一般应用(Xie and Huang 1991)及临床效果如下所述:
柴胡可作为治疗间歇发热的退热药,并能缓解胸胁疼痛,增强脾脏机能。此外,它还能降低血总胆固醇和甘油三酯,增加低密度脂蛋白胆固醇的水平(Shao et al.,2002),并对一系列受体显示亲和力,包括多巴胺D1和D2、毒蕈碱型乙酰胆碱M1、5-HT1和5-HT2,及GABAA受体(Liao et al.,1995)。
延胡索通常用于治疗各种胸腹疼痛,提高痛阈值并缓解痉挛性疼痛;亦可与其他草药如当归(Angelicae dahuricae)等一并使用,有效舒缓痛楚(Yuan et al.,2004)。它含有dl-四氢巴马汀,口服给药小鼠后诱发抗焦虑作用(Leung et al.,2003);其异构体l-四氢巴马汀是多巴胺受体拮抗剂(Xu et al.,1989;Mantsch et al.,2007),能減弱羟考酮诱发的条件性位置偏爱(Liu et al.,2009)及海洛因的自身给药行为(Yue et al.,2012)。在中国,以l-四氢巴马汀为镇痛药的“Rotundine”片剂和注射剂,已获国家批准使用(中国药典委员会2015)。
夜交藤可作为一种镇静催眠药,用于治疗神经衰弱、失眠及多梦,并能促进血液循环以改善侧支血液循環不良引致的四肢疼痛。当与戊巴比妥合用给药时,有明显的协同镇静催眠作用(Wing 2001)。
合欢花可作为镇静催眠药和镇静剂,用于治疗烦躁不安和失眠。已知的是,它能以剂量依赖方式增加戊巴比妥诱发的睡眠时间(Ji et al.,2007;Kang et al.,2000),并且在强迫游泳测试结果显示出抗抑郁效应(Li et al.,2006)。
发明内容
提供一复方中草药组合物,内含一种提取物或其干燥粉末,所述提取物来自多种植物的混合物,此些植物可以是下列任何一种:
(a)柴胡、延胡索和夜交藤,所述组合物不含合欢花(“BYP”);
(b)柴胡、延胡索和合欢花,所述组合物不含夜交藤(“BYA”);
(c)柴胡、夜交藤和合欢花,所述组合物不含延胡索(“BPA”);
(d)延胡索、夜交藤和合欢花,所述组合物不含柴胡(“YPA”);
(e)柴胡和延胡索,所述组合物不含夜交藤和合欢花(“BY”);
(f)柴胡和夜交藤,所述组合物不含延胡索和合欢花(“BP”);
(g)柴胡和合欢花,所述组合物不含延胡索和夜交藤(“BA”);
(h)延胡索和夜交藤,所述组合物不含柴胡和合欢花(“YP”);
(i)夜交藤和合欢花,所述组合物不含柴胡和延胡索(“PA”)。
药物制剂除包含中草药组合物,还有赋形剂。
草药补充剂除包含中草药组合物,还有赋形剂。
提供一种方法,能延缓衰老和/或治疗焦虑症和/或治疗睡眠障碍。该方法是向有需要的受药者给予含植物BYA的中草药组合物,或是含植物BYA的药物制剂或草药补充剂。
提供一种能延缓衰老和/或治疗焦虑症的方法。该方法是向有需要的受药者给予含植物BPA的中草药组合物或是含植物BPA的药物制剂或草药补充剂。
提供一种能延缓衰老的方法。该方法是向有需要的受药者给予含植物BYP、BY、BP、YP的中草药组合物,或是含植物BYP、BY、BP、YP、BYPA的药物制剂或草药补充剂。此组合物包括提取物或提取物干燥粉末,此提取物可以是从多种药用植物的混合物提取或是各药用植物提取的提取物的混合物。前述的药用植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花(“BYPA”)。
提供一种治疗焦虑症和/或治疗睡眠障碍的方法。该方法是向有需要的受药者给予含植物YPA或PA的中草药组合物,或是含植物YPA或PA的药物制剂或草药补充剂。
提供一种治疗焦虑症的方法。该方法是向有需要的受药者给予含植物BA的中草药组合物,或是含植物BA的药物制剂或草药补充剂.
除了前述方法,用来解决正常老年人因老化、焦虑和睡眠障碍引致的单一或一并发生的健康问题,还提供了一种预防或治疗阿尔茨海默病的方法。该方法是向有需要的受药者给予BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA的中草药组合物,或是含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA的药物制剂或草药补充剂。
此外,还提供了一种预防或治疗帕金森氏病的方法。该方法是向有需要的受药者给予BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA的中草药组合物,或含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA的药物制剂或草药补充剂。
提供一种用中草药组合物制备成药物制剂或草药补充剂的方法。该方法的步骤如下:
(i)将含一或多种植物的第一种粉末在溶剂存在下加热,形成悬浮液;
(ii)收集悬浮液上清;
(iii)将悬浮液残余在第二种溶剂存在下加热,形成第二悬浮液;
(iv)收集第二悬浮液上清;
(v)合并此些上清,形成第三悬浮液;
(vi)将第三悬浮液过滤,形成过滤后第三悬浮液;
(vii)加热过滤后第三悬浮液,形成浓缩液;
(viii)将浓缩液脱水,形成脱水物;
(ix)由脱水物形成第二粉末;
(x)干燥第二粉末,形成一种或多种植物的提取物粉末;
(xi)如果步骤(x)的提取物粉末是来自包含该植物组合物所有成分植物的提取物,将该提取物粉末与赋形剂混合,以获得该组合物的药物制剂或草药补充剂;以及
(xii)对任何其余提取得到该组合物的植物可选地重复(i)–(iv)和可选地重复(v)–(x)中任何一个或多个提取步骤,将第二悬浮液、第三悬浮液、过滤后第三悬浮液、浓缩液、脱水物或第二粉末的各种合并成最终提取物粉末,并将此最终提取物粉末与赋形剂混合,获得整个植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
其他事物和方法的特点,一部分是显而易见的,而一部分将在下文中显示。
附图说明
图1A和1B的条形图显示各种草药提取物对空间记忆的抗老化作用。X轴上的“D-gal”标识代表在Y迷宫测试之前进行每天接受D-半乳糖皮下注射(150mg/kg)及口服载体(0.9%NaCl)达8周的D-半乳糖对照小鼠;另“BYPA”、“BYP”、“BYA”、“BPA”、“YPA”、“BY”、“BP”或“YP”标识则分别代表在Y迷宫测试之前进行每天接受D-半乳糖皮下注射(150mg/kg)及口服所标识的草药提取物(120mg/kg)达8周的小鼠。X轴上的“Veh”标识代表在Y迷宫测试之前,每天只接受注射及口服载体达8周,而没有接受D-半乳糖或任何草药提取物的小鼠。数据以平均值±S.E.M.(n≥12)表示。图1A显示进入Y迷宫新臂的百分比,图1B则显示在新臂停留的时间。*(p<0.05),**(p<0.01)或***(p<0.001)表示经单因素方差分析及Newman–Keuls事后范围检验,所得到两组被图中横线交连的小鼠之间平均数差异的显著性。
图2A、2B和2C的条形图显示各种草药提取物对接受了8周D-半乳糖皮下注射的小鼠大脑所发生的抗炎和抗氧化作用。各组标识“Veh”、“D-gal”、“BYPA”、“BYP”、“BYA”、“BPA”、“YPA”、“BY”、“BP”或“YP”的小鼠在处死前如图1所描述的给药8周,并进行脑组织生物化学分析。数据以平均值±S.E.M.(N=6)表示。图2A为脑内TNF-α水平;图2B为脑内IL-6水平;而图2C则是脑内脂质过氧化物丙二醛(MDA)的水平。*(p<0.05),**(p<0.01)或***(p<0.001)表示经单因素方差分析及Newman–Keuls事后范围检验,所得到两组被图中横线交连的小鼠之间平均数差异的显著性。
图3显示D-半乳糖诱发的胡须丢失及各种草药提取物预防胡须丢失的成效。各组标识为“Veh”、“D-gal”、“BYPA”、“BYP”、“BYA”、“BPA”和“YPA”的小鼠如图1所描述给药8周。图片记录显示各组小鼠在8周期间后的胡须状况。(I)两只没有接受D-半乳糖的正常对照;(IIa,IIb)四只经D-半乳糖诱发出现胡须丢失的小鼠;(IIc,IId)四只接受了D-半乳糖但没出现胡须丢失的小鼠;(III)其中两只接受了D-半乳糖和BYPA的小鼠;(IV)其中两只接受了D-半乳糖和BYP的小鼠;(V)其中两只接受了D-半乳糖和BYA的小鼠;(VI)其中两只接受了D-半乳糖和BPA的小鼠;和(VII)其中两只接受了D-半乳糖和YPA的小鼠。
图4的条形图显示各种草药提取物的抗焦虑和镇静作用。于高架十字迷宫并紧接洞板实验进行前的35分钟,小鼠口服接受不含任何药物或草药提取物的载体(“Veh”,0.9%NaCl),或地西泮(“DZ”,1或3mg/kg),或各种草药提取物(30、60、90或120mg/kg),如图中每个子图的X轴上所标识。Y轴表示各参数平均值±S.E.M.(n>18),即停留在高架十字迷宫开放臂的时间百分比(空心柱),或洞板实验中低头窥视小孔的次数(条纹柱)。*(p<0.05),**(p<0.01)或***(p<0.001)表示经单因素方差分析及Newman–Keuls事后范围检验,所得到载体给药与DZ或草药提取物给药的小鼠组别之间平均数差异的显著性。而显示在每个子图X轴上的数字1、3、30、60、90或120,则是以mg/kg为单位的给药剂量。
图5A、5B和5C的条形图显示各种草药提取物并没产生任何不良副作用。图5A是各组别的运动量水平;图5B是依据动物在旋转杆上的停留时间所测定的肌肉协调功能;图5C是以单步被动回避实验中,步入潜伏期降低形式的认知障碍程度。供小鼠给药的载体(“Veh”,0.9%NaCl)、地西泮(“DZ”,1或3mg/kg)、单一或多种草药混合物的提取物(120mg/kg),均标识于X轴上。数据以平均值±S.E.M.形式报告(n>16)。***(p<0.001)表示经单因素方差分析及Newman–Keuls事后范围检验,DZ给药组与载体给药组之间的显著差异;各个单一草药或草药混合物提取物给药组与载体给药组之间并没有任何显著差异。
具体实施方式
研究发现,包括柴胡(B)、延胡索(Y)、夜交藤(P)和合欢花(A)的,采用两种、三种和全部四种草药的混合物制备的多种提取物能有效预防或治疗记忆缺陷、氧化应激、神经炎症、焦虑和睡眠障碍等与年龄相关的健康问题。这些混合提取物在小鼠模型中能就Y-迷宫试验中测量的空间记忆缺陷、脑内TNF-α和IL-6水平的升高所显示的神经炎症、或脑内MDA水平的增加显示氧化应激增强所观测到的,能显著缓和D-半乳糖所诱发的加速衰老症状,展现显著的抗衰老作用。由于自然衰老与年龄相关退行性疾病的表型症状相互重叠,因此记忆缺陷、神经炎症和氧化应激等上观察到的抗老化作用亦适用于阿尔茨海默氏病的预防和治疗上;而抗氧化应激上观察到的抗老化作用亦适用于帕金森氏病的预防和治疗。另外,一些基于B、Y、P和A的混合草药汤剂则显示出具有可治疗焦虑症的抗焦虑作用,和/或具有可用于治疗睡眠障碍的镇静作用。所有具疗效的BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP、BA、YP、PA和BYPA汤剂在达到最大测试口服剂量时均没有明显的严重副作用,如以运动量的增加或减少,转动杆上肌肉协调的减低,或发生在小鼠单步被动回避模型试验中的顺行性遗忘形式显现的副作用。
组合物中包含有一提取物或一提取物的干燥粉末。提取物可以是来源于如本文所述的草药的混合物。或者是,提取物可包括将各单一植物的提取物的混合物。
组合物可以是提取物的汤剂或汤剂的干燥粉末。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡、延胡索和夜交藤(“BYP”)。此组合物不含合欢花。植物提取物的混合物可来源于包括B、Y和P的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0]:[0.5-2.0],以1.4:1:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡、延胡索和合欢花(“BYA”)。此组合物不含夜交藤。植物提取物的混合物可来源于包括B、Y和A的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0]:[0.1-1.5],以1.4:1:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡、夜交藤和合欢花(“BPA”)。此组合物不含延胡索。植物提取物的混合物可来源于包括B、P和A的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0]:[0.1-1.5],以1.4:1:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有延胡索、夜交藤和合欢花(“YPA”)。此组合物不含柴胡。植物提取物的混合物可来源于包括Y、P和A的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0]:[0.1-1.5],以1:1:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡和延胡索(“BY”)。此组合物不含夜交藤和合欢花。植物提取物的混合物可来源于包括B和Y的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0],以1.4:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡和夜交藤(“BP”)。此组合物不含延胡索和合欢花。植物提取物的混合物可来源于包括B和P的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0],以1.4:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡和合欢花(“BA”)。此组合物不含延胡索和夜交藤。植物提取物的混合物可来源于包括B和A的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.1-1.5],以1.4:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有延胡索和夜交藤(“YP”)。此组合物不含柴胡和合欢花。植物提取物的混合物可来源于包括Y和P的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0],以1:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有夜交藤和合欢花(“PA”)。此组合物不含柴胡和延胡索。植物提取物的混合物可来源于包括P和A的粉末混合物,重量比约为[0.5-2.0]:[0.1-1.5],以1:1为优选。
提供的组合物,是源自多种植物的提取物,含有柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花(“BYPA”)。此提取物可从包含B、Y、P和A的粉末制成,重量比约为[0.5-2.0]:[0.5-2.0]:[0.5-2.0]:[0.1-1.5],以1.4:1:1:1为优选。
上述各组合物中的植物混合物成分,可以从含有0至约95%柴胡、0至约95%延胡索、0至约95%夜交藤和0至约75%合欢花的粉末混合而成,各成分的wt.%是按组合物中所有干燥植物的总重量计算。上述各组合物中的最优的植物成分,含有32%至约58%柴胡、23%至约50%延胡索、23%至约50%夜交藤和23%至约50%合欢花。各成分的wt.%是按混合物内所有干燥植物的总重量计算。
可制备成为药物制剂。该药物制剂包含了上述的任何组合物以及赋形剂。此赋形剂可为任意可以应用于药物制作的赋形剂。
可制备成为草药补充剂。该草药补充剂包含了上述的任何组合物以及赋形剂。此赋形剂可为任意可以应用于草药补充剂或药物制作的赋形剂。
提供一种延缓衰老和/或治疗焦虑和/或治疗睡眠障碍的方法。该方法是向有需要的受药者给予本文所述内含BYA植物组合的提取物;或是本文所述内含BYA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
提供一种延缓衰老和/或治疗焦虑的方法。该方法是向有需要的受药者给予本文所述内含BPA植物组合的提取物;或是本文所述内含BPA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
提供一种延缓衰老的方法。该方法是向有需要的受药者给予本文所述内含BYP、BY、BP、YP或BYPA植物组合的提取物;或是本文所述内含BYP、BY、BP、YP或BYPA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
如实施例2所述,空间记忆缺陷、神经炎症和氧化应激是于正常老化及D-半乳糖诱发加速老化的过程中的三种表现。在此基础上,能够改善动物模型中这三种生理和生物化学变化的药剂将被视为能用于治疗衰老过程中的症状的有效药物。因此,任何一种包含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA混合物的草本组合物或包含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA混合物的草药补充剂,由于其表现出增加小鼠在Y型迷宫实验中进入新手臂的次数和停留时间,或使脑内TNF-α,IL-6或MDA水平显著降低的能力,代表它是一种治疗正常老化症状的药物。由于BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA提取物的神经保护作用是通过每日口服而获得,其活性成分于胃肠道中是稳定而能够诱发抗衰老作用的。
提供了一种治疗焦虑症和/或治疗睡眠障碍的方法。该方法是向有需要的受药者给予本文所述内含YPA或PA植物组合的提取物;或是本文所述内含YPA或PA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
提供了一种治疗焦虑症的方法。该方法是向有需要的受药者给予本文所述内含BA植物组合的提取物;或是本文所述内含BA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
如实施例3所述,含两种草药的提取物BA和PA及三种草药的提取物BYA、BPA和YPA提取物,在不同的剂量下,均能显著诱发抗焦虑作用,如在高架十字迷宫测试中,小鼠停留于开放臂的时间百分比增加所证实的,证明了这五种草药汤剂可用于治疗焦虑症。含两种草药的提取物PA及三种草药的提取物BYA和YPA草药提取物引发了明显的镇静催眠作用,表明了这三种草药汤剂可用于治疗睡眠障碍。
关于抗焦虑和镇静作用,图4所示的测试结果显示B、Y、P和A草药之间具有意想不到的拮抗作用及协同作用。例如,虽然单一草药Y、P和A提取物在60-120mg/kg剂量下均能够诱发抗焦虑,但BYP、BY、BP、YP及YA提取物即使在120mg/kg剂量下也没有显示任何抗焦虑作用。尤其值得注意的是,其中两种草药组合YP及YA均缺乏抗焦虑作用,但它们单一使用都具有抗焦虑效能。同样,虽然单一草药B、P及A提取物在30mg/kg或60mg/kg以上剂量下对小鼠都产生了明显的镇静催眠作用;但BYP、BY、BP、YP及YA提取物没有任何一者在120mg/kg剂量下引发明显的镇静催眠效果。这些发现清晰地表明了在镇静效能方面,从单一B、Y、P和A草药混合而成的BYP、BPA、BY、BP、BA、YP、YA和BYPA组合物,其综合药用特性与组成其的单一草药的药用特性总和有着明显差异。这种拮抗作用及协同作用,可用于增强疗效并消除不良副作用。
提供了一种预防或治疗阿尔茨海默氏病的方法。该方法是向有需要的受药者给予内含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA植物组合的提取物;或是本文所述内含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
如实施例2所述,空间记忆缺陷、神经炎症和氧化应激亦是阿尔茨海默氏病的病症,任何一种当中包含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA混合物的草本组合物或草药补充剂,由于其显著能增加小鼠在Y型迷宫实验中进入新手臂的次数和停留时间,或能使脑内TNF-α,IL-6或MDA水平明显降低,因此代表它是一种有效预防和/或治疗阿尔茨海默氏病的药物。在测试过的各草药提取物中,值得注意的是BYP和BY提取物在D-半乳糖诱发小鼠实验中,全部五个实验参数结果均显示它们具有抗衰老和抗阿尔茨海默病效应:在Y迷宫测试中,小鼠进入新手臂的次数及停留时间的百分比明显增加,而脑内TNF-α、IL-6和MDA水平则下降。另外,BP、YP和BYPA提取物也对那五个实验参数中的四个获得了正面的效应。
并提供了一种预防或治疗帕金森病氏病的方法。该方法是向有需要的受药者给予本文所述内含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA植物提取物的组合物;又或是本文所述内含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA植物组合提取物的药物制剂或草药补充剂。
由于氧化应激是帕金森氏病的一种病徵,任何一种当中包含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA组合提取物的草本组合物或草药补充剂,如图2所述,能明显降低D-半乳糖诱发小鼠脑内的MDA水平,即代表它也是一种有效预防和/或治疗帕金森氏病的药物。
如实施例4所述,各种由B、Y、P和A组合制备的,含一种、两种、三种或四种草药的提取物,在以120mg/kg剂量给药时,均没有明显的运动量改变、肌肉协调降低或顺行性遗忘症。因此,本文所述的组合物BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP、BA、YP、PA和BYPA,它们不但能提供保护以抵抗正常老化,预防或治疗阿尔茨海默氏病及帕金森氏病,及治疗焦虑和/或睡眠障碍,而且并没有活动量改变、肌肉不协调或顺行性遗忘症等不良副作用。此外,这10种组合物之中,BYP、BPA、BY、BP、YP和BYPA均显示出抗衰老效果,而没有明显的镇静催眠作用。这是由于其组成草药之间的相互拮抗作用,虽然B、P或A草药各自单一给药时会引起明显的镇静作用。而由于缺乏镇静催眠作用,将有利于这六种组合物用作长期服用的抗衰老、抗阿尔茨海默氏病和/或抗帕金森氏病药物。
本发明所述的方法所治疗的对象通常是人,但也可以是有需要接受抗衰老或抗焦虑治疗的哺乳动物。可把草药组合物或补充剂添加到动物饲料中。
需要接受延缓衰老治疗的受药者,可以是30岁或以上人士,或经历到与衰老有关的变化,如空间记忆减退或智力敏锐度降低。
需预防或治疗阿尔茨海默病的受药人士,可以是基于他们的认知能力和家族病史、精神状态、神经检测和神经影像结果,被评为阿尔茨海默病高危者或确诊病人的人士(Mendez,2006;Schroeter et al.,2009)。
需要预防或治疗帕金森氏病的受药人士,可以是基于其出现一些原发性症状如震颤、僵硬、运动迟缓和姿势不稳定,而被评为帕金森氏病高危者或确诊病人的人士(NIHSeniorHealth 2012)。受药者亦有可能会表现出其它的次发性症状。
本文所用术语“治疗”是指达到一疗效。此处的疗效意指能预防、改善或根治潜在病症。例如,抗焦虑受试者的疗效,是能预防、改善或根治焦虑的根源。还有,疗效的实现是通过根治、改善或预防受药者因潜在病症引起的一种或多种生理症状,并达至可观察到的改善,尽管受试者仍可能患有该潜在病症。例如,对焦虑症受药者施用药物制剂或草药补充剂后,观察到的疗效,可以是受药者感受到较少的焦虑,亦可以是观察到受药者其它伴随焦虑的症状如心悸、呼吸短促、恶心、头晕、肌肉紧张和口干等情况的改善。
含有效剂量的组合物可以作为药物制剂或草药补充剂使用,有效剂量是指来自各植物组合的提取物,或是混合各植物提取物得到的混合物,并加入可供药用的载体,能够实现治疗或预防功效的剂量。应用时的实际有效剂量将取决于受药者个人(例如年龄、体重等)、所治疗的病症及给药途径。有效剂量的测定,是本领域科技人员根据本文的公开内容,有能力进行的。用于人类的有效剂量,可以从动物模型(Reagan–Shaw et al.,2016),来测定,此动物模型是基于食品和药物管理局建议的体表面积(BSA)标准化方法。
本文所述的药物制剂和草药补充剂可以多种途径或模式给予受药者,如口服药、润肤液、皮肤霜、皮肤药贴和非消化道给药(例如:静脉或皮下注射)。而最优选的给药途径是口服、润肤液、护肤霜和皮肤药贴。
药物制剂和草药补充剂可以用常规方式来制备,使用一种或多种可供药用的赋形剂如载体、稀释剂和助剂,此助剂有助于将活性化合物制成适合生理上使用的制剂。所选的制剂将取决于给药途径。
对于口服给药制剂,通过将组合物与本领域所习知可供药用的赋形剂混合,可以·容易地制备组合物的制剂。此处的赋形剂可使组合物配制成片剂、药丸、糖锭片、胶囊、水剂、凝胶、糖浆、糊剂、混悬剂和糯米纸囊剂等,给予受药者口服摄取。合适的赋形剂均为本领域已知的,特别是填充剂如各种糖类,包括乳糖或蔗糖;纤维素制剂如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等;及各种调味剂。如有需要,可加入崩解剂,如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。
活性成分(即各种植物混合物的提取物)约占口服药总重量的20、30、40、50、60、70、80或90%,余下部分包括合适的赋形剂。
本文所述的植物组合提取物可通过以下方法制备。将包含每种植物粉末的混合粉末放进溶剂(例如:2公升5%乙酸)中煮沸约2小时成悬浮液。收集悬浮液上清。将从悬浮液中分离出的残余物在溶剂(例如2公升的5%乙酸)中煮沸成为第二悬浮液。收集第二悬浮液上清。并将两次上清合并成第三悬浮液。第三悬浮液过滤后,经煮沸成浓缩液(约100ml)。浓缩液置于烘箱中脱水(温度约摄氏92度)成为脱水残余物。将脱水残余物与溶剂(如100%乙醇)混合,打碎成细粉再干燥(温度约摄氏92度),制成了粉状植物提取物。因为含多种植物的中药汤剂,可以是,且一般知道是,通过提取含多于一种药用植物的混合物,或通过混合各单一植物的提取物制备而成,所以本文所述的组合提取物,也可以如[0019]所述,使用步骤(i)至(x)制备混合多种植物的粉末,或首先分别处理每种植物,待完成步骤(v)、(vi)、(vii)、(viii)、(ix)或(x)后,再将各单一植物的提取物混合起来产生最终所需的组合提取物粉剂。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BYP组成,制备混合物粉末含B:Y:P的重量比约为1.4:1:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BYA组成,制备混合物粉末含B:Y:A的重量比约为1.4:1:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BPA组成,制备混合物粉末含B:P:A的重量比约为1.4:1:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由YPA组成,制备混合物粉末含Y:P:A的重量比约为1:1:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BY组成,制备混合物粉末含B:Y的重量比约为1.4:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BP组成,制备混合物粉末含B:P的重量比约为1.4:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BA组成,制备混合物粉末含B:A的重量比约为1.4:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由YP组成,制备混合物粉末含Y:P的重量比约为1:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由PA组成,制备混合物粉末含P:A的重量比约为1:1。
所提取的植物混合物可以包含或基本上由BYPA组成,制备混合物粉末含B:Y:P:A的重量比约为1.4:1:1:1。
以上对本发明的详细描述,清晰地说明了在不脱离本发明所附权利要求限定范围的前提下,本发明还可以进行各种修改和变化。
实施例
以下非限制性实施例将进一步说明本发明。
实施例1:草药混合物的提取及实验动物
草药混合物提取物的制备:制备混有四种草药配方BYPA的汤剂,按量将65克B,45克Y,45克P和45克A粉碎,在2公升5%乙酸中沸腾2小时。收集上清液并将残余物在2公升5%乙酸中再次煮沸2小时。将两批上清液合并,经过滤后煮沸浓缩至100ml,然后在摄氏92度的烘箱中脱水。随后加入300ml 100%乙醇于脱水残余物中,打成细粉,置于摄氏92度重新干燥,最后把干燥提取物称重及粉碎。
制备上述四种草药BYPA汤剂的子集的提取物当中省略了一种或多种草药成分,用相同的制备过程,而其余成分量则不改变;例如三种草药BYP汤剂提取物的制备,是采用了65克B,45克Y和45克P,于2公升5%乙酸中煮沸2小时等等,或是两种草药PA汤剂提取物的制备,只采用了45克P和45克A,于2公升5%乙酸中煮2小时等等。
对照组组合物:在一些实验中,购自Sigma公司(St.Louis,MO,USA)的地西泮(Diazepam,DZ)被用作对比抗焦虑剂。使用前,地西泮先溶于含1%DMSO的0.9%NaCl中,并且通过口服途径以10ml/kg给药体积给予实验小鼠地西泮药液。
实验动物:将雄性ICR小鼠随机分成每组5至10只,自由进食和饮水,保持08:00至20:00光照周期。所有动物实验均按照获香港特别行政区卫生署辖下渔农自然护理署批准的实验动物照料及使用守则进行有关动物实验。抗衰老研究中,使用约10周龄的小鼠(体重30-50g)。行为实验中,使用4-6周龄的小鼠(体重20-35g)。
数据分析:实验结果以平均值±标准误差(S.E.M.)表示。数据经单因素方差分析后,再以Newman-Keuls检验方法进行分析。
实施例2:抗衰老试验
D-半乳糖慢性接触是广泛研究的诱导衰老模型其导致果蝇和家蝇寿命缩短(Jordens et al.,1999;Cui et al.,2004),并促使小鼠的D-半乳糖诱导加速老化模型中的空间记忆缺陷、海马神经元退化和氧化损伤(Cui et al.,2006)。在该模型中,还发现了空间记忆障碍是伴随着海马突触体膜上外周型苯二氮受体(PBR)结合位点密度降低(Chen et al.,2006)。这个加速老化模型已被应用于寻找有效延缓D-半乳糖给药动物衰老反应的药物和/或健康补充剂,诸如以100mg/kg胃给药(i.g.)牛膝多糖或枸杞多糖,能有效抑制非酶性糖基化(Deng et al.,2003);100mg/kg腹腔给药(i.p.)R-α-硫辛酸,能改善认知功能障碍和神经退化(Cui 2006);20mg/kg腹腔给药(i.p.)人参皂苷Rg1,能预防认知障碍和海马体衰老(Zhu et al.,2014);及口服10或20mg/kg亚细亚酸,能降低脑内ROS、TNF-α和IL-6的升高水平(Chao et al.,2015)。本研究应用了该D-半乳糖模型,对10周龄雄性ICR小鼠(每组数目n=8~12)进行实验。通过皮下注射每日给予D-半乳糖组小鼠150mg/kg剂量的D-半乳糖,另再通过口服每日给予D-半乳糖对照亚组(“D-gal”)小鼠0.9%NaCl的载体,或通过口服每日给予D-半乳糖实验亚组小鼠BYPA、BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP和YP其中一组草药提取物(120mg/kg),给药期为8周。而载体组(“Veh”)则每天只给注射盐水(0.9%NaCl)及口服盐水(0.9%NaCl),为期同样是8周。8周后,对D-gal对照组、各草药提取物给药组及载体组的加速老化程度,基于五个标准进行评估:(i)体重;(ii)Y迷宫的空间记忆缺陷测试;(iii)脑内促炎细胞因子TNF-α的水平;(iv)脑内促炎细胞因子IL6的水平;和(v)脑内氧化应激标记MDA的水平。发现载体组、D-gal对照组或各草药提取物给药组8周后的体重均没有显著改变。
Y迷宫测试:该测试是一项二重记忆测试,基于Y迷宫的自由选择探索模式,避免对小鼠使用电击或剥夺,也不需要任何规限性学习;用Y迷宫测试可以显示海马体损伤和慢性压力是导致空间记忆功能的受损(Dellu et al.,2000;Conrad et al.,1996)。如图1所示的研究中,每只D-gal亚组动物每日给予D-半乳糖8周后进行测试,所述Y迷宫由3个互为120度夹角的相同臂组成,分别为“起始臂”,“开放臂”和“新颖臂”。测试开始时,先关闭新颖臂入口,将动物置于起始臂,并允许自由探索起始臂和开放臂10分钟。然后,把动物移离迷宫,60分钟后重新进入迷宫,但这次新颖臂的入口是打开的,好让动物可以自由探索三只手臂,测试时间为5分钟。测试期间,记录动物进入每只臂的次数及停留时间,进/出臂的定义为所有四只爪子进入手臂内或在手臂之外。完全丧失空间记忆的动物会随机进入三只手臂,这使进入新颖臂的次数百分比约为33%及停留在新颖臂中的时间百分比约为33%。相反,无或只有部分空间记忆丧失的动物,会进入并花时间停留于优先认知为未开发领域的新颖臂,导致新颖臂进入次数和停留时间百分比均超过33%。
每日注射D-半乳糖(150mg/kg)持续8周诱发进入Y迷宫新颖臂的次数或停留时间显著減少,显著性差异为p<0.001,表明与载体组相比,D-gal组有着明显的空间记忆丧失(图1A和1B)。而与D-gal组小鼠相比,口服草药组BYPA、BYA、BY、BP或YP的新颖臂进入次数百分比显著增加(p<0.05);其中口服草药组BYP的新颖臂进入次数百分比与D-gal组小鼠相比增加更为明显,达p<0.01。还有,与D-gal组小鼠相比,口服草药组BYP或BY停留在新颖臂的时间百分比也有显著增加(p<0.01)。
神经炎症和脑部氧化应激:给药8周后,将实验小鼠安乐死,取出大脑并在pH 7.2的磷酸盐缓冲液中匀浆化。TNF-α和IL-6,作为脑内神经炎症标志物,其水平采用ELISA固相免疫试剂盒(Invitrogen,Camerillo,CA,USA)检测。TNF-α和IL-6两者的最低可检测水平均为3pg/ml。TNF-α和IL-6是促炎细胞因子,在老年患者血清中的水平比较高(Franceschi etal.,2007)。为了评估氧化应激,脂质过氧化产物MDA(广泛应用于动物组织的氧化应激标记物)的水平被估计,方法是通过分光光度测定法于532nm波长检测硫巴比安酸(TBA)和MDA之间的反应(Pryor,1989;Ohkawa et al.,1979)。
与载体组小鼠相比,D-gal亚组小鼠的脑内TNF-α和IL-6水平明显增加(p<0.01)。与D-gal小鼠相比,口服草药亚组BYA或YP能显著降低脑内TNF-α水平p<0.05);而口服草药亚组BYPA、BYP、BY或BP更能显著降低脑内TNF-α水平达显著性差异p<0.01(图2A)。另外,与D-gal小鼠相比,口服草药亚组BYPA能显著降低脑内IL-6的水平(p<0.05);而口服草药亚组BYP、BY、BP或YP更能显著降低脑内IL-6水平达显著性差异p<0.01(图2B)。
与载体组小鼠相比,D-半乳糖对照亚组小鼠的脑内MDA水平明显增加(p<0.001)。由于TNF-α能诱发线粒体产生活性氧簇(Goossens et al.,1995;Baregamian et al.,2009),因此接触D-半乳糖引起的脑内MDA水平增加可能与神经炎症反应有着关联。无论如何,与D-gal亚组小鼠相比,口服草药亚组BYA、BPA或YP可以显著降低脑内MDA水平(p<0.05);而口服草药亚组BYPA、BYP、BY或BP更能显著降低脑内MDA水平达p<0.01(图2C)。
给予D-半乳糖8周后的小鼠显示不同程度的胡须丢失。表一报道了一批小鼠于不同给药组中的反应。载体“Veh”组没有接受任何D-半乳糖注射,而其它组别每日均接受D-半乳糖注射(150mg/kg),另加每日口服120mg/kg剂量的BYPA、BYP、BYA、BPA或YPA提取物或完全没有口服任何草药提取物。“0”表示无胡须丢失;“+”则表示胡须丢失。
图3显示来自不同组别的代表性小鼠。N=12只小鼠/组。
表一
表一中结果显示,BYPA、BYP、BYA、BPA和YPA提取物能够对面部组织老化起保护作用。
空间记忆障碍、神经炎症和氧化应激是正常老化的三种表现,也是D-半乳糖诱导的加速老化反应。在此基础上,任何一种药剂要是能够改善动物模型中这三种生理和生物化学变化中的一种,将被视为能用于治疗衰老过程的症状的有效药物。因此,任何一种草本组合物或草药补充剂,当中包含BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA混合物,因为能增加小鼠在Y型迷宫实验中进入新颖臂次数(图1A)或停留时间(图1B)的百分比,或能显著降低脑内TNF-α(图2A)、IL-6(图2B)或MDA(图2C)水平,是一种治疗正常老化症状的药物。如图1和2所示,由于各BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA提取物的神经保护作用是通过每日口服120mg/kg剂量的提取物所获得,这证明其活性成分于胃肠道中表现稳定以诱发抗衰老作用。
由于空间记忆障碍、神经炎症和氧化应激均是阿尔茨海默病的症状,所以任何一种草本组合物或草药补充剂,包括BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA组合提取物,因为能增加小鼠在Y型迷宫实验中进入新颖臂次数(图1A)或停留时间(图1B)的百分比,或能显著降低脑内TNF-α(图2A)、IL-6(图2B)或MDA(图2C)水平,是一种预防和/或治疗阿尔茨海默病的药物。所有受测试的草药提取物之中,BYP和BY提取物于D-半乳糖诱导小鼠模型中的5个实验参数结果中,显示出抗衰老和抗阿尔茨海默病效应:Y迷宫实验中进入新颖臂的次数及停留时间明显增加,和脑内TNF-α、IL-6以及MDA水平降低。另外,BP、YP和BYPA提取物也于五个参数中的其中四个获得正面结果。
由于氧化应激是帕金森氏病的症状,所以任何一种草本组合物或草药补充剂,包括BYP、BYA、BPA、BY、BP、YP或BYPA组合提取物,因为能够明显地降低了D-半乳糖诱导小鼠脑内的MDA水平,是一种有效预防和/或治疗帕金森氏病的药物。
实施例3:抗焦虑和镇静实验
高架十字迷宫测试:将幼年雄性4-6周龄小鼠随机分组(n=12-20/组)。实验前35分钟,口服给予载体(“Veh”,即0.9%NaCl),或30、60、90、120mg/kg剂量的草药提取物,或1或3mg/kgDZ。测试装置由四个臂组成,每个臂25×5厘米,从一个5×5厘米的中心十字平台往外延伸。其中两个相对的手臂被20厘米不透明高墙围起来,成为两个封闭臂。整个十字迷宫离地面40厘米。每只老鼠会被置于迷宫的中心平台,头部朝向开放臂,继而记录5分钟内小鼠分别在开放臂和封闭臂的停留时间。当全部四只爪子都在臂内,便可记录为进入该手臂。每次测试结束后,并在下一次测试开始前,需彻底清洁并干燥测试装置。与只给于载体的Veh对照组相比,要是受测试的制剂能增加小鼠停留在开放臂的时间百分比,这表示受测试的制剂具有抗焦虑作用(Kalueff and Tuohimaa,2004;Treit et al.,1993)。
洞板测试:高架十字迷宫测试后,实验小鼠会进入洞板测试。洞板装置是一个60×60×20厘米的木箱,有四个直径3厘米的孔均匀分布在地板上。将每只小鼠置于洞板的中心,并录下5分钟内探头入洞中的次数。当小鼠探头入洞中到眼睛低于洞口边缘的程度时,便可记录为一次探头。每次测试结束后,并在下一次测试开始前,需彻底清洁并干燥测试装置。与只给于载体的Veh对照组相比,要是受测试物能诱发动物探头次数減少,这表示受测试物具有镇静催眠作用(File and Pellow,1985)。
如图4所示,除了单一草药提取物B以外,其余三种单一草药提取物A、P和Y从60mg/kg剂量开始均显示具抗焦虑作用,证明为于高架十字迷宫测试中停留在开放臂的时间比载体对照组显著增加。提取物P和提取物A给药组小鼠从60mg/kg剂量开始显示出镇静行为,证明为于洞板试验中的探头次数明显減少,而提取物B的有效剂量则从30mg/kg开始。提取物Y小鼠给药至120mg/kg剂量,还是没显示任何探头次数的减少所证实的镇静作用。另外,有些多草药提取物,如两种草药提取物BA和PA及三种草药提取物BYA、BPA和YPA,在不同的剂量下均能诱发显著抗焦虑作用,证明为于高架十字迷宫测试中停留在开放臂的时间增加,表示这五种草本汤剂可用作治疗焦虑症。两种草药提取物PA和三种草药提取物BYA和YPA能诱发明显的镇静作用,表示这三种草本汤剂可用作治疗睡眠障碍症。相反,BYP、BY、BP、YP和YA提取物并没有任何显著的抗焦虑或镇静作用。就如先前所报道(Xue and Wong 2008),含四种草药BYPA的提取物具显著抗焦虑作用但无明显镇静作用。
对于抗焦虑和镇静作用,图4结果揭示了B、Y、P和A四种草药之间有着意想不到的拮抗效应和协同效应。例如,单一草药Y、P和A均能以60-120mg/kg的剂量诱发抗焦虑,但BYP、BY、BP、YP和YA提取物给药至120mg/kg的剂量时没有抗焦虑作用。虽然YP和YA汤剂缺乏抗焦虑作用,但其中的单一草药成分却具抗焦虑作用,值得关注。同样地,虽然单一草药B、P和A以30mg/kg或60mg/kg以上剂量给药小鼠,能产生明显的镇静作用,但BYP、BPA、BY、BP、BA、YP、YA和BYPA提取物给药至120mg/kg,还是没有一者能产生明显的镇静作用。这些发现清楚地表明,虽然BYP、BPA、BY、BP、BA、YP、YA和BYPA组合物的药性是来自其组成成分B、Y、P和A,但是组合物的药性与其组成草药单一的诱发镇静能力有着显著差异,这种拮抗效应和协同效应可用于增强疗效并去除不良副作用(Jiang 2005;Qiu 2007;Wang 2008)。
实施例4:自发活动能力、认知能力和肌肉松弛实验
活动量测试:在高架十字迷宫和洞板测试后,接受了载体、DZ或各种草药组合提取物的小鼠通过ZIL-2装置(由北京中草药研究所提供)进行了运动评估。该测试装置的尺寸为60厘米×60厘米×12厘米,并由透明塑料圆柱形盒子组成,内里配备了三组均匀分布、带有光探测器的的红外光束。在5分钟内自动记录红外光束被小鼠切断的次数。切断次数的增加或減少表示活动量的相应增加或減少(Hui et al.,2002)。
旋转杆测试:小鼠随机分组(n=15-20/组)后,在旋转杆测试前35分钟,分别接受口服载体(“Veh”,即0.9%NaCl),1或3mg/kg剂量的DZ,或120mg/kg剂量的单一、两种、三种或四种草药组合提取物。测试肌肉协调能力的旋转器为定制设备,以一根圆杆(直径为2.5cm)组成,杆体表面有纹理,横置于离地面0.5m。小鼠在口服接受载体、DZ或草药提取物之前,被置放于以16rpm转动的旋转杆上,进行2分钟训练。在测试中,通过将小鼠放在旋转杆上,并记录停留在旋转杆上的时间来测试载体、DZ或草药提取物的效应,最长停留时间设为2分钟。与载体对照组对比,要是有一组动物的在旋转杆上的停留时间显著減少,表明肌肉协调能力下降(Karl et al.,2003)。
被动回避测试(步入法):小鼠随机分组(n=15-20/组)后,在测试前35分钟,分别接受口服载体(“Veh”,即0.9%NaCl),1或3mg/kg剂量的DZ,或120mg/kg剂量的单一、两种、三种或四种草药组合提取物。测试装置由一组两室相连的活动箱组成(由中国北京中医科学院提供),其中一室为不透明(暗室),而另一室为透明(明室)。在训练过程中,在每只老鼠放进明室后,将连接明室及暗室的活动门在10秒后打开,在15秒内没有进入暗室的小鼠会不被采用。在实际测试时,小鼠进入暗室后,活动门会关闭,同时通过网格地板启动0.4mA向脚底电击2秒;十秒过后,将小鼠从暗室放回原来的笼子。经过24小时休息后,小鼠被送回明室,而通往暗室的门在10秒后打开,记录小鼠进入暗室所需时间,为“步入潜伏期”,最大设为300秒。与载体对照组相比,任何一组受药动物若表现了显著缩短的步入潜伏期,即被视为显示了顺行性遗忘症状引致的工作记忆受损(Nazari–Serenjeh et al.,2011)。
图5A中的运动量测试结果显示,接受任何一种BYPA、BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP、BA、YP、YA、PA、B、Y、P或A提取物的实验小鼠,其运动量与载体组并没有显著改变,而给药3mg/kg地西泮则明显诱发了小鼠运动能力下降(p<0.001)。图5B中的旋转杆测试结果显示,接受任何一种BYPA、BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP、BA、YP、YA、PA、B、Y、P或A提取物的实验小鼠,其停留在旋转杆上的时间与载体组并没有显著分别,这表示各组接受草药提取物的实验小鼠均没有显著的肌肉不协调反应。相反,给药1或3mg/kg地西泮则使在旋转杆上停留的时间显著減少(p<0.001),代表诱发了肌肉不协调。图5C中的步入潜伏期测试结果显示,接受任何一种BYPA、BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP、BA、YP、YA、PA、B、Y、P或A提取物的实验小鼠,与载体组小鼠没有明显区别,代表所测试的草药提取物均没有诱发任何顺行性遗忘症状。相反,给药1或3mg/kg地西泮则在步入潜伏期的缩短(p<0.001)方面产生了显著的顺行性遗忘症。
本实施例的结果表明,采用柴胡(B)、延胡索(Y)、夜交藤(P)和合欢花(A)所制备的单一、两种、三种或四种草药组合提取物,以120mg/kg剂量使用时,均没有诱发任何明显的活动量改变、肌肉协调缺陷或顺行性遗忘症。因此,这系列BYP、BYA、BPA、YPA、BY、BP、BA、YP、PA和BYPA复方草药汤剂不但能有效延缓衰老,预防和治疗老年神经退行性疾病,及治疗焦虑和/或睡眠障碍症,且没有任何不良副作用,诸如运动量改变、肌肉不协调或顺行性遗忘。此外,在这些草药汤剂之中,BYP、BPA、BY、BP、YP和BYPA显示出抗衰老作用,由于草药成分之间的相互拮抗作用而没有显著地镇静催眠作用,虽然单独的草药B、P和A在单独给药时会产生显著的镇静催眠作用(图4)。缺乏镇静催眠作用将有利于这六种汤剂用作适合长期服用的抗衰老、抗阿尔茨海默氏病和/或抗帕金森氏病药物。
在说明本发明或其优选实施例时,冠词“一”、“该”和“所述”意指一或多个,而术语“包括”、“包含”和“具有”则意指包括在内并且意味着比列出的更多。
鉴于以上所述,本发明实现了几个目的,并获得了优越的成果。
在不脱离本发明范围的情况下,可以对上述各草药组合和方法进行各样的改变,而上述说明书和附图中展示的所有内容应理解读为说明性及非限制性。
前述各段落中引用的参考文献如下:
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Claims (33)
1.一种组合物,包括提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物来源于多种植物的混合,所述植物包括:
(a)柴胡、延胡索和夜交藤,所述组合物不含合欢花;
(b)柴胡、延胡索和合欢花,所述组合物不含夜交藤;
(c)柴胡、夜交藤和合欢花,所述组合物不含延胡索;
(d)延胡索、夜交藤和合欢花,所述组合物不含柴胡;
(e)柴胡和延胡索,所述组合物不含夜交藤和合欢花;
(f)柴胡和夜交藤,所述组合物不含延胡索和合欢花;
(g)柴胡和合欢花,所述组合物不含延胡索和夜交藤;
(h)延胡索和夜交藤,所述组合物不含柴胡和合欢花;或
(i)夜交藤和合欢花,所述组合物不含柴胡和延胡索。
2.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自柴胡、延胡索和夜交藤等各种植物的粉末的重量比约为1.4:1:1的各种植物的粉末混合物的1(a)中的所述植物。
3.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自柴胡、延胡索和合欢花等各种植物的粉末的重量比约为1.4:1:1的各种植物的粉末混合物的1(b)中的所述植物。
4.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自柴胡、夜交藤和合欢花等各种植物的粉末的重量比约为1.4:1:1的各种植物的粉末混合物的1(c)中的所述植物。
5.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自延胡索、夜交藤和合欢花等各种植物的粉末的重量比约为1:1:1的各种植物的粉末混合物的1(d)中的所述植物。
6.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自柴胡和延胡索等各种植物的粉末的重量比约为1.4:1的各种植物的粉末混合物的1(e)中的所述植物。
7.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自柴胡和夜交藤等各种植物的粉末的重量比约为1.4:1的各种植物的粉末混合物的1(f)中的所述植物。
8.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自柴胡和合欢花等各种植物的粉末的重量比约为1.4:1的各种植物的粉末混合物的1(g)中的所述植物。
9.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自延胡索和夜交藤等各种植物的粉末的重量比约为1:1的各种植物的粉末混合物的1(h)中的所述植物。
10.权利要求1所述的组合物,其中所述植物包含来源自夜交藤和合欢花等各种植物的粉末的重量比约为1:1的各种植物的粉末混合物的1(i)中的所述植物。
11.权利要求1-10中的任何一者所述的组合物,主要含有所述提取物或其干燥粉末。
12.一种药物制剂或草药补充剂,包括权利要求1-11中的任何一者所述的组合物,以及赋形剂。
13.权利要求12所述的药物制剂或草药补充剂,其中活性成分主要来自所述组合物。
14.一种延缓衰老或治疗焦虑症和/或诱导睡眠的方法,所述方法包括向有需要的受试者施用包括1(b)中所述植物的权利要求1或3所述的的组合物,或包括1(b)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
15.一种延缓衰老和/或治疗焦虑症的方法,所述方法包括向有需要的受药者施用包括1(c)中所述植物的权利要求1或4所述的组合物,或包括1(c)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
16.一种延缓衰老的方法,所述方法包括向有需要的受药者施用包括1(a)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求1、2、6、7或9中的任何一者所述的组合物;组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花;或施用包括1(a)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂;或所述药物制剂或所述草药补充剂包括组合物及赋形剂,所述组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
17.一种治疗焦虑症和/或诱导睡眠的方法,所述方法包括向有需要的受药者施用包括1(d)或1(i)中所述植物的权利要求1、5或10所述的组合物,或包括1(d)或1(i)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
18.一种治疗焦虑症的方法,此方法包括向有需要的受药者施用包括1(g)中所述植物的权利要求1或8所述的组合物,或包括1(g)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
19.一种预防和/或治疗阿尔茨海默病的方法,所述方法包括向有需要的受药者施用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求1、2、3、4、6、7或9中的任何一者所述的组合物;组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花;或施用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂;或所述药物制剂或所述草药补充剂包括组合物及赋形剂,所述组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
20.一种预防和/或治疗帕金森氏病的方法,所述方法包括向有需要的受药者施用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求1、2、3、4、6、7或9中的任何一者所述的组合物;组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花;或施用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂;或所述药物制剂或所述草药补充剂包括组合物及赋形剂,所述组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
21.如权利要求16、19或20中的任意一者所述的方法,其中所述植物包括来源自柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花的各种植物的粉末的重量比约为1.4:1:1:1的粉末混合物的柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
22.权利要求1-11中的任意一者所述的组合物的药物制剂或草药补充剂的制备方法,该方法包括:
(i)在第一溶剂存在下,将含一或多种植物的第一植物粉末加热,形成第一悬浮液;
(ii)收集所述悬浮液的上清;
(iii)在第二溶剂存在下将所述悬浮液的残余加热,形成第二悬浮液;
(iv)收集所述第二悬浮液的上清;
(v)合并所述多个上清,形成第三悬浮液;
(vi)将所述第三悬浮液过滤,形成过滤后的第三悬浮液;
(vii)加热所述过滤后的第三悬浮液,形成浓缩液;
(viii)将所述浓缩液脱水,形成脱水物;
(ix)将所述脱水物形成第二粉末;
(x)干燥所述第二粉末,形成含一种或多种植物的粉末化提取物;
(xi)如果步骤(x)的粉末化提取物包含来自所述组合物的成分中的植物的提取物,将提取物粉末与赋形剂混合,得到包括所述组合物的所述药物制剂或所述草药补充剂;及
(xii)对其余来自所述组合物的成分中的植物,选择性重复(i)-(iv)和选择性重复(v)-(x)中的一个或多个步骤,将所述第二悬浮液、所述第三悬浮液、所述过滤后的第三悬浮液、所述浓缩液、所述脱水物或所述第二粉末的每一种各自混合,以成为最终粉末化提取物,并将此最终粉末化提取物与赋形剂混合,获得包括所述组合物的药物制剂或草药补充剂。
23.权利要求22所述的方法,其中步骤(i)的第一粉末是整个组合物中的植物的粉末混合物,而步骤(x)产生的粉末化提取物包含了所述组合物来源的植物的提取物。
24.权利要求22所述的方法,其中步骤(i)的第一粉末是组合物中的其中一种植物的粉末,对所述组合物来源的各种植物成分,重复进行步骤(i)-(iv)及步骤(v)-(x)中的一或多个步骤;且每个所述第二悬浮液、所述第三悬浮液、所述过滤后的第三悬浮液、所述浓缩液、所述脱水物或所述第二粉末,被合并成为最终粉末化提取物,并与赋形剂混合,以形成药物制剂或草药补充剂。
25.权利要求22-24中任意一者所述的方法,其中所述第一溶剂和/或第二溶剂均是乙酸。
26.一种用于延缓衰老或治疗焦虑症和/或诱导睡眠的药物制剂或草药补充剂,其中该疗法包括给有需要的受药者使用包括1(b)中所述植物的权利要求1或3所述的组合物,或是包括1(b)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
27.一种用于延缓衰老和治疗焦虑症的药物制剂或草药补充剂,该疗法是给有需要的受药者使用包括1(c)中所述植物的权利要求1或4所述的组合物,或是包括1(c)中所述植物的权利要求12或13的药物制剂或草药补充剂。
28.一种应用于延缓衰老的药物制剂或草药补充剂,该疗法是向有需要的受药者使用包括1(a)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求1、2、6、7或9的组合物,组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花;或包括1(a)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂;或所述药物制剂或所述草药补充剂包括组合物及赋形剂所述组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
29.一种用于治疗焦虑症和/或诱导睡眠的药物制剂或草药补充剂,该疗法是给有需要的受药者使用包括1(d)或1(i)中所述植物的权利要求1、5或10所述的提取物,或是包括1(d)或1(i)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
30.一种用于治疗焦虑症的药物制剂或草药补充剂,该疗法是给有需要的受药者使用包括1(g)中所述植物的权利要求1或8所述的提取物组合,或是包括1(g)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂。
31.一种能预防和/或治疗阿尔茨海默氏病的药物制剂或草药补充剂,该疗法是向有需要的受药者使用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求1、2、3、4、6、7或9所述的组合物;组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花;或是使用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂;或药物制剂或草药补充剂,包括组合物及赋形剂,所述组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
32.一种能预防和/或治疗帕金森氏病的药物制剂或草药补充剂,该疗法是向有需要的受药者使用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求1、2、3、4、6、7或9所述的组合物;组合物包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花;或是使用包括1(a)、1(b)、1(c)、1(e)、1(f)或1(h)中所述植物的权利要求12或13所述的药物制剂或草药补充剂;或药物制剂或草药补充剂,包括组合物及赋形剂所述组合物要还包含提取物或提取物的干燥粉末,所述提取物是从所述植物混合后提取或是混合各个所述植物的提取物而成,所述植物包括柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
33.权利要求28、31或32中任何一者所述的药物制剂或草药补充剂,其中所述植物包括来源自柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花的各种植物的粉末的重量比约为1.4:1:1:1的粉末混合物的柴胡、延胡索、夜交藤和合欢花。
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