CN109628565A - 一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，本方法是通过提取酒中的DNA，再通过随机引物聚合酶链式反应技术进行扩增，再通过凝胶电泳进行分离显色，绘制基因图谱，用来分辨该酒真伪。这种鉴定技术能为各白酒生产厂家、各级质量监督及市场监管部门提供技术支持，让他们在维权执法中主动、迅速、准确的采取行动，保护企业和消费者的合法权益。

Description

一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法

技术领域

本发明涉及白酒检测技术领域，具体为一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法。

背景技术

白酒是我国独有的传统产品，历史悠久。近些年来，对白酒的需求量尤其是对名优产品的需求量愈来愈大，尤其是高档白酒，价值高、销量好的高档 白酒是假冒产品重点侵犯对象。五粮液、贵州茅台酒、 剑南春、酒鬼酒等产品的假酒则轻易可见。围绕着五粮液和贵州茅台酒的商标侵权例子也司空见惯。最近两年 市场上出现的国窖1573、金剑南、水井坊、舍得酒、五粮液等产品也会出现假冒。如何鉴别真假名优白酒己受到人们的广泛重视。目前白酒主要通过酒类产品的瓶口、瓶盖、外包装、标识、封口等处使用防伪包装和防伪印刷技术来进行鉴别。这些防伪措施虽然起到一定的防伪作用，但这些技术实施的对象并不是酒品本身，而是酒品的身外之物，相对于酒品而言，仅仅是附属品或寄生物，与酒品并无直接的、内在的、必然的联系。它能起到的作用仅是为酒品制作了一套铁甲和头盔，当遇到狡诈险恶的制假者采用偷梁换柱的方法，假酒真包装时，这种仅是将防伪单元附加在防伪主题上，重表不重里思维下的防伪策略，就必然会给制假者留下可乘之机，最终导致假冒伪劣产品搅乱市场秩序。针对酒品本身的内涵防伪技术主要是利用红外光谱、气相色谱和质谱检测技术建立各种名优白酒的指纹图谱，由于不同的白酒生产厂家所处的地域、气候、微生物环境、水质环境不同及生产工艺的差别，生产出的白酒的成份有所不同，根据这些成份的不同采用红外光谱、气相色谱和质谱进行指纹的鉴定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，包括以下步骤：

A、采用裂解法，提取酒中基因片段；

B、利用随机引物通过随机引物聚合酶链式反应技术以提取的基因片段进行扩增；

C、对PCR产物进行凝胶电泳，采用0.8%的琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为RAE，电压90V，电泳时间30min；

D、利用凝胶成像系统，进行读取并保存结果；

E、真伪判定标准：将待检测样品电泳基因图谱，与绘制的标准基因图谱比对，匹配度达到95%以上，为真酒，低于95%为假酒；其中，匹配度计算方法：待检样品基因图谱与标准基因图谱条代吻合数之比：

。

优选的，所述步骤A中基因片段提取方法如下：

的离心管中，加入1ml，30mg/ml蜗牛酶溶液，37℃保温30-60min； a、取酒液10 ml

混合65℃保温30min； b、用500ulsolutionⅡ溶液悬浮，然后加入50μl 10%SDS,

c、采用最大转速离心15min，转移上清液至新的离心管中，用等体积的异丙醇沉淀DNA；

TE溶液溶解。 pH=7.4 d、室温下放置5min，离心10min，用70%的乙醇洗涤一次，真空干燥，用50ul。

优选的，琼脂糖凝胶制备方法如下：

a、取5×TBE缓冲液20ml加水至200ml,配制成0.5×TBE稀释缓冲液,待用；

b、胶液的制备：称取0.4g琼脂糖,置于200ml锥形瓶中,加入50ml0.5×TBE稀释缓冲液,放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂糖凝胶液，加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发；

c、胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏紧密封住，将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙，向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭；用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧,待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层；倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则容易出现气泡；待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面；

d、加样：取10μl酶解液与2μl6×载样液混匀,用微量移液枪小心加入样品槽中，若DNA含量偏低,则可依上述比例增加上样量,但总体积不可超过样品槽容量，每加完一个样品要更换tip头,以防止互相污染；

e、电泳：加完样后,合上电泳槽盖,立即接通电源，控制电压保持在60-80V,电流在40mA以上，当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时,停止电泳；

f染色：未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml的EB溶液中,室温下染色20-25分钟。

g、观察和拍照：在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本方法是通过提取酒中的DNA，再通过随机引物聚合酶链式反应技术进行扩增，再通过凝胶电泳进行分离显色，绘制基因图谱，用来分辨该酒真伪。这种鉴定技术能为各白酒生产厂家、各级质量监督及市场监管部门提供技术支持，让他们在维权执法中主动、迅速、准确的采取行动，保护企业和消费者的合法权益。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供如下技术方案：一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，包括以下步骤：

A、采用裂解法，提取酒中基因片段；

B、利用随机引物通过随机引物聚合酶链式反应技术以提取的基因片段进行扩增；

C、对PCR产物进行凝胶电泳，采用0.8%的琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为RAE，电压90V，电泳时间30min；

D、利用凝胶成像系统，进行读取并保存结果；

E、真伪判定标准：将待检测样品电泳基因图谱，与绘制的标准基因图谱比对，匹配度达到95%以上，为真酒，低于95%为假酒；其中，匹配度计算方法：待检样品基因图谱与标准基因图谱条代吻合数之比：

。

本发明中，步骤A中基因片段提取方法如下：

的离心管中，加入1ml，30mg/ml蜗牛酶溶液，37℃保温30-60min； a、取酒液10 ml

混合65℃保温30min； b、用500ulsolutionⅡ溶液悬浮，然后加入50μl 10%SDS,

c、采用最大转速离心15min，转移上清液至新的离心管中，用等体积的异丙醇沉淀DNA；

TE溶液溶解。 pH=7.4 d、室温下放置5min，离心10min，用70%的乙醇洗涤一次，真空干燥，用50ul

本发明中，琼脂糖凝胶制备方法如下：

b、取5×TBE缓冲液20ml加水至200ml,配制成0.5×TBE稀释缓冲液,待用；

b、胶液的制备：称取0.4g琼脂糖,置于200ml锥形瓶中,加入50ml0.5×TBE稀释缓冲液,放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂糖凝胶液，加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发；

c、胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏紧密封住，将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙，向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭；用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧,待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层；倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则容易出现气泡；待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面；

d、加样：取10μl酶解液与2μl6×载样液混匀,用微量移液枪小心加入样品槽中，若DNA含量偏低,则可依上述比例增加上样量,但总体积不可超过样品槽容量，每加完一个样品要更换tip头,以防止互相污染，待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。因边缘效应样品槽附近会有一些隆起,阻碍缓冲液进入样品槽中,所以要注意保证样品槽中应注满缓冲液；

e、电泳：加完样后,合上电泳槽盖,立即接通电源，控制电压保持在60-80V,电流在40mA以上，当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时,停止电泳；

f染色：未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml的EB溶液中,室温下染色20-25分钟。

g、观察和拍照：在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本方法是通过提取酒中的DNA，再通过随机引物聚合酶链式反应技术进行扩增，再通过凝胶电泳进行分离显色，绘制基因图谱，用来分辨该酒真伪。这种鉴定技术能为各白酒生产厂家、各级质量监督及市场监管部门提供技术支持，让他们在维权执法中主动、迅速、准确的采取行动，保护企业和消费者的合法权益。

综上所述，本方法是通过提取酒中的DNA，再通过随机引物聚合酶链式反应技术进行扩增，再通过凝胶电泳进行分离显色，绘制基因图谱，用来分辨该酒真伪。这种鉴定技术能为各白酒生产厂家、各级质量监督及市场监管部门提供技术支持，让他们在维权执法中主动、迅速、准确的采取行动，保护企业和消费者的合法权益。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (3)

1.一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、采用裂解法，提取酒中基因片段；

B、利用随机引物通过随机引物聚合酶链式反应技术以提取的基因片段进行扩增；

C、对PCR产物进行凝胶电泳，采用0.8%的琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为RAE，电压90V，电泳时间30min；

D、利用凝胶成像系统，进行读取并保存结果；

E、真伪判定标准：将待检测样品电泳基因图谱，与绘制的标准基因图谱比对，匹配度达到95%以上，为真酒，低于95%为假酒；其中，匹配度计算方法：待检样品基因图谱与标准基因图谱条代吻合数之比：

。

2.根据权利要求1所述的一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，其特征在于：所述步骤A中基因片段提取方法如下：

a、取酒液10 ml 的离心管中，加入1ml，30mg/ml蜗牛酶溶液，37℃保温30-60min；

b、用500ulsolutionⅡ溶液悬浮，然后加入50μl 10%SDS, 混合65℃保温30min；

c、采用最大转速离心15min，转移上清液至新的离心管中，用等体积的异丙醇沉淀DNA；

d、室温下放置5min，离心10min，用70%的乙醇洗涤一次，真空干燥，用50ul pH=7.4 TE溶液溶解。

3.根据权利要求1所述的一种构建基因图谱用以鉴定白酒真假的方法，其特征在于：琼脂糖凝胶制备方法如下：

a、取5×TBE缓冲液20ml加水至200ml,配制成0.5×TBE稀释缓冲液,待用；

b、胶液的制备：称取0.4g琼脂糖,置于200ml锥形瓶中,加入50ml0.5×TBE稀释缓冲液,放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂糖凝胶液，加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发；

c、胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏紧密封住，将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙，向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭；用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧,待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层；倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则容易出现气泡；待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面；

d、加样：取10μl酶解液与2μl6×载样液混匀,用微量移液枪小心加入样品槽中，若DNA含量偏低,则可依上述比例增加上样量,但总体积不可超过样品槽容量，每加完一个样品要更换tip头,以防止互相污染；

e、电泳：加完样后,合上电泳槽盖,立即接通电源，控制电压保持在60-80V,电流在40mA以上，当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时,停止电泳；

f、染色：未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml的EB溶液中,室温下染色20-25分钟。

g、观察和拍照：在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。