CN109628370A - 一种三维细胞培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种三维细胞培养方法，包括以下步骤：将细胞置入细胞培养基中，将载有细胞的细胞培养基加入至三维细胞组织生物反应器内的培养盘上，除去培养液上的气泡；启动三维细胞组织生物反应器，三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动；其中，所述培养盘的振荡角度为4‑12度，转速为5‑30rpm。相对现有技术，本发明的三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动，使得细胞培养基内的所述细胞均匀交换养分和气体，并且细胞与细胞之间有足够的接触，有利于细胞聚集，加快细胞培养；转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL‑3、IL‑6和TPO的stemspan无血清培养基能为细胞培养提供有利的环境和养分，有利于细胞繁殖速度提升。

Description

一种三维细胞培养方法
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种三维细胞培养方法。
背景技术
造血干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的造血前体细胞，目前已用于恶性及非恶性血液病、实体肿瘤等多种疾病的治疗。造血干细胞可来源于骨髓、外周血和脐带血等，其中脐带血造血干细胞具有增殖能力强、免疫原性低、易于获得等优点，已成为人们关注的焦点。
脐血造血干细胞能够分化为巨核系祖细胞，并进一步发育成熟产生血小板，因此有望通过体外回输巨核系祖细胞以提高血液中血小板的数量，缓解或替代血源紧张造成的血小板缺乏，所以对应的细胞培养方法需要进行解决。
发明内容
本发明的目的是提供一种三维细胞培养方法，所要解决的技术问题是：缺乏对应的细胞培养方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种三维细胞培养方法，包括以下步骤：
将细胞置入细胞培养基中，将载有细胞的细胞培养基加入至三维细胞组织生物反应器内的培养盘上，除去培养液上的气泡；启动三维细胞组织生物反应器，三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动；其中，所述培养盘的振荡角度为4-12度，转速为5-30rpm。
进一步，所述培养盘的振荡角度为8度。
进一步，所述培养盘的转速随细胞培养时间的延长而增加。
进一步，在细胞培养的第1-5天，所述培养盘转速为8rpm；在细胞培养的第6-10天，所述培养盘转速为12rpm；在细胞培养的第10天以后，所述转速为14rpm。
进一步，所述三维细胞组织生物反应器对应所述培养盘的背侧均设置有由硅胶制成的换气膜。
进一步，所述细胞培养基为含转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基。
进一步，于细胞培养的第4天向细胞培养基中补充原培养基的1/3体积的培养基。
进一步，除去培养液上的气泡时，向所述三维细胞组织生物反应器内的培养盘上输出氧气气流；对应每一次补充培养基，均进行一次氧气气流输入。
进一步，氧气的气流速度为0.1-1m/s。
本发明的有益效果是：三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动，使得细胞培养基内的所述细胞均匀交换养分和气体，并且细胞与细胞之间有足够的接触，有利于细胞聚集，加快细胞培养；转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基能为细胞培养提供有利的环境和养分，有利于细胞繁殖速度提升。
附图说明
图1为本发明一种三维细胞培养方法的流程图。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：
如图1所示，一种三维细胞培养方法，包括以下步骤：
将细胞置入细胞培养基中，将载有细胞的细胞培养基加入至三维细胞组织生物反应器内的培养盘上，除去培养液上的气泡；启动三维细胞组织生物反应器，三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动；其中，所述培养盘的振荡角度为4度，转速为30rpm。
上述实施例中，所述培养盘的转速随细胞培养时间的延长而增加；在细胞培养的第1天，所述培养盘转速为8rpm；在细胞培养的第6天，所述培养盘转速为12rpm；在细胞培养的第10天以后，所述转速为14rpm。
上述实施例中，所述三维细胞组织生物反应器对应所述培养盘的背侧均设置有由硅胶制成的换气膜。
上述实施例中，所述细胞培养基为含转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基。
上述实施例中，于细胞培养的第4天向细胞培养基中补充原培养基的1/3体积的培养基。
上述实施例中，除去培养液上的气泡时，向所述三维细胞组织生物反应器内的培养盘上输出氧气气流；对应每一次补充培养基，均进行一次氧气气流输入。
上述实施例中，氧气的气流速度为0.1m/s。
本实施例的三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动，使得细胞培养基内的所述细胞均匀交换养分和气体，并且细胞与细胞之间有足够的接触，有利于细胞聚集，加快细胞培养；转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基能为细胞培养提供有利的环境和养分，有利于细胞繁殖速度提升。
实施例2：
如图1所示，一种三维细胞培养方法，包括以下步骤：
将细胞置入细胞培养基中，将载有细胞的细胞培养基加入至三维细胞组织生物反应器内的培养盘上，除去培养液上的气泡；启动三维细胞组织生物反应器，三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动；其中，所述培养盘的振荡角度为8度，转速为18rpm。
上述实施例中，所述培养盘的转速随细胞培养时间的延长而增加；在细胞培养的第3天，所述培养盘转速为8rpm；在细胞培养的第8天，所述培养盘转速为12rpm；在细胞培养的第10天以后，所述转速为14rpm。
上述实施例中，所述三维细胞组织生物反应器对应所述培养盘的背侧均设置有由硅胶制成的换气膜。
上述实施例中，所述细胞培养基为含转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基。
上述实施例中，于细胞培养的第4天向细胞培养基中补充原培养基的1/3体积的培养基。
上述实施例中，除去培养液上的气泡时，向所述三维细胞组织生物反应器内的培养盘上输出氧气气流；对应每一次补充培养基，均进行一次氧气气流输入。
上述实施例中，氧气的气流速度为0.5m/s。
本实施例的三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动，使得细胞培养基内的所述细胞均匀交换养分和气体，并且细胞与细胞之间有足够的接触，有利于细胞聚集，加快细胞培养；转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基能为细胞培养提供有利的环境和养分，有利于细胞繁殖速度提升。
实施例3：
如图1所示，一种三维细胞培养方法，包括以下步骤：
将细胞置入细胞培养基中，将载有细胞的细胞培养基加入至三维细胞组织生物反应器内的培养盘上，除去培养液上的气泡；启动三维细胞组织生物反应器，三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动；其中，所述培养盘的振荡角度为12度，转速为5rpm。
上述实施例中，所述培养盘的转速随细胞培养时间的延长而增加；在细胞培养的第5天，所述培养盘转速为8rpm；在细胞培养的第10天，所述培养盘转速为12rpm；在细胞培养的第10天以后，所述转速为14rpm。
上述实施例中，所述三维细胞组织生物反应器对应所述培养盘的背侧均设置有由硅胶制成的换气膜。
上述实施例中，所述细胞培养基为含转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基。
上述实施例中，于细胞培养的第4天向细胞培养基中补充原培养基的1/3体积的培养基。
上述实施例中，除去培养液上的气泡时，向所述三维细胞组织生物反应器内的培养盘上输出氧气气流；对应每一次补充培养基，均进行一次氧气气流输入。
上述实施例中，氧气的气流速度为1m/s。
本实施例的三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动，使得细胞培养基内的所述细胞均匀交换养分和气体，并且细胞与细胞之间有足够的接触，有利于细胞聚集，加快细胞培养；转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基能为细胞培养提供有利的环境和养分，有利于细胞繁殖速度提升。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种三维细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
将细胞置入细胞培养基中，将载有细胞的细胞培养基加入至三维细胞组织生物反应器内的培养盘上，除去培养液上的气泡；启动三维细胞组织生物反应器，三维细胞组织生物反应器带动其培养盘进行振荡和转动；其中，所述培养盘的振荡角度为4-12度，转速为5-30rpm。
2.根据权利要求1所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，所述培养盘的振荡角度为8度。
3.根据权利要求1所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，所述培养盘的转速随细胞培养时间的延长而增加。
4.根据权利要求3所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，在细胞培养的第1-5天，所述培养盘转速为8rpm；在细胞培养的第6-10天，所述培养盘转速为12rpm；在细胞培养的第10天以后，所述转速为14rpm。
5.根据权利要求1所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，所述三维细胞组织生物反应器对应所述培养盘的背侧均设置有由硅胶制成的换气膜。
6.根据权利要求1至5任一项所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，所述细胞培养基为含转铁蛋白、胰岛素、硒酸钠、SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基。
7.根据权利要求6所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，于细胞培养的第4天向细胞培养基中补充原培养基的1/3体积的培养基。
8.根据权利要求7所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，除去培养液上的气泡时，向所述三维细胞组织生物反应器内的培养盘上输出氧气气流；对应每一次补充培养基，均进行一次氧气气流输入。
9.根据权利要求8所述一种三维细胞培养方法，其特征在于，氧气的气流速度为0.1-1m/s。
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