CN109609563A - 采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法 - Google Patents

采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于二十碳五烯酸和生物柴油的制备，特别是指一种采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法。包括培养微拟球藻、湿微拟球藻破壁、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA、富含EPA藻油和生物柴油的分离等工艺步骤；本发明解决了现有技术存在的生物柴油的生产成本较高以及EPA在藻油中的含量低的技术难题。具有所制备的生物柴油的密度、运动黏度和十六烷值等主要技术指标符合国标要求，可大幅度降低生物柴油的生产成本，藻油中EPA含量高等优点。

Description

采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴 油的方法
技术领域
本发明属于二十碳五烯酸和生物柴油的制备，特别是指一种采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法。
背景技术
近年来，微拟球藻是最有潜力被开发成微藻高附加值产品和生物柴油的藻种之一。这是因其具有生长速度快，固定二氧化碳效率高，油脂含量高(Mitra et al.,2015；刘婉君，2016；Law et al.,2018)。Lopez等人利用固定化酶(Novozym 435，南极假丝酵母脂肪酶B固定在大孔丙烯酸树脂)催化已处理的微拟球藻藻粉(采用高压均浆法破壁)，可获得生物柴油的转化率达99％(Lopez et al.，2016)。Law等人也利用脂肪酶(脂肪酶来自Rhizimucor miehei)直接催化已处理的微拟球藻藻体(采用高压均浆法破壁)，生物柴油的转化率为90％(Law et al.，2018)。此外，已有大量研究表明利用微拟球藻制备生物柴油的品质指标(如密度、运动黏度和十六烷值)可达到中国生物柴油企业标准(标准代号：Q/WHRD01-2003)、柴油机燃料调合用生物柴油(BD100)(GB/T 20828-2015)和美国生物柴油标准(ASTM D6751-2003)的品质指标(Mitra etal.，2015；刘婉君，2016；孙发强，2015；Lopezetal.，2016；Maeda etal.，2018)。国家质量监督检验检疫总局及国家质量标准化监督委员会于2017年9月1日颁布并实施了由石油化工研究院起草的《B5柴油》的国家标准(标准代号GB 25199-2017)。
为了使生产工艺更节能，目前研究是通过高压均浆法破碎微拟球藻细胞(Lopezetal.，2016；Law etal.，2018)。但是高压均浆法破碎微藻细胞是一个高能耗的处理过程(Gunerken et al.,2015)，即处理1公斤湿藻体(微藻干重4.1％)需要消耗6.08千瓦时电量(Gunerken et al.，2015)。高能耗的破壁技术大大增加了最终产品的价格。Wu等人研究表明，纤维素酶是酶解破壁微拟球藻的最佳生物催化剂之一(Wu etal.，2017)。这是因为微拟球藻的细胞壁含70％的纤维素(Scholz etal.，2014)。因此利用纤维素酶酶解微拟球藻，再转酯化反应制备生物柴油，可能是一种更经济的方法。
除了生物柴油，微拟球藻细胞还能大量合成二十碳五烯酸(EPA，占总脂肪酸10-40％)(Ma etal.，2016)。众所周知EPA是一种ω-3脂肪酸，具有抗肿瘤、预防心血管疾病、缓解中风和痛风等多种生物学功能。近年来海洋污染严重，现有食用鱼油已检测到杀虫剂、重金属(如汞、砷等)、激素等有害物质，使鱼油源的EPA安全性受到挑战。基于海洋食物链，海鱼摄食含EPA的海洋微藻才能积累海鱼EPA。另外现有资料表明，微拟球藻是一种生产绿色的可再生的EPA新资源。如Mitra等人(Mitra etal.，2015)培养微拟球藻(Nannochloropsisgaditana)可合成19.13％-37.83％EPA(占总脂肪酸)。Law等人利用15升玻璃缸培养微拟球藻(Nannochloropsis salina)，通过高氮和缺氮条件下分别获得EPA含量为14.6％和31％(Law et al.，2018)。但是现有开发微拟球藻生物柴油的研究中(Lopez etal.，2016；Lawetal.，2018)，研究者将微拟球藻的EPA脂肪酸也转化为低值的生物柴油，这无疑是一种资源的浪费。
作为本申请的主要发明人研究发现，在乙醇反应催化鱼油和等鞭金藻藻油中，南极假丝酵母脂肪酶A具有歧视ω-3脂肪酸(十八碳四烯酸(SDA)、EPA、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA))的功能，即催化ω-3脂肪酸的速率显著低于其他脂肪酸(如饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸)(He et al.,2016和2017)。同时脂肪酶A表现非位置选择性的特性，达到富集SDA、EPA、DPA和DHA的作用(He et al.，2016和2017)。上述现有技术中通过脂肪酶A催化鱼油和等鞭金藻藻油，获得的EPA含量最高仅为45％。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，通过采用纤维素酶解破壁微拟球藻以及利用液体南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应，实现了联产低值的生物柴油和高附加值的EPA，同时有效降低了生物柴油的制造成本并提高了EPA在藻油中的含量。
本发明的整体技术构思是：
采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻制成发酵液，培养条件为采用鼓泡式光反应器培养，培养基按照体积比为60％-90％的比例装量，接种量为每升培养基含有微拟球藻0.05克-0.2克，培养温度为23℃-28℃，通气速率1升/分钟-3升/分钟，二氧化碳浓度为1％-5％，培养周期8天-12天；
B、湿微拟球藻破壁
将步骤A中获得的发酵液高速离心后获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入5毫升-20毫升蒸馏水以及0.01％-1％纤维素酶的比例在湿微拟球藻中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，将酶解后的物料高速离心后获得破壁的微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每克已破壁的微拟球藻干重加入3毫升-5毫升的乙醇和20微升-60微升的液体脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及液体脂肪酶A进行转酯化反应，获得低值的生物柴油和高值化的EPA，转酯化反应的条件是：温度为30℃-40℃，转速为150转/分钟-250转/分钟，时间为48小时-96小时；液体脂肪酶A的选用南极假丝酵母脂肪酶A；
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入正己烷，充分萃取后分离正己烷相并去除萃取剂，得到粗生物柴油；
下层乙醇相高速离心收集乙醇，藻渣采用乙醇充分萃取，合并萃取液并去除乙醇得到富含EPA的藻油。
本发明的具体技术构思还有：
本发明中的微拟球藻可以采用多种现有藻种实现，其选择并不脱离本发明的技术实质，其中较为优选的技术方案是，所述的步骤A中的微拟球藻选自微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537，微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1，微拟球藻Nannochloropsis oculata CCMP525，微拟球藻Nannochloropsis gaditana CCMP527，微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529，微拟球藻Nannochloropsis limneticaCCMP505中的一种。
更为优选的技术方案是，所述的微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537，微拟球藻Nannochloropsis oculata CCMP525，微拟球藻Nannochloropsis gaditanaCCMP527，微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529以及微拟球藻Nannochloropsislimnetica CCMP505购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(Nat ional Center forMarine Algae and Microbiota,USA)；微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1购自美国马里兰大学环境科学中心海洋与环境技术研究所(Institute of Marine&Environmental Technology,Center for Environmental Science,Univers ity ofMaryland,USA)。
为满足微拟球藻生长的需要，优选的技术方案是，步骤A中每升改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐15克-30克；NaNO3 0.08克-1.5克；NaH2PO4 0.001克-0.01克；Na2EDTA0.004克-0.02克；FeCl3·H2O 0.003克-0.01克；CuSO4·5H2O 0.1×10-5克-1×10-5克；ZnSO4·7H2O 1×10-5克-5×10-5克；CoCl2·6H2O 1×10-5克-3×10-5克；Na2MoO4·2H2O 5×10-6克-9.9×10-6克；维生素B1 1×10-4克-2×10-4克；维生素B12 1×10-6克-2×10-6克；生物素1×10-6克-2×10-6克。
为便于快速收集微拟球藻，优选的技术方案是，步骤B中高速离心的条件是：转速为3000转/分钟-6000转/分钟，时间为3分钟-10分钟。
为提高纤维素酶对湿微拟球藻酶解破壁效果，缩短酶解破壁反应时间，优选的技术实现方式是，步骤B中的纤维素酶来源于木霉，纤维素酶的酶活为15000U/g-100000U/g。1U的纤维素酶酶活定义为：纤维素酶在温度为50℃和pH为4.8条件下水解作用纤维素1分钟所释放1微克葡萄糖。
更为优选的技术方案是，所述的步骤B中的酶解条件是：温度为35℃-55℃，转速为150转/分钟-250转/分钟，酶解时间为4小时-24小时。
为提高转酯化反应性能，即EPA富集能力最高和生物柴油转化率最高，优选的技术实现手段是，步骤C中南极假丝酵母脂肪酶A酶活6KLU/g。1KLU的脂肪酶酶活为，脂肪酶在温度为37℃和pH为7.2条件下水解作用三丁酸甘油酯1分钟释放1毫摩尔的丁酸。
更为优选的技术方案是，步骤C中南极假丝酵母脂肪酶A由丹麦诺维信公司生产，英文缩写CALA，商品名AD L，酶活6KLU/g。
粗生物柴油和富含EPA藻油的分离优选采用如下技术手段实现：
所述的步骤D中采用正己烷萃取得到粗生物柴油的具体工艺步骤为：将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入6-10倍体积的正己烷，充分萃取后静止分层，收集上层正己烷相；再加入6-10倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相，将两次的正己烷相旋转蒸发去除正己烷获得粗生物柴油。
所述的步骤D中富含EPA的藻油的分离具体工艺步骤为：下层乙醇相在转速为3000转/分钟-6000转/分钟的条件下离心3分钟-5分钟，收集乙醇溶液；藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，在转速为3000转/分钟-6000转/分钟的条件下离心3分钟-5分钟，收集乙醇溶液，将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，获得富含EPA的藻油。
为验证本发明的技术效果，申请人采用如下方法对本发明所获得的富含EPA藻油、生物柴油的转化率及品质进行测试：
1、测定富含EPA的藻油
取10mg的微拟球藻藻粉，加1mL0.5M氢氧化钠-甲醇溶液，于80℃反应10分钟；冷却后，加1mL14％三氟化硼-甲醇溶液，于80℃反应2分钟。反应完成后，冷却至室温，加0.2mL饱和盐溶液(270mg/mL的氯化钠和1.5mg/mL的氯化钾)，振荡10秒后，加入1mL正己烷(含0.5mg十七烷酸甲酯)。充分振荡后，取正己烷，利用气相色谱仪，测定总可皂化的脂肪酸含量。
脂肪酶转酯化反应后，取2mg的反应物，加1mL正己烷(含0.1mg十七烷酸甲酯)，利用气相色谱仪，测定脂肪酸乙酯含量，即生物柴油的量。富含EPA的藻油制备量＝总可皂化的脂肪酸量-生物柴油的量。
脂肪酶转酯化反应后，藻油EPA含量可通过气相色谱仪测定。
2、生物柴油转化率测定
反应进行完毕后，取2mg的反应物，加1mL正己烷(含0.1mg十七烷酸甲酯)，利用气相色谱仪，测定脂肪酸乙酯含量。生物柴油的转化率＝(100％×脂肪酸乙酯含量/可皂化的脂肪酸含量)。
3、主要品质指标的测定
依据国标记载，评估所制备的生物柴油中密度、运动黏度和十六烷值等三个主要品质指标。
本发明所具备的实质性特点和取得的显著技术进步在于：
1、采用本发明的方法所制备富含EPA的藻油，其EPA占总脂肪酸的含量60％-70％。所制备藻油中EPA浓度明显高于现有报道藻油中EPA含量。
2、采用本发明的方法所制备的生物柴油的密度(855-890kg/m3)、运动黏度(4.1-4.7mm2/s)和十六烷值(51-58)等主要技术指标，符合国标中对于生物柴油的主要技术指标要求，生物柴油的转化率可达50％-60％。
3、采用酶解破壁微藻由于酶反应条件温和、水解酶底物选择性强、商用水解酶的价格低廉(https://www.1688.com，酶活为50000U/g的纤维素酶价格约100元/kg)、酶用量少(低于1％)，其破壁反应过程的能耗较低，可大大降低生产高值化的EPA产品和低值的生物柴油的制备成本，为联产EPA及生物柴油技术的规模化生产提供了科学依据。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据说明书做出的等效技术手段替换，均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
采用两步酶法催化湿微拟球藻制备生物柴油的方法，包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537制成发酵液，培养条件：鼓泡式光反应器培养，培养基按照体积比为60％的比例装量，接种量为每升培养基接种微拟球藻0.05g，培养温度为23℃，通气速率1升/分钟，二氧化碳浓度为1％，培养周期8天；
B、湿微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537破壁
将步骤A中获得的发酵液在转速为3000转/分钟的条件下，高速离心3分钟，去除上清液，再用蒸馏水清洗两次，离心收集微藻细胞获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入5mL蒸馏水以及1％纤维素酶的比例在湿藻体中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，酶解条件是：温度为35℃、转速为150转/分钟、酶解时间为4小时；将酶解后的物料在转速为3000转/分钟的条件下，高速离心3分钟获得破壁的湿微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每克已破壁的微拟球藻干重加入3毫升的乙醇和20微升的南极假丝酵母脂肪酶A的比例，在步骤B中破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应后获得低值的生物柴油和高值化的EPA，转酯化反应的条件是：温度为30℃，转速为150转/分钟，时间为48小时。
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入6倍体积的正己烷，充分萃取后，静止分层，收集上层正己烷相。再加入6倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相，将两次的正己烷相，旋转蒸发去除正己烷，即获得粗生物柴油。
下层乙醇相，3000转每分钟，离心3分钟，收集乙醇。藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，离心(3000转/分钟，3分钟)收集乙醇溶液。将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，即获得富含EPA的藻油。
所述的微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(National Center for Marine Algae and Microbiota,USA)。
步骤A中每升改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐15克；NaNO3 0.08克；NaH2PO4 0.001克；Na2EDTA 0.004克；FeCl3·H2O0.003克；CuSO4·5H2O 1×10-6克；ZnSO4·7H2O 1×10-5克；CoCl2·6H2O 1×10-5克；Na2MoO4·2H2O5×10-6克；维生素B1 1×10-4克；维生素B12 1×10-6克；生物素1×10-6克。
步骤B中的纤维素酶来源于木霉，纤维素酶的酶活为15000U/g。
所述的步骤C中南极假丝酵母脂肪酶A由丹麦诺维信公司生产，英文缩写CALA，商品名AD L，酶活6KLU/g。
通过气相色谱仪分析后，采用实施例1的方法获得的生物柴油转化率为50％-56.27％。生物柴油的密度855kg/m3-871kg/m3、运动黏度4.1mm2/s-4.52mm2/s、十六烷值53.21-55.49。
富含EPA的藻油量为46.73％-50％，EPA占总脂肪酸含量为60％-63.72％。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：
采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1制成发酵液，培养条件：培养基按照体积比为90％的比例装量，接种量为每升的培养基接微拟球藻0.2g，培养温度为28℃，通气速率3升/分钟，二氧化碳浓度为5％，培养周期12天；
B、湿微拟球藻破壁
将步骤A中获得的发酵液在转速为6000转/分钟的条件下，高速离心10分钟，去除上清液，再用蒸馏水清洗两次，离心收集微藻细胞获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入20mL蒸馏水以及1％纤维素酶的比例在湿藻体中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，酶解条件是：温度为55℃、转速为250转/分钟、酶解时间为24小时；将酶解后的物料在转速为8000转/分钟的条件下高速离心10分钟获得破壁的湿微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每克微拟球藻干重加入5mL的乙醇和60μL的南极假丝酵母脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应后获得生物柴油，转酯化反应的条件是：温度为40℃，转速为250转/分钟，时间为96小时。
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入10倍体积的正己烷，充分萃取后，静止分层，收集上层正己烷相。再加入10倍体积的正己烷，萃取并静止分层收集上层正己烷相。将两次的正己烷相旋转蒸发去除正己烷，即获得粗生物柴油。
下层乙醇相，6000转/分钟离心5分钟，收集乙醇。藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，离心(6000转/分钟，5分钟)收集乙醇溶液。将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，即获得富含EPA的藻油。
步骤A中每升改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐30克；NaNO3 1.5克；NaH2PO4 0.01克；Na2EDTA 0.02克；FeCl3·H2O0.01克；CuSO4·5H2O 1×10-5克；ZnSO4·7H2O 5×10-5克；CoCl2·6H2O 3×10-5克；Na2MoO4·2H2O9.9×10-6克；维生素B1 2×10-4克；维生素B12 2×10-6克；生物素2×10-6克。
微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1购自美国马里兰大学环境科学中心海洋与环境技术研究所(Institute of Marine&Environmental Technology，Center forEnvironmental Science，Univers ity of Maryland，USA)。
步骤B中的纤维素酶来源于木霉，纤维素酶的酶活为50000U/g。
通过气相色谱仪分析后，采用实施例2的方法获得生物柴油的转化率为53.72％-60％。生物柴油的密度862kg/m3-890kg/m3、运动黏度4.2mm2/s-4.7mm2/s、十六烷值51-58。
富含EPA的藻油量为40-47.28％，EPA占总脂肪酸含量为61.42-70％。
其余内容同实施例1。
实施例3
采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻Nannochloropsis oculata CCMP525
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻Nannochloropsis oculata CCMP525制成发酵液，培养条件：培养基按照体积比为75％的比例装量，接种量为每升培养基接微拟球藻0.125g，培养温度为26℃，通气速率2升/分钟，二氧化碳浓度为3％，培养周期10天；
B、湿微拟球藻破壁Nannochloropsis oculata CCMP525
将步骤A中获得的发酵液在转速为4500转/分钟的条件下，高速离心8分钟，去除上清液，再用蒸馏水清洗两次，离心收集微藻细胞获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入12.5mL蒸馏水以及0.55％纤维素酶的比例在湿藻体中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，酶解条件是：温度为45℃、转速为200转/分钟、酶解时间为14小时；将酶解后的物料在转速为4500转/分钟的条件下，高速离心8分钟获得破壁的湿微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每克微拟球藻干重加入4mL的乙醇和40μL的南极假丝酵母脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应后获得生物柴油，转酯化反应的条件是：温度为35℃，转速为200转/分钟，时间为72小时。
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中，反应体系中加入8倍体积的正己烷，充分萃取后静止分层，收集上层正己烷相。再加入8倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相。将两次的正己烷相，旋转蒸发去除正己烷，即获得粗生物柴油。
下层乙醇相，4500转每分钟，离心4分钟，收集乙醇。藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，离心(4500转/分钟，4分钟)收集乙醇溶液。将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，即获得富含EPA的藻油。
步骤A中每升改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐22.5克；NaNO3 0.79克；NaH2PO4 0.0055克；Na2EDTA 0.012克；FeCl3·H2O0.056克；CuSO4·5H2O 5.5×10-6克；ZnSO4·7H2O 3×10-5克；CoCl2·6H2O 2×10-5克；Na2MoO4·2H2O 7.5×10-6克；维生素B1 1.5×10-4克；维生素B12 1.5×10-6克；生物素1.5×10-6克。
微拟球藻Nannochloropsis oculata CCMP525购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(National Center for Marine Algae and Microbiota,USA)。
步骤B中纤维素酶的酶活为100000U/g。
通过气相色谱仪分析后，采用实施例3的方法获得生物柴油的转化率为50％-57.49％。生物柴油的密度855kg/m3-880kg/m3，运动黏度4.1mm2/s-4.5mm2/s，十六烷值51.08-55.27。
富含EPA的藻油量为42.51％-50％，EPA占总脂肪酸含量为60.07％-64.92％。
其余内容同实施例1。
实施例4
采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻Nannochloropsis gaditana CCMP527
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻Nannochloropsis gaditana CCMP527制成发酵液，培养条件：培养基按照体积比为82％的比例装量，接种量为每升培养基接微拟球藻0.085g，培养温度为24℃，通气速率1.5升/分钟，二氧化碳浓度为2％，培养周期9天；
B、湿微拟球藻破壁Nannochloropsis gaditana CCMP527
将步骤A中获得的发酵液在转速为4000转/分钟的条件下，高速离心5分钟，去除上清液，再用蒸馏水清洗两次，离心收集微藻细胞获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入8mL蒸馏水以及0.25％纤维素酶的比例在湿藻体中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，酶解条件是：温度为40℃、转速为175转/分钟、酶解时间为9小时；将酶解后的物料在转速为4000转/分钟的条件下，高速离心5分钟获得破壁的湿微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每1克微拟球藻干重加入3.5mL的乙醇和30μL的南极假丝酵母脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应后获得生物柴油，转酯化反应的条件是：温度为32.5℃，转速为175转/分钟，时间为60小时。
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中，反应体系中加入7倍体积的正己烷，充分萃取后静止分层，收集上层正己烷相。再加入7倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相。将两次的正己烷相旋转蒸发去除正己烷，即获得粗生物柴油。
下层乙醇相，4000转/分钟离心3.5分钟，收集乙醇。藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，离心(4000转/分钟，3.5分钟)收集乙醇溶液。将3次的乙醇溶液，旋转蒸发去除乙醇，即获得富含EPA的藻油。
步骤A中每升改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐27.5克；NaNO3 1.05克；NaH2PO4 0.0038克；Na2EDTA 0.016克；FeCl3·H2O0.0048克；CuSO4·5H2O 7.8×10-6克；ZnSO4·7H2O 4×10-5克；CoCl2·6H2O 2.5×10-5克；Na2MoO4·2H2O 8×10-6克；维生素B1 1.75×10-4克；维生素B12 1.75×10-6克；生物素1.75×10-6克。
微拟球藻Nannochloropsis gaditana CCMP527购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(National Center for Marine Algae and Microbiota,USA)。
步骤B中的纤维素酶来源于木霉。
通过气相色谱仪分析后，采用实施例4的方法获得生物柴油的转化率为52.83％-58.96％。生物柴油的密度863kg/m3-889kg/m3，运动黏度4.31mm2/s-4.68mm2/s，十六烷值52.56-57。
富含EPA的藻油量为41.04％-47.17％，EPA占总脂肪酸含量为62.57％-69.42％。
其余内容同实施例1。
实施例5
采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529制成发酵液，培养条件：培养基按照体积比为68％的比例装量，接种量为每升培养基接微拟球藻0.15g，培养温度为25℃，通气速率2.5升/分钟，二氧化碳浓度为4％，培养周期11天；
B、湿微拟球藻破壁Nannochloropsis granulata CCMP529
将步骤A中获得的发酵液在转速为5000转/分钟的条件下高速离心9分钟，去除上清液，再用蒸馏水清洗两次，离心收集微藻细胞获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入17.5mL蒸馏水以及0.15％纤维素酶的比例在湿藻体中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，酶解条件是：温度为50℃、转速为225转/分钟、酶解时间为19小时；将酶解后的物料在转速为5000转/分钟的条件下，高速离心9分钟获得破壁的湿微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每1克微拟球藻干重加入4.5mL的乙醇和50μL的南极假丝酵母脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应后获得生物柴油，转酯化反应的条件是：温度为37.5℃，转速为225转/分钟，时间为84小时。
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中，反应体系中加入9倍体积的正己烷，充分萃取后静止分层，收集上层正己烷相。再加入9倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相。将两次的正己烷相旋转蒸发去除正己烷，即获得粗生物柴油。
下层乙醇相，5000转/分钟离心4.5分钟，收集乙醇。藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，离心(5000转/分钟，4.5分钟)收集乙醇溶液。将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，即获得富含EPA的藻油。
步骤A中每升含有改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐18克；NaNO3 0.6克；NaH2PO4 0.004克；Na2EDTA 0.005克；FeCl3·H2O0.004克；CuSO4·5H2O 3.7×10-6克；ZnSO4·7H2O 2×10-5克；CoCl2·6H2O 1.2×10-5克；Na2MoO4·2H2O 6.5×10-6克；维生素B1 1.2×10-4克；维生素B12 1.2×10-6克；生物素1.2×10-6克。
所述的微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(Nat ional Center for Marine Algae and Microbiota,USA)。
步骤B中的纤维素酶的酶活为20000U/g。
通过气相色谱仪分析后，采用实施例5的方法获得生物柴油的转化率为54.56％-58.12％。生物柴油的密度860kg/m3-885kg/m3，运动黏度4.12mm2/s-4.53mm2/s，十六烷值54.03-56.28。
富含EPA的藻油量为41.78％-45.44％，EPA占总脂肪酸含量为61.74％-69.32％。
其余内容同实施例1。
实施例6
采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻Nannochloropsis limnetica CCMP505
在灭菌后改良的f/2培养基中采用异养培养的方法培养微拟球藻Nannochloropsis limnetica CCMP505制成发酵液，培养条件：培养基按照体积比为85％的比例装量，接种量为每升培养基接微拟球藻0.1g，培养温度为27℃，通气速率2.6升/分钟，二氧化碳浓度为3.5％，培养周期10天；
B、湿微拟球藻破壁Nannochloropsis limnetica CCMP505
将步骤A中获得的发酵液在转速为3800转/分钟的条件下高速离心6分钟，去除上清液，再用蒸馏水清洗两次，离心收集微藻细胞获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入10mL蒸馏水以及0.5％纤维素酶的比例在湿藻体中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，酶解条件是：温度为42℃、转速为180转/分钟、酶解时间为12小时；将酶解后的物料在转速为3800转/分钟的条件下，高速离心6分钟获得破壁的湿微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每1克微拟球藻干重加入3.6mL的乙醇和35μL的南极假丝酵母脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及南极假丝酵母脂肪酶A进行转酯化反应后获得生物柴油，转酯化反应的条件是：温度为32℃，转速为210转/分钟，时间为70小时。
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中，反应体系中加入8倍体积的正己烷，充分萃取后静止分层，收集上层正己烷相。再加入8倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相。将两次的正己烷相旋转蒸发去除正己烷，即获得粗生物柴油。
下层乙醇相，3800转/分钟离心4分钟，收集乙醇。藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，离心(3800转/分钟，4分钟)收集乙醇溶液。将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，即获得富含EPA的藻油。
步骤A中每升含有改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐20克；NaNO3 0.8克；NaH2PO4 0.006克；Na2EDTA 0.009克；FeCl3·H2O0.007克；CuSO4·5H2O 8×10-6克；ZnSO4·7H2O 2×10-5克；CoCl2·6H2O 2×10-5克；Na2MoO4·2H2O 9×10-6克；维生素B1 1×10-4克；维生素B12 1×10-6克；生物素1×10-6克。
微拟球藻Nannochloropsis limnetica CCMP505购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(National Center for Marine Algae and Microbiota,USA)。
步骤B中的纤维素酶的酶活为20000U/g。
生物柴油的转化率及其脂肪酶组成。通过气相色谱仪分析后，采用实施例6的方法获得生物柴油的转化率为52.81％-59.23％。生物柴油的密度858kg/m3-876kg/m3、运动黏度4.23mm2/s-4.55mm2/s、十六烷值52.76-57.21。
富含EPA的藻油量为40.77％-47.19％，EPA占总脂肪酸含量为60.27％-68.12％。
其余内容同实施例1。

Claims (11)

1.采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
A、培养微拟球藻
在灭菌后改良的f/2培养基中采用自养培养的方法培养微拟球藻制成发酵液，培养条件为采用鼓泡式光反应器培养，培养基按照体积比为60％-90％的比例装量，接种量为每升培养基含有微拟球藻0.05克-0.2克，培养温度为23℃-28℃，通气速率1升/分钟-3升/分钟，二氧化碳浓度为1％-5％，培养周期8天-12天；
B、湿微拟球藻破壁
将步骤A中获得的发酵液高速离心后获得湿微拟球藻，按照每克微拟球藻干重加入5毫升-20毫升蒸馏水以及0.01％-1％纤维素酶的比例在湿微拟球藻中加入蒸馏水及纤维素酶进行酶解，将酶解后的物料高速离心后获得破壁的微拟球藻；
C、脂肪酶A的转酯化反应制备生物柴油和EPA
按照每克已破壁的微拟球藻干重加入3毫升-5毫升的乙醇和20微升-60微升的液体脂肪酶A的比例，在步骤B中获得的破壁的湿微拟球藻中加入乙醇及液体脂肪酶A进行转酯化反应，获得低值的生物柴油和高值化的EPA，转酯化反应的条件是：温度为30℃-40℃，转速为150转/分钟-250转/分钟，时间为48小时-96小时；液体脂肪酶A的选用南极假丝酵母脂肪酶A；
D、富含EPA藻油和生物柴油的分离
将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入正己烷，充分萃取后分离正己烷相并去除萃取剂，得到粗生物柴油；
下层乙醇相高速离心收集乙醇，藻渣采用乙醇充分萃取，合并萃取液并去除乙醇得到富含EPA的藻油。
2.根据权利要求1所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤A中的微拟球藻选自微拟球藻Nannochloropsis salinaCCMP537，微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1，微拟球藻Nannochloropsisoculata CCMP525，微拟球藻Nannochloropsis gaditana CCMP527，微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529，微拟球藻Nannochloropsis limnetica CCMP505中的一种。
3.根据权利要求2所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的微拟球藻Nannochloropsis salina CCMP537，微拟球藻Nannochloropsis oculata CCMP525，微拟球藻Nannochloropsis gaditana CCMP527，微拟球藻Nannochloropsis granulata CCMP529以及微拟球藻Nannochloropsis limneticaCCMP505购自美国国家海洋藻类和微生物群中心(Nat ional Center for Marine Algaeand Microbiota,USA)；微拟球藻Nannochloropsis oceanica IMET1购自美国马里兰大学环境科学中心海洋与环境技术研究所(Institute of Marine&EnvironmentalTechnology,Center for Environmental Science,University of Maryland,USA)。
4.根据权利要求1所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤A中每升改良的f/2培养基包含如下质量的原料：
海盐15克-30克；NaNO3 0.08克-1.5克；NaH2PO4 0.001克-0.01克；Na2EDTA 0.004克-0.02克；FeCl3·H2O 0.003克-0.01克；CuSO4·5H2O 0.1×10-5克-1×10-5克；ZnSO4·7H2O 1×10-5克-5×10-5克；CoCl2·6H2O 1×10-5克-3×10-5克；Na2MoO4·2H2O 5×10-6克-9.9×10-6克；维生素B1 1×10-4克-2×10-4克；维生素B12 1×10-6克-2×10-6克；生物素1×10-6克-2×10-6克。
5.根据权利要求1所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤B中高速离心的条件是：转速为3000转/分钟-6000转/分钟，时间为3分钟-10分钟。
6.根据权利要求1所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤B中的纤维素酶来源于木霉，纤维素酶的酶活为15000U/g-100000U/g。
7.根据权利要求1或6中任一项所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤B中的酶解条件是：温度为35℃-55℃，转速为150转/分钟-250转/分钟，酶解时间为4小时-24小时。
8.根据权利要求1所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤C中南极假丝酵母脂肪酶A酶活6KLU/g。
9.根据权利要求1或8中任一项所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤C中南极假丝酵母脂肪酶A由丹麦诺维信公司生产，英文缩写CALA，商品名酶活6KLU/g。
10.根据权利要求1所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤D中采用正己烷萃取得到粗生物柴油的具体工艺步骤为：将步骤C中转酯化反应后的反应体系中加入6-10倍体积的正己烷，充分萃取后静止分层，收集上层正己烷相；再加入6-10倍体积的正己烷，萃取并静止分层，收集上层正己烷相，将两次的正己烷相旋转蒸发去除正己烷获得粗生物柴油。
11.根据权利要求1或10中任一项所述的采用脂肪酶选择性催化微拟球藻联产二十碳五烯酸和生物柴油的方法，其特征在于所述的步骤D中富含EPA的藻油的分离具体工艺步骤为：下层乙醇相在转速为3000转/分钟-6000转/分钟的条件下离心3分钟-5分钟，收集乙醇溶液；藻渣用同等体积的无水乙醇，洗涤两次，在转速为3000转/分钟-6000转/分钟的条件下离心3分钟-5分钟，收集乙醇溶液，将3次的乙醇溶液旋转蒸发去除乙醇，获得富含EPA的藻油。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112358970A (zh) * 2020-11-24 2021-02-12 广西小藻农业科技有限公司 拟微绿球藻及其应用
CN112795423A (zh) * 2021-01-25 2021-05-14 武汉轻工大学 一种酶处理辅助提取微拟球藻epa极性脂的方法
CN113480425A (zh) * 2021-06-21 2021-10-08 日照职业技术学院 一种从微藻中提取dha和epa的工艺
CN116769847A (zh) * 2023-08-09 2023-09-19 德默特生物科技(珠海)有限公司 一种提高拟微球藻藻油中epa含量的方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1865048A1 (en) * 2006-06-09 2007-12-12 Cognis IP Management GmbH Process for the production of fatty acid alkyl esters by integrating fermentation and esterification
CN101121896A (zh) * 2007-09-19 2008-02-13 河北工业大学 利用脂肪酶催化生产生物柴油的方法
WO2008032007A1 (en) * 2006-09-14 2008-03-20 Tmo Renewables Ltd Lipase
CN101280328A (zh) * 2008-05-27 2008-10-08 清华大学 一种从自养到异养两步培养小球藻生产生物柴油的方法
CN103451101A (zh) * 2012-05-28 2013-12-18 中国石油天然气股份有限公司 一种生产高品质微藻生物柴油的方法
CN105925628A (zh) * 2016-07-06 2016-09-07 清华大学 酶法生产生物柴油和多元不饱和脂肪酸酯富集的耦合工艺
CN106221888A (zh) * 2016-08-30 2016-12-14 南宁华侨投资区政孙贸易有限公司 一种微藻生物柴油的生产方法
CN106929550A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 中国石油天然气股份有限公司 一种以布朗葡萄藻生产生物柴油原料的方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1865048A1 (en) * 2006-06-09 2007-12-12 Cognis IP Management GmbH Process for the production of fatty acid alkyl esters by integrating fermentation and esterification
WO2008032007A1 (en) * 2006-09-14 2008-03-20 Tmo Renewables Ltd Lipase
CN101121896A (zh) * 2007-09-19 2008-02-13 河北工业大学 利用脂肪酶催化生产生物柴油的方法
CN101280328A (zh) * 2008-05-27 2008-10-08 清华大学 一种从自养到异养两步培养小球藻生产生物柴油的方法
CN103451101A (zh) * 2012-05-28 2013-12-18 中国石油天然气股份有限公司 一种生产高品质微藻生物柴油的方法
CN106929550A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 中国石油天然气股份有限公司 一种以布朗葡萄藻生产生物柴油原料的方法
CN105925628A (zh) * 2016-07-06 2016-09-07 清华大学 酶法生产生物柴油和多元不饱和脂肪酸酯富集的耦合工艺
CN106221888A (zh) * 2016-08-30 2016-12-14 南宁华侨投资区政孙贸易有限公司 一种微藻生物柴油的生产方法

Non-Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HALLDORSSON A等: "Separation of EPA and DHA in fish oil by lipase-catalyzed esterification with glycerol", 《JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY》 *
HALLDORSSON A等: "Separation of EPA and DHA in fish oil by lipase-catalyzed esterification with glycerol", 《JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY》, vol. 80, no. 9, 30 September 2003 (2003-09-30), pages 915 - 921, XP001247623, DOI: 10.1007/s11746-003-0796-8 *
YONGJIN HE等: "Rationale behind the near-ideal catalysis of Candida antarctica lipase A (CAL-A) for highly concentrating ω-3 polyunsaturated fatty acids into monoacylglycerols", 《FOOD CHEMISTRY》 *
YONGJIN HE等: "Rationale behind the near-ideal catalysis of Candida antarctica lipase A (CAL-A) for highly concentrating ω-3 polyunsaturated fatty acids into monoacylglycerols", 《FOOD CHEMISTRY》, vol. 219, 15 March 2017 (2017-03-15) *
YONGJIN HE等: "The near-ideal catalytic property of Candida antarctica lipase A to highly concentrate n-3 polyunsaturated fatty acids in monoacylglycerols via one-step ethanolysis of triacylglycerols", 《BIORESOURCE TECHNOLOGY》 *
YONGJIN HE等: "The near-ideal catalytic property of Candida antarctica lipase A to highly concentrate n-3 polyunsaturated fatty acids in monoacylglycerols via one-step ethanolysis of triacylglycerols", 《BIORESOURCE TECHNOLOGY》, vol. 219, 30 November 2016 (2016-11-30) *
何勇锦: "藻油制备功能性油脂及其酶催化特性的研究", 《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *
何勇锦: "藻油制备功能性油脂及其酶催化特性的研究", 《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》, no. 08, 15 August 2018 (2018-08-15), pages 2 - 8 *
刘书成等: "酶法制备n-3多不饱和脂肪酸甘油酯的研究进展", 《海洋水产研究》, vol. 26, no. 05, 31 October 2005 (2005-10-31), pages 98 - 103 *
刘颖等: "脂肪酶催化转酯化生产生物柴油的研究进展", 《中国科技信息》 *
刘颖等: "脂肪酶催化转酯化生产生物柴油的研究进展", 《中国科技信息》, no. 22, 30 November 2010 (2010-11-30), pages 21 - 22 *
唐青涛等: "脂肪酶富集DHA和EPA的研究进展", 《华西药学杂志》 *
唐青涛等: "脂肪酶富集DHA和EPA的研究进展", 《华西药学杂志》, vol. 16, no. 4, 30 April 2001 (2001-04-30), pages 289 - 292 *
库流鹏: "微藻油脂制备生物柴油和富集多不饱和脂肪酸甘油酯工艺的研究", 《中国优秀硕士论文全文数据库》, no. 05, 15 May 2017 (2017-05-15), pages 1 - 89 *
杨建军等: "脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望", 《食品研究与开发》 *
杨建军等: "脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望", 《食品研究与开发》, vol. 34, no. 16, 31 August 2013 (2013-08-31), pages 128 - 132 *
王清印: "《多营养层次的海水综合养殖》", 31 October 2011, 海洋出版社, pages: 23 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112358970A (zh) * 2020-11-24 2021-02-12 广西小藻农业科技有限公司 拟微绿球藻及其应用
CN112358970B (zh) * 2020-11-24 2023-01-24 广西小藻农业科技有限公司 拟微绿球藻及其应用
CN112795423A (zh) * 2021-01-25 2021-05-14 武汉轻工大学 一种酶处理辅助提取微拟球藻epa极性脂的方法
CN112795423B (zh) * 2021-01-25 2023-01-17 武汉轻工大学 一种酶处理辅助提取微拟球藻epa极性脂的方法
CN113480425A (zh) * 2021-06-21 2021-10-08 日照职业技术学院 一种从微藻中提取dha和epa的工艺
CN113480425B (zh) * 2021-06-21 2023-07-18 日照职业技术学院 一种从微藻中提取dha和epa的工艺
CN116769847A (zh) * 2023-08-09 2023-09-19 德默特生物科技(珠海)有限公司 一种提高拟微球藻藻油中epa含量的方法
CN116769847B (zh) * 2023-08-09 2023-12-05 德默特生物科技(珠海)有限公司 一种提高拟微球藻藻油中epa含量的方法

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