CN109589452B - 一种生物材料的抗钙化处理方法 - Google Patents

一种生物材料的抗钙化处理方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109589452B
CN109589452B CN201811391606.7A CN201811391606A CN109589452B CN 109589452 B CN109589452 B CN 109589452B CN 201811391606 A CN201811391606 A CN 201811391606A CN 109589452 B CN109589452 B CN 109589452B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
biological material
glutaraldehyde
gas
soaking
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811391606.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109589452A (zh
Inventor
赵益民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Chuangxin Medical Technology Co ltd
Original Assignee
Hangzhou Chuangxin Medical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Chuangxin Medical Technology Co ltd filed Critical Hangzhou Chuangxin Medical Technology Co ltd
Priority to CN201811391606.7A priority Critical patent/CN109589452B/zh
Publication of CN109589452A publication Critical patent/CN109589452A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109589452B publication Critical patent/CN109589452B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3625—Vascular tissue, e.g. heart valves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3629—Intestinal tissue, e.g. small intestinal submucosa
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Treatment And Processing Of Natural Fur Or Leather (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，包括：去除生物材料的脂肪；对所述生物材料进行脱细胞处理；利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制；将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中；将所述生物材料浸泡到2，3‑丁二醇溶液中；将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存。本发明提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，能够获得更好的抗钙化效果。

Description

一种生物材料的抗钙化处理方法
技术领域
本发明涉及生物医疗技术领域，特别涉及一种生物材料的抗钙化处理方法。
背景技术
生物材料是用于与生命系统接触和发生相互作用的，并能对其细胞、组织和器官进行诊断、治疗、修复、替换或诱导再生的一类天然或人工合成的特殊功能材料。生物材料的钙化会大大降低生物材料的应用效果。目前，尚无完美的、针对生物材料的抗钙化处理技术。
发明内容
本发明实施例提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，能够获得更好的抗钙化效果。
本发明实施例提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，包括：
去除生物材料的脂肪；
对所述生物材料进行脱细胞处理；
利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制；
将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中；
将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中；
将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存。
在本发明实施例中，去除生物材料的脂肪，减少生物材料中的脂肪带来的副作用，有利于后续的抗钙化处理。还可以包括去除生物材料中的结缔组织。
通过对生物材料进行脱细胞处理后，脱去了抗原性较强的上皮细胞核成纤维细胞，降低了抗原性，减少了生物组织钙化的重要位点，且保留了细胞外基质，增强了生物材料的抗钙化。
在利用戊二醛鞣制溶液对生物材料进行鞣制的过程中，较优地，戊二醛鞣制溶液需要满足以下条件：
所述戊二醛鞣制溶液中戊二醛的浓度在0.01％-0.65％的范围内。
具体地，浓度可以为0.01％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.65％等。
所述戊二醛鞣制溶液的PH值在5.5-7.4的范围内。
具体地，戊二醛鞣制溶液的PH值可以为5.5、5.8、6、6.5、7、7.4等。
所述戊二醛鞣制溶液的温度在4℃-55℃的范围内。
在利用戊二醛鞣制溶液进行鞣制的过程中，保存戊二醛鞣制溶液的温度在4℃-55℃的范围内。具体地，该温度可以为4℃、10℃、15℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃等。
鞣制的时间在2天-7天的范围内。
在利用戊二醛鞣制溶液进行鞣制的过程中，整个这个鞣制过程的时间可以在2天-7天的范围内。具体地，该时间可以为2天、3天、5天、7天等。
戊二醛鞣制溶液可以是戊二醛HEPES缓冲溶液。
利用戊二醛鞣制溶液对生物材料进行鞣制后，能够使生物材料的胶原蛋白交联，强度增加，免疫原性降低，增加生物材料的稳定性，并具有消毒的效果。
在生物材料浸泡在丹宁酸溶液中的浸泡过程中，较优地，丹宁酸溶液需要满足以下条件：
所述丹宁酸溶液中丹宁酸的浓度在0.1％-8％的范围内。
具体地，丹宁酸溶液中丹宁酸的浓度可以为0.1％、0.8％、1％、1.5％、2％、5.5％、6％、6.5％、8％等
所述丹宁酸溶液的PH值在5-7的范围内。
具体地，在生物材料浸泡在丹宁酸溶液中的过程中，丹宁酸溶液的PH值保持在5-7的范围内，具体地，该PH值可以为5、6、6.5、7等。
所述丹宁酸溶液的温度在10℃-30℃的范围内。
具体地，在生物材料浸泡在丹宁酸溶液中的过程中，丹宁酸溶液的温度维持在10℃-30℃的范围内，具体地，该温度可以为10℃、15℃、20℃、25℃、30℃等。
在所述丹宁酸溶液浸泡的时间在1天-7天的范围内。
具体地，在生物材料浸泡在丹宁酸溶液中的过程中，浸泡的时间在1天-7天的范围内。具体地，浸泡的时间可以为1天、2天、4天、5天、7天等。
在将生物材料浸泡到丹宁酸溶液中后，丹宁酸能够稳定生物材料细胞外基质中的胶原蛋白纤维、弹性蛋白纤维以及粘多糖等成分，能够显著降低由弹力纤维粘多糖等物质降解导致的钙化，能够改善生物材料的生物力学性能，增强抗疲劳性，延长生物材料的使用寿命。通过丹宁酸还能抗菌和减少蛋白抗原性，这有助于增强生物材料的抗钙化性能和生物相容性。
在生物材料浸泡在2，3-丁二醇溶液中的过程中，较优地，2，3-丁二醇溶液满足以下条件：
所述2，3-丁二醇溶液中2，3-丁二醇的浓度在90％-100％的范围内。
具体地，2，3-丁二醇溶液中2，3-丁二醇的浓度可以为90％、95％、98％、99％、100％等。优选地，该浓度为100％。
所述2，3-丁二醇溶液的PH值在5.5-6.5的范围内。
具体地，在生物材料浸泡在2，3-丁二醇溶液的过程中，2，3-丁二醇溶液的PH值维持在5.5-6.5的范围内。具体地，该PH值可以为5.5、5.8、6.0、6.2、6.5等。
所述2，3-丁二醇溶液的温度在20℃-65℃的范围内。
具体地，在生物材料浸泡在2，3-丁二醇溶液的过程中，2，3-丁二醇溶液的温度维持在20℃-65℃的范围内。具体地，该温度可以为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃等。优选地，该温度为55℃。不同的温度，得到的生物材料的抗拉强度也不同，在20℃-65℃的范围，抗拉强度随着温度的升高呈增大的趋势。例如：在温度为25℃时，抗钙化处理后的生物材料的抗拉强度可以达到9.88±1.56；在温度为35℃时，抗钙化处理后的生物材料的抗拉强度可以达到10.13±1.00；在温度为55℃时，抗钙化处理后的生物材料的抗拉强度可以达到18.10±2.44。
在所述2，3-丁二醇溶液浸泡的时间在3天-21天的范围内。
具体地，在生物材料浸泡在2，3-丁二醇溶液的过程中，浸泡的时间维持在3天-21天的范围内。具体地，该浸泡的时间可以为：3天、7天、10天、15天、20天、21天等。
通过将生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中，2，3-丁二醇溶液的两个羟基受两侧紧邻的两个碳键的影响，结构相对不稳定，更易与醛基结合，形成稳定的环状缩醛，消除了利用戊二醛鞣制溶液进行鞣制的过程中在生物材料中残留的醛基所带来的细胞毒性，增加了生物材料与血液的相容性，防止了生物材料的钙化，能够大大延长生物材料的使用期限，并且，通过浸泡到2，3-丁二醇溶液中能够提高生物材料的抗拉强度。
较优地，所述2，3-丁二醇溶液的温度为55℃，在所述2，3-丁二醇溶液浸泡的时间为7天。在2，3-丁二醇溶液的温度为55℃时，2，3-丁二醇溶液能够更快的反应，进而能够更快的得到符合要求的生物材料，浸泡的时间在7天时尽快得打符合要求的生物材料。具体地，在2，3-丁二醇溶液的温度为55℃的情况下，在浸泡的时间在7天时，即可消除了利用戊二醛鞣制溶液进行鞣制的过程中在生物材料中残留的醛基所带来的细胞毒性，增加了生物材料与血液的相容性，防止了生物材料的钙化，能够大大延长生物材料的使用期限，并且，在2，3-丁二醇溶液的温度为55℃时，生物材料的抗拉强度较高。
在生物材料保存在戊二醛保存溶液中的过程中，戊二醛保存溶液满足以下条件：
所述戊二醛保存溶液中戊二醛的浓度在0.2％-0.3％的范围内。
在生物材料保存在戊二醛保存溶液中的过程中，戊二醛保存溶液中戊二醛的浓度在0.2％-0.3％的范围内。例如：该浓度可以为：0.2％、0.25％、0.27％、0.28％、0.3％等。
所述戊二醛保存溶液的温度在4℃-10℃的范围内。
在生物材料保存在戊二醛保存溶液中的过程中，戊二醛保存溶液的温度维持在4℃-10℃的范围内。具体地，该温度可以为：4℃、5℃、6℃、8℃、9℃、10℃等。
在生物材料保存在戊二醛保存溶液中的过程中，戊二醛保存溶液PH值可以在5.5-7.4的范围内。
可以将生物材料一直保存在戊二醛保存溶液中，在需要使用生物材料时，从戊二醛保存溶液中取出即可。
将生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存，能够提高生物材料的抗钙化性能。
进一步地，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
将所述生物材料浸泡到第一活性溶液中；
其中，所述第一活性溶液中包括：异丙醇、异丁醇、异戊醇、正丙醇、正丁醇、正戊醇、乙醇中的一种或多种。
通过将生物材料浸泡到第一活性溶液中，能够减少对生物材料的损伤，提高了抗钙化性的均一性，大大提高了生物材料的抗钙化效果。
进一步地，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
将所述生物材料浸泡到第二活性溶液中；
所述第二活性溶液中包括：失水山梨醇酯、聚氧乙烯基失水山梨醇酯、油酸钾、油酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸钾、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种。
通过将生物材料浸泡到第二活性溶液中，能够减少对生物材料的损伤，提高了抗钙化性的均一性，大大提高了生物材料的抗钙化效果。
进一步地，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
利用交联溶剂对所述生物材料进行交联处理；
其中，所述交联溶剂中包括：4-6个碳原子的聚甘油聚缩水甘油醚、二环氧甘油二醇酯、乙二醇二环氧甘油酯、丁二醇二环氧甘油醚中的一种或多种。
通过交联溶剂的交联处理，能够提高生物材料的抗钙化性能。
进一步地，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
将所述生物材料浸泡到脂肪酸溶液中；
其中，所述脂肪酸溶液中包括：饱和脂肪酸及其疏水性衍生物、不饱和脂肪酸及其疏水性衍生物。
通过将生物材料浸泡到脂肪酸溶液中能够取得更好的抗钙化效果，并且抗钙化更加均匀，不影响生物材料的结构和机械力学性能，提升了生物材料的耐疲劳性能和使用寿命。
进一步地，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗。
通过漂洗可以清除生物材料中的杂质以及没有清除干净的脂肪等，有利于后续的抗钙化处理。
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗。
通过漂洗可以对生物材料中残留的戊二醛鞣制溶液进行清除，降低戊二醛鞣制溶液对后续抗钙化处理的影响，确保丹宁酸溶液的处理效果。
在所述将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中之后，在所述将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗。
通过漂洗可以对生物材料中残留的丹宁酸溶液进行清除，降低丹宁酸溶液对后续抗钙化处理的影响，确保2，3-丁二醇溶液的处理效果。
在所述将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中之后，在所述将所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗；
通过漂洗可以对生物材料中残留的2，3-丁二醇溶液进行清除，降低2，3-丁二醇溶液对后续抗钙化处理的影响，确保戊二醛保存溶液的处理效果。
本发明实施例中生理盐水的温度可以是常温。
进一步地，
所述生物材料包括：各种动物源心包、各种动物源瓣膜、各种动物源肠外膜、各种动物源硬脑膜、各种动物源血管、各种动物源带瓣管道。
本发明实施例提供的方法可以对上述的任意一种生物材料进行抗钙化处理。
其中，心包可以为牛心包、猪心包、马心包、驴心包、骡心包、鹿心包、袋鼠心包等。
在本发明实施例中，各种溶液中的水可以是普通水，也可以是生理盐水或者模拟体液的缓冲溶液，例如：磷酸盐缓冲溶液。
在本发明实施例中，在生物材料浸泡到各种溶液的过程中，可以通过搅拌、震动、超声波、光照、辐照、通入臭氧等方式促进溶液对生物材料的抗钙化处理。
这里的各种溶液包括：戊二醛鞣制溶液、丹宁酸溶液、2，3-丁二醇溶液、戊二醛保存溶液、第一活性溶液、第二活性溶液、交联溶剂、脂肪酸溶液等。
本发明实施例提供的一种生物材料的抗钙化处理方法至少具有如下有益效果：
1、通过对生物材料进行脱细胞处理后，脱去了抗原性较强的上皮细胞核成纤维细胞，降低了抗原性，减少了生物组织钙化的重要位点，且保留了细胞外基质，增强了生物材料的抗钙化性能。
2、利用戊二醛鞣制溶液对生物材料进行鞣制后，能够使生物材料的胶原蛋白交联，强度增加，免疫原性降低，增加生物材料的稳定性，并具有消毒的效果。
3、在将生物材料浸泡到丹宁酸溶液中后，丹宁酸能够稳定生物材料细胞外基质中的胶原蛋白纤维、弹性蛋白纤维以及粘多糖等成分，能够显著降低由弹力纤维粘多糖等物质降解导致的钙化，能够改善生物材料的生物力学性能，增强抗疲劳性，延长生物材料的使用寿命。通过丹宁酸还能抗菌和减少蛋白抗原性，这有助于增强生物材料的抗钙化性能和生物相容性。
4、通过将生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中，2，3-丁二醇溶液的两个羟基受两侧紧邻的两个碳键的影响，结构相对不稳定，更易与醛基结合，形成稳定的环状缩醛，消除了利用戊二醛鞣制溶液进行鞣制的过程中在生物材料中残留的醛基所带来的细胞毒性，增加了生物材料与血液的相容性，防止了生物材料的钙化，能够大大延长生物材料的使用期限，并且，通过浸泡到2，3-丁二醇溶液中能够提高生物材料的抗拉强度。
5、通过将生物材料浸泡到第一活性溶液中，能够减少对生物材料的损伤，提高了抗钙化性的均一性，大大提高了生物材料的抗钙化效果。
6、通过将生物材料浸泡到第二活性溶液中，能够减少对生物材料的损伤，提高了抗钙化性的均一性，大大提高了生物材料的抗钙化效果。
7、通过将生物材料浸泡到脂肪酸溶液中能够取得更好的抗钙化效果，并且抗钙化更加均匀，不影响生物材料的结构和机械力学性能，提升了生物材料的耐疲劳性能和使用寿命。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例提供的一种生物材料的抗钙化处理方法的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，本发明实施例提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，该方法可以包括以下步骤：
步骤101：去除生物材料的脂肪；
步骤102：对所述生物材料进行脱细胞处理；
步骤103：利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制；
步骤104：将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中；
步骤105：将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中；
步骤106：将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存。
在本发明实施例中，本发明实施例提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，包括：
去除生物材料的脂肪；
利用生理盐水对生物材料进行漂洗；
对漂洗后的生物材料进行脱细胞处理；
利用戊二醛鞣制溶液对脱细胞处理后的生物材料进行鞣制；
鞣制第一时长(在2天-7天的范围内)后，将生物材料从戊二醛鞣制溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到丹宁酸溶液中；
在丹宁酸溶液中浸泡第二时长(在1天-7天的范围内)后，将生物材料从丹宁酸溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中；
在2，3-丁二醇溶液中浸泡第三时长(在3天-21天的范围内)后，将生物材料从2，3-丁二醇溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存。
在获取生物材料时，较优地，选择在新鲜状态下12个小时内的生物材料。
在本发明实施例中，本发明实施例提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，包括：
去除生物材料(牛心包)的脂肪；
利用生理盐水对生物材料进行漂洗；
对漂洗后的生物材料进行脱细胞处理；
利用戊二醛鞣制溶液(浓度为0.6％、PH值为7、温度为20℃)对脱细胞处理后的生物材料进行鞣制；
鞣制第一时长(7天)后，将生物材料从戊二醛鞣制溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到丹宁酸溶液(浓度为0.5％、PH值为5.5、温度为15℃)中；
在丹宁酸溶液中浸泡第二时长(3天)后，将生物材料从丹宁酸溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液(浓度为100％、PH值为6、温度为55℃)中；
在2，3-丁二醇溶液中浸泡第三时长(10天)后，将生物材料从2，3-丁二醇溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到戊二醛保存溶液(浓度为0.25％、PH值为6、温度为4℃)中进行保存。
未经过抗钙化处理的新鲜生物材料的钙含量(单位是：μg/mg，干重)为4.01±6.13，通过本发明实施例的抗钙化处理之后，生物材料的钙含量为3.89±2.95。通过该使实验数据发现，生物材料的钙含量较低，通过本发明实施例提供的抗钙化的处理方法，获得了较好的抗钙化效果。
其中，戊二醛鞣制溶液可以通过以下方式配制：
将50mmol/L的戊二醛HEPES缓存液调制至500mL，将PH值调制为7，在加入6mL浓度为50％的戊二醛溶液。
丹宁酸溶液可以通过以下方式配制：
将2.5g丹宁酸溶于50mmol/L的Na2HPO4溶液，调至500mL，用盐酸将PH值调节到5.5。
以牛心包为实验材料，去除牛心包中的脂肪，分割出相同重量的两片牛心包，分别是牛心包A和牛心包B。牛心包A直接进入戊二醛保存液保存。利用本发明实施例提供的一种生物材料的抗钙化处理方法对牛心包B进行处理，具体处理过程如下：
利用生理盐水对牛心包B进行漂洗；
对漂洗后的牛心包B进行脱细胞处理；
利用戊二醛鞣制溶液(浓度为0.6％、PH值为7、温度为20℃)对脱细胞处理后的牛心包B进行鞣制；
鞣制7天后，将牛心包B从戊二醛鞣制溶液中取出，利用生理盐水对取出的牛心包B进行漂洗；
将漂洗后的牛心包B浸泡到丹宁酸溶液(浓度为0.5％、PH值为5.5、温度为15℃)中；
在丹宁酸溶液中浸泡3天后，将牛心包B从丹宁酸溶液中取出，利用生理盐水对取出的牛心包B进行漂洗；
将漂洗后的牛心包B浸泡到2，3-丁二醇溶液(浓度为100％、PH值为6、温度为55℃)中；
在2，3-丁二醇溶液中浸泡10天后，将牛心包B从2，3-丁二醇溶液中取出，利用生理盐水对取出的牛心包B进行漂洗；
将漂洗后的牛心包B浸泡到戊二醛保存溶液(浓度为0.25％、PH值为6、温度为4℃)中进行保存。
将牛心包A和牛心包B放置相同时间后，得到如下结果：
牛心包A的钙含量(μg/mg，干重)为250.01±25.05，牛心包B的钙含量为3.89±2.95。
通过上述实验可见，本发明实施例提供的一种生物材料的抗钙化处理方法，能够大大提高生物材料的抗钙化效果。
在本发明实施例提供了一种生物材料的抗钙化处理方法，包括：
去除生物材料的脂肪；
利用生理盐水对生物材料进行漂洗；
对漂洗后的生物材料进行脱细胞处理；
利用戊二醛鞣制溶液对脱细胞处理后的生物材料进行鞣制；
利用交联溶剂对所述生物材料进行交联处理，其中，交联溶剂中包括：4-6个碳原子的聚甘油聚缩水甘油醚、二环氧甘油二醇酯、乙二醇二环氧甘油酯、丁二醇二环氧甘油醚中的一种或多种。
鞣制第一时长(在2天-7天的范围内)后，将生物材料从戊二醛鞣制溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到丹宁酸溶液中；
在丹宁酸溶液中浸泡第二时长(在1天-7天的范围内)后，将生物材料从丹宁酸溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中；
在2，3-丁二醇溶液中浸泡第三时长(在3天-21天的范围内)后，将生物材料从2，3-丁二醇溶液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到第一活性溶液、第二活性溶液和脂肪酸溶液的混合液中；
在混合液中浸泡第四时长(在1天-5天的范围内)后，将生物材料从混合液中取出，利用生理盐水对取出的生物材料进行漂洗；
将漂洗后的生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存。
其中，第一活性溶液中包括：异丙醇、异丁醇、异戊醇、正丙醇、正丁醇、正戊醇、乙醇中的一种或多种。
第二活性溶液中包括：失水山梨醇酯、聚氧乙烯基失水山梨醇酯、油酸钾、油酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸钾、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种。
脂肪酸溶液中包括：饱和脂肪酸及其疏水性衍生物、不饱和脂肪酸及其疏水性衍生物。不饱和脂肪酸可以包括油酸、亚油酸、亚麻酸、蓖麻油酸和鱼油中的一种或多种。
混合液的温度可以在10℃-60℃，例如：该温度可以为10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、60℃等。
混合液可以通过以下方式获得：
方式一：硬脂酸钾4份，油酸钾0.1份，异丙醇11份，异戊醇4份，亚麻酸1份，磷酸盐缓冲溶液35份。
方式二：乙醇13份，正戊醇6份，吐温-80 1.5份，脂肪醇聚氧乙烯醚3份，油酸0.6份，氨基硅油0.3份，水30份。
方式三：吐温-80 0.5份，聚乙二醇辛基苯基醚0.1份，乙醇5份，油酸0.2份，角鲨烷0.1份，0.9％生理盐水50份。
最后需要说明的是：以上所述仅为本发明的较佳实施例，仅用于说明本发明的技术方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种生物材料的抗钙化处理方法，其特征在于，包括：
去除生物材料的脂肪；
对所述生物材料进行脱细胞处理；
利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制；
将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中；
将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中；
将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存；
其中，所述2，3-丁二醇溶液的温度在40℃-65℃的范围内，所述2，3-丁二醇溶液的pH值在5.5-6.5范围内。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
将所述生物材料浸泡到第一活性溶液中；
其中，所述第一活性溶液中包括：异丙醇、异丁醇、异戊醇、正丙醇、正丁醇、正戊醇、乙醇中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
将所述生物材料浸泡到第二活性溶液中；
所述第二活性溶液中包括：失水山梨醇酯、聚氧乙烯基失水山梨醇酯、油酸钾、油酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酸钾、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
利用交联溶剂对所述生物材料进行交联处理；
其中，所述交联溶剂中包括：4-6个碳原子的聚甘油聚缩水甘油醚、二环氧甘油二醇酯、乙二醇二环氧甘油酯、丁二醇二环氧甘油醚中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述戊二醛鞣制溶液中戊二醛的浓度在0.01%-0.65%的范围内；
和/或，
所述戊二醛鞣制溶液的pH值在5.5-7.4的范围内；
和/或，
所述戊二醛鞣制溶液的温度在4℃-55℃的范围内；
和/或，
鞣制的时间在2天-7天的范围内。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述2，3-丁二醇溶液中2，3-丁二醇的浓度在90%-100%的范围内；
和/或，
在所述2，3-丁二醇溶液浸泡的时间在3天-21天的范围内。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述丹宁酸溶液中丹宁酸的浓度在0.1%-8%的范围内；
和/或，
所述丹宁酸溶液的pH值在5-7的范围内；
和/或，
所述丹宁酸溶液的温度在10℃-30℃的范围内；
和/或，
在所述丹宁酸溶液浸泡的时间在1天-7天的范围内。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述戊二醛保存溶液中戊二醛的浓度在0.2%-0.3%的范围内；
和/或，
所述戊二醛保存溶液的温度在4℃-10℃的范围内；
和/或，
所述戊二醛保存溶液的pH值在5.5-7.4的范围内。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
将所述生物材料浸泡到脂肪酸溶液中；
其中，所述脂肪酸溶液中包括：饱和脂肪酸及其疏水性衍生物、不饱和脂肪酸及其疏水性衍生物。
10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗；
和/或，
在所述利用戊二醛鞣制溶液对所述生物材料进行鞣制之后，在所述将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗；
和/或，
在所述将所述生物材料浸泡到丹宁酸溶液中之后，在所述将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗；
和/或，
在所述将所述生物材料浸泡到2，3-丁二醇溶液中之后，在所述将所述生物材料浸泡到戊二醛保存溶液中进行保存之前，进一步操作包括：
利用生理盐水和/或磷酸盐缓冲溶液对所述生物材料进行漂洗；
和/或，
所述生物材料包括：各种动物源心包、各种动物源瓣膜、各种动物源肠外膜、各种动物源硬脑膜、各种动物源血管、各种动物源性带瓣管道；
和/或，
所述2，3-丁二醇溶液的温度为55℃，在所述2，3-丁二醇溶液浸泡的时间为7天。
CN201811391606.7A 2018-11-21 2018-11-21 一种生物材料的抗钙化处理方法 Active CN109589452B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811391606.7A CN109589452B (zh) 2018-11-21 2018-11-21 一种生物材料的抗钙化处理方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811391606.7A CN109589452B (zh) 2018-11-21 2018-11-21 一种生物材料的抗钙化处理方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109589452A CN109589452A (zh) 2019-04-09
CN109589452B true CN109589452B (zh) 2022-04-29

Family

ID=65960270

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811391606.7A Active CN109589452B (zh) 2018-11-21 2018-11-21 一种生物材料的抗钙化处理方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109589452B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110025403B (zh) * 2019-04-11 2020-09-15 宁波健世生物科技有限公司 一种通过涂层的方式改善人工生物瓣膜钙化的方法
CN110694112A (zh) * 2019-09-12 2020-01-17 厉忠逵 一种异种生物组织材料的多联抗钙化处理方法
CN111588909A (zh) * 2020-02-24 2020-08-28 科凯(南通)生命科学有限公司 一种生物医用材料防钙化的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1371750A (zh) * 2002-02-28 2002-10-02 中南大学湘雅二医院 生物心脏瓣膜2,3－丁二醇防钙化改性的方法
WO2004047620A2 (en) * 2002-11-26 2004-06-10 Clemson University Fixation method for bioprostheses
CN101161293A (zh) * 2006-10-12 2008-04-16 胡盛寿 异种生物组织材料的抗钙化改性方法
CN102114270A (zh) * 2011-02-22 2011-07-06 微创医疗器械(上海)有限公司 一种梯度交联及修饰型耐久性人工生物瓣及其制备方法
CN105363071A (zh) * 2015-11-23 2016-03-02 金仕生物科技（常熟）有限公司 生物材料的抗钙化处理方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201333112Y (zh) * 2009-01-16 2009-10-28 中国人民解放军第四军医大学 一种无支架的异种生物心脏瓣膜
CN105887327B (zh) * 2014-05-13 2018-10-12 香港理工大学深圳研究院 一种复合纳米纤维膜及其制备方法
US20190290762A1 (en) * 2016-06-13 2019-09-26 Nitin Chopra Nano-architectured colloidosomes for controlled and triggered release

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1371750A (zh) * 2002-02-28 2002-10-02 中南大学湘雅二医院 生物心脏瓣膜2,3－丁二醇防钙化改性的方法
WO2004047620A2 (en) * 2002-11-26 2004-06-10 Clemson University Fixation method for bioprostheses
CN101161293A (zh) * 2006-10-12 2008-04-16 胡盛寿 异种生物组织材料的抗钙化改性方法
CN102114270A (zh) * 2011-02-22 2011-07-06 微创医疗器械(上海)有限公司 一种梯度交联及修饰型耐久性人工生物瓣及其制备方法
CN105363071A (zh) * 2015-11-23 2016-03-02 金仕生物科技（常熟）有限公司 生物材料的抗钙化处理方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109589452A (zh) 2019-04-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109589452B (zh) 一种生物材料的抗钙化处理方法
EP1452150B1 (en) Chemical cleaning of biological material
US10390946B2 (en) Method for the preparation of biological tissue for dry use in an implant
CA2351216C (en) Method for tissue fixation using epoxides
CN109651627B (zh) 天然聚合物交联剂及其在制备抗钙化生物瓣膜中的应用
CN105169483A (zh) 一种脱细胞基质凝胶的制备方法及其脱细胞基质凝胶
US20050238688A1 (en) Method of preparing an immunologically inert graft material from body tissue and material made with the method
US11179505B2 (en) Methods for stabilizing collagen-containing tissue products against enzymatic degradation
KR20210124886A (ko) 외과적 이식용 생물 조직의 준비 방법
Gu et al. Preparation and evaluation of decellularized porcine carotid arteries cross-linked by genipin: the preliminary results
EP2236544A1 (en) Collagen Implant
CN109820624B (zh) 一种采用光交联处理生物瓣膜的方法
Kumar et al. Effects of crosslinking treatments on the physical properties of acellular fish swim bladder
CN110917398A (zh) 生物材料的抗氧化方法及生物材料
KR100739422B1 (ko) 헤파린이 결합된 항석회화성 무세포성 생체조직 이식물 및그 제조방법
Singh et al. In vivo bio-compatibility determination of crosslinked as well as uncross linked native and acellular pericardium of buffalo
CN114848912B (zh) 一种脱细胞真皮及其制备方法
Esmaeili et al. Processing and post-processing of fish skin as a novel material in tissue engineering
KR100524082B1 (ko) 아르기닌이 결합된 항석회화성 생체조직 이식물 및 그 제조 방법
US9555162B2 (en) Phospholipid reduction in biological tissue
Singh et al. Host tissue response to subcutaneously implanted native and acellular scaffold in a rabbit model
AU774997B2 (en) Chemical cleaning of biological material
Kumar et al. In Vitro Evaluation of Cross-Linked Native and Acellular Caprine Pericardium.
MXPA99010251A (es) Limpieza quimica de material biologico

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 310023 181 Wuchang Street, Wuchang Street, Yuhang District, Hangzhou, Zhejiang

Applicant after: Hangzhou Chuangxin Medical Technology Co.,Ltd.

Address before: 310023 181 Wuchang Street, Wuchang Street, Yuhang District, Hangzhou, Zhejiang

Applicant before: HANGZHOU JIAHE ZHONGBANG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: A method for anti calcification treatment of biomaterials

Effective date of registration: 20230711

Granted publication date: 20220429

Pledgee: Xixi sub branch of Bank of Hangzhou Co.,Ltd.

Pledgor: Hangzhou Chuangxin Medical Technology Co.,Ltd.

Registration number: Y2023330001451