CN109575128A - 一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法 - Google Patents

一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物克隆技术领域，公开了一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法，在体外合成抗原多肽，对小鼠进行免疫，然后制备饲养细胞，培养骨髓瘤细胞，再制备免疫脾脏细胞，进行细胞融合，对杂交瘤细胞进行筛选，克隆化阳性杂交瘤细胞，然后对单克隆细胞进行大量制备。本发明目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法，以及构建的血清蛋白检测试剂盒，比目前市售LBP试剂盒灵敏度检出率高10％。对应其他方法检测肝病、肾病指标，确定LBP的人体检测标准值；本发明利用质谱技术，设计制造用于检测人类LBP的质谱检测试剂盒，运用质谱技术检测LBP含量。

Description

一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法
技术领域
本发明属于生物克隆技术领域，尤其涉及一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
单克隆抗体具有特异性强、效价高、均质性、少或无血清交叉反应、易于大量生产、成本低等优点，它在疾病治疗和临床实践中具有极大的应用潜力。但迄今所获得的单克隆抗体多为鼠源性，对人而言具有较强的免疫原性，在人体内可引起较强的人抗鼠抗体反应，从而严重地限制了单克隆抗体在人体内的应用。此外，鼠源性单克隆抗体不能与人类抗体Fc受体结合。这也使得单克隆抗体在治疗方面陷入了低谷。随着重组DNA技术的发展，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体，部分或全人源化的单克隆抗体技术在全世界范围内发出了夺目的光彩。
嵌合单克隆抗体和由转基因小鼠、噬菌体展示技术、核糖体展示技术及共价展示技术所制备的单克隆抗体取得了激荡人心的丰硕成果。
综上所述，现有技术存在的问题是：
现有技术中，目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法复杂，繁琐；以及构建的血清蛋白检测试剂盒，灵敏度检出率低。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法，
本发明是这样实现的，一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法，所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法包括：
体外合成抗原多肽；
小鼠免疫；
制备饲养细胞；
培养骨髓瘤细胞；
制备免疫脾脏细胞；
细胞融合；
杂交瘤细胞筛选；
克隆化阳性杂交瘤细胞；
单克隆抗体的大量制备。
本发明的另一目的在于提供一种利用所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法制备的基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体。
本发明的另一目的在于提供一种应用于所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法，所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法包括：
1)抗体亚类的鉴定；
2)抗体效价测定；
3)检测标志蛋白的表达；
4)检测标志蛋白的mRNA表达；
5)标记抗体；
6)建立ELISA检测系统；
7)进行ELISA检测灵敏度与特异性实验。
本发明的另一目的在于提供一种利用所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法血清蛋白检测试剂盒。
本发明的另一目的在于提供一种血清蛋白检测试剂盒的构建方法，所述血清蛋白检测试剂盒的构建方法包括：
本发明的另一目的在于提供一种利用所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法的肝病血清蛋白检测试剂盒。
本发明的另一目的在于提供一种利用所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法的肾病血清蛋白检测试剂盒。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法，以及构建的血清蛋白检测试剂盒，比目前市售LBP试剂盒灵敏度检出率高10％。对应其他方法检测肝病、肾病指标，确定LBP的人体检测标准值。
本发明利用质谱技术，设计制造用于检测人类LBP的质谱检测试剂盒，运用质谱技术检测LBP含量。
附图说明
图1是本发明实施例提供的目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法流程图。
图2是本发明实施例提供的目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体的检测方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合具体分析对本发明的应用作进一步描述。
如图1所示，本发明实施例提供的目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法为：
S101：体外合成抗原多肽；
S102：小鼠免疫；
S103：制备饲养细胞；
S104：培养骨髓瘤细胞；
S105：制备免疫脾脏细胞；
S106：细胞融合；
S107：杂交瘤细胞筛选；
S108：克隆化阳性杂交瘤细胞；
S109：单克隆抗体的大量制备。
本发明涉及的抗原多肽可采用类似功能的现有技术的抗原多肽或直接购买于相关单位。
如图2所示，本发明还提供了基于目标蛋白质多肽抗原的单克隆抗体的检测方法，步骤为：
S201：抗体亚类的鉴定；
S202：抗体效价测定；
S203：检测标志蛋白的表达；
S204：检测标志蛋白的mRNA表达；
S205：标记抗体；
S206：建立ELISA检测系统；
S207：ELISA检测灵敏度与特异性实验。
检测采用血清蛋白检测试剂盒。
本发明目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法，以及构建的血清蛋白检测试剂盒，比目前市售LBP试剂盒灵敏度检出率高10％。对应其他方法检测肝病、肾病指标，确定LBP的人体检测标准值。
本发明利用质谱技术，设计制造用于检测人类LBP的质谱检测试剂盒，运用质谱技术检测LBP含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法，其特征在于，所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法包括：
制备免疫脾脏细胞；
细胞融合；
杂交瘤细胞筛选；
克隆化阳性杂交瘤细胞；
单克隆抗体的大量制备。
2.如权利要求1所述的基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法，其特征在于，制备免疫脾脏细胞前，需进行：
体外合成抗原多肽；
小鼠免疫；
制备饲养细胞；
培养骨髓瘤细胞。
3.一种利用权利要求1所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法制备的基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体。
4.一种应用于权利要求3所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法，其特征在于，所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法包括：
1)抗体亚类的鉴定；
2)抗体效价测定；
3)检测标志蛋白的表达；
4)检测标志蛋白的mRNA表达；
5)标记抗体；
6)建立ELISA检测系统；
7)进行ELISA检测灵敏度与特异性实验。
5.一种利用权利要求4所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法血清蛋白检测试剂盒。
6.一种利用权利要求4所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法的肝病血清蛋白检测试剂盒。
7.一种利用权利要求4所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法的肾病血清蛋白检测试剂盒。
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