CN109479772A - 虹鳟鱼人工繁殖技术方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供虹鳟鱼人工繁殖技术方法，属于鱼类繁殖技术领域，包括注射催产剂，配制等渗液，人工采卵采精，人工授精，发眼卵孵化，受精率检测，稚鱼出苗孵化，苗种强化培育，其中苗种强化培育用饵料中添加有酶解猪血球蛋白粉；该酶解猪血球蛋白粉制备步骤为：a，提供抗凝猪血；b，提供中性蛋白酶；c，提供包含有磺基水杨酸和茶多酚的促进剂；d，使抗凝猪血经前处理后，与b、c中物质接触，形成水解液，然后经喷雾干燥处理即得。本发明提供的虹鳟鱼人工繁殖技术方法能降低卵粒间粘着性，增加卵粒受精几率，使受精卵不被病菌污染，加速受精卵进入启动期，以此提高胚胎存活率和孵化率，并辅以适口性和感官体验优良的开口驯化饵料。
Description
技术领域
本发明属于鱼类繁殖技术领域，具体涉及虹鳟鱼人工繁殖技术方法。
背景技术
虹鳟，属硬骨鱼纲，鲱形目，鲑亚目，鲑科，有陆封型、降海型和湖沼型三种。虹鳟的营养全面丰富，味道鲜美、无腥味，无肌间小骨、产刺少，具有较高的食用价值，深受广大消费者的喜爱。虹鳟鱼属鲑科冷水鱼类，具有寿命长、生长速度快、抗病能力强等特点，经过多年驯化易于人工饲养，适合在流水式的池塘内高密度、集约化的养殖，经人工繁殖和鱼苗培育逐步适应后可在我国北方多数地区养殖生产，通过合理的饲养管理，可获得较高的经济效益，从而使虹鳟成为世界粮农组织(FAO)大力推荐养殖的经济鱼类之一。
由于虹鳟自身的品质和对生活环境的特殊要求，决定了它绿色、营养食品的地位，因此，在世界优质水产品养殖中，虹鳟的养殖是最具代表性的产业之一。我国虹鳟养殖始于1959年，现有养殖水面逾2000亩，但生产能力仍然不及市场消费能力，还有一部分虹鳟产品依靠进口。生产能力和市场上的差异，有历史、生产方式和养殖技术等方面的原因，但最主要的是：缺乏健康养殖意识，没有建立优良繁育体系，只进行作坊式经营，不注重亲鱼培育，没有严格执行人工繁殖技术的操作规程，造成生产成本过高，苗种生产性能和成活率低下。因此，对虹鳟鱼的人工繁殖技术方法进行深入研究，提供更多、更优质的苗种，并降低人工繁殖生产过程的成本，是亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种降低卵粒间粘着性、增加卵粒受精几率、受精卵不被病菌污染、加速受精卵进入启动期、胚胎存活率和孵化率高、饵料适口性和感官体验优良的虹鳟鱼人工繁殖技术方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，包括注射催产剂，配制等渗液，人工采卵采精，人工授精，发眼卵孵化，受精率检测，稚鱼出苗孵化，苗种强化培育，其中苗种强化培育用饵料中添加有酶解猪血球蛋白粉；上述酶解猪血球蛋白粉制备步骤为：
a，提供抗凝猪血；
b，基于抗凝猪血的重量，提供3500～5000U/g的中性蛋白酶；
c，基于抗凝猪血的重量，提供包含有磺基水杨酸和茶多酚的促进剂；
d，使抗凝猪血经前处理后，与b、c中物质接触后，形成水解液，该水解液经喷雾干燥处理，即得蛋白粉。酶解猪血球蛋白粉的营养成分稳定多样，作为一种高蛋白原料添加进饵料中，利用其中生物活性肽，能调节新陈代谢和免疫能力，富含的铁等微量元素也能补铁补血，促进骨髓造血机制生长，对鱼肉色泽有提升，从而提高动物的消化吸收利用率，促进动物生长性能。
作为优选，前处理步骤为：向抗凝猪血中加入缓冲液混匀后，进行过滤，然后在2000～3000r/min的条件下离心20～30min，再取沉淀加水溶解形成浓度为8～12％的溶液，然后用功率为1800～2500W的超声波处理5～10min，即得猪血血红蛋白液；上述缓冲液中包含柠檬酸二钠和碳酸氢钠，其重量比为1:2～5。加入缓冲液可以使猪血抗凝抗氧化，提高其热稳定性，保证营养成分不易流失；将沉淀进行超声波处理是为了对沉淀物中的猪血球细胞进行预破碎，利于后续操作。
作为优选，促进剂中磺基水杨酸和茶多酚的添加量分别为抗凝猪血重量的0.13～0.33％和0.2～0.5％。在水解过程中加入促进剂，一方面可以降低猪血中的纤维蛋白原，降低底物内部粘度，同时利用分子中的羟基与猪血中的卟啉化合物和亚铁离子络合，使亚铁不被氧化变暗，酶解液颜色也保持鲜艳，致使饵料能从感官上刺激鱼苗摄食，另一方面促进剂中亲水性的羟基、羧基能与酶解液中疏水性氨基酸的疏水基团发生共价，疏水基团被隐藏起来，水解产品的腥味和苦味消除，提高了产品的适口性和感官体验。
作为优选，水解液形成条件如下：反应温度为40～55℃，pH值为7～8，时间为2～3h。将猪血球酶解成多肽及游离氨基酸，能加速机体消化吸收，提高蛋白质的利用率。
作为优选，水解液的喷雾干燥处理条件为：进风温度为180～240℃，出风温度为70～80℃，最大水分蒸发量为3～5kg/h。
作为优选，苗种强化培育步骤为：孵化积温达350℃*d后，稚鱼全部出膜，将出膜的鱼苗放入育苗池暂养，放养密度为3500～5000尾/m2，池中水深20～40cm，水流量为15～20L/min，水温为7～13℃，溶氧为8～12mg/L，9～10d后开始投喂含有酶解猪血球蛋白粉的饵料，即得虹鳟鱼苗。
进一步优选，饵料中还含有轮虫、卤虫、水蚤中的至少一种。饵料中还可以添加配合饲料对鱼苗进行驯化，以此保证饵料营养全面，投喂充足，提高鱼苗的质量和成活率。
作为优选，注射催产剂步骤为：选出性成熟的雌鱼注射催产剂，间隔49～54h后，同时向雌鱼和雄鱼注射催产剂，雌鱼第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，雄鱼催产剂用量为雌鱼第二次注射剂量的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂。
进一步优选，催产剂选自鱼用PG、LRH、HCG、DOM中的至少两种，各催产剂第二次注射剂量分别为PG7～8mg/kg、LRH18～23μg/kg、HCG1600～2200单位/kg、DOM13～16mg/kg。
作为优选，配制等渗液步骤为：以经滤网和生物棉过滤器处理后，再通过紫外灯杀菌和臭氧消毒的无菌水为基质，溶解氯化钠、丙二醇丁醚和L-扁桃酸，配制成浓度以氯化钠计为0.90～0.96％的等渗液；上述丙二醇丁醚和L-扁桃酸分别为氯化钠重量的0.5～0.8％和0.35～0.85％。等渗液中的丙二醇丁醚和L-扁桃酸能抑制卵膜蛋白质中双硫键的形成，使得卵膜无法分泌凝胶物，降低卵粒之间的粘着性，增大卵粒间隙，从而降低精子通过的时间，增加卵粒受精机会和几率，同时能加速卵膜硬化，使得细菌不易侵入，减少卵粒被污染的几率。
作为优选，人工采卵采精步骤中，在温度为4～8℃的条件下，使用挤腹法收集卵粒和精液，所得卵粒在授精前用等渗液淋洗，等渗液温度为5～13℃，淋洗速率为3～5L/min。等渗液浓度与体腔液、正常卵内容物等渗，用来洗卵不会对正常卵造成不良影响，又可以清除破碎卵的卵黄及粪、尿等杂物，保护卵粒活力，同时避免破卵的卵黄蛋白使精子凝聚而失去活力，提高受精率。
作为优选，人工授精采用湿法授精，每万粒卵中加入精液5～10mL，温度为5～10℃，完成授精后，将受精卵置于20～25℃温水中刺激1～2min，然后进行孵化。虹鳟是冷水性鱼类，受精完成后，用稍高的温度短暂刺激受精卵，既不会导致温度过高使受精卵死亡，又可以刺激受精卵的自我保护机制，使其加速进入启动期，从而获得更高的胚胎存活率和孵化率。
作为优选，发眼卵孵化步骤为：将受精卵置于孵化器中，卵粒层数为10～20层，实施流水吸水膨胀0.5～1h，流水速率为每万粒卵2～3L/min，然后将供水量调至每万粒卵4～7L/min，孵化期间温度为7～15℃。将受精卵直接进行微流水吸水膨胀，可以使多余精液随水溢出，而且可以进行使得吸水膨胀和流水孵化连续化进行，简化了更换器具、缺水等操作工艺，有利于提高卵成活率和工作效率，受精卵多层相叠，可以避免卵粒随水流而震动，减小卵死亡的几率。
作为优选，受精率检测步骤为：在受精12～14h后，在10℃水温下，观察受精卵中进入4个细胞期的卵，其中胚体上形成4个大小相同细胞的为受精卵，4个细胞大小不均匀或排列不规则、界限不清的为未受精卵。
作为优选，稚鱼出苗孵化步骤为：将受精卵置于孵化器中，孵化用水自下部流经全部鱼卵，从上部溢出，注水量为3～8L/min，水温在7～15℃，溶氧为6～10mg/L，期间每3～4d消毒一次，消毒用水盐度为3～4，每次1～2h。用盐水对受精卵消毒，可以控制死卵水霉菌的着生。孵化用水要求水质清新，无杂物和悬浮物，溶氧充足。整个孵化期间要采用避光措施。
本发明的有益效果为：
1)本发明中使用等渗液清洗和保护卵粒，降低卵粒间粘着性，增加其受精几率，同时保护卵粒不被病菌污染，保持其高火力，提高了受精率和受精卵孵化率；
2)本发明在受精结束后，用稍高的温度短暂刺激受精卵，可以激发受精卵的自我保护机制，使其加速进入启动期，从而获得更高的胚胎存活率和孵化率；
3)本发明中苗种强化培育用饵料中添加的酶解猪血球蛋白粉，能调节新陈代谢和免疫能力，也能补铁补血，促进骨髓造血机制生长，同时颜色鲜艳，消除了腥味和苦味，提高了产品的适口性，从感官上刺激鱼苗摄食，从而提高动物的消化吸收利用率，促进动物生长性能。
本发明采用了上述技术方案提供虹鳟鱼人工繁殖技术方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，包括注射催产剂，配制等渗液，人工采卵采精，人工授精，发眼卵孵化，受精率检测，稚鱼出苗孵化，苗种强化培育，其中苗种强化培育用饵料中添加有酶解猪血球蛋白粉；上述酶解猪血球蛋白粉制备步骤为：
a，提供抗凝猪血；
b，基于抗凝猪血的重量，提供4000U/g的中性蛋白酶；
c，基于抗凝猪血的重量，提供包含有磺基水杨酸和茶多酚的促进剂；
d，使抗凝猪血经前处理后，与b、c中物质接触后，形成水解液，该水解液经喷雾干燥处理，即得蛋白粉。酶解猪血球蛋白粉的营养成分稳定多样，作为一种高蛋白原料添加进饵料中，利用其中生物活性肽，能调节新陈代谢和免疫能力，富含的铁等微量元素也能补铁补血，促进骨髓造血机制生长，对鱼肉色泽有提升，从而提高动物的消化吸收利用率，促进动物生长性能。
前处理步骤为：向抗凝猪血中加入缓冲液混匀后，进行过滤，然后在2000r/min的条件下离心30min，再取沉淀加水溶解形成浓度为8％的溶液，然后用功率为1800W的超声波处理10min，即得猪血血红蛋白液；上述缓冲液中包含柠檬酸二钠和碳酸氢钠，其重量比为1:3。加入缓冲液可以使猪血抗凝抗氧化，提高其热稳定性，保证营养成分不易流失；将沉淀进行超声波处理是为了对沉淀物中的猪血球细胞进行预破碎，利于后续操作。
促进剂中磺基水杨酸和茶多酚的添加量分别为抗凝猪血重量的0.18％和0.35％。在水解过程中加入促进剂，一方面可以降低猪血中的纤维蛋白原，降低底物内部粘度，同时利用分子中的羟基与猪血中的卟啉化合物和亚铁离子络合，使亚铁不被氧化变暗，酶解液颜色也保持鲜艳，致使饵料能从感官上刺激鱼苗摄食，另一方面促进剂中亲水性的羟基、羧基能与酶解液中疏水性氨基酸的疏水基团发生共价，疏水基团被隐藏起来，水解产品的腥味和苦味消除，提高了产品的适口性和感官体验。
水解液形成条件如下：反应温度为45℃，pH值为7，时间为3h。将猪血球酶解成多肽及游离氨基酸，能加速机体消化吸收，提高蛋白质的利用率。
水解液的喷雾干燥处理条件为：进风温度为240℃，出风温度为80℃，最大水分蒸发量为5kg/h。
苗种强化培育步骤为：孵化积温达350℃*d后，稚鱼全部出膜，将出膜的鱼苗放入育苗池暂养，放养密度为4000尾/m2，池中水深25cm，水流量为15L/min，水温为8℃，溶氧为9mg/L，9d后开始投喂含有酶解猪血球蛋白粉的饵料，即得虹鳟鱼苗。
饵料中还含有轮虫、卤虫、水蚤中的至少一种。饵料中还可以添加配合饲料对鱼苗进行驯化，以此保证饵料营养全面，投喂充足，提高鱼苗的质量和成活率。
注射催产剂步骤为：选出性成熟的雌鱼注射催产剂，间隔50h后，同时向雌鱼和雄鱼注射催产剂，雌鱼第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，雄鱼催产剂用量为雌鱼第二次注射剂量的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂。
催产剂为鱼用PG和LRH，各催产剂第二次注射剂量分别为PG7mg/kg、LRH18μg/kg。
配制等渗液步骤为：以经滤网和生物棉过滤器处理后，再通过紫外灯杀菌和臭氧消毒的无菌水为基质，溶解氯化钠、丙二醇丁醚和L-扁桃酸，配制成浓度以氯化钠计为0.92％的等渗液；上述丙二醇丁醚和L-扁桃酸分别为氯化钠重量的0.55％和0.5％。等渗液中的丙二醇丁醚和L-扁桃酸能抑制卵膜蛋白质中双硫键的形成，使得卵膜无法分泌凝胶物，降低卵粒之间的粘着性，增大卵粒间隙，从而降低精子通过的时间，增加卵粒受精机会和几率，同时能加速卵膜硬化，使得细菌不易侵入，减少卵粒被污染的几率。
人工采卵采精步骤中，在温度为4℃的条件下，使用挤腹法收集卵粒和精液，所得卵粒在授精前用等渗液淋洗，等渗液温度为5℃，淋洗速率为5L/min。等渗液浓度与体腔液、正常卵内容物等渗，用来洗卵不会对正常卵造成不良影响，又可以清除破碎卵的卵黄及粪、尿等杂物，保护卵粒活力，同时避免破卵的卵黄蛋白使精子凝聚而失去活力，提高受精率。
人工授精采用湿法授精，每万粒卵中加入精液5mL，温度为5℃，完成授精后，将受精卵置于25℃温水中刺激1min，然后进行孵化。虹鳟是冷水性鱼类，受精完成后，用稍高的温度短暂刺激受精卵，既不会导致温度过高使受精卵死亡，又可以刺激受精卵的自我保护机制，使其加速进入启动期，从而获得更高的胚胎存活率和孵化率。
发眼卵孵化步骤为：将受精卵置于孵化器中，卵粒层数为10层，实施流水吸水膨胀0.5h，流水速率为每万粒卵2L/min，然后将供水量调至每万粒卵4L/min，孵化期间温度为7℃。将受精卵直接进行微流水吸水膨胀，可以使多余精液随水溢出，而且可以进行使得吸水膨胀和流水孵化连续化进行，简化了更换器具、缺水等操作工艺，有利于提高卵成活率和工作效率，受精卵多层相叠，可以避免卵粒随水流而震动，减小卵死亡的几率。
稚鱼出苗孵化步骤为：将受精卵置于孵化器中，孵化用水自下部流经全部鱼卵，从上部溢出，注水量为5L/min，水温在8℃，溶氧为8mg/L，期间每4d消毒一次，消毒用水盐度为3，每次2h。用盐水对受精卵消毒，可以控制死卵水霉菌的着生。孵化用水要求水质清新，无杂物和悬浮物，溶氧充足。整个孵化期间要采用避光措施。
实施例2：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，具体包括以下步骤：
1)选出性成熟的雌鱼注射催产剂，间隔52h后，同时向雌鱼和雄鱼注射催产剂，雌鱼第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，雄鱼催产剂用量为雌鱼第二次注射剂量的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂，上述催产剂为鱼用PG、HCG和LRH，各催产剂第二次注射剂量分别为PG7mg/kg、HCG1800单位/kg、LRH18μg/kg；
2)以经滤网和生物棉过滤器处理后，再通过紫外灯杀菌和臭氧消毒的无菌水为基质，溶解氯化钠、丙二醇丁醚和L-扁桃酸，配制成浓度以氯化钠计为0.95％的等渗液，上述丙二醇丁醚和L-扁桃酸分别为氯化钠重量的0.65％和0.6％；
3)在温度为8℃的条件下，使用挤腹法收集卵粒和精液，所得卵粒在授精前用等渗液淋洗，等渗液温度为10℃，淋洗速率为4L/min；
4)采用湿法授精，每万粒卵中加入精液10mL，温度为10℃，完成授精后，将受精卵置于25℃温水中刺激2min，然后进行孵化；
5)将受精卵置于孵化器中，卵粒层数为20层，实施流水吸水膨胀1h，流水速率为每万粒卵3L/min，然后将供水量调至每万粒卵7L/min，孵化期间温度为10℃；
6)待检测过受精率后，将受精卵置于孵化器中，孵化用水自下部流经全部鱼卵，从上部溢出，注水量为8L/min，水温在10℃，溶氧为10mg/L，期间每4d消毒一次，消毒用水盐度为4，每次1h；
7)当孵化积温达350℃*d后，稚鱼全部出膜，将出膜的鱼苗放入育苗池暂养，放养密度为4500尾/m2，池中水深35cm，水流量为20L/min，水温为10℃，溶氧为10mg/L，10d后开始投喂含有酶解猪血球蛋白粉的饵料，即得虹鳟鱼苗。
上述步骤7)中所用饵料中含有天然饵料和酶解猪血球蛋白粉，天然饵料为轮虫、卤虫、水蚤中的一种或多种，酶解猪血球蛋白粉的制备步骤如下：
a，向抗凝猪血中加入缓冲液混匀后，进行过滤，然后在3000r/min的条件下离心20min，再取沉淀加水溶解形成浓度为10％的溶液，然后用功率为2000W的超声波处理5min，即得猪血血红蛋白液，上述缓冲液中包含柠檬酸二钠和碳酸氢钠，其重量比为1:4；
b，向猪血血红蛋白液中按4500U/g添加中性蛋白酶和促进剂，然后在温度55℃、pH值7.5的条件下酶解2.5h，上述促进剂中磺基水杨酸和茶多酚的添加量分别为抗凝猪血重量的0.28％和0.45％；
c，将酶解液进行喷雾干燥处理，进风温度为180℃，出风温度为70℃，最大水分蒸发量为4kg/h，即得酶解猪血球蛋白粉。
实施例3：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，具体包括以下步骤：
1)选出性成熟的雌鱼注射催产剂，间隔50h后，同时向雌鱼和雄鱼注射催产剂，雌鱼第一次注射剂量为第二次注射剂量的一半，雄鱼催产剂用量为雌鱼第二次注射剂量的一半，雄鱼性成熟好的不再注射催产剂，上述催产剂为鱼用PG、HCG和LRH，各催产剂第二次注射剂量分别为PG8mg/kg、HCG2000单位/kg、LRH20μg/kg；
2)以经滤网和生物棉过滤器处理后，再通过紫外灯杀菌和臭氧消毒的无菌水为基质，溶解氯化钠、丙二醇丁醚和L-扁桃酸，配制成浓度以氯化钠计为0.93％的等渗液，上述丙二醇丁醚和L-扁桃酸分别为氯化钠重量的0.8％和0.75％；
3)在温度为5℃的条件下，使用挤腹法收集卵粒和精液，所得卵粒在授精前用等渗液淋洗，等渗液温度为12℃，淋洗速率为4L/min；
4)采用湿法授精，每万粒卵中加入精液8mL，温度为10℃，完成授精后，将受精卵置于22℃温水中刺激1min，然后进行孵化；
5)将受精卵置于孵化器中，卵粒层数为20层，实施流水吸水膨胀1h，流水速率为每万粒卵3L/min，然后将供水量调至每万粒卵6L/min，孵化期间温度为12℃；
6)待检测过受精率后，将受精卵置于孵化器中，孵化用水自下部流经全部鱼卵，从上部溢出，注水量为7L/min，水温在12℃，溶氧为9mg/L，期间每4d消毒一次，消毒用水盐度为4，每次1.5h；
7)当孵化积温达350℃*d后，稚鱼全部出膜，将出膜的鱼苗放入育苗池暂养，放养密度为5000尾/m2，池中水深30cm，水流量为18L/min，水温为12℃，溶氧为11mg/L，10d后开始投喂含有酶解猪血球蛋白粉的饵料，即得虹鳟鱼苗。
上述步骤7)中所用饵料中含有天然饵料和酶解猪血球蛋白粉，天然饵料为轮虫、卤虫、水蚤中的一种或多种，酶解猪血球蛋白粉的制备步骤如下：
a，向抗凝猪血中加入缓冲液混匀后，进行过滤，然后在3000r/min的条件下离心25min，再取沉淀加水溶解形成浓度为12％的溶液，然后用功率为2500W的超声波处理8min，即得猪血血红蛋白液，上述缓冲液中包含柠檬酸二钠和碳酸氢钠，其重量比为1:3.5；
b，向猪血血红蛋白液中按5000U/g添加中性蛋白酶和促进剂，然后在温度50℃、pH值7.5的条件下酶解2.5h，上述促进剂中磺基水杨酸和茶多酚的添加量分别为抗凝猪血重量的0.25％和0.3％；
c，将酶解液进行喷雾干燥处理，进风温度为200℃，出风温度为80℃，最大水分蒸发量为5kg/h，即得酶解猪血球蛋白粉。
对比例1：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其中配制等渗液时，未添加丙二醇丁醚和L-扁桃酸。
本实施例是在实施例3的基础上进行对比试验，其他步骤与实施例3中一致，进行虹鳟鱼的人工繁殖。
对比例2：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其中人工授精步骤中，完成授精后，受精卵不用温水进行刺激，直接进行发眼卵孵化。
本实施例是在实施例3的基础上进行对比试验，其他步骤与实施例3中一致，进行虹鳟鱼的人工繁殖。
对比例3：
虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其中苗种强化培育用饵料中添加的酶解猪血球蛋白粉的制备步骤中，对猪血血红蛋白液酶解的步骤中，未添加包含有磺基水杨酸和茶多酚的促进剂。
本实施例是在实施例3的基础上进行对比试验，其他步骤与实施例3中一致，进行虹鳟鱼的人工繁殖。
实施例4：
虹鳟鱼人工繁殖技术试验
在某虹鳟鱼养殖基地，随机选取性成熟的雄鱼、雌鱼各210尾、120尾，雄性亲鱼2～3龄，雌性亲鱼2～4龄，随机分为5组，将实施例3设为试验组，对比例1～3设为对照组1～3，另设空白组，该空白组中与实施例3步骤一致，其中苗种强化培育用饵料中未添加酶解猪血球蛋白粉。在人工繁殖中严格遵守步骤，期间对受精卵的受精率进行检测。
受精率检测：在受精12h后，在10℃水温下，卵可以发育至4细胞期，将卵粒在鉴别液中浸泡10min后，置于解剖镜下观察，在卵的一端，胚体上形成4个大小相同细胞的为受精卵，4个细胞大小不均匀或排列不规则、界限不清的为未受精卵。上述鉴别液配制：以100ml计，在85ml蒸馏水中，加入福尔马林5ml，甘油6ml，冰醋酸4ml。
表1虹鳟鱼人工繁殖技术试验结果
| 排卵数/粒 | 受精卵数/粒 | 受精率％ | 孵化率％ | 鱼苗成活率％ | |
| 试验组 | 76592 | 74907 | 97.8 | 98.5 | 95.6 |
| 对照组1 | 75411 | 68926 | 91.4 | 95.3 | 95.7 |
| 对照组2 | 76813 | 74893 | 97.5 | 93.5 | 95.3 |
| 对照组3 | 75566 | 73526 | 97.3 | 98.2 | 92.4 |
| 空白组 | 76265 | 74130 | 97.2 | 98.1 | 89.6 |
由上表可知，对照组1相对于其他组别的受精率明显较低，说明等渗液中所加的丙二醇丁醚和L-扁桃酸，对受精率有明显的增益效果，同时也对孵化率有一定的有益影响，添加促进剂的组别，平均孵化率能达98％以上；对照组2的孵化率不到95％，是因为未用温水对受精卵进行应激刺激，使得受精卵的活力不如其它组别，胚体存活率较低；对照组3的鱼苗成活率较其它对照组和试验组低，是由于酶解猪血球蛋白粉制备中未添加促进剂，使得饵料的适口性和感官体验略差，鱼苗的摄食率较低，而空白组成活率较低则是因为饵料中没有酶解猪血球蛋白粉，说明该蛋白粉对鱼苗的生长发育有积极作用。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (10)
1.虹鳟鱼人工繁殖技术方法，包括注射催产剂，配制等渗液，人工采卵采精，人工授精，发眼卵孵化，受精率检测，稚鱼出苗孵化，苗种强化培育，其特征在于：苗种强化培育用饵料中添加有酶解猪血球蛋白粉；所述酶解猪血球蛋白粉制备步骤为：
a，提供抗凝猪血；
b，基于抗凝猪血的重量，提供3500~5000U/g的中性蛋白酶；
c，基于抗凝猪血的重量，提供包含有磺基水杨酸和茶多酚的促进剂；
d，使所述抗凝猪血经前处理后，与b、c中物质接触，形成水解液，所述水解液经喷雾干燥处理，即得酶解猪血球蛋白粉。
2.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述前处理步骤为：向抗凝猪血中加入缓冲液混匀后，进行过滤离心20~30min，再取沉淀加水溶解，然后用功率为1800~2500W的超声波处理5~10min，即得猪血血红蛋白液；所述缓冲液中包含柠檬酸二钠和碳酸氢钠，其重量比为1:2~5。
3.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述促进剂中磺基水杨酸和茶多酚的添加量分别为抗凝猪血重量的0.13~0.33%和0.2~0.5%。
4.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述苗种强化培育步骤为：孵化积温达350℃*d后，稚鱼全部出膜，将出膜的鱼苗放入育苗池暂养，放养密度为3500~5000尾/m2，池中水深20~40cm，水流量为15~20L/min，水温为7~13℃，溶氧为8~12mg/L，9~10d后开始投喂含有酶解猪血球蛋白粉的饵料，即得虹鳟鱼苗。
5.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述配制等渗液步骤为：以经滤网和生物棉过滤器处理后，再通过紫外灯杀菌和臭氧消毒的无菌水为基质，溶解氯化钠、丙二醇丁醚和L-扁桃酸，配制成浓度以氯化钠计为0.90~0.96%的等渗液；所述丙二醇丁醚和L-扁桃酸分别为氯化钠重量的0.5~0.8%和0.35~0.85%。
6.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述人工采卵采精步骤中，在温度为4~8℃的条件下，使用挤腹法收集卵粒和精液，所得卵粒在授精前用等渗液淋洗，等渗液温度为5~13℃，淋洗速率为3~5L/min。
7.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述人工授精采用湿法授精，每万粒卵中加入精液5~10mL，温度为5~10℃，完成授精后，将受精卵置于20~25℃温水中刺激1~2min，然后进行孵化。
8.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述发眼卵孵化步骤为：将受精卵置于孵化器中，卵粒层数为10~20层，实施流水吸水膨胀0.5~1h，流水速率为每万粒卵2~3L/min，然后将供水量调至每万粒卵4~7L/min，孵化期间温度为7~15℃。
9.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述受精率检测步骤为：在受精12~14h后，在10℃水温下，观察受精卵中进入4个细胞期的卵，其中胚体上形成4个大小相同细胞的为受精卵，4个细胞大小不均匀或排列不规则、界限不清的为未受精卵。
10.根据权利要求1所述的虹鳟鱼人工繁殖技术方法，其特征在于：所述稚鱼出苗孵化步骤为：将受精卵置于孵化器中，孵化用水自下部流经全部鱼卵，从上部溢出，注水量为3~8L/min，水温在7~15℃，溶氧为6~10mg/L，期间每3~4d消毒一次，消毒用水盐度为3~4，每次1~2h。
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