CN109476790B - 处理血液样品以检测靶核酸 - Google Patents

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Abstract

本文提供能够整合血液分级分离、特异性核酸扩增和/或从全血检测核酸的多孔聚合物整体材料和方法。

Description

处理血液样品以检测靶核酸
相关申请的交叉引用
本申请主张于2016年5月25日提交的美国临时申请系列号第62/341,559号的优先权，其内容以引用方式并入本文中。
技术领域
本公开涉及用于处理血液样品和检测靶核酸的存在的侧流多孔聚合物整体料，以及制造和使用所述整体料的方法。
背景技术
测试血液样品以检测靶核酸可以是有挑战性的。基于核酸的血液分析的灵敏度和特异性不仅受到核酸丰度的影响，还受到其扩增和检测的可用性的影响。例如，如果核酸被隔离在病毒衣壳中，或者如果它与结合的蛋白质相结合，则可用性可能会受到影响。更重要的是，血细胞组分对核酸诊断技术具有众所周知的干扰作用，如抑制扩增和信号检测。已经开发了一些解决方案来解决这个问题。
大多数核酸检测系统在应用于扩增和检测系统之前需要预先提取样品中的总核酸。一些核酸提取方案包括裂解所有血细胞，结合核酸，并成功洗去抑制物质。或者，可将全血离心以从血浆中去除红细胞和白细胞，将细胞与血浆携带的核酸和病原体分离。以这种方式进行的血浆分离效果良好，但对于大量样品来说并不理想，并且由于额外的血液处理步骤，增加了污染风险。已经开发出预处理裂解血液样品用于直接核酸分析的更简单的方法。通常，使少量的血液在隔离抑制物质的试剂中裂解。然后，这些经过特殊处理的血液样品被少量用于含有专用缓冲液和抑制耐受酶的扩增反应。然而，这些技术所需的酶比标准扩增酶更昂贵。此外，对样品的量和可用于分析这些制剂的方法有更严格的限制，这可能会降低分析灵敏度。
鉴于这些缺点以及对便宜的耗材检测方法的需求日益增加，特别是在远程诊断医学中或技术人员技术水平最低的场所，需要简单的现场护理(POC)工具来检测血液中的核酸。这种理想的血液检测装置应该能够接收全血或最小稀释的全血；从扩增和检测试剂中消除或分离抑制物质；并且在对用户或仪器干预要求最低的情况下在全集成系统中快速、廉价地操作。
发明内容
本文提供能够整合血液分级分离、特异性核酸扩增和/或从全血检测核酸的多孔聚合物整体材料和方法。所公开的多孔聚合物整体料是自芯吸的，并且适用于提供从血液进行简单的靶核酸分离、扩增和/或检测方法的方法，其最小化或消除了对危险化学品或专用设备的需求。
在一个方面中，所公开的多孔聚合物整体料是通用的核酸检测系统：小的均质条，能够快速将血液分离成含红细胞和不含红细胞的组分，吸收经设计用于检测单一的目标靶分子的湿的扩增和检测试剂，并支持整体料内的检测反应。参见例如图6。所公开的聚合物整体料和相关装置不仅允许在单一样品内进行多靶检测(例如使用靶特异性多重扩增，以及在单一试剂区内进行多模式检测(例如多种荧光染料))，而且它们还可以通过从样品加载区发出的整体料盘或树状突(dendritic process)中的径向芯吸而几何分布样品来得到进一步利用。参见例如图7-10。
所公开的整体料经设计以在保持其关键诊断优点的同时在物理上坚固。因此，它们可以独立存在，被模制成各种形状，并整合到现有的硬件/耗材系统中。
附图简述
图1显示用于处理血液样品的整体料的视图。
图2显示开始处理血液样品时整体料的视图
图3显示血液样品分级分离开始时的整体料的视图。
图4显示当血液样品的无血细胞部分进入试剂区时整体料的视图。
图5显示其中已经插入整体料的、具有血液样品的样品管的横截面视图。
图6是被配置成扩增和检测靶核酸(如果存在)的四块整体料的照片。
图7显示具有五个试剂区的整体料的俯视图。
图8显示具有四个试剂区的盘状整体料的俯视图。
图9显示整体料的俯视图，此时血细胞被隔离在整体料的中心，并且无血细胞的流体从整体料的中心向周边芯吸。
图10显示当无血细胞的流体已继续芯吸到整体料周边时整体料的俯视图。
图11显示分级分离血液样品和扩增和/或检测靶核酸的方法的流程图。
图12显示分级分离血液样品和扩增和/或检测靶核酸的另一种方法的流程图。
图13显示分级分离血液样品以及将无血细胞部分芯吸到与整体料偶联的后续芯吸装置中的方法的流程图。
图14显示用于测试整体料拉伸强度的整体料的视图。
图15显示移液管尖端的横截面视图，所述移液管尖端被配置成由具有不同体积质量密度的多种可聚合组合物制备多层多孔聚合物整体料。
图16显示用于制造块状或板状多层多孔聚合物整体料的模具组件的视图。
具体实施方式
本文提供多孔聚合物整体料，其能够整合血液分级分离、特异性核酸扩增、从全血检测核酸和自芯吸装置。所公开的聚合物整体料可以通过例如以下方式来制造：i)提供多种单体，所述单体包含：至少一种单体；和至少一种可自由基聚合的基于三羟甲基丙烷(TMP)的单体，其具有下式：
Figure BDA0001926776290000041
其中R1、R2和R3各自独立地选自-(CH2CH2O)nH、-(CH2CH2O)nC(O)CH2CH2SH、-(CH2CH2O)nC(O)CH＝CH2和-(CH2CH2O)nC(O)C(CH3)＝CH2；且每个n独立地是0到12的整数，其中所述基于(TMP)的单体以所述多种单体总体积的0.1％到44％(v:v)范围的量存在；ii)通过在致孔溶剂中合并所述多种单体来获得可聚合组合物；和iii)聚合所述可聚合组合物以形成多孔聚合物整体料。
在一个方面中，本文所述基于(TMP)的单体中的n，每个n独立地是0到6的整数、0到3的整数、或整数0、1、2或3。在一个方面中，每个n为0。
在一个方面中，本发明方法的整体料是自芯吸的。
术语“自芯吸(self-wicking)”是指由于整体料孔隙对液体的毛细管作用的影响，流体经过整体料的运动。这是整体料的特性，使得液体样品从整体料的第一部分自发地流到另外的连续部分，而不需要施加外部压差(例如，在常规柱色谱法中使用压力)。在本文所述的方法中，这种自芯吸能力可以单独提供输送和处理血液样品所需的力。自芯吸独立于整体料在空间中的取向，并且足以克服芯吸流体的重力，导致芯吸流体在整体料内大体上各向异性的流动。因此，液体在自芯吸整体料内的流动通常由整体料的几何形状引导。有利的是，这种特性可以被经过具有限定几何形状和纵横比的整体料的芯吸流体利用，以便可预测地引导流体的流动。例如，通过将流体施加到相对于其宽度适当长且薄的整体料上，可以开发侧流装置。本文所述的整体料适当地是自芯吸的。例如，在某些方面中，本发明方法的整体料包括在1.0厘米与10厘米之间、例如在1.5厘米与5.0厘米之间两分钟水芯吸速率。在其它情况下，本发明方法的整体料包括至少1.8cm、至少2.0cm、至少2.3cm、至少2.5cm、至少2.7cm、至少3.0cm、至少3.2cm、至少3.5cm、至少4.0cm、至少4.5cm、至少5.0cm、至少5.5cm、至少6.0cm、至少6.5cm、至少7.0cm或至少7.5cm的两分钟水芯吸速率。
除了自芯吸特性之外，本发明方法的整体料还适用于分级分离生物流体，如血液。在一个方面中，本发明方法的整体料分级分离红细胞。红细胞(RBC)保留因子(Rf)是一种类似于平面或薄层色谱中使用的阻滞因子的量度。对于具有恒定横截面积的整体料，RBC Rf被计算为从血液加载位置的近侧边缘开始，最远可观察到的RBC(通常是线性前沿)穿过的距离与无血细胞流体穿过的类似总距离之比。这在视觉上表现为血红色区和颜色为淡裸色或黄色的相邻区。RBC Rf用于测量整体料通过阻滞血细胞相对于血液其他成分的运动来分级分离血液的相对能力。在本文一个方面中，本发明方法的整体料具有在0.01至0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值。在其它方面中，本发明方法的整体料具有在0.01至0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值，并且包括在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率。
本发明方法的整体料的孔径可以变化。在一个方面中，本发明方法的整体料的孔径在2-7微米范围内。在其它方面中，本发明方法的整体料具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值和在2-7微米范围内的孔径。在另一方面中，本发明方法的整体料具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值，包括在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率，并且具有在2-7微米范围内的孔径。
本发明方法的整体料的孔隙度也可以变化。在某些情况下，本发明方法的整体料的孔隙度为50％到85％。在其它方面中，本发明方法的整体料具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值和50％到85％的孔隙度。在另一方面中，本发明方法的整体料具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值，包括1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率，并且具有50％到85％的孔隙度。在又一方面中，本发明方法的整体料具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值，包括在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率，具有在2-7微米范围内的孔径，并且具有50％到85％的孔隙度。
本发明方法的整体料可包括对应于至少10克的承载重量的最小拉伸强度。这可通过例如图14中所述的测试方案来测定。因此，在一个方面中，提供这样的整体料：所述整体料具有0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值和10克的最小重量承载。还提供这样的整体料：所述整体料具有0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值、50％到85％的孔隙度和10克的最小重量承载。还提供这样的整体料：所述整体料具有0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值、在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率、50％到85％的孔隙度和10克的最小重量承载。进一步提供这样的整体料：所述整体料具有0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值、在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率、50％到85％的孔隙度、50％到85％的孔隙度和10克的最小重量承载。在其它方面中，本发明方法的整体料可包括对应于至少50克、至少100克、至少250克、至少500克、至少750克、至少1000克、至少1250克、至少1500克或更高的承载重量的最小重量承载。
在某些情况下，所公开方法的至少一种基于TMP的单体包含三羟甲基丙烷乙氧基三丙烯酸酯(TMP(EO)TA)。TMP(EO)TA可以以基于多种单体的总体积0.1％到44％(v:v)范围的量存在。
在某些情况下，所公开方法的至少一种基于TMP的单体包含三羟甲基丙烷三(3-巯基丙酸酯)(TMPMP)。TMPMP可以以基于多种单体的总体积0.1％到7％(v:v)范围的量存在。
在某些情况下，所公开方法的至少一种单体选自乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)；甲基丙烯酸2-羟乙酯(HEMA)；四(乙二醇)二丙烯酸酯(TEGDA)；四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)；和其组合，所述组合包括EGDMA、HEMA、TEGDA或TEGDMA中的两种或更多种。
在某些情况下，所公开方法的至少一种单体选自：乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，其量的范围为多种单体的总体积的34％到75％(v:v)；甲基丙烯酸2-羟乙酯(HEMA)，其量的范围为多种单体的总体积的10％到35％(v:v)；四(乙二醇)二丙烯酸酯(TEGDA)，其量的范围为多种单体的总体积的0％到15％(v:v)；和四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)，其量的范围为多种单体的总体积的0％到20％(v:v)。
本文所述方法的致孔溶剂可以是含醇的，即包含至少一种醇。在一个方面中，致孔溶剂包含醇和水的混合物。在另一方面中，致孔溶剂包含两种醇的混合物。在另一方面中，致孔溶剂包含两种醇和水的混合物。水可以以0％到10％范围的量存在。
在一个方面中，本文所述方法的致孔溶剂包含以下分子式的第一醇：[CXH(2X+2)O]，其中X为1到10的整数。在另一方面中，本文所述方法的致孔溶剂包含以下分子式的第一醇：[CXH(2X+2)O]，其中第一醇以所述致孔溶剂总体积的0到100％范围的量存在。
在一个方面中，本文所述方法的致孔溶剂包含以下分子式的第二醇：[CYH(2Y+2)O2]，其中Y为2到10的整数。在另一方面中，本文所述方法的致孔溶剂包含以下分子式的第二醇：[CYH(2Y+2)O2]，其中第二醇以所述致孔溶剂总体积的0到50％范围的量存在。在一个方面中，醇可包括以下混合物：20％到65％(v:v)的甲醇、0％到60％(v:v)的辛醇和0％到35％(v:v)的戊二醇。
在一个方面中，本文所述方法的致孔溶剂进一步包含表面活性剂。在另一方面中，本文所述方法的致孔溶剂进一步包含选自以下的表面活性剂：十二烷基硫酸钠(SDS)、泊洛沙姆124和Triton X-100。在另一方面中，本文所述方法的致孔溶剂进一步包含选自以下的表面活性剂：SDS，其以致孔溶剂总体积的0到1.0％范围的量存在；泊洛沙姆124，其以致孔溶剂总体积的0到35％范围的量存在；和Triton X-100，其以致孔溶剂总体积的0到35％范围的量存在。
在一个方面中，本文所述方法的可聚合组合物具有1:1到1:5(v:v)的单体与溶剂比。
如本领域技术人员所熟知的，在完成整体料聚合后，清洗整体料以除去剩余溶剂和整体料中任何未掺入的单体，并将其彻底干燥以制备用于芯吸的整体料。清洗和干燥整体料的多种方法是众所周知的。
本文还提供通过本文所述的任一方法制成的多孔聚合物整体料，其具有一种或多种公开的特性，例如自芯吸(如在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率)、0.01到0.8范围的Rf值、2-7微米范围内的孔径、50％到85％的孔隙度和10克的最小重量承载。
本文还提供检测血液样品的无血细胞部分中的靶核酸的方法，其包括：i)提供根据本文所述方法制造的整体料，其中整体料的至少一个区被指定为试剂区；ii)将至少一种靶核酸的扩增和/或检测试剂加载到整体料的试剂区中；iii)任选地干燥整体料中的至少一种试剂；iv)任选地将血液样品稀释于载液中；v)在整体料上的样品施加位置加载血液样品，其中整体料的大小设定为沿其长度或半径吸收血液样品的流，且其中所述流包含a)血液样品的包含血细胞和无血细胞的流体的第一部分，其芯吸到整体料的第一区中；和b)血液样品的不含血细胞的第二部分，其芯吸通过整体料的第一区，进入到整体料的第二区中和进入到整体料的试剂区中；vi)等待无血细胞部分芯吸到试剂区中，其中无血细胞部分与试剂区中的试剂混合；vii)任选地机械分离第一(含血细胞)区与整体料；viii)任选地在整体料上的样品施加位置或另外的位置加载示踪流体；ix)调节试剂区中混合物的温度以促进靶的扩增，前提是扩增试剂和靶核酸存在于试剂区中；x)等待靶核酸的扩增和/或信号的放大；xii)检测整体料的试剂区中指示剂或指示剂系统的存在或不存在，其对应于靶核酸的存在或不存在；和xiii)任选地机械分离试剂区与整体料。在上述方法的一个方面中，扩增使用以下方法来进行：聚合酶链反应(PCR)；等温核酸扩增；信号放大方法；或核酸扩增和信号放大。在上述方法的一个方面中，靶核酸源自，本文的靶核酸源自细菌、病毒、真菌、单细胞真核生物或其它寄生生物体或源自宿主生物体的细胞，包括移植细胞、肿瘤细胞、游离循环核酸或含循环核酸的生物分子。
还提供检测血液样品的无血细胞部分中的靶核酸的方法，其包括：i)提供根据本文所述方法制造的整体料，其中整体料的至少一个区被指定为试剂区；ii)任选地将血液样品稀释于载液中；iii)在整体料上的样品施加位置加载血液样品，其中整体料的大小设定为沿其长度或半径吸收血液样品的流，且其中所述流包含：a)血液样品的包含血细胞和无血细胞的流体的第一部分，其芯吸到整体料的第一区中；和b)血液样品的不含血细胞的第二部分，其芯吸通过整体料的第一区，进入到整体料的第二区中但不进入到整体料的试剂区中；iv)等待无血细胞部分芯吸到整体料的第二区中；v)任选地机械分离第一区与整体料；vi)将至少一种靶核酸的扩增和/或检测试剂加载到整体料的初始干燥试剂区中，其中试剂芯吸到整体料的第二区中且其中试剂与第二区中的无血细胞部分混合；vii)任选地在整体料上的样品施加位置或另外的位置加载示踪流体；viii)调节第二区中混合物的温度以促进靶的扩增，前提是扩增试剂和靶核酸存在于第二区中；ix)等待靶核酸的扩增和/或信号的放大；和x)检测整体料中指示剂或指示剂系统的存在或不存在，其对应于靶核酸的存在或不存在。在上述方法的一个方面中，扩增使用以下方法来进行：聚合酶链反应(PCR)；等温核酸扩增；信号放大方法；或核酸扩增和信号放大。在上述方法的一个方面中，靶核酸源自细菌、病毒、真菌、单细胞真核生物或无细胞核酸。
还提供将血液样品分级分离成血细胞和无血细胞部分的方法，其包括i)提供根据本文所述方法制造的整体料；ii)提供后续芯吸装置；iii)将后续芯吸装置与整体料的至少一个表面偶联成流体连通；iv)任选地将血液样品稀释于载液中；v)在整体料上的样品施加位置加载血液样品，其中整体料的大小设定为沿其长度或半径吸收血液样品的流，且其中所述流包含：a)血液样品的包含血细胞和无血细胞流体的第一部分，其芯吸到整体料中；和b)血液样品的不含血细胞的第二部分，其芯吸通过整体料且芯吸到后续芯吸装置中；vi)任选地在整体料上的样品施加位置或另外的位置加载示踪流体；vii)等待无血细胞部分芯吸到整体料的后续芯吸装置中；和viii)任选地解偶联芯吸装置与整体料。在上述方法的一个方面中，芯吸装置是另外的聚合物整体料或硝化纤维素带。
本文还提供将血液样品分级分离成血细胞和无血细胞部分的侧流多孔整体料，其包括可在没有流体装置的辅助下操作的多孔有机聚合物整体料，其中整体料的大小设定为沿其长度或半径的至少一部分吸收血液样品的流，且整体料被配置成：i)将血液样品芯吸到整体料中；ii)将血液样品的血细胞隔离在第一区中；iii)使血液样品的无血细胞部分芯吸通过第一区且任选地芯吸到整体料的第二区中；和iv)具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子(Rf)值。在上述方法的一个方面中，整体料进一步包含多个涂布以有机多孔聚合物涂层的无机珠粒，其中无机珠粒包含二氧化硅、金属或金属氧化物。在上述方法的一个方面中，整体料是具有在1.5厘米与5.0厘米之间的两分钟水芯吸速率的自芯吸整体料。在上述方法的一个方面中，整体料具有在2-7微米范围内的孔径。在上述方法的一个方面中，整体料具有50％到85％的孔隙度。在上述方法的一个方面中，整体料是侧流整体料。在上述方法的一个方面中，整体料包括被配置成接收血液样品的无血细胞部分的试剂区，所述无血细胞部分已芯吸通过第一区且任选地芯吸到整体料的第二区中。在上述方法的一个方面中，整体料进一步包括后续芯吸装置，其中侧流装置是另外的聚合物整体料或硝化纤维素带，且其中芯吸装置被配置成：i)选择性地与侧流多孔整体料偶联；ii)在芯吸装置的至少一部分中加载至少一种靶核酸的扩增和/或检测试剂，和iii)接收血液样品的无血细胞部分，所述无血细胞部分已芯吸通过侧流多孔整体料的至少第一区且芯吸到芯吸装置中。在上述方法的一个方面中，根据图14的方法，整体料具有对应于10克承载重量的最小拉伸强度。
还提供在移液管尖端中制造如本文所述的多层多孔聚合物整体料的方法。这些方法包括例如：i)提供移液管尖端，所述移液管尖端具有在顶部具有开口的圆锥形空腔，且移液管的较窄端是液密密封的，其中移液管尖端的壁对于紫外光的通过是透明的，前提是使用紫外光来引发聚合；ii)将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第一可聚合组合物分配到移液管尖端中；iii)将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第二可聚合组合物分配到移液管尖端中；iv)任选地提供从多个光源引导的紫外光源，所述多个光源从多个相应的方向邻近移液管尖端的侧面定位，以提供指向移液管尖端中的可聚合组合物的均匀紫外光源；和v)在移液管尖端中引发可聚合组合物的聚合。
在一些方面中，前述方法中的聚合通过如下手段来引发：电磁辐射、化学反应、通过热或其组合。在前述方法的其它方面中，第一可聚合组合物的体积质量密度大于第二可聚合组合物的体积质量密度。
本文还提供用于制造如本文所述多层多孔整体料的模具。这些方法包括例如：i)模具部件，其包括具有第一侧和第二侧的片材，所述模具部件配置有中空内腔，所述中空内腔在上端具有用于接收多种可聚合组合物的开口；和ii)第一片材和第二片材，其各自具有内平面和外平面，当第一片材和第二片材固定在模具部件的相对侧上时，每个片材的长度和宽度设定为包封模具部件的中空内腔，其中第一片材和第二片材对于紫外光的通过是透明的，前提是使用紫外光来引发可聚合组合物的聚合。
在一些方面中，前述方法中所述的第一片材和第二片材的内表面包括非粘性表面。在其它方面中，前述方法进一步包括施加到第一片材和第二片材的内表面的非粘性透明层。非粘性透明层包括(但不限于)：包括聚乙烯层、聚氯乙烯(PVC)层、聚丙烯层或其它聚烯烃聚合物层或聚四氟乙烯(PTFE)层上的喷涂层的那些。
在模具中制造多层多孔聚合物整体料的其它方法包括：i)模具部件，其包括具有第一侧和第二侧的片材，所述模具部件配置有中空内腔，所述中空内腔在上端具有用于接收多种可聚合组合物的开口；ii)第一片材和第二片材，其各自具有内平面和外平面，当第一片材和第二片材固定在模具部件的相对侧上时，每个片材的长度和宽度设定为包封模具部件的中空内腔，其中第一片材和第二片材对于紫外光的通过是透明的，前提是使用紫外光来引发可聚合组合物的聚合；iii)将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第一可聚合组合物分配到模具的中空腔中；iv)将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第二可聚合组合物分配到模具的中空腔中；v)任选地提供从多个光源引导的紫外光源，所述多个光源邻近第一片材和第二片材的外表面布置，以提供指向模具腔中的可聚合组合物的紫外光源；和vi)在模具腔中引发可聚合组合物的聚合。在前述方法的其它方面中，第一可聚合组合物的体积质量密度大于第二可聚合组合物的体积质量密度。
在一些方面中，前述方法中的聚合通过电磁辐射、化学反应、通过加热或其组合来引发。
包括在本公开中的其它整体料和工艺如以下具体实施方式部分所述。贯穿本申请引用的所有参考文献(包括文献参考文献、已发布专利、已公布专利申请和共同未决专利申请)的内容在此以引用的方式明确地将其全部并入本文中。除非另有定义，否则这里使用的所有技术和科学术语都符合本领域普通技术人员公知的含义。
具体实施方式
图1显示用于处理血液样品102的侧流多孔聚合物整体料110的视图，此时所述血液样品施加在靠近整体料110一端的样品施加位置112。在整体料110的相对端，任选地将干燥试剂120储存在试剂区118中。整体料110是具有自芯吸特性的多孔聚合物整体料且可将血液样品分级分离成血细胞和无血细胞(BCF)部分。试剂120是至少一种扩增和/或检测试剂，其用于在BCF部分芯吸到试剂区118中后对其进行处理。试剂120将扩增BCF部分中的靶核酸(如果存在)且提供是否存在靶核酸的指示。血液样品102可任选地被等渗溶液(例如磷酸盐缓冲盐水或其它缓冲液)稀释。血液样品102的体积应该被选择成与特定整体料110的有效加载体积相关联，使得BCF部分可芯吸到试剂区118中。
多孔聚合物整体料可以通过混合单体和致孔溶剂形成可聚合组合物并引发聚合来形成，所述引发可以使用热、紫外光或通过化学反应产生自由基种类来完成。用于分级分离血液的整体料的特征可在于具有高度多孔结构、某些孔径的分布、某一范围内的芯吸速率和特定范围内的红细胞保留因子(Rf)。
图2显示图1的整体料110开始处理血液样品102时的视图。血液样品102已通过样品施加位置112进入整体料110且血液样品102的一部分114沿着箭头116所显示的方向芯吸通过整体料110。
图3显示进行血液样品102的分级分离时图1的整体料110的视图。血液样品102中的血细胞122被隔离在整体料110的第一区中。血液样品102的剩余部分(即BCF部分124)进一步被芯吸到整体料110中且朝向试剂区118被芯吸。
图4显示整体料110已将BCF流体124与血液样品102分级分离且BCF部分124已进入试剂区118时图1的整体料110的视图。试剂区118已加载有试剂120以提供进行靶核酸的扩增和/或检测所需的化学品。试剂120在试剂区118中优选地呈干燥形式。血细胞122已被隔离在界定第一区的整体料部分中。血细胞122没有因芯吸贯穿整体料110的行动而被损坏或裂解。整体料110的、其中已经芯吸有BCF部分124的部分界定第二区。含有BCF部分124的所述第二区延伸到试剂区118中且与其重叠。
BCF流体124与试剂区118中的试剂120混合，形成混合物126。如果靶核酸存在于BCF流体124中，那么可对靶核酸进行扩增，由此增加靶核酸的拷贝数。本领域已知多种扩增方法，例如聚合酶链反应(PCR)和等温扩增，其可用于增加靶核酸的拷贝数，从而有助于检测靶核酸(如果存在)。
一些已知的扩增方法包括环介导等温扩增法(LAMP)、重组酶/聚合酶分析(RPA)、链置换扩增(SDA)、NASBA、多重置换扩增(MDA)、滚环扩增(RCA)、连接酶链反应(LCR)、解旋酶依赖性扩增(HDA)和分枝扩增(RAM)。信号放大方法在本领域是已知的，例如分支DNA(bDNA)和杂交捕获。
本领域已知多种检测方法，例如未掺入的扩增信号报告子的猝灭(QUASR)、定量聚合酶链反应(qPCR)、切刻核酸内切酶信号放大(NESA)和酶联免疫吸附分析(ELISA)。QUASR描述于以下文献中：Ball,C.S.等人，Quenching of Unincorporated AmplificationSignal Reporters in Reverse-Transcription Loop-Mediated IsothermalAmplification Enabling Bright,Single-Step,Closed-Tube,and MultiplexedDetection of RNA Viruses,Analytical Chemistry,2016,88,3562-3568，2016年3月16日。
图5显示具有血液样品502的样品管504的侧视图，其中整体料510已插入到血液样品502中。在整体料510的上端存在含有试剂520的试剂区518。当整体料510的底端插入血液样品502中时，血液样品502开始沿箭头516所显示的芯吸方向向上芯吸到整体料510中。
随着血液样品502芯吸到整体料510中，血液样品502中的血细胞将被隔离在整体料510的底部。血液样品502的BCF部分将继续进一步向上芯吸到整体料510中且进入试剂区518中。如果靶核酸存在于BCF部分中，则将发生靶核酸的扩增，于是靶核酸的检测通过指示剂或指示系统变得显而易见。
指示方法可以利用许多已知物理现象中的一种或多种，这些现象包括这样的分子，所述分子是：光吸收的、发色的、荧光的(包括提供荧光、时间分辨荧光、荧光偏振和/或福斯特共振能量转移[FRET])、发磷光的、发光的、放射性的；或者这些现象包括吸收和/或发射电磁辐射和/或核辐射的其它分子。其他可用的指示系统取决于试剂区的电化学变化，例如电导率的变化。
图6显示四种整体料602、604、606和608的照片600。含有流感病毒的血液样品已被施加到整体料602、604和606的底部。不含流感病毒的血液样品已被施加到整体料608的底部，作为对照。在整体料602、604、606和608中，血细胞部分622被隔离在所示每个整体料的下半部分中。血液样品的芯吸已经沿着如箭头614所显示的方向从每个整体料的底部向上进行到顶部。
在整体料602、604、606和608中，BCF部分624已经继续芯吸到整体料的上半部分中。每个整体料在上端均具有试剂区，其用于储存至少一种用于扩增和/或检测靶核酸的试剂。当每种血液样品的BCF部分进入每个相应整体料的试剂区时，扩增和检测试剂将处理BCF部分并提供是否存在靶核酸的指示。所用的扩增和检测试剂是LAMP QUASR试剂。图6显示整体料602、604和606各自接收血液样品，所述血液样品被分级分离且从中扩增靶核酸。在该实例中，每一个中的指示剂系统都产生关于源自流感病毒的靶核酸的检测的视觉可观察指示602A、604A和606A。整体料608的上端608A缺少可见的指示剂，表明对照整体料608中不存在靶核酸。
用于制造图6中的自芯吸多孔聚合物分级分离整体料的可聚合组合物包含以下单体混合物(25％v:v)：EGDMA-70％、TEGDA-10％、TMP(EO)TA-10％和HEMA-10％；和以下溶剂混合物(75％v:v)：1-辛醇(C8H10O)-60％和甲醇(CH4O)-40％。
图7显示整体料710的俯视图，所述整体料在其中心配置有样品施加位置712。整体料710具有五个试剂区718A-718E。图7是可处理血液样品的实施方案，所述血液样品将从整体料710的中心径向向外芯吸。随着血液样品芯吸离开中心，血液样品中所含的血细胞将被隔离在整体料710的中心。整体料710可提供多达五种不同靶核酸中的靶核酸的检测。随着BCF部分从整体料710的中心向周边芯吸，BCF部分将被再分成五个部分，并与相应的五种试剂720A-720E混合。
图8显示具有四个试剂区818A-818D以及相应试剂820A-820D的盘状整体料810的俯视图。整体料810提供血液样品814的测试，以检测多达四种不同的靶核酸。血液样品814被施加在整体料810的中心，并且血液样品从整体料810的中心向周边继续芯吸，如箭头816所示。
图9显示整体料810的俯视图，此时血细胞822被隔离在整体料810的中心，且BCF流体824从整体料810的中心向周边芯吸。
图10显示整体料810的俯视图，此时血细胞822已被隔离在整体料810的中心，并且BCF流体824已继续芯吸到整体料810的周边。BCF流体824也已进入试剂区818A-D，其中流体824能够与多达四种不同的试剂820A-D反应，并产生相应的混合物826A-D。如果血液样品814中存在每种靶核酸，那么在每个试剂区中的指示将变得显而易见。
图11显示分级分离血液样品和检测靶核酸的方法1100的流程图。此方法对应于针对图1-10描述的血液样品的处理。在区块1102中，提供用于处理血液样品的整体料。整体料的尺寸被选择成能够沿着其长度或半径吸收待施加的血液样品的量。在区块1104中，将至少一种靶核酸的扩增和/或检测试剂加载到整体料的试剂区中。在步骤1104之后，一种选择是干燥整体料中的至少一种试剂。
在区块1106中，待测试的血液样品被加载到整体料的样品施加位置中。在加载血液样品之前，一种选择是用合适的载液(例如磷酸盐缓冲盐水)稀释血液样品。血液样品的包含血细胞和BCF流体的部分可以芯吸到整体料的第一区中，并且包含血细胞的第一部分可以被隔离在第一区中；并且血液样品的不含血细胞的、包含BCF流体的第二部分可以芯吸通过整体料的第一区，进入到整体料的第二区中并进入到整体料的试剂区中。
在区块1108中，等待BCF部分芯吸到试剂区中的同时，将经过一定的时间长度，BCF部分与试剂区中的试剂混合。时间的长短将取决于许多因素，包括整体料的大小和形状、施加到整体料的血液样品的体积以及通过整体料的芯吸速率。该等待时间可以在使用之前针对特定的分级分离整体料来确定。换句话说，等待时间是预先确定的，如同等待预定时间段一样。步骤1108之后的一种选择是机械分离第一(含血细胞)区与整体料。另外的选择是在整体料上的样品施加位置或另外的位置加载示踪流体，以帮助血液样品芯吸通过整体料。
在区块1110中，根据所使用的扩增方法的类型，如果扩增试剂和靶核酸存在于试剂区中，那么调节试剂区中混合物的温度以促进靶的扩增。例如，如果使用等温扩增方法，则试剂区的温度必须升高到室温以上。如果使用PCR方法，则必须进行一定量的热循环。
核酸扩增所需的高温通常会导致细胞裂解或病毒颗粒裂解。因此，重要的是，在热诱导细胞或颗粒裂解之前，大量流体流动已经完成或接近完成。因为裂解的红细胞贡献了大部分扩增和检测抑制剂，所以重要的是，红细胞或其裂解产物足够远，以便在测试时程中抑制剂从这些细胞向检测区中的扩散最小。相比之下，如果非血细胞或颗粒(例如细菌、病毒)的核酸是扩增和/或检测的靶，则在试剂区或试剂区附近的非血细胞或颗粒的裂解可能是有利的。
在步骤1112中，如果靶存在于试剂区中的混合物中，那么在等待靶核酸扩增发生的同时，将经过一定的时间长度。如果靶不存在，则对于等待多久后能在后续检测步骤1114中看到或感测到靶未被检测到，等待必须具有上限。该时间段取决于许多因素，但是可以针对特定的分级分离整体料和应用来确定。
在步骤1114中，可以通过视觉、光学或其他指示方法来确定检测，即，在整体料的试剂区中指示剂或指示系统的存在或不存在，其对应于血液样品中靶核酸的存在或不存在。步骤1114之后的一种选择是机械分离试剂区与整体料。
图12显示分级分离血液样品和检测靶核酸的方法1200的流程图。在步骤1202中，提供用于处理血液样品的整体料。整体料的尺寸被选择成能够沿着其长度或半径吸收待施加的血液样品的量。在步骤1204中，待测试的血液样品在样品施加位置被加载到整体料中。包含血细胞和BCF流体的血液样品可以芯吸到整体料的第一区中，并且血细胞将被隔离在第一区中。血液样品的不含血细胞的、包含BCF流体的第二部分可以芯吸通过整体料的第一区，进入到整体料的第二区中，但不进入到整体料的试剂区中。因此，在这个步骤中，整体料的试剂区保持干燥。在加载血液样品之前，一种选择是用合适的载液(例如磷酸盐缓冲盐水或其它缓冲液)稀释血液样品。
在步骤1206中，等待BCF部分芯吸到整体料的第二区中的同时，将经过一定的时间长度。时间的长短将取决于许多因素，包括整体料的大小和形状、施加到整体料的血液样品的体积以及通过整体料的芯吸速率。该等待时间可以在使用之前针对特定的分级分离整体料来确定。步骤1206之后的一种选择是机械分离第一(含血细胞)区与整体料。
在步骤1208中，将至少一种靶核酸的扩增和/或检测试剂加载到整体料的初始干燥试剂区中；试剂芯吸通过试剂区且芯吸到整体料的第二区中；试剂在第二区中与BCF部分混合。在步骤1208之后，一种选择是在整体料上的样品施加位置或另外的位置加载示踪流体，以帮助血液样品芯吸通过整体料。
在步骤1210中，根据所使用的扩增方法的类型，如果扩增试剂和靶核酸存在于第二区中，则调节第二区中混合物的温度以促进靶的扩增。例如，如果使用等温扩增方法，则试剂区的温度必须升高到室温以上。如果使用PCR方法，则必须进行一定量的热循环。
在步骤1212中，如果靶存在于试剂区中的混合物中，那么在等待靶核酸扩增发生的同时，将经过一定的时间长度。如果靶不存在，则对于等待多久后能在后续检测步骤1214中看到或感测到靶未被检测到，等待时间必须具有上限。该时间段将取决于许多因素，但是可以针对特定的分级分离整体料和应用来确定。
在步骤1214中，可以通过视觉、光学或其他指示方法来确定检测，即，在整体料的试剂区和/或第二区中指示剂或指示系统的存在或不存在，其对应于血液样品中靶核酸的存在或不存在。
图13显示将血液样品分级分离成血细胞和BCF部分的方法1300的流程图。在步骤1302中，提供用于处理血液样品的分级分离整体料。在步骤1304中，提供后续芯吸装置。在步骤1306中，将芯吸装置与整体料的至少一个表面偶联成流体连通。
在步骤1308中，待测试的血液样品在样品施加位置被加载到整体料中。包含血细胞和BCF流体的血液样品可以芯吸到整体料中，且血液样品的包含血细胞的第一部分将被隔离在整体料中。血液样品的不含血细胞的、包含BCF流体的第二部分可以芯吸通过整体料且芯吸到后续芯吸装置中。在加载血液样品之前，一种选择是用合适的载液(例如磷酸盐缓冲盐水或其它缓冲液)稀释血液样品。
在步骤1310中，在等待BCF部分芯吸到芯吸装置中的同时，将经过一定的时间长度。时间的长短将取决于许多因素，包括整体料的大小和形状、芯吸装置的大小和形状、施加到整体料的血液样品的量、通过整体料的芯吸速率以及芯吸装置中的芯吸速率。该等待时间可以在使用之前针对分级分离整体料和芯吸装置的特定组合来确定。步骤1310之后的一种选择是将芯吸装置与整体料解偶联。
图14显示用于测试分级分离整体料的各种制剂的拉伸强度的、在最宽部分具有长度1402和宽度1404的整体料1400的视图。分级分离整体料必须具有一定的最小拉伸强度以便被制造、运输和用于分级分离。开发了一种标准化拉伸测试，类似于诸如ASTM E8(或ASTMD638)拉伸测试等测试。整体料1400被制造成“狗骨”形状，中心1406处比上端1410和下端1412处窄。在使用单体和溶剂的特定配方制造之后，在已经洗掉任何剩余的溶剂并且整体料已经干燥并在室温储存一段时间之后，整体料即可进行测试。被测试整体料的特定标准化尺寸为6.35mm长，两端为19.05mm，中心为12.7mm，且厚度为1.0mm+/-0.1mm。被测试整体料1400的上端固定在顶端1410处，然后，从10克开始，连接一系列递增的重量，并添加递增量的重量，直到被测试整体料在整体料的较窄部分被拉开。在该测试中，确定分级分离整体料必须具有10克的最小强度，以便足够耐用，从而在测试靶之前和期间经受预期的处理条件。
分级分离侧流整体料可以通过以下方式来形成：将单体和致孔溶剂混合在一起，以通过提供单体的混合物来形成可聚合组合物，所述单体的混合物是例如至少一种单体和至少一种可自由基聚合的基于三羟甲基丙烷(TMP)的单体的混合物，所述可自由基聚合的基于三羟甲基丙烷(TMP)的单体具有下式：
Figure BDA0001926776290000181
其中R1、R2和R3各自独立地选自-(CH2CH2O)nH、-CH2CH2O)nC(O)CH2CH2SH、-(CH2CH2O)nC(O)CH＝CH2和-(CH2CH2O)nC(O)C(CH3)＝CH2；且每个n独立地是0到12的整数，其中所述基于(TMP)的单体以多种单体的总体积的0.1％到44％(v:v)范围的量存在。基于TMP的单体的一种形式是当n＝3时。基于TMP的单体的一种形式是0.1％到44％的TMP(EO)TA(三羟甲基丙烷乙氧基三丙烯酸酯)。TMP(EO)TA，作为用于制造分级分离多孔聚合物整体料的混合物中的一种单体，可增加这样的整体料的强度。用于制造分级分离多孔聚合物整体料的混合物中的单体的另一实例是0％到7％(v:v)的TMPMP(三羟甲基丙烷三(3-巯基丙酸酯))，其可增加这样的整体料的柔性。用于制造分级分离整体料的其它单体包括：34％到75％(v:v)的EGDMA(乙二醇二甲基丙烯酸酯)、10％到35％(v:v)的HEMA(甲基丙烯酸2-羟乙基酯)、0％到15％(v:v)的TEGDA(四(乙二醇)二丙烯酸酯)和0％到20％(v:v)的TEGDMA(四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯)。
用于将血液样品分级分离成血细胞和BCF部分的侧流多孔整体料可包括多孔有机聚合物整体料和任选的无机聚合物整体料，其可在没有流体装置的辅助下操作。这样的整体料的大小可以被设定为沿其长度或半径的至少一部分吸收血液样品的流。分级分离整体料可以被配置成：将血液样品加载到整体料中；将血液样品芯吸到整体料中；将血液样品的血细胞隔离在第一区中；使血液样品的BCF部分芯吸通过第一区，并任选地芯吸到整体料的第二区中；并且具有在0.01到0.8范围的测量的红细胞保持因子(Rf)值。
分级分离整体料可包括涂布有有机多孔聚合物涂层的无机珠粒，其中无机珠粒包含二氧化硅、金属和/或金属氧化物。聚合物涂层与整体料的其余部分中的聚合物可以相同或相似。
芯吸测试测量水垂直穿过固化的整体料的距离，整体料的尺寸为：1.27cm宽，6.35cm长，0.30cm厚。如本文所述制备整体料。
在测试之前，整体料被储存在大气条件下(温度：18-22℃，RH10-40％)，尽管发明人已经发现对于没有装载环境敏感试剂(例如，通过固定/共价接枝)的整体料不需要环境控制。通过观察溶剂前沿，可以目视进行测量。
1.将3mm的整体料浸入在去离子水中，其中整体料处于直立方向；
2.由于芯吸作用，水在整体料的长度上垂直向上移动；
3.在具有最大测量值的整体料的角落处测量水在2.0分钟内行进的距离。
可以添加染料来辅助测量。合适地，染料是与水一起行进的染料，而不会被整体料显著阻滞。合适的实例包括FD&C Yellow 1号和荧光素。Red 40和Blue 1也可用于如本文所述的一些整体料。
无血细胞(本文称为BCF)区不含有任何可见的红细胞(红血球)或天然白细胞(白血球)，但可以含有原核细胞、单细胞真核细胞、真菌细胞或细胞聚集体或病毒颗粒。所述区可含有细胞衍生物如血小板、外来体、膜碎片和/或生物分子如核酸、蛋白质、肽、碳水化合物和脂质。
图15图解说明移液管尖端1500的横截面视图，所述移液管尖端1500被配置成由具有不同体积质量密度的多种可聚合组合物制成多层多孔聚合物整体料1510。在这里，移液管尖端1500具有在顶部具有开口的圆锥形空腔。移液管尖端的较窄端是液密密封的。如果紫外光用于引发聚合，那么移液管尖端的壁对于紫外光的通过是透明的。
多种可聚合组合物1502可依序分配到移液管尖端1500的圆锥形空腔中。将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第一可聚合组合物分配到移液管尖端1500中，形成第一层1504。将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第二可聚合组合物分配到移液管尖端1500中，形成第二层1506。为了在整体料1510内形成层，第一组合物将具有高于第二组合物的体积质量密度，以最小化两种组合物的混合。
聚合的引发可以使用电磁辐射(例如紫外光)、加热、化学反应或其组合来进行。如果聚合是通过紫外光引发的，那么多个紫外光源1508可以布置在移液管尖端1500周围，其中紫外光指向层1504和1506中的可聚合组合物，以引发组合物的聚合，从而在移液管尖端1500内形成多层整体料1510。
图16显示用于制造块状或板状多层多孔聚合物整体料的模具1600的组件的视图。第一平板1602和第二平板1604在固定在一起时包封内部模具部件1606，形成用于制造多层整体料的模具。板1602和1604各具有内平面和外平面。当第一板1602和第二板1604被固定在内模具部件1606的相对侧上时，板1602和1604的大小各设定为一定长度和宽度，以包封模具部件1606的中空内腔1610。如果紫外光用于引发聚合，第一板1602和第二板1604对于紫外光的通过是适当透明的。聚合的引发可以使用电磁辐射(例如紫外光)、加热、化学反应或其组合来进行。
当模具1600的组件固定在一起时，模具部件1606具有中空内腔1610，其上端具有开口1608，用于接收一系列可聚合组合物。将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第一可聚合组合物分配到组装模具1600中，在模腔1610的底部形成第一层。将包含多种单体和致孔溶剂的混合物的第二可聚合组合物分配到组装模具1600中，形成位于第一层顶部的第二层。为了在组装模具1600中的整体料内形成水平层，第一组合物将具有高于第二组合物的体积质量密度，以最小化两种组合物的混合。
如果紫外光用于引发组装模具1600的腔1610中的可聚合组合物的聚合，则至少两个紫外光源可邻近第一板1602和第二板1604的外表面布置，以提供指向组装模具1600的腔1610中的可聚合组合物的紫外光源。聚合完成后，在组装模具1600中将形成多层整体料。可以通过松开模具1600来拆卸模具1600，然后可以从内模具部件1606移除第一板1602和第二板1604，并且可以从内模具部件1606移除多层整体料。
为了便于拆卸，板1602和1604可以由具有不会粘在制造整体料上的、非粘性表面的材料(例如各种塑料或硼硅酸盐玻璃)制成，这些材料。在另一个实施方案中，为了便于拆卸模具1600，可以用非粘性层涂布或覆盖板1602和1604的内表面。非粘性层可以是聚乙烯层、PVC层、聚丙烯层或其它聚烯烃聚合物层或其它塑料层。非粘性层也可以是PTFE涂层或其它合适的脱模涂层上的喷涂层。
应理解，本文描述的实例和修改仅仅是为了说明的目的，且本领域技术人员根据这些实例和修改将提出各种修改或改变，并且这些修改或改变将包括在本申请的精神和所附权利要求书的范围内。

Claims (19)

1.一种制造多孔聚合物整体料的方法，其包括：
-提供多种单体，所述单体包含：
至少一种单体，所述至少一种单体选自：
乙二醇二甲基丙烯酸酯；
甲基丙烯酸2-羟乙酯；
四(乙二醇)二丙烯酸酯；
四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯；和
其组合，所述组合包含乙二醇二甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸2-羟乙酯、四(乙二醇)二丙烯酸酯或四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯中的两种或更多种；和
至少一种可自由基聚合的基于三羟甲基丙烷的单体，其具有下式：
Figure FDA0003025925740000011
其中R1、R2和R3各自独立地选自-(CH2CH2O)nH、-(CH2CH2O)nC(O)CH2CH2SH、-(CH2CH2O)nC(O)CH＝CH2和-(CH2CH2O)nC(O)C(CH3)＝CH2；且每个n独立地是0到12的整数，其中所述可自由基聚合的基于三羟甲基丙烷的单体以所述多种单体的总体积的0.1％到44％(v:v)范围的量包括三羟甲基丙烷乙氧基三丙烯酸酯或三羟甲基丙烷三(3-巯基丙酸酯)；
-通过在致孔溶剂中合并所述多种单体来获得可聚合组合物；和
-聚合所述可聚合组合物以形成所述多孔聚合物整体料。
2.根据权利要求1所述的方法，其中n为0。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述可自由基聚合的基于三羟甲基丙烷的单体包括三羟甲基丙烷三(3-巯基丙酸酯)，其量的范围为所述多种单体的总体积的0.1％到7％(v:v)。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种单体选自：
乙二醇二甲基丙烯酸酯，其量的范围为所述多种单体的总体积的34％到75％(v:v)；
甲基丙烯酸2-羟乙酯，其量的范围为所述多种单体的总体积的10％到35％(v:v)；
四(乙二醇)二丙烯酸酯，其量的范围为所述多种单体的总体积的0％到15％(v:v)；和
四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯，其量的范围为所述多种单体的总体积的0％到20％(v:v)。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂包含醇。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂包含醇和水的混合物。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂包含下式的第一醇：[CXH(2X+2)O]，其中X为1到10的整数。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂包含下式的第一醇：[CXH(2X+2)O]，其中所述第一醇以所述致孔溶剂的总体积的0到100％范围的量存在。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂包含下式的第二醇：[CYH(2Y+2)O2]，其中Y为2到10的整数。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂包含下式的第二醇：[CYH(2Y+2)O2]，其中所述第二醇以所述致孔溶剂的总体积的0到50％范围的量存在。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述致孔溶剂进一步包含表面活性剂。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述可聚合组合物具有1:1到1:5(v:v)的单体与溶剂比。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述整体料是具有在1.5厘米与5.0厘米之间两分钟水芯吸速率的自芯吸整体料。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述整体料具有0.01到0.8范围的测量的红细胞保留因子值。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述整体料具有2微米到7微米范围内的孔径和50％到85％的孔隙度。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述整体料是侧流整体料。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述整体料是用于将血液样品分级分离成血细胞和无血细胞部分的侧流多孔整体料。
18.根据权利要求1所述的方法，其中所述整体料具有对应于至少10克的承载重量的最小拉伸强度。
19.一种通过根据权利要求1-18所述的方法中的任一种方法制造的整体料。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10858690B2 (en) 2016-05-25 2020-12-08 Monolythix, Inc. Processing blood samples to detect target nucleic acids

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104406831A (zh) * 2014-11-21 2015-03-11 广东万事泰集团有限公司 血液分离装置、血液分离检测装置及分离检测方法
WO2015098439A1 (ja) * 2013-12-26 2015-07-02 東レエンジニアリング株式会社 成形品の粘弾性構造解析装置、方法、プログラム、および媒体

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9902463D0 (en) * 1999-02-05 1999-03-24 Univ Cambridge Tech Manufacturing porous cross-linked polymer monoliths
US20050095602A1 (en) 2003-11-04 2005-05-05 West Jason A. Microfluidic integrated microarrays for biological detection
EP1733233B1 (en) * 2004-03-30 2012-12-12 GE Healthcare Bio-Sciences Corp. Lateral flow format, materials and methods
EP2419920A1 (en) 2009-04-16 2012-02-22 Spinx, Inc. Devices and methods for interfacing microfluidic devices with macrofluidic devices
EP2521612B1 (en) * 2010-01-08 2017-05-17 University Of Tasmania Use of porous polymer monoliths
BR112013002064B1 (pt) 2010-07-27 2020-11-24 Northwestern University Dispositivo e metodos para filtragem do plasma sanguíneo
AU2012283749B2 (en) 2011-07-12 2017-03-16 University Of Tasmania Use of porous polymer materials for storage of biological samples
US20150211967A1 (en) 2014-01-29 2015-07-30 Trajan Scientific Australia Pty Ltd Preparation of samples for analysis and sampling device therefor
WO2015195178A2 (en) 2014-03-27 2015-12-23 Canon U.S. Life Sciences, Inc. Integration of ex situ fabricated porous polymer monoliths into fluidic chips
US9464969B2 (en) 2014-11-20 2016-10-11 Monolythix, Inc. Monoliths
US10858690B2 (en) 2016-05-25 2020-12-08 Monolythix, Inc. Processing blood samples to detect target nucleic acids

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015098439A1 (ja) * 2013-12-26 2015-07-02 東レエンジニアリング株式会社 成形品の粘弾性構造解析装置、方法、プログラム、および媒体
CN104406831A (zh) * 2014-11-21 2015-03-11 广东万事泰集团有限公司 血液分离装置、血液分离检测装置及分离检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《In Situ Polymerization of Monolith Based on Poly(Triallyl Isocyanurate-co-Trimethylolpropane Triacrylate) and Its Application in High-Performance Liquid Chromatography》;Zhong Jing，et al.;《Journal of Chromatographic Science》;20140918;第53卷(第4期);第532页第1栏第3段-第2栏第1段，第534页第2栏第1段，图1 *

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