CN109464471A - 一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法 - Google Patents
一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物膜技术领域，公开了一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法；制备细菌溶液；麻醉；固定；右前胸部约第4、5、6、7肋处皮肤剃毛、备皮；定位；消毒；穿刺：剪开右侧第6肋间穿刺点皮肤约1.0cm切口，直镊穿破胸膜，夹取夹头皮针管置入并固定，接上注射器，回抽直至无法抽出气体；按家兔重量2ml/kg上述菌液给予注射；将头皮针管夹紧后，剪除头端，用镊子将剩余管体送入胸腔，缝合皮肤伤口；术后解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物；取少量脓絮状物，涂布于载玻片，进行肽核算荧光原位杂交检测，红色密集部分即为铜绿假单胞菌形成的生物膜。
Description
技术领域
本发明属于生物膜技术领域，尤其涉及一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
铜绿假单胞菌是脓胸感染常见的革兰阴性杆菌之一，占全部革兰阴性杆菌的构成比在12％～30％。药敏试验结果提示来源于脓液的铜绿假单胞菌呈多重耐药性导致脓胸治疗效果差，迁延不愈，形成慢性脓胸。生物膜是微生物有组织生长的聚集体，以生物膜形式生长的微生物对抗菌药物以及宿主的免疫防御的抗性都比浮游细菌要强。
目前尚未有脓胸患者胸腔絮状物中有生物膜形成，也无成熟的脓胸絮状物生物膜形成的动物模型，希望通过此方法建立的脓胸脓絮状物生物膜模型，并在此基础上，能够分析胸腔絮状物中铜绿假单胞菌生物膜的生长，形态，致病性，脓胸的发病机理及治疗效果是否与生物膜相关等。目前尚未有成熟的铜绿假单胞菌感染的脓胸胸腔脓絮状物生物膜形成的动物模型。对铜绿假单胞菌生物膜的研究主要通过腹腔感染模型、创面感染模型及体外试验。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)目前尚未有脓胸患者胸腔絮状物中有生物膜形成，也无成熟的脓胸絮状物生物膜形成的动物模型；
(2)目前尚未有成熟的铜绿假单胞菌感染的脓胸胸腔脓絮状物生物膜形成的动物模型。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法。
本发明是这样实现的，一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法，具体包括以下步骤：
步骤一：制备细菌溶液：取铜绿假单胞菌菌株复苏，增菌，使用LB肉汤溶解，制成所需浓度的细菌溶液；
步骤二：麻醉：将家兔置于家兔手术盒子，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠将家兔麻醉；
步骤三：固定：将家兔移至手术台，取左侧卧位，捆绑固定，充分暴露右前胸壁区域；右前胸部约第4、5、6、7肋处皮肤剃毛、备皮；
步骤四：定位：触摸右侧胸壁肋骨，从第12肋起始，触及第6肋间，选取胸骨-脊柱的中外部分作为穿刺点，签字笔标记，重复定位2次；
步骤五：消毒：碘伏消毒穿刺点周围皮肤，直径约10cm，2次，铺手术巾；
步骤六：穿刺：剪开右侧第6肋间穿刺点皮肤约1.0cm切口，直镊穿破胸膜，夹取夹头皮针管置入并固定，接上注射器，回抽直至无法抽出气体；按家兔重量2ml/kg上述菌液给予注射；
步骤七：将头皮针管夹紧后，剪除头端，用镊子将剩余管体送入胸腔，缝合皮肤伤口；术后解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物；
步骤八：取少量脓絮状物，涂布于载玻片，进行肽核算荧光原位杂交检测，红色密集部分即为铜绿假单胞菌形成的生物膜。
进一步，步骤一中，家兔麻醉，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠，30mg/kg。
进一步，步骤七中，术后第4-6天，解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明通过将一定浓度铜绿假单胞菌菌株注入家兔胸腔，诱导其产生脓胸，并形成大量脓絮状物，以建立胸腔脓絮状物生物膜形成模型，该模型成功后，可以分析胸腔内生物膜形成的机制、及全身用药等方式干预对脓胸治疗的效果。也可通过此模型对铜绿假单胞菌生物膜的致病性、耐药性进行进一步研究。
附图说明
图1是本发明实施例提供的铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细描述；
如图1所示，本发明实施例提供的铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法，具体包括以下步骤：
S101：制备细菌溶液：取铜绿假单胞菌菌株复苏，增菌，使用LB肉汤溶解，制成所需浓度的细菌溶液；
S102：麻醉：将家兔置于家兔手术盒子，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠将家兔麻醉；
S103：固定：将家兔移至手术台，取左侧卧位，捆绑固定，充分暴露右前胸壁区域；右前胸部约第4、5、6、7肋处皮肤剃毛、备皮；
S104：定位：触摸右侧胸壁肋骨，从第12肋起始，触及第6肋间，选取胸骨-脊柱的中外部分作为穿刺点，签字笔标记，重复定位2次；
S105：消毒：碘伏消毒穿刺点周围皮肤，直径约10cm，2次，铺手术巾；
S106：穿刺：剪开右侧第6肋间穿刺点皮肤约1.0cm切口，直镊穿破胸膜，夹取夹头皮针管置入并固定，接上注射器，回抽直至无法抽出气体；按家兔重量2ml/kg上述菌液给予注射；
S107：将头皮针管夹紧后，剪除头端，用镊子将剩余管体送入胸腔，缝合皮肤伤口；术后解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物；
S108：取少量脓絮状物，涂布于载玻片，进行肽核算荧光原位杂交检测，红色密集部分即为铜绿假单胞菌形成的生物膜。
步骤S101中，本发明实施例提供的家兔麻醉，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠，30mg/kg。
步骤S107中，本发明实施例提供的术后第4-6天，解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物。
下面结合附图对本发明的应用原理进行进一步说明；
实施例1；
(1)取铜绿假单胞菌菌株复苏，增菌，使用LB肉汤溶解，制成所需浓度的细菌溶液。
(2)麻醉：将家兔置于家兔手术盒子，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠(30mg/kg)将家兔麻醉。
(3)固定：将家兔移至手术台，取左侧卧位，捆绑固定，充分暴露右前胸壁区域。
(4)右前胸部约第4、5、6、7肋处皮肤剃毛、备皮。
(5)定位：触摸右侧胸壁肋骨，从第12肋起始，触及第6肋间，选取胸骨-脊柱的中外部分作为穿刺点，签字笔标记，重复定位2次。
(6)消毒：碘伏消毒穿刺点周围皮肤，直径约10cm，2次，铺手术巾。
(7)穿刺：剪开右侧第6肋间穿刺点皮肤约1.0cm切口，直镊穿破胸膜，夹取夹头皮针管置入并固定，接上注射器，回抽直至无法抽出气体。
(8)按家兔重量2ml/kg上述菌液给予注射。
(9)将头皮针管夹紧后，剪除头端，迅速用镊子将剩余管体送入胸腔，缝合皮肤伤口。
(10)术后第4-6天，解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物。
(11)取少量脓絮状物，涂布于载玻片，进行肽核算荧光原位杂交检测，图中红色密集部分即为铜绿假单胞菌形成的生物膜。说明脓胸胸腔脓絮状物生物膜模型建立成功。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法，其特征在于，所述的铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法包括以下步骤：
步骤一：取铜绿假单胞菌菌株复苏，增菌，使用LB肉汤溶解，制成所需浓度的细菌溶液；
步骤二：将家兔置于家兔手术盒子，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠将家兔麻醉；
步骤三：将家兔移至手术台，取左侧卧位，捆绑固定，充分暴露右前胸壁区域；右前胸部第4、5、6、7肋处皮肤剃毛、备皮；
步骤四：触摸右侧胸壁肋骨，从第12肋起始，触及第6肋间，选取胸骨-脊柱的中外部分作为穿刺点，签字笔标记，重复定位2次；
步骤五：碘伏消毒穿刺点周围皮肤，直径约10cm，2次，铺手术巾；
步骤六：剪开右侧第6肋间穿刺点皮肤1.0cm切口，直镊穿破胸膜，夹取夹头皮针管置入并固定，接上注射器，回抽直至无法抽出气体；按家兔重量2ml/kg上述菌液给予注射；
步骤七：将头皮针管夹紧后，剪除头端，用镊子将剩余管体送入胸腔，缝合皮肤伤口；术后解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物；
步骤八：取脓絮状物，涂布于载玻片，进行肽核算荧光原位杂交检测，红色密集部分即为铜绿假单胞菌形成的生物膜。
2.如权利要求1所述的铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法，其特征在于，所述步骤一中，家兔麻醉，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠，30mg/kg。
3.如权利要求1所述的铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法，其特征在于，所述步骤七中，术后第4-6天，解剖家兔胸腔，可发现脓胸形成，胸腔内有大量脓液，及白色脓絮状物。
4.一种由权利要求1～3任意一项所述铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型建立方法构建的铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型。
5.一种如权利要求4所述铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型在对铜绿假单胞菌生物膜的致病性中的应用。
6.一种如权利要求4所述铜绿假单胞菌家兔脓胸脓絮状物生物膜模型在对铜绿假单胞菌生物膜的耐药性中的应用。
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