CN109430118B - 提高虎斑乌贼繁殖力的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了提高虎斑乌贼繁殖力的方法，具体为：将配组好的虎斑乌贼暂养在设有附卵基的室内培育池中，待虎斑乌贼亲体自然产卵后，收集受精卵，喷淋消毒液后进行人工孵化，将孵出的幼苗在幼苗池中养殖，待幼苗胴长合格后投放到养殖池中养殖。有益效果为：本发明方法具有孵化率高、成活率高、病害少、育苗量高、易于养殖、生长快、成品规格大等优点，能抑制细菌的生长，提高虎斑乌贼繁殖能力。

Description

提高虎斑乌贼繁殖力的方法
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，尤其是涉及提高虎斑乌贼繁殖力的方法。
背景技术
乌贼属于软体动物门，头足纲，十腕总目，乌贼目，是头足类最具开发潜力的种类之一，其肉质鲜美，可食部分占90％以上；其生殖腺可加工成“乌鱼穗”和“乌鱼蛋”；另外其海螵蛸和墨囊具有凝血、抗肿瘤、抗癌等功效。因此乌贼深受大众喜爱，是我国重要的海洋渔业资源。近年来，国内外对乌贼资源分布已有较深入的研究，目前被捕捞、开发利用的主要有种，我国以金乌贼、曼氏无针乌贼、乌贼、拟目乌贼、虎斑乌贼等产量较高。但是由于捕捞过度及海域环境恶化等原因，乌贼资源明显衰退，无法形成渔汛。繁殖期是乌贼类生命周期的重要阶段，除了澳大利亚巨乌贼外，大多数乌贼繁殖期几乎不群聚，但它们有生殖洄游的现象，一般乌贼类只有一个繁殖期，如自然海区的金乌贼、曼氏无针乌贼均属于此。但在人工养殖条件下，由于环境因子的改变，曼氏无针乌贼可繁殖2次。亲体怀卵量决定了其后代的数量和质量，制约着补充群体的数量、质量以及多样性水平的高低。不同乌贼的怀卵量有着明显的差异，如曼氏无针乌贼怀卵量一般为1000-3000粒，金乌贼一般为500-1500粒，虎斑乌贼一般为500-3000粒，拟目乌贼平均产卵量为354粒。为了恢复、开发和利用乌贼资源，国外学者已较早开展了乌贼人工繁育研究。
虎斑乌贼常在浅海区产卵，冬季栖于水深100米左右。春季集群游来浅水区交配、产卵；在广东近海的产卵期约为4-5月，水温18-24℃，产卵于5-20米水深处。卵子较大，孵化前的卵子长径约27-34毫米，短径约14-16毫米，略呈葡萄状，一端较突，另一端为分叉柄，卵膜为奶油色型，半透明；卵子分批成熟，单个产出，多扎附于柳珊珊、马尾藻或细枝、细绳上。在繁殖期间，雄体背面的“虎斑”特别鲜明，即所谓的“婚装色彩”，有追偶、争偶等复杂的性行为，并有明显的趋光性。虎斑乌贼生长迅速，一年可以长到4kg，是非常理想的养殖种类，但目前人工繁育技术还没有突破，规模化繁育困难。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有孵化率高、成活率高、病害少、育苗量高、易于养殖、生长快、成品规格大等优点，抑制细菌的生长，提高虎斑乌贼繁殖能力的提高虎斑乌贼繁殖力的方法。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：
提高虎斑乌贼繁殖力的方法，将配组好的虎斑乌贼暂养在设有附卵基的室内培育池中，待虎斑乌贼亲体自然产卵后，收集受精卵，喷淋消毒液后进行人工孵化，将孵出的幼苗在幼苗池中养殖，待幼苗胴长合格后投放到养殖池中养殖。本发明方法具有孵化率高、成活率高、病害少、育苗量高、易于养殖、生长快、成品规格大等优点，并且该育苗方法易于实施操作、成功率高，适宜大规模推广；该方法用附卵基具有良好的柔韧性、抗菌性、粘附性能和亲和性能，能够有效抑制细菌的生长，避免虎斑乌贼受伤并影响产卵，使得受精卵能够牢固地附着在附卵基上，提高受精卵的卵质量，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力；该培育方法能消除细菌、真菌、病毒等病原对卵的孵化率、畸形率的影响，提高受精卵的孵化率，降低分泌物的黏度，使得受精卵能够在培育池中均匀分散开来，有效提高孵化率。
作为优选，消毒液的成分及其重量份为：聚维酮碘0.02-0.05份、次氯酸0.006-0.01份、EDTA 0.01-0.03份、右旋肉碱0.001-0.003份、蒸馏水1000-1100份。该孵化强化液对细菌、真菌、病毒等病原均有良好杀灭效果，能消除细菌、真菌、病毒等病原对卵的孵化率、畸形率的影响，提高受精卵的孵化率，同时能破坏受精卵表面分泌物中的糖蛋白结构，使得寡糖链与蛋白质的共价键断裂，进而降低分泌物的黏度，使得受精卵能够在培育池中均匀分散开来，有效提高孵化率。
作为优选，附卵基为网目25-30mm的聚乙烯网片。该附卵基不会造成乌贼受伤并影响产卵，可重复利用，在海水中耐长时间浸泡，不败坏水质，附卵效果佳，可以缩短产卵时间，雌雄交配后1min，雌性便开始将卵附于附卵基上，附着均匀牢固，提高产卵量，还可以避免虎斑乌贼的受精卵霉变或坏死，提高受精卵质量，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力。
进一步优选，附卵基的制备方法为：将重量比为100:0.1-3的聚乙烯和ε-聚赖氨酸于双棍混炼机上于158-163℃、280-350rpm下充分混炼8-12min，然后将共混好的复合材料放入模具，转移到平板硫化机上在158-163℃、8-12MPa下热压4-6min，然后室温下冷压，冷压完成后，从模具中取出，即得聚乙烯网片附卵基。该聚乙烯网片附卵基兼具聚乙烯和ε-聚赖氨酸的功能，具有优异的抗菌效果，能够有效抑制细菌的生长，并在较长时间内发挥良好的抗菌能力，不易被乌贼排泄物或墨汁污染，避免虎斑乌贼的受精卵霉变或坏死，提高受精卵的卵质量，协助提高虎斑乌贼繁殖能力，同时该ε-聚赖氨酸的加入不影响聚乙烯网片的力学性能，且对虎斑乌贼受精卵无不良影响。
更进一步优选，ε-聚赖氨酸中含有0.03-0.06wt％的D-赖氨酸。反应体系中D-赖氨酸的存在能够将ε-聚赖氨酸在聚乙烯中充分分散开，增强ε-聚赖氨酸与聚乙烯的相容性和共混性，提高附卵基的使用性能和生物相容性，对虎斑乌贼受精卵无不良影响，能协助提高虎斑乌贼繁殖能力，同时能够和ε-聚赖氨酸相互配合，削弱聚乙烯之间的作用力，阻碍结晶结构的形成，降低聚乙烯的结晶度，使得附卵基具有良好的柔韧性，避免虎斑乌贼受伤并影响产卵，此外，D-赖氨酸的加入有助于提升附卵基的细胞粘附性能和亲和性能，使得受精卵能够牢固地附着在附卵基上，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力。
作为优选，亲体暂养的条件为：放养密度为0.5-2只/平方米，水温为24-25℃，海水盐度为28-30，流水刺激的流速为5-8m/min、时间为10-15min，日投饵2-4次，总的投喂量为亲体重量的0.3-0.6倍。
作为优选，亲体暂养用饵料的成分及其重量份为：发酵豆粕18-28份、鱼粉10-20份、骨粉10-20份、糠虾粉7-15份、维生素A 0.002-0.004份、维生素E 0.001-0.002份、维生素C 0.002-0.005份、植物油3-7份、柠檬酸0.2-0.4份、植酸酶0.1-0.3份。微生物发酵过程中能够提高豆粕中粗脂肪、粗蛋白、氨基酸和磷的含量，并将大分子蛋白质分解成小分子蛋白质及活性肽，提高了虎斑乌贼对蛋白的消化利用率和机体免疫力，同时，豆粕中的部分抗营养因子被消除，增加豆粕中生物活性因子和抗菌能力，改善豆粕的适口性，此外，发酵豆粕中的鼠李糖乳杆菌可以提高参与促进卵母细胞成熟因子基因的表达，并且降低了抑制卵母细胞成熟因子的表达，促进卵母细胞的成熟，增加产卵量，受精率以及孵化率，进而提高虎斑乌贼的繁殖力，以及在宿主肠道内生产一些增强宿主消化的酶，如淀粉酶，蛋白酶和脂酶，促进宿主有机物质和蛋白质的消化率，还可以提供一些必需的生长因子，维生素或氨基酸，影响机体的能量代谢和能量平衡，因此，发酵豆粕能够提高虎斑乌贼的摄食率、利用率、机体免疫力和繁殖力。
作为优选，人工孵化具体为：将受精卵放置于培育池中，卵粒密度为300-350只/立方米，控制培育池水温为24-25℃，海水盐度为28-30，水溶氧量≥6mg/L，孵化时间20-35d，每1-2m2放置一个散气石，每天换水量为50-60％，并及时清除死亡个体及残渣污垢，幼苗培育完成，带水出苗。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1)本发明方法具有孵化率高、成活率高、病害少、育苗量高、易于养殖、生长快、成品规格大等优点，并且该育苗方法易于实施操作、成功率高，适宜大规模推广；2)该方法用附卵基具有良好的柔韧性、抗菌性、粘附性能和亲和性能，能够有效抑制细菌的生长，避免虎斑乌贼受伤并影响产卵，使得受精卵能够牢固地附着在附卵基上，提高受精卵的卵质量，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力；3)该培育方法能消除细菌、真菌、病毒等病原对卵的孵化率、畸形率的影响，提高受精卵的孵化率，降低分泌物的黏度，使得受精卵能够在培育池中均匀分散开来，有效提高孵化率。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
提高虎斑乌贼繁殖力的方法，将配组好的虎斑乌贼暂养在设有附卵基的室内培育池中，待虎斑乌贼亲体自然产卵后，收集受精卵，喷淋消毒液后进行人工孵化，将孵出的幼苗在幼苗池中养殖，待幼苗胴长合格后投放到养殖池中养殖。该方法可提高虎斑乌贼亲体的摄食率、利用率和机体免疫力，提高参与促进卵母细胞成熟因子基因的表达，并且降低了抑制卵母细胞成熟因子的表达，促进卵母细胞的成熟，增加产卵量，受精率以及孵化率，进而提高虎斑乌贼的繁殖力；能使受精卵粘连在一起，不易被水流冲散，提高受精卵的抑菌能力、受精卵质量和孵化率；所用附卵基具有良好的柔韧性、抗菌性、粘附性能和亲和性能，能够有效抑制细菌的生长，避免虎斑乌贼受伤并影响产卵，使得受精卵能够牢固地附着在附卵基上，提高受精卵的卵质量，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力；该培育方法能消除细菌、真菌、病毒等病原对卵的孵化率、畸形率的影响，提高受精卵的孵化率，降低分泌物的黏度，使得受精卵能够在培育池中均匀分散开来，有效提高孵化率。
消毒液的成分及其重量份为：聚维酮碘0.05份、次氯酸0.006份、EDTA 0.03份、右旋肉碱0.001份、蒸馏水1100份。该孵化强化液对细菌、真菌、病毒等病原均有良好杀灭效果，能消除细菌、真菌、病毒等病原对卵的孵化率、畸形率的影响，提高受精卵的孵化率，同时能破坏受精卵表面分泌物中的糖蛋白结构，使得寡糖链与蛋白质的共价键断裂，进而降低分泌物的黏度，使得受精卵能够在培育池中均匀分散开来，有效提高孵化率。
附卵基为网目25mm的聚乙烯网片。该附卵基不会造成乌贼受伤并影响产卵，可重复利用，在海水中耐长时间浸泡，不败坏水质，附卵效果佳，可以缩短产卵时间，雌雄交配后1min，雌性便开始将卵附于附卵基上，附着均匀牢固，提高产卵量，还可以避免虎斑乌贼的受精卵霉变或坏死，提高受精卵质量，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力。
附卵基的制备方法为：将重量比为100:3的聚乙烯和ε-聚赖氨酸于双棍混炼机上于158℃、350rpm下充分混炼8min，然后将共混好的复合材料放入模具，转移到平板硫化机上在163℃、8MPa下热压6min，然后室温下冷压，冷压完成后，从模具中取出，即得聚乙烯网片附卵基。该聚乙烯网片附卵基兼具聚乙烯和ε-聚赖氨酸的功能，具有优异的抗菌效果，能够有效抑制细菌的生长，并在较长时间内发挥良好的抗菌能力，不易被乌贼排泄物或墨汁污染，避免虎斑乌贼的受精卵霉变或坏死，提高受精卵的卵质量，协助提高虎斑乌贼繁殖能力，同时该ε-聚赖氨酸的加入不影响聚乙烯网片的力学性能，且对虎斑乌贼受精卵无不良影响。
上述ε-聚赖氨酸中含有0.03wt％的D-赖氨酸。反应体系中D-赖氨酸的存在能够将ε-聚赖氨酸在聚乙烯中充分分散开，增强ε-聚赖氨酸与聚乙烯的相容性和共混性，提高附卵基的使用性能和生物相容性，对虎斑乌贼受精卵无不良影响，能协助提高虎斑乌贼繁殖能力，同时能够和ε-聚赖氨酸相互配合，削弱聚乙烯之间的作用力，阻碍结晶结构的形成，降低聚乙烯的结晶度，使得附卵基具有良好的柔韧性，避免虎斑乌贼受伤并影响产卵，此外，D-赖氨酸的加入有助于提升附卵基的细胞粘附性能和亲和性能，使得受精卵能够牢固地附着在附卵基上，进而提高孵化率，最终提高虎斑乌贼繁殖能力。
亲体暂养的条件为：放养密度为2只/平方米，水温为24℃，海水盐度为30，流水刺激的流速为5m/min、时间为15min，日投饵2次，总的投喂量为亲体重量的0.6倍。
亲体暂养用饵料的成分及其重量份为：发酵豆粕18份、鱼粉20份、骨粉10份、糠虾粉15份、维生素A 0.002份、维生素E 0.002份、维生素C 0.002份、植物油7份、柠檬酸0.2份、植酸酶0.3份。微生物发酵过程中能够提高豆粕中粗脂肪、粗蛋白、氨基酸和磷的含量，并将大分子蛋白质分解成小分子蛋白质及活性肽，提高了虎斑乌贼对蛋白的消化利用率和机体免疫力，同时，豆粕中的部分抗营养因子被消除，增加豆粕中生物活性因子和抗菌能力，改善豆粕的适口性，此外，发酵豆粕中的鼠李糖乳杆菌可以提高参与促进卵母细胞成熟因子基因的表达，并且降低了抑制卵母细胞成熟因子的表达，促进卵母细胞的成熟，增加产卵量，受精率以及孵化率，进而提高虎斑乌贼的繁殖力，以及在宿主肠道内生产一些增强宿主消化的酶，如淀粉酶，蛋白酶和脂酶，促进宿主有机物质和蛋白质的消化率，还可以提供一些必需的生长因子，维生素或氨基酸，影响机体的能量代谢和能量平衡，因此，发酵豆粕能够提高虎斑乌贼的摄食率、利用率、机体免疫力和繁殖力。
人工孵化具体为：将受精卵放置于培育池中，卵粒密度为300只/立方米，控制培育池水温为25℃，海水盐度为28，水溶氧量≥6mg/L，孵化时间35d，每1m2放置一个散气石，每天换水量为60％，并及时清除死亡个体及残渣污垢，幼苗培育完成，带水出苗。
实施例2：
提高虎斑乌贼繁殖力的方法，将配组好的虎斑乌贼暂养在设有附卵基的室内培育池中，待虎斑乌贼亲体自然产卵后，收集受精卵，喷淋消毒液后进行人工孵化，将孵出的幼苗在幼苗池中养殖，待幼苗胴长合格后投放到养殖池中养殖。
消毒液的成分及其重量份为：聚维酮碘0.03份、次氯酸0.008份、EDTA 0.02份、右旋肉碱0.002份、蒸馏水1000份。
附卵基为网目27mm的聚乙烯网片。
附卵基的制备方法为：将重量比为100:1的聚乙烯和ε-聚赖氨酸于双棍混炼机上于160℃、300m下充分混炼10min，然后将共混好的复合材料放入模具，转移到平板硫化机上在160℃、10MPa下热压5min，然后室温下冷压，冷压完成后，从模具中取出，即得聚乙烯网片附卵基。
上述ε-聚赖氨酸中含有0.05wt％的D-赖氨酸。
亲体暂养的条件为：放养密度为1只/平方米，水温为24℃，海水盐度为30，流水刺激的流速为6m/min、时间为12min，日投饵3次，总的投喂量为亲体重量的0.5倍。
亲体暂养用饵料的成分及其重量份为：发酵豆粕22份、鱼粉15份、骨粉15份、糠虾粉10份、维生素A 0.003份、维生素E 0.0015份、维生素C 0.004份、植物油5份、柠檬酸0.3份、植酸酶0.2份。
人工孵化具体为：将受精卵放置于培育池中，卵粒密度为320只/立方米，控制培育池水温为24℃，海水盐度为30，水溶氧量≥6mg/L，孵化时间30d，每1.5m2放置一个散气石，每天换水量为55％，并及时清除死亡个体及残渣污垢，幼苗培育完成，带水出苗。
采用该实施例的具体方法对雌虎斑乌贼2000条，雄性曼式无针乌贼1000条进行亲体培育、人工繁殖、苗种培育，最后受精卵达到98.3％，孵化率达到94.2％，成活率达到93.5％。
实施例3：
提高虎斑乌贼繁殖力的方法，将配组好的虎斑乌贼暂养在设有附卵基的室内培育池中，待虎斑乌贼亲体自然产卵后，收集受精卵，喷淋消毒液后进行人工孵化，将孵出的幼苗在幼苗池中养殖，待幼苗胴长合格后投放到养殖池中养殖。
消毒液的成分及其重量份为：聚维酮碘0.02份、次氯酸0.01份、EDTA 0.01份、右旋肉碱0.003份、蒸馏水1000份。
附卵基为网目30mm的聚乙烯网片。
附卵基的制备方法为：将重量比为100:0.1的聚乙烯和ε-聚赖氨酸于双棍混炼机上于163℃、280rpm下充分混炼12min，然后将共混好的复合材料放入模具，转移到平板硫化机上在158℃、12MPa下热压4min，然后室温下冷压，冷压完成后，从模具中取出，即得聚乙烯网片附卵基。
上述ε-聚赖氨酸中含有0.06wt％的D-赖氨酸。
亲体暂养的条件为：放养密度为0.5只/平方米，水温为25℃，海水盐度为28，流水刺激的流速为8m/min、时间为10min，日投饵4次，总的投喂量为亲体重量的0.3倍。
亲体暂养用饵料的成分及其重量份为：发酵豆粕28份、鱼粉10份、骨粉20份、糠虾粉7份、维生素A 0.004份、维生素E 0.001份、维生素C 0.005份、植物油3份、柠檬酸0.4份、植酸酶0.1份。
人工孵化具体为：将受精卵放置于培育池中，卵粒密度为350只/立方米，控制培育池水温为24℃，海水盐度为30，水溶氧量≥6mg/L，孵化时间20d，每2m2放置一个散气石，每天换水量为50％，并及时清除死亡个体及残渣污垢，幼苗培育完成，带水出苗。
实施例4：
发酵豆粕的具体发酵步骤为：将豆粕研磨至100目，加水至含水量为50％，混合均匀后高压灭菌25min，冷却，接种量为4％接种鼠李糖乳杆菌，在38℃下发酵1.5d，冷冻干燥，粉碎过250目筛，即得发酵豆粕。
生育酚为鼠李糖乳杆菌重量的4.0％，半胱氨酸为鼠李糖乳杆菌重量的1.1％。生育酚和半胱氨酸的特殊存在一方面能为鼠李糖乳杆菌提供充足的碳源和氮源，促进乳酸菌的生长，延长鼠李糖乳杆菌的对数期，使得鼠李糖乳杆菌代谢出更多的有机酸、酶类、胞外多糖等代谢产物，改变豆粕内部的分子结构，使得豆粕具有更多的亲水基团，有利于豆粕被吸收利用；另一方面能被虎斑乌贼吸收利用，提高灰质和白质中FMRFamide的含量，然后使得缠卵腺和副缠卵腺中具有粘连卵串作用的分泌物产量增加，使受精卵粘连在一起，不易被水流冲散，提高孵化率，且能刺激雌性亲体的副缠卵腺管腔中能产抗生素的细菌大量繁殖，然后随分泌物附到卵的三级卵膜上，提高受精卵的抑菌能力，提高受精卵的孵化率；总之生育酚和半胱氨酸的特殊存在能够提高虎斑乌贼受精卵的孵化率。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.提高虎斑乌贼繁殖力的方法，其特征在于：将配组好的虎斑乌贼暂养在设有附卵基的室内培育池中，待虎斑乌贼亲体自然产卵后，收集受精卵，喷淋消毒液后进行人工孵化，将孵出的幼苗在幼苗池中养殖，待幼苗胴长合格后投放到养殖池中养殖；
所述附卵基的制备方法为：将重量比为100:0.1-3的聚乙烯和ε-聚赖氨酸于双棍混炼机上于158-163℃、280-350rpm下充分混炼8-12min，然后将共混好的复合材料放入模具，转移到平板硫化机上在158-163℃、8-12MPa下热压4-6min，然后室温下冷压，冷压完成后，从模具中取出，即得聚乙烯网片附卵基；
所述ε-聚赖氨酸中含有0.03-0.06wt％的D-赖氨酸；
所述亲体暂养用饵料的成分及其重量份为：发酵豆粕18-28份、鱼粉10-20份、骨粉10-20份、糠虾粉7-15份、维生素A0.002-0.004份、维生素E0.001-0.002份、维生素C0.002-0.005份、植物油3-7份、柠檬酸0.2-0.4份、植酸酶0.1-0.3份；
所述发酵豆粕中含有鼠李糖乳杆菌。
2.根据权利要求1所述的提高虎斑乌贼繁殖力的方法，其特征在于：所述消毒液的成分及其重量份为：聚维酮碘0.02-0.05份、次氯酸0.006-0.01份、EDTA0.01-0.03份、右旋肉碱0.001-0.003份、蒸馏水1000-1100份。
3.根据权利要求1所述的提高虎斑乌贼繁殖力的方法，其特征在于：所述附卵基为网目25-30mm的聚乙烯网片。
4.根据权利要求1所述的提高虎斑乌贼繁殖力的方法，其特征在于：所述亲体暂养的条件为：放养密度为0.5-2只/平方米，水温为24-25℃，海水盐度为28-30，流水刺激的流速为5-8m/min、时间为10-15min，日投饵2-4次，总的投喂量为亲体重量的0.3-0.6倍。
5.根据权利要求1所述的提高虎斑乌贼繁殖力的方法，其特征在于：所述人工孵化具体为：将受精卵放置于培育池中，卵粒密度为300-350只/立方米，控制培育池水温为24-25℃，海水盐度为28-30，水溶氧量≥6mg/L，孵化时间20-35d，每1-2m2放置一个散气石，每天换水量为50-60％，并及时清除死亡个体及残渣污垢，幼苗培育完成，带水出苗。
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