CN109406477A - 一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法 - Google Patents

一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109406477A
CN109406477A CN201811632964.2A CN201811632964A CN109406477A CN 109406477 A CN109406477 A CN 109406477A CN 201811632964 A CN201811632964 A CN 201811632964A CN 109406477 A CN109406477 A CN 109406477A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chain
reaction
preparation
detection
methylation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811632964.2A
Other languages
English (en)
Inventor
黄加栋
赵菡
赵一菡
刘素
王玉
瞿晓南
张儒峰
李莎莎
王业茹
孙文玉
张曼茹
江龙
赵崇政
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Jinan
Original Assignee
University of Jinan
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Jinan filed Critical University of Jinan
Priority to CN201811632964.2A priority Critical patent/CN109406477A/zh
Publication of CN109406477A publication Critical patent/CN109406477A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6402Atomic fluorescence; Laser induced fluorescence

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及生物传感器技术领域,特别涉及基于催化发夹自组装检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器,基于甲基化后的目标物与核酸探针特异性识别,利用催化发夹自组装不断形成三通路结构,同时循环放大Trigger,在三通路的末端,通过碱基互补配对结合含有荧光基团的Signal probe,最后利用了核酸内切酶IV的切割位点(AP位点),实现定位切割,释放荧光基团产生一定强度的荧光信号的生物传感器。该传感器具有检测速度快,检测限低,特异性高等优点,弥补了现有对DNA甲基化检测的不足,实现对甲基化的快速,准确的定量检测。

Description

一种检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备 方法
技术领域
本发明涉及生物传感器技术领域,特别涉及基于催化发夹自组装检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器,还涉及其制备方法。
背景技术
DNA甲基化在细胞增殖中起重要作用,衰老和基因转录。两种过度甲基化(超甲基化)和缺乏甲基化(低甲基化)已经在多种类型的癌症中被鉴定出来,例如乳腺癌,卵巢癌,和肺癌。在许多人中病例,异常的DNA甲基化模式已经存在与异常的DNA MTase活性相关,因此,DNA甲基化被公认为新一代癌症生物标志物和新的抗肿瘤治疗的药理学靶点。
目前已经开发了多种用于DNA MTase的方法测定,如放射性测定,高效液体色谱(HPLC)、种免疫化学方法和凝胶电泳。但是,大多数都需要放射性标记的基板,种复杂的仪器,和特殊抗体,费时费力操作。已经有了的新方法开发用于DNA MTase测定,例如比色法,荧光测定法,和生物发光测定法。但是,这些方法通常涉及繁琐的纳米粒子制备,双荧光团猝灭剂双标记,和长的分析时间。因为他们的独特优势低成本,快速响应和小型化,电化学方法已被广泛应用于DNA甲基化测定,但它们需要繁琐的表面改性电极。因此,一种灵敏度高且简单的简单方法对于DNA MTase测定是具有实际意义的。
发明内容
为了解决以上现有技术中检测DNA甲基转移酶活性的方法特异性和灵敏度都比较低、检测周期长的问题,本发明提供了一种特异性和灵敏度高、检测速度快的基于催化发夹组装放大的荧光法检测DNA甲基转移酶活性的生物传感器。
一种检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器,包括均相反应液、目标物、辅酶SAM、MTase链、限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链;
所述的均相反应液包括灭菌水、1×的Dam缓冲液;
所述的DNA链的序列如下:
MTase如SEQ No.1所示;
H1如SEQ No.2所示;
H2如SEQ No.3所示;
H3如SEQ No.4所示;
Signal probe如SEQ No.5所示;
所述的Signal probe序列 的5’端第三个碱基T上修饰饰猝灭基团Dabcyl,第五个碱基上修饰四氢呋喃碱基位点;3’端第5个碱基修饰荧光基团FAM。
所述的辅酶SAM为提供甲基化的辅酶。
所述的目标物为甲基转移酶Dam。
上述荧光生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
(1)将目标物即甲基转移酶Dam、Dam缓冲液、MTase链以及提供甲基化的辅酶SAM同时加入到均相反应液中,反应结束后得到甲基化产物;
(2)向步骤(1)的甲基化产物中加入限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链、1×cutsmart反应缓冲液,完成甲基化切割以及催化发夹自组装反应;
(3)将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
所述的步骤(1)中MTase链的加入量为0.5μM;SAM的加入量为160μM,Dam的加入量为10U。
所述的步骤(2)中甲基化产物、限制性内切酶Dpnl、1×cutsmart反应缓冲液、H1链、H2链、H3链、Signal probe的加入量比值为:5 μL:1μL:2μL:1μM:1μM:1μM:5μM;
所述的限制性内切酶Dpnl的浓度为20U/μL;所述的核酸内切酶的最终浓度为0.5U/μL。
所述的步骤(1)的反应条件为37℃,60 min。
所述的步骤(2)的反应条件为37℃,90 min。
本发明中一共用到了5条DNA链,其序列分别是:
MTase:GAAGGATCACTACTCCCTAACATCTCAAGGATCCTTC
H1:
GTGGATACGTTTCCTTGAGATGTTAGGGAGTAGTGATAACGTCACAACTCACTACTCCCTAACATCGATTAGC
H2:
GTGGATGATGTTAGGGAGTAGTGAGTTGTGACGTTAAACATCTCAAGGTAACGTCACAACTCACTAGATTAGC
H3:
GTGGATTAGTGAGTTGTGACGTTACCTTGAGATGTTTCACTACTCCCTAACATCTCAAGGTAACGTGATTAGC
Signal probe:5’-GCT(Dabcyl)AAxCAT(FAM)CCAC-3’
其中Signal probe 的5’端第三个碱基T上修饰饰猝灭基团Dabcyl,3’端第5个碱基修饰荧光基团FAM。MTase链含有特定的甲基化序列(GATC),在提供甲基化的辅酶SAM以及甲基转移酶DAM的作用下,MTase链甲基化,加入特异性甲基化内切酶Dpnl,会形成一条序列为TCACTACTCCCTAACATCTCAAGGA的Trigger,Trigger用于打开H1,继而打开H2,H3,在打开H3的同时挤下Trigger,Trigger用于进一步的催化发夹自组装。在形成好的三通路DNA构象上,加入Signal probe,Signal probe通过碱基互补配对形成双链,在核酸内切酶IV作用下,将Signal probe剪切成两部分,使得荧光基团(FAM)和猝灭集团(Dabcyl)分离,从而产生荧光信号。通过测量荧光强度来定量检测DNA甲基化。
本发明中DNA甲基转移酶的检测是在均相溶液中实现的,通过催化发夹自组装、核酸内切酶IV的配合实现信号的循环放大,从而实现DNA甲基化的高灵敏检测,并获得较低的检测下限。
均相中发生的反应主要有:MTase在提供甲基化的辅酶SAM以及甲基转移酶DAM的作用下进行甲基化,将在甲基化完成得到的MTase链中加入特异性甲基化内切酶Dpnl,会形成一条序列为TCACTACTCCCTAACATCTCAAGGA的Trigger,Trigger用于打开H1,继而打开H2,H3,在打开H3的同时挤下Trigger,Trigger用于进一步的催化发夹自组装。在形成好的三通路DNA构象上,加入Signal probe,Signal probe通过碱基互补配对形成双链,核酸内切酶IV能够剪切Signal probe中间的四氢呋喃碱基位点(TAP位点)使得Signal probe断裂分开,从而荧光基团(FAM)和猝灭集团(Dabcyl)分离,产生荧光信号。通过测量荧光强度来定量检测DNA甲基化。
本发明基于甲基化后的目标物与核酸探针特异性识别,利用催化发夹自组装不断形成三通路结构,同时循环放大Trigger,在三通路的末端,通过碱基互补配对结合含有荧光基团的Signal probe,最后利用了核酸内切酶IV的切割位点(AP位点),实现定位切割,释放荧光基团产生一定强度的荧光信号的生物传感器。该传感器具有检测速度快,检测限低,特异性高等优点,弥补了现有对DNA甲基化检测的不足,实现对甲基化的快速,准确的定量检测。
本发明的有益效果:
1. 特异性高
甲基化后的目标物与核酸探针特异性识别,具有高特异性;利用了核酸内切酶IV的切割位点(AP位点),实现定位切割,释放荧光基团的高特异性。
2. 灵敏度好
利用催化发夹自组装不断形成三通路结构,同时循环放大Trigger,具有放大信号的功能。该传感器的反应条件温和,反应速度快;由于使用荧光法,其检测方法操作简便、检测周期短;检测原理的主要过程均是在均相中实现的,提高了反应速度,降低了操作的复杂程度,实现了目标物的快速,简单,灵敏的检测。
3. 速度快、成本低
制备方法简单,性能稳定,荧光检测的重复性好,适用于与疾病相关的Dam检测和生物传感器产业化的实际应用;制作该生物传感器的工艺成本低,适用于产业化中价廉的要求。
附图说明
图1为该实验的原理图;
图2为实施例1检测结果图;
图3为实施例2检测结果图;
图4为实施例3检测结果图;
图5为实施例4检测结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1荧光强度随核酸内切酶IV浓度的变化
所述的荧光生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
a、将灭菌水,1×的Dam缓冲液(buffer),0.5μM MTase链和160μM的SAM,10U的Dam加入到预先准备好的灭菌的EP管中。在37℃下孵育60min。
b、向该EP管中加入a反应完成的目标物(5 μL)、加入1μLDpnl(20U/μL),1×cutsmart反应缓冲液2μL,H1 H2 H3各1μM,Signal probe取5μM, 1 μL核酸内切酶IV(浓度分别为0.1U/μL、0.2U/μL、0.3U/μL、0.5U/μL、0.8U/μL、1.0 U/μL)、37℃的恒温箱中孵育90min;
c、将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,用荧光仪在518nm处检测荧光。
荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
上述过程中用到的溶液的制备方法:
超纯水均需进行高温灭菌处理。具体方法是,将超纯水分别放置在锥形瓶中,然后用锡箔纸和报纸进行封口。在高压灭菌锅中在120℃的温度下灭菌20 min。
10×的缓冲液(buffer)是随聚合酶一起买来的,可直接使用。
结果见图2,从图中可以看出,随着核酸内切酶IV量的增加,实验得到的荧光强度不断增强,在酶量达到100Uml之后,荧光强度基本不变。说明酶修复循环所需核酸内切酶IV量为0.5U/μL。
实施例2 荧光强度随目标物浓度的变化
一种本发明所述荧光生物传感器的制备方法:
所述的荧光生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
a、 将灭菌水,1×的Dam缓冲液(buffer),0.5μM MTase链和160μM的SAM, Dam(0.005to 40 U/mL)加入到预先准备好的灭菌的EP管中。在37℃下孵育60min。
b、向该EP管中加入a反应完成的目标物(5 μL)、加入1μLDpnl(20U/μL),1×cutsmart反应缓冲液2μL,H1 H2 H3各1μM,Signal probe取5μM, 0.5U/μL核酸内切酶IV、37℃的恒温箱中孵育90min;
c、将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,用荧光仪在518nm处检测荧光。
荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
上述过程中用到的溶液的制备方法:
超纯水均需进行高温灭菌处理。具体方法是,将超纯水分别放置在锥形瓶中,然后用锡箔纸和报纸进行封口。在高压灭菌锅中在120℃的温度下灭菌20 min。
10×的缓冲液(buffer)是随聚合酶一起买来的,可直接使用。
结果见图3,从图中可以看出,随着目标物浓度的增加,实验得到的荧光强度不断增强,所作标准曲线,计算回归方程为F=880.42+185.68×LgC UDG (U/mL),相关系数为0.977。
实施例3荧光强度随H1 H2 H3链浓度的变化
所述的荧光生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
a、将灭菌水,1×的Dam缓冲液(buffer),0.5μM MTase链和160μM的SAM,10U的Dam加入到预先准备好的灭菌的EP管中。在37℃下孵育60min。
b、向该EP管中加入a反应完成的目标物(5 μL)、加入1μLDpnl(20U/μL),1×cutsmart反应缓冲液2μL,H1 H2 H3(浓度分别为10μM,1μM,0.5μM,0.1μM,0.01μM),Signalprobe取5μM, 0.5U/μL酸内切酶IV、37℃的恒温箱中孵育90min;
c、将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,用荧光仪在518nm处检测荧光。
荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
上述过程中用到的溶液的制备方法:
1、超纯水均需进行高温灭菌处理。具体方法是,将超纯水分别放置在锥形瓶中,然后用锡箔纸和报纸进行封口。在高压灭菌锅中在120℃的温度下灭菌20 min。
2、10×的缓冲液(buffer)是随聚合酶一起买来的,可直接使用。
结果见图4,从图中可以看出,随着H1、H2、H3浓度的增加,实验得到的荧光强度不断增强,在H1、H2、H3浓度达到1 μM之后,荧光强度基本不变。说明实验所需的H1、H2、H3链量为1μM。
实施例4荧光强度随反应时间的变化
所述的荧光生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
a、将灭菌水,1×的Dam缓冲液(buffer),0.5μM MTase链和160μM的SAM,10UDam浓度分别为加入到预先准备好的灭菌的EP管中。在37℃下孵育60min。
b、向该EP管中加入a反应完成的目标物(5 μL)、加入1μL Dpnl(20U/μL)、1×cutsmart反应缓冲液2μL,H1 H2 H3各1μM,Signal probe取5μM, 0.5U/μL核酸内切酶IV、37℃的恒温箱中孵育10 min、30 min、60 min、90 min、120 min、150 min;
c、将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,用荧光仪在518nm处检测荧光。
荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
上述过程中用到的溶液的制备方法:
1、超纯水均需进行高温灭菌处理。具体方法是,将超纯水分别放置在锥形瓶中,然后用锡箔纸和报纸进行封口。在高压灭菌锅中在120℃的温度下灭菌20 min。
2、10×的缓冲液(buffer)是随聚合酶一起买来的,可直接使用。
检测结果见图5,从图中可以看出,随着反应时间的增加,荧光强度不断增强,在反应时间达到90 min之后,荧光强度基本不变。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受实施例的限制,其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 济南大学
<120> 一种检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 1
gaaggatcac tactccctaa catctcaagg atccttc 37
<210> 2
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 2
gtggatacgt ttccttgaga tgttagggag tagtgataac gtcacaactc actactccct 60
aacatcgatt agc 73
<210> 3
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 3
gtggatgatg ttagggagta gtgagttgtg acgttaaaca tctcaaggta acgtcacaac 60
tcactagatt agc 73
<210> 4
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 4
gtggattagt gagttgtgac gttaccttga gatgtttcac tactccctaa catctcaagg 60
taacgtgatt agc 73
<210> 5
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 5
gctaacatcc ac 12

Claims (8)

1.一种检测DNA甲基转移酶活性的荧光生物传感器,其特征在于,包括均相反应液、目标物、辅酶SAM、MTase链、限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signalprobe链;
所述的均相反应液包括灭菌水、1×的Dam缓冲液;
所述的DNA链的序列如下:
MTase如SEQ No.1所示;
H1如SEQ No.2所示;
H2如SEQ No.3所示;
H3如SEQ No.4所示;
Signal probe如SEQ No.5所示;
所述的Signal probe序列 的5’端第三个碱基T上修饰饰猝灭基团Dabcyl,第五个碱基上修饰四氢呋喃碱基位点;3’端第5个碱基修饰荧光基团FAM。
2.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的辅酶SAM为提供甲基化的辅酶。
3.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的目标物为甲基转移酶Dam。
4.一种权利要求1所述的荧光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将目标物即甲基转移酶Dam、Dam缓冲液、MTase链以及提供甲基化的辅酶SAM同时加入到均相反应液中,反应结束后得到甲基化产物;
(2)向步骤(1)的甲基化产物中加入限制性内切酶Dpnl、H1链、H2链、H3链、核酸内切酶IV、Signal probe链、1×cutsmart反应缓冲液,完成甲基化切割以及催化发夹自组装反应;
(3)将b步反应后的溶液(10 μL)稀释至70 μL,荧光仪激发波长设置为486nm,发射波长为518nm,检测范围450nm-530nm,读取荧光信号变化,检测目标物。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)中MTase链的加入量为0.5μM;SAM的加入量为160μM,Dam的加入量为10U。
6. 根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)中甲基化产物、限制性内切酶Dpnl、1×cutsmart反应缓冲液、H1链、H2链、H3链、Signal probe的加入量比值为:5 μL:1μL:2μL:1μM:1μM:1μM:5μM;所述的限制性内切酶Dpnl的浓度为20U/μL;所述的核酸内切酶的最终浓度为0.5U/μL。
7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)的反应条件为37℃,60min。
8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)的反应条件为37℃,90min。
CN201811632964.2A 2018-12-29 2018-12-29 一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法 Pending CN109406477A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811632964.2A CN109406477A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811632964.2A CN109406477A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109406477A true CN109406477A (zh) 2019-03-01

Family

ID=65462074

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811632964.2A Pending CN109406477A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109406477A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111504966A (zh) * 2020-04-24 2020-08-07 济南大学 一种检测并降解氨苄青霉素的生物传感器及其制备方法与应用
CN112304913A (zh) * 2020-10-22 2021-02-02 济南大学 一种检测Hg2+荧光生物传感器及其制备方法与应用
CN112345507A (zh) * 2020-11-06 2021-02-09 济南大学 一种基于dna三棱柱结构构象变化靶向癌细胞的生物传感器
CN112852922A (zh) * 2021-01-14 2021-05-28 山东师范大学 一种检测dna甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1490517B1 (en) * 2002-03-11 2011-05-11 Simon Fraser University Dna conformational switches as sensitive electronic sensors of analytes
CN103710453A (zh) * 2013-12-30 2014-04-09 深圳先进技术研究院 一种基于化学发光反应的甲基化酶检测探针、检测试剂盒及检测方法
CN107760762A (zh) * 2017-09-30 2018-03-06 山东师范大学 一种检测dna腺嘌呤甲基转移酶的荧光化学传感器及其检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1490517B1 (en) * 2002-03-11 2011-05-11 Simon Fraser University Dna conformational switches as sensitive electronic sensors of analytes
CN103710453A (zh) * 2013-12-30 2014-04-09 深圳先进技术研究院 一种基于化学发光反应的甲基化酶检测探针、检测试剂盒及检测方法
CN107760762A (zh) * 2017-09-30 2018-03-06 山东师范大学 一种检测dna腺嘌呤甲基转移酶的荧光化学传感器及其检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KE YANG 等: "Hairpin DNA-fueled dynamic self-assembly of three-arm DNA branched junctions consisting of active DNAzyme structures for enzyme-free ultrasensitive detection of nucleic acids", 《ANALYTICAL METHODS》 *
XIANJIN XIAO 等: "Ultra-selective and sensitive DNA detection by a universal apurinic/apyrimidinic probe-based endonuclease IV signal amplification system", 《CHEM. COMMUN.》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111504966A (zh) * 2020-04-24 2020-08-07 济南大学 一种检测并降解氨苄青霉素的生物传感器及其制备方法与应用
CN112304913A (zh) * 2020-10-22 2021-02-02 济南大学 一种检测Hg2+荧光生物传感器及其制备方法与应用
CN112345507A (zh) * 2020-11-06 2021-02-09 济南大学 一种基于dna三棱柱结构构象变化靶向癌细胞的生物传感器
CN112345507B (zh) * 2020-11-06 2022-07-05 济南大学 一种基于dna三棱柱结构构象变化靶向癌细胞的生物传感器
CN112852922A (zh) * 2021-01-14 2021-05-28 山东师范大学 一种检测dna甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用
CN112852922B (zh) * 2021-01-14 2022-12-27 山东师范大学 一种检测dna甲基化的荧光生物传感器、检测方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhang et al. CRISPR/Cas12a-mediated interfacial cleaving of hairpin DNA reporter for electrochemical nucleic acid sensing
CN109406477A (zh) 一种检测dna甲基转移酶活性的荧光生物传感器及其制备方法
Deng et al. Quantum dots-labeled strip biosensor for rapid and sensitive detection of microRNA based on target-recycled nonenzymatic amplification strategy
CN103913443B (zh) 一种基于DNA-银纳米簇(DNA-Ag NCs)适体传感器的用途以及检测方法
Zhang et al. A novel electrochemical cytosensor for selective and highly sensitive detection of cancer cells using binding-induced dual catalytic hairpin assembly
CN104312914B (zh) 一种基于纳米孔结构的蛋白质分子电子器件
CN104630363A (zh) 一种基于免标记无酶dna机器荧光放大策略检测尿嘧啶-dna糖基化酶活性的方法
CN105806912A (zh) 基于纳米孔道和电化学传感定量检测端粒酶活性的方法
CN105647788A (zh) 用于核酸检测的sers传感器及其制备和多元检测方法
CN108192948A (zh) 一种利用α-溶血素纳米孔检测DNA糖基化酶活性的方法
CN105136882B (zh) 基于dna模拟酶诱导苯胺聚合的电化学检测dna甲基转移酶活性的检测方法
CN109439735A (zh) 一种脱碱基核酸内切酶1的荧光检测探针、试剂盒及应用
CN104894222A (zh) 一种基于荧光铜纳米颗粒免标检测t4多聚核苷酸激酶/磷酸酶及其抑制剂的新方法
CN105525010A (zh) 一种茎环结构组合探针及其应用
Yin et al. Electrochemical biosensor for hydroxymethylated DNA detection and β-glucosyltransferase activity assay based on enzymatic catalysis triggering signal amplification
Li et al. Electrophoresis separation assisted G-quadruplex DNAzyme-based chemiluminescence signal amplification strategy on a microchip platform for highly sensitive detection of microRNA
Wang et al. Primer dephosphorylation-initiated circular exponential amplification for ultrasensitive detection of alkaline phosphatase
Wang et al. Target-mediated hyperbranched amplification for sensitive detection of human alkyladenine DNA glycosylase from HeLa cells
CN109613095A (zh) 基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用
Yan et al. A Simple and Highly Sensitive Electrochemical Biosensor for microRNA Detection Using Target‐Assisted Isothermal Exponential Amplification Reaction
CN109251960A (zh) 基于碱基切除修复诱导的检测Dam甲基转移酶活性方法
CN109097446A (zh) 一种检测miRNA的方法及试剂盒
Shuofeng et al. Sensitive detection of microRNA based on high-fidelity CRISPR/Cas13a trans cleavage activity coupled with template-free DNA extension-induced strongly emitting copper nanoparticles
Zhu et al. Electrochemical determination of flap endonuclease 1 activity amplified by CRISPR/Cas12a trans‐cleavage
Hu et al. G-quadruplex-deficient precursor hairpin probes for ultra-low background dual-mode detection of miRNAs

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination