CN109369754A - 硝酸酯类化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了硝酸酯类化合物及其应用。对正常SD小鼠进行分组对照试验，分别研究硝酸酯类化合物对苯肾上腺素/氯化钾引起的血管收缩功能的影响，同时与现有的单硝酸异山梨酯和硝酸异山梨酯对苯肾上腺素/氯化钾引起的血管收缩功能的影响进行对比，发现3,6‑脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物对苯肾上腺素/氯化钾引起的血管收缩有抑制作用，且部分化合物的血管舒张率远高于单硝酸异山梨酯和硝酸异山梨酯，具有较好的血管舒张作用。本发明能有效释放NO，随着时间的延长，释放量增加。本发明可应用于制备治疗或预防脑血管疾病、心绞痛、心血管疾病、男性性功能障碍、血管性痴呆、血管性头痛、血管性耳鸣、内耳眩晕症、急性青光眼或缺氧性肺动脉高压药物。

Description

硝酸酯类化合物及其应用
技术领域
本发明涉及硝酸酯类化合物及其应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
血管收缩在临床上表现为引起高血压、血栓的形成、心绞痛的发生、导致水钠潴留以及一系列的损伤心、脑、肾等重要人体器官相关病变，而尤为突出的是心脑血管疾病的发生，并且男性性功能障碍、血管性痴呆、血管性头痛、血管性耳鸣和内耳眩晕症等疾病的发生发展也与血管收缩密切相关。
目前心脑血管疾病是当今世界上威胁全球人类健康与生命的头号杀手，其发病率和死率已超过肿瘤性疾病而跃居世界第一。男性性功能障碍是一种较为严重的男科疾病，这一疾病会影响到患者的正常生活，甚至是心理健康。血管性痴呆是一种因缺血性或出血性脑卒中而造成认知、记忆和行为等认知功能障碍的综合征，它是老年性痴呆的一个重要类型作为目前的研究热点,血管性痴呆的治疗也越来越受研究者的重视。血管性头痛、血管性耳鸣和内耳眩晕症也是困扰人们的多发疾病。而血管收缩是诱发以上心脑血管疾病及其并发疾病的主要原因之一。因此研究开发血管收缩抑制剂是当今药物研究的热点领域之一。
硝酸酯类药物对血管的舒张可以减轻心肌负荷，降低氧耗，对心肌缺血有保护作用。一般认为，硝酸酯作为NO供体，能激活鸟苷酸环化酶(Gc)或开放血管平滑肌上的钾通道，降低细胞内的钙离子浓度，使细胞发生超极化而舒张血管。硝酸酯类药物在临床上被广泛的运用对心绞痛、高血压、脑卒中等心脑血管疾病的治疗当中。
2014年王国才等人从龙脷叶中提取了系列具有3,6-脱水呋喃己糖结构的天然产物。(C.H.Wang,W.Li,H.L.Liu,J.Wang,G.Q.Li,G.C.Wang
and Y.L.Li,Carbohydr.Res.,2014,384,99.)随后谢唯佳等人完成了这类天然产物的首次全合成并将其命名为sauropunol A-D。(L.Liu,C.Q.Wang,D.Liu,W.G.He,J.Y.Xu,A.J.Lin,H.Q.Yao,G.Tanabe,O.Muraoka,W.J.Xie and X.M.Wu,Org.Lett.,2014,16,5004；C.Zhang,C.Wang,Z.Wang,G.Tanabe,O.Muraoka,A.Lin,J.Xu,X.Wu,L.Wu and W.Xie)具体结构如下：
由于天然产物sauropunol A-D与已上市的硝酸之类抗心绞痛药物硝酸异山梨酯(ISDN)以及单硝酸异山梨酯(ISMN)较为类似，因而基于天然产物sauropunol A-D的结构设计合成了系列硝酸酯衍生物并对其在血管扩张方面的生物活性进行了研究。
发明内容
本发明提供了新型的硝酸酯类化合物，并提供了新型硝酸酯类化合物的应用。
本发明为了实现上述目的，采用以下技术方案：
硝酸酯类化合物，所述硝酸酯类化合物为3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物。
优选地，所述3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物的化学通式如下：
其中，R1为甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、烯丙基、苄基、异丙基或仲丁基中的一种，R2为氢、羟基、烃氧基、烯丙氧基、苄氧基、2-硝基苄氧基、3-硝基苄氧基、4-硝基苄氧基、4-甲氧基苄氧基、2-硝基-4-甲氧基苄氧基或3-硝基-4-甲氧基苄氧基中的一种，R3为氢、羟基、烃氧基、烯丙氧基、苄氧基、2-硝基苄氧基、3-硝基苄氧基、4-硝基苄氧基、4-甲氧基苄氧基、2-硝基-4-甲氧基苄氧基或3-硝基-4-甲氧基苄氧基中的一种。
如权利要求1或2所述的硝酸酯类化合物在制备抑制血管收缩药物中的应用。
如权利要求1或2所述的硝酸酯类化合物在制备通过扩张血管治疗疾病药物中的应用。
如权利要求1或2所述的硝酸酯类化合物在制备治疗或预防脑血管疾病、心绞痛、心血管疾病、男性性功能障碍、血管性痴呆、血管性头痛、血管性耳鸣、内耳眩晕症、急性青光眼或缺氧性肺动脉高压药物中的应用。本发明包括但不仅限于在上述疾病治疗或预防药物制备中的应用。
有益效果：本发明提供了新型的硝酸酯类化合物，并提供了新型硝酸酯类化合物的应用，对肾上腺素/氯化钾引起的血管收缩功能具有较好的血管舒张作用，能有效释放NO，并随着时间的延长，释放量增加，可应用于制备抑制血管收缩药物、通过扩张血管治疗疾病药物以及制备治疗或预防脑血管疾病、心绞痛、心血管疾病、男性性功能障碍、血管性痴呆、血管性头痛、血管性耳鸣、内耳眩晕症、急性青光眼或缺氧性肺动脉高压药物。
附图说明
图1为实施例3中化合物绘制的亚硝酸钠标准曲线图；
图2为化合物(1)～(15)，(28)，(29)的NO体外释放量对比图；
图3为化合物(16)～(29)的NO体外释放量对比图。
图4为硝酸酯类化合物(NO.17)对血管性痴呆模型大鼠颞叶皮层血流量的影响。
图5为硝酸酯类化合物对急性青光眼模型新西兰兔眼内压的影响。
图6为硝酸酯类化合物(NO.17)对大鼠大脑中动脉的舒张作用(舒张比％)。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
通式1-5所示的3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物类化合物包括以下结构：
硝酸酯类化合物(3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物)具有抑制血管收缩的作用。同时硝酸酯类化合物(3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物)具有扩张血管的作用。
本发明中公开了一系列3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物，包括式(1)～式(27)，并在对其药理研究过程中发现3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物在扩张血管以及相关疾病治疗方面(有些疾病不一定是血管收缩引起，但是可以通过扩张血管来治疗)有较好的疗效，在抑制血管收缩中具有很好的应用前景。为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1：硝酸酯类化合物对苯肾上腺素引起的血管收缩功能的影响
试剂配制：硝酸酯类化合物式(1)～式(27)并对其进行作相应的编号NO.1～NO.27，单硝酸异山梨酯和硝酸异山梨酯，分别编号为NO.28和NO.29，均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
对照组：采用DMSO作为溶剂对照组。
实验样本：体重为200～300g的雄性SD大鼠。
实验仪器：PowerLab离体组织灌流系统，AD Instruments公司产品。
实验方法：正常SD雄性大鼠用2.5％戊巴比妥钠麻醉，打开腹腔迅速分离肠系膜动脉，剪成3-4mm的血管环，水平悬挂于20ml浴槽内，浴槽中为37℃恒温，充以95％O2+5％CO2混合气体的Kreb's-Henseleit液。
给予初始张力0.5g并平衡1h后，分别加入1μM苯肾上腺素使血管预收缩，待血管收缩达到平衡后，加入配置好的试剂(NO.1～NO.29)或者DMSO，观察血管对药物的张力反应，其中，剂量设置为：初筛时化合物终浓度设为30μM。选出血管舒张百分率达到30％以上(不包括30％)的硝酸酯类化合物，进行量效关系实验，其中，硝酸酯类化合物累积终浓度为:1μM、3μM、10μM、30μM。每次加药体积为12μL，溶剂对照组每次加入DMSO的体积为12μL。
观察指标：观察大鼠肠系膜动脉在加药前后血管舒缩反应，数据均采用血管环张力变化反映药物作用，以1μM苯肾上腺素诱发的收缩幅度作为100％，以各浓度药物的舒张百分率来反映药物对血管的影响，舒张率越高则表示药物对血管的舒张作用越强。
1.1初筛结果
表1所示为化合物(编号NO.1～NO.29)对苯肾上腺素诱导血管收缩的舒张作用的活性筛选，由表1可以看出，编号为NO.1～NO.27的化合物编号对苯肾上腺素诱导的血管收缩均具有血管舒张作用，其中除了编号NO.5的化合物，其他化合物的血管舒张率均高于单硝酸异山梨酯(NO.28)的血管舒张率(8％)，且编号为NO.1、NO.3、NO.8、NO.9、NO.13、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.24、NO.26、NO.27的化合物的血管舒张率均高于硝酸异山梨酯(NO.29)的血管舒张率(30％)。
表1.化合物对苯肾上腺素诱导血管收缩的舒张作用的活性筛选
1.2化合物对苯肾上腺素诱导血管收缩的舒张作用的量效关系
由表1可得，化合物编号为NO.1、NO.3、NO.8、NO.9、NO.13、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.24、NO.26、NO.27对苯肾上腺素诱导血管收缩的舒张作用大于30％(血管舒张率)，继续进行量效关系研究。根据量效关系采用半对数直线回归计算化合物(NO.1、NO.3、NO.8、NO.9、NO.13、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.24、NO.26、NO.27)对苯肾上腺素诱导血管收缩的舒张作用的IC50，IC50值越低说明生物活性越强，由此可见化合物NO.17和NO.18具有最强的血管扩张能力，结果见表2。
表2.化合物对苯肾上腺素诱导血管收缩的IC50
实施例2：硝酸酯类化合物对氯化钾引起的血管收缩功能的影响
试剂配制：对硝酸酯类化合物式(1)～式(27)进行作相应的编号NO.1～NO.27，单硝酸异山梨酯和硝酸异山梨酯，分别编号为NO.28和NO.29，均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
对照组：采用DMSO作为溶剂对照组；
实验样本：体重为200～300g的雄性SD大鼠；
实验仪器：PowerLab离体组织灌流系统，AD Instruments公司产品；
实验方法：正常SD雄性大鼠用2.5％戊巴比妥钠麻醉，打开腹腔迅速分离肠系膜动脉，剪成3-4mm的血管环，水平悬挂于20ml浴槽内，浴槽中为37℃恒温，充以95％O2+5％CO2混合气体的Kreb's-Henseleit液。
给予初始张力0.5g并平衡1h后，分别加入60mM氯化钾使血管预收缩，待血管收缩达到平衡后，加入配置好的试剂(NO.1～NO.29)或者溶剂对照组DMSO，观察血管对药物的张力反应。其中，剂量设置为：初筛时化合物终浓度设为30μM。选出血管舒张百分率达到30％以上(不包括30％)的硝酸酯类化合物，进行量效关系实验，其中，硝酸酯类化合物累积终浓度为:1μM、3μM、10μM、30μM，每次加药体积为12μL，溶剂对照组每次加入DMSO的体积为12μL。
观察指标：观察大鼠肠系膜动脉在加药前后血管舒缩反应，数据均采用血管环张力变化反映药物作用，以60mM氯化钾诱发的收缩幅度作为100％，以各浓度药物的舒张百分率来反映药物对血管的影响，舒张率越高则表示药物对血管的舒张作用越强。
2.1初筛结果
如表3所示为化合物(编号NO.1～NO.29)对氯化钾诱导血管收缩的舒张作用的活性筛选，由表3可以看出，编号为NO.1～NO.27的化合物编号对氯化钾(KCl)诱导的血管收缩均具有血管舒张作用，其中除了编号NO.5和NO.10的化合物，其他化合物的血管舒张率均高于单硝酸异山梨酯的血管舒张率(3％)，且编号为NO.1、NO.9、NO.11、NO.12、NO.13、NO.14、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.20、NO.21、NO.23、NO.24、NO.25、NO.26、NO.27的化合物的血管舒张率均高于硝酸异山梨酯的血管舒张率(20％)。
表3.化合物对KCl诱导血管收缩的舒张作用的活性筛选
2.2、化合物对KCl诱导血管收缩的舒张作用的量效关系
由表3可得，化合物编号为NO.11、NO.12、NO.13、NO.14、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.24、NO.26、NO.27对KCl诱导血管收缩的舒张作用大于30％，继续进行量效关系研究。根据量效关系采用半对数直线回归计算化合物(编号为NO.11、NO.12、NO.13、NO.14、NO.15)对KCl诱导血管收缩的舒张作用的IC50，由此可见化合物NO.17具有最强的血管扩张能力，结果见表4。
表4.化合物对KCl诱导血管收缩的IC50
结论：综合实施例1和2可知，硝酸类化合物NO.1～NO.27对对苯肾上腺素或KCl诱导的血管收缩都具有一定的舒张作用，其中，编号为NO.11、NO.12、NO.13、NO.14、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.24、NO.26、NO.27的化合物的对苯肾上腺素诱导的血管收缩的血管舒张率均高于硝酸异山梨酯的血管舒张率(30％)，编号为NO.1、NO.9、NO.11、NO.12、NO.13、NO.14、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.20、NO.21、NO.23、NO.24、NO.25、NO.26、NO.27的化合物对KCl诱导的血管收缩的血管舒张率均高于硝酸异山梨酯的血管舒张率(20％)。尤其，硝酸酯类化合NO.13、NO.15、NO.17、NO.18、NO.19、NO.24、NO.26、NO.27对苯肾上腺素或KCl诱导的血管收缩均具有良好的舒张作用，在抑制血管收缩方面具有良好的应用前景。
实施例3：硝酸酯类化合物体外NO释放量测定
3.1Griess法测定原理
亚硝酸盐(NO2 -)为NO稳定的终末代谢产物，测定NO2 -的含量可间接地反映NO的产生量。在酸性条件下，NO与重氮盐磺胺发生重氮反应，并生成重氮化合物，后者进一步与萘基乙烯基二胺发生耦合反应，该反应生成的产物浓度与NO浓度具有线性关系，在540nm处有最大吸收峰。
3.2仪器与试剂
仪器：分析天平；HH-4恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；华东电子DG5033A酶标仪(南京华东电子集团医疗装备有限责任公司)。
试剂、规格及产地：磺胺，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；萘乙二胺盐酸盐，分析纯，萨恩化学技术(上海)有限公司；亚硝酸钠，分析纯，西陇化工股份有限公司；L-半胱氨酸，分析纯，萨恩化学技术(上海)有限公司；PBS缓冲液，分析纯，南京银河生物医药有限公司；二甲基亚砜，分析纯，上海泰坦股份有限公司；硝酸异山梨酯，标准品，北京中科盈创生物科技有限公司；单硝酸异山梨酯，标准品，北京中科盈创生物科技有限公司。
3.3实验方法
3.3.1溶液的配制
格里斯(Griess)试剂的配制：称取磺胺2g，萘乙二胺盐酸盐100mg，加85％磷酸5mL,用去离子水稀释至45mL，于暗处放置，备用；
过量L-半胱氨酸的PBS溶液的配制：称取L-半胱氨酸120mg，用PBS(pH7.4)溶解并稀释至200mL，即得含有过量L-半胱氨酸(5mmol)的磷酸盐缓冲溶液，备用；
亚硝酸钠标准储备液的配制：精密称取干燥的亚硝酸钠(110℃烘干1h)0.15g,置于100mL容量瓶中，用适量去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀。从中精密量取0.1mL至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得1.5mg/L亚硝酸钠标准储备溶液，备用；
供试品溶液的配制：对硝酸酯类化合物式(1)～式(27)进行作相应的编号NO.1～NO.27，单硝酸异山梨酯和硝酸异山梨酯，分别编号为NO.28和NO.29，精密称取上述化合物(编号NO.1～NO.29)各0.01mmol,且均分别采用1mL二甲基亚砜溶解，摇匀，即得浓度为0.01mol/L的供试品溶液(编号NO.1～NO.29)，备用；
3.3.2标准曲线的绘制
精密量取亚硝酸钠标准储备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL,分别置于6个10mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，配制成浓度分别为0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mg/L的亚硝酸钠系列标准工作液。精密量取上述亚销酸钠系列标准工作溶液150μL，置于96孔板中，精密加入格里斯试剂50μL充分混匀，室温放置10min，于542nm处测定其吸收度。根据所得数据绘制标准曲线，以吸光度值对亚硝酸钠标准工作溶液浓度进行回归计算，得到回归方程y＝17.212x+0.0148(R2＝0.9962)。
3.3.3体外NO释放量测定
实验组：精密量取供试品溶液0.1mL，用含有过量的L-半胱氨酸(5mmol/L)的磷酸盐缓冲溶液稀释至10mL,摇匀，使各供试品溶液的最终浓度为0.1mmol/L,将供试品溶液置于37℃环境中孵化，于0、4、8、12、16、20、24、28、32h等不同时间点精密吸取反应液200μL,0-4℃冰箱放置。
空白组：精密量取二甲基亚砜溶液0.1mL，用含有过量的L-半胱氨酸(5mmol/L)的磷酸盐缓冲溶液稀释至10mL，摇匀，置于37℃环境中孵化,于0、4、8、12、16、20、24、28、32h等不同时间点精密吸取反应液200μL，0-4℃冰箱放置。
取各时间点实验组的供试品溶液和空白组的空白溶液150μL，加入50μL格里斯(Griess)试剂，混匀，室温放置10min后于540nm处测定吸收度。根据已获得的标准曲线，求算出各供试品溶液在不同时间点的NO2 -浓度，从而间接反映各供试品(化合物NO.1～NO.29)在不同时间点的NO释放情况。如图2、图3所示为各供试品溶液(编号NO.1～NO.29)不同时间与NO浓度间的关系图(由于供试品数量多，故曲线分别放在图2、图3)。
结果表明，本发明中大多数硝酸酯类化合物能有效释放NO，随着时间的延长，释放量增加。
构效关系总结如下：
a)1位取代基相同时，2,5-双取代硝酸酯>2-取代硝酸酯>5-取代硝酸酯；
b)2-取代硝酸酯衍生物中，对于端基异构体,β-构型衍生物>α-构型衍生物；
c)5-取代硝酸酯衍生物中，对于端基异构体,α-构型衍生物>β-构型衍生物；
d)2,5-双取代硝酸酯中，1位取代基位阻越小，活性越大。
实施例4：硝酸酯类化合物(NO.17)对血管性痴呆模型大鼠颞叶皮层血流量的影响。
试剂配制：硝酸酯类化合物(NO.17)、单硝酸异山梨酯(NO.28)均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
实验样本:正常雄性SD大鼠和血管性痴呆模型雄性SD大鼠，体重200～300g,按照SPF大鼠饲养要求进行饲养。随机分为7组：分别为空白组(9只)、模型组(11只)、硝酸酯类化合物(NO.17)6.25mg/kg剂量组(9只)、硝酸酯类化合物(NO.17)12.5mg/kg剂量组(8只)、硝酸酯类化合物(NO.17)25mg/kg剂量组(11只)、单硝酸异山梨酯(NO.28)25mg/kg剂量组(12只)。
实验方法:SD大鼠在双侧颈总动脉结扎造模后，将配制好的试剂(NO.17、NO.28)对SD大鼠尾静脉给药，每天2次，连续7天，在造模后1、14、28、42天使用激光多普勒血流仪检测大鼠颞叶皮层血流值。检测方法如下：使用2.5％戊巴比妥钠麻醉将大鼠麻醉，沿大鼠头部正中切口，充分暴露右侧顶骨，在大鼠前囟旁开5mm，后2mm点处用颅钻钻直径为1mm小凹槽，使用激光多普勒血流仪测量该点血流值，即为颞叶血流值。测量后将皮层缝合，伤口处擦拭碘酊，将大鼠放回笼中。如图4所示，硝酸酯类化合物(NO.17)对正常雄性SD大鼠脑血流量影响较小，正常雄性SD大鼠脑血流量轻微升高，但是对血管痴呆模型大鼠的脑血流量影响较大，能够显著增加血管痴呆模型大鼠的脑血流量。且在14d的给药时间内，相同给药计量的硝酸酯类化合物(NO.17)比单硝酸异山梨酯(NO.28)影响更为显著。
实施例5：硝酸酯类化合物(NO.17)对短暂性青光眼新西兰兔眼压的影响。
试剂配制：硝酸酯类化合物(编号NO.17)、单硝酸异山梨酯(编号为NO.28)均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
实验样本：雄性新西兰兔，体重范围为1.5～2kg。实验分为3组，模型组，硝酸酯类化合物NO.17组(5.5mg/kg)、单硝酸异山梨酯NO.28(5.5mg/kg)，每组4只新西兰兔。
实验方法：采用新西兰兔玻璃体注射高渗生理盐水(5％,0.1ml)诱导新西兰兔短暂性青光眼模型，注射高渗生理盐水前测试新西兰兔的眼压(0min)，注射高渗生理盐水后立即测压眼压(1min)，剔除眼压低于70mmHg新西兰兔，确定模型成功后，立即静脉注射给药。然后在10min、30min、60min、90min、120min、150min和180min测试眼压，各个时间点测3次，平均值为该点眼压。
实验结论：如图5所示，硝酸酯类化合物(NO.17)和单硝酸异山梨酯(编号为NO.28)均能降低新西兰兔急性青光眼模型的眼内压，且硝酸酯类化合物(NO.17)的效果优于单硝酸异山梨酯(编号为NO.28)。
实施例6：硝酸酯类化合物(NO.17)对缺氧性肺动脉高压模型大鼠的影响
试剂配制：硝酸酯类化合物(编号NO.17)、单硝酸异山梨酯(编号为NO.28)均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
实验样本：正常雄性SD大鼠，体重300-350g，随机平均分为三组，分别为A组(常氧对照组)：在常氧状态下(吸入21％±1.5％氮氧混合气)饲养3周；B组(慢性缺氧组)：置缺氧仓内，保持仓内氧浓度为9％±1.5％，每天持续缺氧8h，每周6d，共3周；C组(硝酸酯类化合物NO.17，2.5mg/kg):慢性缺氧过程中，每天于缺氧前经胃管灌饲给药。D组(单硝酸异山梨酯NO.28，2.5mg/kg):慢性缺氧过程中，每天于缺氧前经胃管灌饲给药。
实验过程：大鼠经2.5％戊巴比妥钠麻醉后，行气管切开插管，接动物人工呼吸机，呼吸频率90次/min,潮气量4-6mL；选择右侧颈外静脉穿刺插管，经上腔静脉、右心房、右心室到肺动脉，接生理多导仪，根据生理多导仪上显示的压力波形判断导管所在的位置，分别记录试验过程中第5、10、30和60min时的肺动脉压，取其平均值代表mPAP。手术完毕后，进行心脏穿刺，抽血4mL，分别测定血浆ET-1和血清NO水平。如表5所示为各组大鼠mPAP、血浆ET-1及血清NO水平。
表5各组大鼠mPAP、血浆ET-1及血清NO水平
由表5可知，硝酸酯类化合物NO.17能降低肺动脉平均压及肺血管阻力，此类药起效快，作用消失快，而对体循环影响较小。且长期应用硝酸酯类化合物NO.17可明显降低缺氧所致的肺动脉高压，这是由于硝酸酯类在体内可释放NO而发挥扩血管作用所致。因此，持续性应用硝酸酯类化合物NO.17可显著降低慢性缺氧所致的肺动脉高压，同时，还可明显抑制ET-1的生成及提高血清NO水平，此外硝酸酯类化合物NO.17的效果要比单硝酸异山梨酯NO.28显著。
实施例7：硝酸酯类化合物(NO.17)对心肌缺血致心绞痛模型大鼠的影响。
试剂配制：硝酸酯类化合物(编号NO.17)、单硝酸异山梨酯(编号为NO.28)均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
实验样本：正常雄性SD大鼠，体重200～300g，将大鼠适应性喂养一周后随机分为6组，包括空白组、模型组、硝酸酯类化合物(NO.17)6.25mg/kg剂量组、硝酸酯类化合物(NO.17)12.5mg/kg剂量组、硝酸酯类化合物(NO.17)25mg/kg剂量组、单硝酸异山梨酯(NO.28)25mg/kg剂量组，每组各10只。
造模：灌药前依据体重按10ml/kg计算灌胃量，每日灌胃一次，连续14d，空白组和模型组用等体积DMSO灌胃，第15日各组最后一次灌胃30min后，先将大鼠用2.5％戊巴比妥钠麻醉将大鼠麻醉，仰卧固定在鼠板上，将多道生理记录仪的针状电机分别插入皮下，先连续观察并记录一段Ⅱ导联心电图，然后模型组及给药组分别舌下静脉注射垂体后叶素(pit)0.6μ/kg,空白组舌下静脉注射等计量DMSO溶液，造模后继续监测Ⅱ导联心电图变化。30min后从颈动脉采血4ml，检测各项指标。
观测指标如下：
心电图指标：对心肌缺血的观察指标主要为ST段的变化，取注射后15s,40s,2min,5min,4个时点，取其平均值，记录并计算ST段的变化值(绝对值)。
NO检测：用硝酸还原酶法测定。
ET测定：采用放免法测定。
当模型组注射垂体后叶素后立即至15秒内，ST段抬高≥0.1mv时，即造模成功。
实验方法：从颈动脉采血4ml，将其均分为两份，其中2mL迅速加入含有抑肽酶20μL、10％EDTA二钠15μL的试管中，4℃，3000rpm离心10min，分离出血浆并编号，加盖存于-20℃冰箱中待测。测定前，将样本在室温中复融，再次4℃，3000rpm离心5min，取上清液测定ET。另2mL迅速加入试管中，4℃，3000rpm离心10min，分离出血浆并编号，加盖存于-20℃冰箱中待测。测定前，将样本在室温中复融，再次4℃，3000rpm离心5min，取上清液测其NO。如表6所示，为各组大鼠心电图的变化结果：
表6各组大鼠心电图ST段的变化(mv)
其中，*为P＜0.05(模型组与空白组)；Δ为P＜0.05，ΔΔ为P＜0.01(各给药组与模型组比较)；▲为＞0.05(NO.17与NO.28比较)。
由表6可以看出，造模后15S模型组ST段抬高≥0.1mv，与空白组比较有统计学意义(P＜0.05)，即造模成功。且造模后15s，硝酸酯类化合物NO.17各剂量组和NO.28对照组与模型组比较有统计学意义(P＜0.05)；造模后40s、2min、5min，硝酸酯类化合物NO.17各剂量组和NO.28对照组与模型组比较有统计学意义(P＜0.01)。硝酸酯类化合物NO.17各剂量组与NO.28对照组比较无统计学意义(P＞0.05)。
如表7所示,为各组大鼠ET、NO变化结果：
表7各组大鼠ET、NO的变化
一氧化氮(NO)是一种内皮依赖性松弛因子(EDRF)，NO减少是血管痉挛及血栓形成的重要因素。因心肌缺血导致的心绞痛的患者水血浆NO水平显著降低，且其降低程度与临床病情严重程度相一致，因此血清NO水平对因心肌缺血导致的心绞痛的患者具有较大影响。内皮素(ET)主要内源于血管内皮，是最强的缩血管物质，在调节冠脉血流量中起着重要作用，因此ET含量过大，会促进血管平滑肌的收缩与增殖，加重因心肌缺血导致的心绞痛的患者的病情。如表7所示，与模型组和空白组相比，硝酸酯类化合物N0.17能够有效地控制血清中内皮素(ET)的含量，减少其对血管平滑肌的收缩影响，同时又能够显著地增加血清NO水平，使其能够促进血管平滑肌的舒张，缓解心肌缺血症状，由此可以看出，硝酸酯类化合物N0.17对NO的分泌起促进作用，对ET的释放起抑制作用，从而调节血管的收缩与舒张。与单硝酸异山梨酯(NO.28)相比，相同计量的硝酸酯类化合物N0.17，其ET含量和NO含量指标均优于单硝酸异山梨酯(NO.28)。
实施例8：硝酸酯类化合物(NO.17)对大鼠大脑中动脉的舒张作用。
试剂配制：硝酸酯类化合物(NO.17)、单硝酸异山梨酯(NO.28)均采用DMSO溶解配制，保存条件为4℃；
实验样本:正常SD雄性大鼠，体重200～300g；随机分为4组：硝酸酯类化合物(NO.17)3μM剂量组、硝酸酯类化合物(NO.17)10μM剂量组、硝酸酯类化合物(NO.17)30μM剂量组、单硝酸异山梨酯(NO.28)30μM剂量组，每组各10只。
实验方法：取正常SD雄性大鼠，颈椎脱臼，断头，迅速将脑组织取出，剥离大脑中动脉，剪成2～3mm血管环，血管环标准化，检测其内皮完整性，去除内皮不完整的血管环。采用60mM KCl对血管环预收缩，待收缩达到平衡后，分别加入不同浓度的硝酸酯类化合物(NO.17)和、单硝酸异山梨酯(NO.28)对照药，监测30min血管张力变化，观察并计算30min内血管舒张曲线及舒张百分比。
如图6所示，与单硝酸异山梨酯(NO.28)相比，硝酸酯类化合物(NO.17)对氯化钾预收缩的大脑中动脉具有显著的扩张作用。且随着硝酸酯类化合物(NO.17)注射浓度的增加血管舒张率随着提高。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (5)

1.硝酸酯类化合物，其特征在于，所述硝酸酯类化合物为3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物。
2.根据权利要求1所述的硝酸酯类化合物，其特征在于，所述3,6-脱水呋喃己糖类硝酸酯衍生物的化学通式如下：
其中，R1为甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、烯丙基、苄基、异丙基或仲丁基中的一种；R2为氢、羟基、烃氧基、烯丙氧基、苄氧基、2-硝基苄氧基、3-硝基苄氧基、4-硝基苄氧基、4-甲氧基苄氧基、2-硝基-4-甲氧基苄氧基或3-硝基-4-甲氧基苄氧基中的一种；R3为氢、羟基、烃氧基、烯丙氧基、苄氧基、2-硝基苄氧基、3-硝基苄氧基、4-硝基苄氧基、4-甲氧基苄氧基、2-硝基-4-甲氧基苄氧基或3-硝基-4-甲氧基苄氧基中的一种。
3.如权利要求1或2所述的硝酸酯类化合物在制备抑制血管收缩药物中的应用。
4.如权利要求1或2所述的硝酸酯类化合物在制备通过扩张血管治疗疾病药物中的应用。
5.如权利要求1或2所述的硝酸酯类化合物在制备治疗或预防脑血管疾病、心绞痛、心血管疾病、男性性功能障碍、血管性痴呆、血管性头痛、血管性耳鸣、内耳眩晕症、急性青光眼或缺氧性肺动脉高压药物中的应用。
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