CN109364049A

CN109364049A - 大黄素及大黄素与虎杖苷组合在治疗代谢综合征中的应用

Info

Publication number: CN109364049A
Application number: CN201811165481.6A
Authority: CN
Inventors: 孟凤仙; 崔晓兰; 王洁; 卜祥伟; 张正菊
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-09-30
Filing date: 2018-09-30
Publication date: 2019-02-22

Abstract

本发明涉及大黄素以及大黄素与虎杖苷在制备用于治疗代谢综合征的药物中的应用，具体而言涉及大黄素以及大黄素与虎杖苷在制备同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症、肥胖症药物的药物中的应用。所述药物可制成临床上或药学上可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、喷雾剂、栓剂、滴丸等合适的剂型。

Description

大黄素及大黄素与虎杖苷组合在治疗代谢综合征中的应用

技术领域

本发明涉及大黄素及大黄素与虎杖苷组合在治疗代谢综合征中的应用。

背景技术

代谢综合征是指人体的蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质发生代谢紊乱的病理状态，是一组复杂的代谢紊乱症候群。其具有以下特点：①多种代谢紊乱集于一身，包括肥胖、高血糖、高血压、血脂异常、高血黏、高尿酸、高脂肪肝发生率和高胰岛素血症，这些代谢紊乱是心、脑血管病变以及糖尿病的病理基础，由此可见糖尿病不是一个孤立的病，而是代谢综合征的组成部分；②目前多认为肥胖尤其是中心性肥胖造成胰岛素抵抗和高胰岛素血症；以及③可导致多种疾病，如高血压、冠心病、脑卒中、甚至某些癌症，包括与性激素有关的乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌，以及消化系统的胰腺癌、肝胆癌、结肠癌等。

虎杖是我国传统常用中药，为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖 (PolygonumCuspidatum Sieb.et Zucc)的干燥根茎和根，又名阴阳莲、紫金龙、苦杖、酸杖、斑杖、土大黄等。主要分布于我国长江以南各地和陕西、湖北及四川等地。具有利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰的功效(参见《中华人民共和国药典》2015年版)。《本草拾遗》记载虎杖“主风在骨节间及血瘀”；《医林纂要》记载虎杖“坚肾，强阳益精，壮筋骨，增气力”；以及《滇南本草》记载虎杖：“攻诸肿毒，止咽喉疼痛，利小便，走经络”。

虎杖中主要成分有蒽醌类、均二苯乙烯类、黄酮类、香豆素类以及一些脂肪酸类化合物等。

有关虎杖研究的相关试验表明：虎杖具有多种药理作用，主要包括对多器官功能障碍综合征的保护作用、对心血管系统的作用，抗菌、抗病毒，抗炎、抗过敏，抗氧化、抗休克，抗肿瘤，抗血栓、抗动脉粥样硬化及肾脏保护作用等。

现有技术中也有关于虎杖苷对糖代谢的影响的报道(《中药药理与临床》， 2016；32(3))，作用机制是虎杖苷通过增加胰岛素受体底物(IRS)的磷酸化，进而激活蛋白激酶B信号通路，Akt激活后，磷酸化下游糖原合成酶激酶 (GSK-3)，抑制其活性，促进糖原合成，同时增加肝糖原代谢的关键酶葡萄糖激酶(GCK)的表达，降低糖质新生关键酶葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)的表达，进而使肝糖原合成增加，输出减少，保持血糖的正常。

现有技术中还有关于虎杖苷对脂质代谢影响的报道(《中药药理与临床》， 2016；32(3))，显示虎杖苷对肝脂肪变性的保护作用可能与其降低肝脏TNF- α水平，肝脂质过氧化和SREBP-1c介导的脂质生成作用有关。Hao，J等研究同样证实了虎杖苷能明显降低糖尿病大鼠模型TC、TG和LDL-C的水平，并发现虎杖苷可能是通过Akt信号通路调节一些脂肪生成基因，如SREBP-1c、进而影响低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达来调节脂质生成。

现有技术中关于虎杖苷抗高尿酸血症的报道(《广东化工》，2017年第4 期，第44卷总第342期)，显示虎杖苷能够抑制小鼠高尿酸血症以及改善肾功能，其抑制高尿酸症的机制可能是调节了URAT1、GLUT9、ABCG2、 OAT1蛋白在肾脏中的表达，而改善肾功能的机制可能是提高了OCT1、OCT2、 OCTN1、OCTN2蛋白在肾脏中的表达。

现有技术中并没有关于虎杖苷降血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白含量的相关报道。

有关大黄素药理作用研究表明：大黄素具有抗炎、抑菌、抗病毒、抗真菌、抗原虫作用；抗肿瘤作用；肾保护、抗肾间质纤维化及利尿作用；肝保护作用：防治肝癌、防治脂肪肝、抗肝细胞纤维化抑制乙型肝炎病毒、保护受损肝细胞等作用；对胃肠道的作用：泻下、抗幽门螺杆菌所致溃疡和应激性溃疡、保护大鼠肠黏膜的作用；抗氧化和清除自由基的作用；抗脑缺血损伤：可减轻大鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤，对大鼠脑缺血损伤具有保护作用；对心血管系统的作用：抗心肌缺血、抗动脉粥样硬化、抗心律失常；对急性胰腺炎的治疗作用；对免疫系统的影响：免疫抑制作用/双向调节作用；对骨代谢的影响。

现有技术中有关于大黄素降低糖尿病大鼠血糖水平及血脂水平作用的报道，但是现有技术中没有关于大黄素降尿酸、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白含量的相关报道。

虎杖研究的相关试验表明：虎杖具有多种药理作用，主要包括对多器官功能障碍综合征的保护作用、对心血管系统的作用，抗菌、抗病毒，抗炎、抗过敏，抗氧化、抗休克，抗肿瘤，抗血栓、抗动脉粥样硬化及肾脏保护作用等。

现有技术中虽然涉及到虎杖苷降血糖、降血脂、降尿酸的作用，但存在以下缺陷：动物模型在造模时因素单一、彼此没有内在联系、与人类疾病发病差别较大；检测指标缺乏动态观察；各指标之间没有内在联系，作用靶点分散。

大黄素的药理作用集中在抗微生物、抗肿瘤、肾保护、肝保护、胃肠道保护等方面。大黄素降低糖尿病大鼠血糖水平及血脂水平的作用虽有报道，大黄素降尿酸、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白含量的作用却没有报道。

综上所述，现有技术中并没有公开虎杖苷、大黄素与虎杖苷的组合通过同一信号通路对代谢综合征起作用，也就是说，现有技术中并无虎杖苷、大黄素与虎杖苷的组合能够同时通过同一信号通路降低血尿酸、血糖、尿糖、血胆固醇、血甘油三脂、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白的含量的报道。

发明内容

本发明涉及大黄素及大黄素与虎杖苷的组合在治疗代谢综合征中的应用，尤其涉及大黄素及大黄素与虎杖苷的组合在制备用于同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症、肥胖症的药物中的应用。所述药物可制成临床上或药学上可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、喷雾剂、栓剂、滴丸等合适的剂型。

第一方面本发明涉及大黄素在制备用于治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

本发明首次发现，大黄素通过干预AMPK/iNOS/NF-κB信号通路而发挥治疗代谢综合征的作用。因此，本发明还涉及大黄素在制备用于通过干预 AMPK/iNOS/NF-κB信号通路而治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

优选地，上述药物中大黄素占5～60重量份。

第二方面，本发明涉及大黄素与虎杖苷的组合在制备用于治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

本发明首次发现，大黄素与虎杖苷的组合通过干预AMPK/iNOS/NF-κ B信号通路而发挥治疗代谢综合征的作用。因此，本发明还涉及大黄素与虎杖苷的组合在制备用于通过干预AMPK/iNOS/NF-κB信号通路而治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

优选地，上述药物中以大黄素5～30重量份与虎杖苷5～30重量份进行配比。优选地，上述药物中大黄素与虎杖苷以1∶1的重量比进行配制。

本发明的药物可以制成临床上或药学上可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、喷雾剂、栓剂、滴丸等合适的剂型。

本发明的药物能同时降低血尿酸、血糖、尿糖、血胆固醇、血甘油三脂、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白的含量。

本发明的药物的给药途径包括临床上可接受的口服给药、注射给药、静脉滴注给药、舌下给药、喷雾吸入及直肠给药。

具体来说，本发明采用KK-ay合并高脂血症模型小鼠，进行一模型多指标同时检测，评价了大黄素及大黄素与虎杖苷的组合对代谢综合征的治疗作用，明确了AMPK/iNOS/NF-κB信号通路作为其作用靶点。

本发明采用能更好模拟人类代谢综合征疾病的KK-ay合并高脂血症小鼠动物模型，说明大黄素及大黄素与虎杖苷的组合能同时降低血尿酸、血糖、尿糖、血胆固醇、血甘油三脂、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白的含量，明确了大黄素及大黄素与虎杖苷的组合以AMPK/iNOS/NF-κB 信号通路作为其治疗代谢综合征的作用靶点。

本发明中首次发现大黄素同时对血糖、血脂、血尿酸、血同型半胱氨酸、肾功能及体重有作用；并且首次发现大黄素与虎杖苷组合同时对血糖、血脂、血尿酸、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素、尿蛋白、肾功能及体重有作用。

而且，本发明首次采用动物模型KK-Ay小鼠(自发性2型糖尿病小鼠) 联合高脂饲料造成复合型代谢性疾病模型，更好地模拟了人类疾病的发病状态，与临床更接近；在同一模型上同时对血糖、血脂、血尿酸、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素、尿蛋白、肾功能及体重进行检测，并对其进行动态观察，更好地反映了大黄素、大黄素和虎杖苷的组合治疗代谢综合征的有效性及作用特点；同时对血糖、血脂、血尿酸、血同型半胱氨酸、肾功能及体重进行检测，并对其进行了动态观察，与现有方法不同；作用机制为调节免疫-炎性-代谢因子AMPK/iNOS/NF-κB信号通路而发挥作用，可以看出作用靶点与已有的报道完全不同。

附图说明：

图1：显示了各组小鼠HE染色的情况(HE，×200)，其中，A：正常组；B：模型组；C：阳性药物组；D：大黄素大剂量组；E：大黄素中剂量组；F：大黄素小剂量组；G：大黄素+虎杖苷大剂量组；H：大黄素+虎杖苷中剂量组；I：大黄素+虎杖苷小剂量组；

图2：显示了各组小鼠PAS染色的情况(HE，×400)，其中，A：正常组；B：模型组；C：阳性药物组；D：大黄素大剂量组；E：大黄素中剂量组；F：大黄素小剂量组；G：大黄素+虎杖苷大剂量组；H：大黄素+虎杖苷中剂量组；I：大黄素+虎杖苷小剂量组；

图3：显示了各组小鼠电镜观察情况(×15000)，其中，A：正常组；B：模型组；C：阳性药物组；D：大黄素大剂量组；E：大黄素中剂量组；F：大黄素小剂量组；G：大黄素+虎杖苷大剂量组；H：大黄素+虎杖苷中剂量组；I：大黄素+虎杖苷小剂量组。

具体实施方式

下面结合实施例及说明书附图对本发明的技术方案做进一步描述。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限定本发明的保护范围。

实施例1：大黄素组，以及大黄素和虎杖组对自发性2型糖尿病小鼠合并血脂代谢异常模型的影响

实验材料和方法

1.动物模型：

自发性2型糖尿病小鼠(KK-ay小鼠)合并血脂代谢异常模型，SPF级雄性8～9周龄，体重30.94±1.67g，购自北京华阜康实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2009-0004。雄性C57BL/6J小鼠6只，体重24.57±1.60g，购自北京华阜康实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2009-0007。

2.受试药物：

大黄素：国家药品标准物质，约20mg包装，批号：110756-200110(中国食品药品检定研究院)

虎杖苷：化学对照品，约20mg包装，批号：111575-200502(中国食品药品检定研究院)

剂量设计：

大黄素大、中、小剂量：用蒸馏水分别配制成13.33mg/(kg·d)、6.67 mg/(kg·d)、3.33mg/(kg·d)的大、中、小剂量

大黄素+虎杖苷大、中、小剂量：分别取各一半重量的大黄素和虎杖苷用蒸馏水配制成13.33mg/(kg·d)、6.67mg/(kg·d)、3.33mg/(kg·d)的大、中、小剂量

3.试验方法：

各动物适应性喂养2周后，KK-Ay小鼠给予高脂饲料喂养，饲养方式为三天高脂饲料，三天正常饲料，两种配方高脂饲料交替使用，正常对照组 C57BL/6J小鼠给予普通饲料喂养。高脂饲料诱导3周后检测KK-Ay小鼠空腹血糖及24h尿蛋白水平，血糖水平高于13.9mmol/l并且24h尿蛋白高于正常组，视为模型诱导成功。

将模型诱导成功小鼠按血糖及24h尿蛋白水平随机分为9组，分别为模型对照组、阳性药对照组，大黄素、大黄素+虎杖苷药物各大、中、小剂量组，将C57BL/6J小鼠设为正常对照组，每组6只。各组小鼠每日灌胃1次，连续12周。

4.检测指标：

4.1每周用电子天平监测小鼠体重；

4.2分别在药物干预的第0、4、8、12周尾尖取血，检测空腹血糖及尿酸值；代谢笼收集24h尿液并记录尿量，-80℃冰箱保存以备24小时尿蛋白、尿微量白蛋白(Alb)、尿肌酐(Cr)，计算尿白蛋白/肌酐比值检测；

4.3干预12周后，留取血液标本，-80℃冰箱保存以备甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、β2微球蛋白(β2-MG)检测；

4.4取血后摘取新鲜肾组织，将1/2左肾置10％中性福尔马林缓冲液中，供光镜观察；1/2左肾迅速放入2.5％戊二醛用于肾组织电镜观察；

4.5机理研究：麻醉，腹主动脉取血，迅速摘取右侧肾脏，液氮冻存，以备RT-PCR、Westem blot方法检测相关信号通路各指标；

本试验数据均以SPSS 22.0统计处理，P＜0.05表示差异有统计学意义。

5.药效学研究：

在试验过程中，正常对照组各指标在正常范围内波动；模型对照组各指标成稳定升高状态；大黄素及大黄素+虎杖苷在所试剂量范围内对血尿酸、尿糖、血胆固醇、血甘油三脂、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白含量等有明显降低作用，与模型对照组比较有显著性差异；

6.机理研究：

大黄素以及大黄素+虎杖苷可明显上调代谢综合征模型小鼠免疫炎性代谢性抑制分子AMPK的表达，下调炎性因子iNOS、NF-κB、TNF-α、IL-18 的表达。由于AMPK可直接或间接参与炎性因子负性调节，可抑制iNOS表达，进而抑制NO产生，抑制炎症反应。AMPK还可增强PGC-1α蛋白活性，进而抑制NF-κB活性，抑制下游炎症因子TNF-α、IL-18等的表达。AMPK激活后还可增强SIRT1活性，进而下调NF-κ B、组蛋白等乙酰化水平，下调下游炎症相关因子的表达水平，减轻炎症免疫病理损伤。

7.试验结果：

表1 大黄素及大黄素+虎杖苷对KK-ay小鼠血糖的影响

注：与正常组对照比较，^##P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P ＜0.01

结果显示：试验期间，模型对照组小鼠从0周至12周空腹血糖水平均处于增高状态，与正常对照组比较具有显著差异(P＜0.01)。大黄素及大黄素+ 虎杖苷不同剂量组在给药后8周对造模后小鼠血糖有明显降低作用，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。

表2 大黄素及大黄素+虎杖苷对KK-ay小鼠血尿酸的影响

结果显示：造模后模型对照组血尿酸值水平显著升高，与正常对照组比较具有显著性差异(P＜0.01)；将大黄素及大黄素+虎杖苷连续给药12周后，三个剂量组从给药4周后可明显降低血尿酸值含量，与模型对照组比较具有显著性差异(P＜0.05)。

表3 大黄素及大黄素+虎杖苷对KK-ay小鼠甘油三酯、总胆固醇的影响

注：与正常组比较，^##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

结果显示：造模后模型对照组血甘油三酯、总胆固醇水平显著升高，与正常对照组比较具有显著性差异(P＜0.01)；将大黄素及大黄素+虎杖苷及虎杖苷连续给药12周后，三个剂量组可明显降低血甘油三脂含量，与模型对照组比较具有显著性差异(P＜0.05)；各药物在所试剂量范围内对血总胆固醇无降低作用。

表4 大黄素及大黄素+虎杖苷对KK-ay小鼠血肌酐、尿素氮的影响

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

结果显示：造模后模型对照组血肌酐明显升高，与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；模型组尿素氮无明显变化。将大黄素及大黄素+虎杖苷各剂量组连续给药12周后，所试剂量对血肌酐及尿素氮均明显降低作用，与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。

实施例2：大黄素及大黄素+虎杖苷对KK-ay小鼠肾组织病理改变的影响：

1.HE染色

模型对照组肾小球病变、肾小管病变、肾间质炎性浸润及病变总积分均明显增高，与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.1)；大黄素及大黄素+虎杖苷连续给药12周后在所试剂量范围内均可不同程度减轻肾小球病变、肾小管病变及肾间质炎性浸润，降低病变总积分，与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.1)。

表5 大黄素及大黄素+虎杖苷各组肾脏病变分类积分

注：与正常组比较，#P＜0.05；与模型组比较：*P＜0.05。

表6 大黄素及大黄素+虎杖苷各组小鼠肾脏病变总积分

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05。

2.PAS染色

与正常组比较，模型组ECM明显增高，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与模型组比较大黄素及大黄素+虎杖苷组ECM明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。

表7 大黄素及大黄素+虎杖苷各组肾小球基质EcM情况

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05，##P＜0.01。

3.电镜观察

正常组基底膜较均一，组织紧密，极少量足突倒伏、融合。模型组基底膜增厚，足突倒伏、融合，肾小球部分纤维化。阳性药基底膜较均一，足突部分倒伏、融合，肾小球未见纤维化改变。大黄素组部分基底膜增厚，少量分足突倒伏、融合，未见肾小球固化或纤维化。大黄素+虎杖苷大剂量组肾小球损伤较重，肾小球固化，可见纤维化；大黄素+虎杖苷中剂量组基底膜较均一，少量足突倒伏、融合；大黄素+虎杖苷小剂量组基底膜欠均一，部分足突倒伏、融合。与模型组比较，各用药组肾小球及肾小管损伤均较轻。

实施例3：大黄素及大黄素+虎杖苷对自发性2型糖尿病小鼠合并血脂代谢异常模型AMPK/iNOS/NF-κ B信号通路的影响

1.受试药物：大黄素：国家药品标准物质，约20mg包装，批号： 110756-200110(中国食品药品检定研究院)

剂量设计：

大黄素高中低剂量：用蒸馏水分别配制成13.33mg/(kg·d)、6.67mg/(kg·d)、3.33mg/(kg·d)的大中小剂量

大黄素+虎杖苷高中低剂量：分别取各一半重量的大黄素和虎杖苷用蒸馏水配制成13.33mg/(kg·d)、6.67mg/(kg·d)、3.33mg/(kg·d)的大中小剂量

2.实验动物：SPF级雄性8-9周龄KK-Ay小鼠，体重(30.94+1.67)g，购自北京华阜康实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2009-0004。雄性C57BL/6J小鼠6只，体重(24.57+1.60)g，购自北京华阜康实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2009-0007。适应性喂养2周后，KK-Ay小鼠给予高脂饲料喂养，饲养方式为三天高脂饲料，三天正常饲料，两种配方高脂饲料交替使用，正常对照组C57BL/6J小鼠给予普通饲料喂养。高脂饲料诱导3周后检测KID-Ay小鼠空腹血糖及24h尿蛋白水平，血糖水平高于 13.9mmol/1并且24h尿蛋白高于正常组，视为模型诱导成功。

将模型成功小鼠按血糖及24h尿蛋白水平随机分为模型组，阳性药组，大黄素及大黄素+虎杖苷大、中、小剂量组，将C57BL/6J小鼠设为正常对照组，每组6只。各组小鼠每日灌胃1次，连续12周。

干预12周后，麻醉，腹主动脉取血，液氮冻存，以备RT-PCR、Western blot方法检测。

3.检测：

(1)RT-PCR检测：用Trizol提取腹主动脉血RNA，进行反转录得到 cDNA溶液后，进行实时荧光定量PCR反应：Power SYBR GREEN 17.2μl，反应体系cDNA 2μl，10μM引物各0.4μl。反应条件：42℃灭活5min，95 ℃下变性10秒、退火5秒，60℃延伸34秒，共计40个循环。反应结束后分析熔解曲线，鉴定PCR产物的特异性。利用Sequence Detection System软件，分析PCR过程各检测样本的Ct值。

(2)Western blot检测：向腹主动脉血(1ml)中加入200μl蛋白裂解液，混匀，充分裂解。离心后取上清，用BCA试剂盒测定蛋白浓度。将样本蛋白浓度调至相同，加载样缓冲液，95℃变性5min，保存备用。采用SDS 聚丙烯凝胶电泳，配制10％分离胶，5％浓缩胶，加样电泳，浓缩胶90V，分离胶120V，当溴酚蓝电泳至胶底部时终止电泳。湿法转膜约150min。用含5％BSA-TBST的封闭液封闭PVDF膜，室温摇动封闭2h。按比例稀释I 抗，与膜一起孵育，4℃过夜。按1∶5000比例稀释HRP标记的二抗，与膜共同孵育2h。ECL显色，凝胶图像分析系统对蛋白条带进行扫描，gel-pro 软件分析图像灰度。相对含量的变化＝目的蛋白灰度/Actin灰度。

(3)ELISA检测，按照ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司) 说明书操作。

4.试验结果：

表8 各组AMPK mRNA转录及蛋白表达(Western blot)水平比较

注：与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05；

结果显示：与正常组比较，模型组小鼠AMPK mRNA转录及蛋白表达水平明显下降(P＜0.01)。与模型组比较，大黄素及大黄素+虎杖苷各剂量组AMPK mRNA表达水平上调(P＜0.01，P＜0.05)。

表9各组iNOs mRNA转录及蛋白表达(Western blot)水平

结果显示：与正常组比较，模型组小鼠iNOS mRNA转录及蛋白表达水平明显上升(P＜0.01)。与模型组比较，大黄素及大黄素+虎杖苷不同剂量组iNOS mRNA表达水平明显下调(P＜0.01，P＜0.05)。

表10各组NF-κB mRNA转录及蛋白表达(Western blot)水平

结果显示：与正常组比较，模型组小鼠P65mRNA转录及蛋白表达水平明显上升(P＜0.01)。与模型组比较，各治疗组P65mRNA转录及蛋白表达水平明显下调(P＜0.01)。

表11各组TNF-αmRNA转录及蛋白表达(ELIsA)水平

结果显示：与正常组比较，模型组小鼠TNF-α mRNA转录及蛋白表达水平明显上升(P＜0.01)。与模型组比较，各治疗组TNF-a mRNA转录及蛋白表达水平明显下调(P＜0.01)。

表12各组IL-18mRNA转录及蛋白表达(ELIsA)水平

结果显示：与正常组比较，模型组小鼠IL-18mRNA转录及蛋白表达水平明显上升(P＜0.01)。与模型组比较，各治疗组IL-18mRNA转录水平明显下调(P＜0.01)。

结论：

大黄素组、大黄素+虎杖苷组均可明显上调代谢综合征模型小鼠免疫炎性代谢性抑制分子AMPK表达，下调炎性因子iNOS、NF-κB、TNF-α、IL-18 表达。由于AMPK可直接或间接参与炎性因子负性调节，可抑制iNOS表达，进而抑制NO产生，抑制炎症反应。AMPK还可增强PGC-1α蛋白活性，进而抑制NF-κB活性，抑制下游炎症因子TNF-α、IL-18等的表达。AMPK 激活后还可增强SIRT1活性，进而下调NF-κB、组蛋白等乙酰化水平，下调下游炎症相关因子的表达水平，减轻炎症免疫病理损伤。

Claims

1.大黄素在制备用于治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

2.大黄素在制备用于通过干预AMPK/iNOS/NF-κB信号通路而治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

3.根据权利要求1或2的应用，所述药物中大黄素占5～60重量份。

4.大黄素与虎杖苷的组合在制备用于治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

5.大黄素与虎杖苷的组合在制备用于通过干预AMPK/iNOS/NF-κB信号通路而治疗代谢综合征的药物中的应用，其特征在于所述药物能同时治疗高尿酸血症、高脂血症、高血糖、高同型半胱氨酸血症和肥胖症。

6.根据权利要求4或5的应用，所述药物中以大黄素占5～30重量份，虎杖苷占5～30重量份进行配比。

7.根据权利要求4或5的应用，所述药物中大黄素与虎杖苷以1∶1的重量比进行配制。

8.根据权利要求1-7任一项的应用，其特征在于，所述药物制成临床上或药学上可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、水针剂、粉针剂、冻干粉针剂、喷雾剂、栓剂、滴丸。

9.根据权利要求1～7任一项的应用，其特征在于，所述药物能同时降低血尿酸、血糖、尿糖、血胆固醇、血甘油三脂、血同型半胱氨酸、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白的含量。

10.根据权利要求1～9任一项的应用，其特征在于，所述药物的给药途径包括临床上可接受的口服给药、注射给药、静脉滴注给药、舌下给药、喷雾吸入及直肠给药。