CN109355236A

CN109355236A - 一种具有防治线虫的复合微生物菌剂及制备方法

Info

Publication number: CN109355236A
Application number: CN201811497112.7A
Authority: CN
Inventors: 郑安科; 徐骠; 张俊庆
Original assignee: Shandong Civil Life Science And Technology Co Ltd
Current assignee: Shandong Civil Life Science And Technology Co Ltd
Priority date: 2018-12-07
Filing date: 2018-12-07
Publication date: 2019-02-19

Abstract

本发明属于生物菌肥技术领域，具体涉及涉及枯草芽孢杆菌（TMQK08），干酪乳杆菌（TMQR01），胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03），按有效活菌数比例为2.5‑3：1.5‑2：4‑5搭配，并保证活菌数≥50亿/ml，并添加孢子数大于10亿/ml的淡紫拟青霉（TMQMD04）发酵液。同时搭配酶解甲壳素和萃取楸树汁，以达到杀灭线虫的功效，同时具治愈根肿、根腐、根黑的作用，实现全苗、壮苗、绿苗。

Description

一种具有防治线虫的复合微生物菌剂及制备方法

技术领域

本发明属于农业微生物菌剂技术领域，具体涉及一种具有防治线虫的复合微生物菌剂及制备方法。

背景技术

根结线虫是世界上严重危害植物的寄生线虫之一，其寄生范围非常广泛，寄主超过3000多种植物，根结线虫病对全世界的作物经济造成每年高达数百亿美元的损失，年损失率约10%，而对于蔬菜、果树、烟草等农作物年损伤率甚至超过20%之多。

随着温室大棚的不断推广与增加，根结线虫病的发病比以往更趋于广泛和严重。由于根结线虫生活在土壤中，主要对植物的根系造成危害，侵染初期往往不易察觉，除此之外根结线虫体壁可保护其免受外来物质侵害，而且根结线虫寄主广泛，几乎涵盖所有农作物，当根结线虫成功侵染根系并形成根结后，地上部分才会逐渐出现萎蔫、长势不良等症状，即使地上部分开始出现病害症状，有时候可能本误认为是枯萎病等真菌性病害，不能及时有效的对症下药，以至于延误了最佳防治时间，所以对根结线虫防治都非常困难。

目前主要的防治措施有化学防治、农业防治、物理防治和生物防治。其中化学防治主要包括化学有毒性物质如：甲烷、面隆、威百亩、氯化苦等对土地熏蒸杀死线虫，但是，该类药物往往挥发性强，毒性大，会破环臭氧层，对环境危害巨大；农业措施主要包括轮作、选育抗病新品种、砧木嫁接、加入土壤改良剂等，但是农业方法存在周期长、工作难度大、适用面窄、效率低等缺点。物理措施的淹水处理只适用于保水性较好的粘性土壤中，在缺水性土壤中推广上受到很大限制；热处理又分为真气灭菌额晒田，真气灭菌的同时会杀死有益菌，不利于土壤微生物区系平衡，晒田的边际效应影响较大。生物防治是以自然控制手段进入有害线虫生活环境，以竞争、捕食、寄生、拮抗等作用机制来控制线虫的方式。

发明内容

鉴于根结线虫对农业带来的巨大危害及损失，本发明涉及一种具有防治线虫的复合微生物菌剂及制备方法，本发明是一种对线虫具有拮抗和杀灭作用的复合菌剂；通过对自然界存在的一些对线虫具有拮抗和杀灭作用的有益细菌的筛选分离，得到优势菌种，通过优势互补将多种拮抗菌按一定的比例搭配，再结合一些生物增效剂，杀灭线虫的同时对土壤具有一定的改良作用，其具有制备方法简单、效果明显，提高经济效益等优势。

本发明的技术方案如下：本发明一方面提供了一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，包括三种芽孢菌：枯草芽孢杆菌（TMQK08），干酪乳杆菌（TMQR01），胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）以及一种霉菌：淡紫拟青霉（TMQMD04）和两种增效剂：酶解甲壳素，萃取楸树汁。

作为优选，活菌数配比为：枯草芽孢杆菌（TMQK08）：干酪乳杆菌（TMQR01）：胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）=2.5-3：1.5-2：4-5。

作为优选，所述三种芽孢菌中总有效活菌数≥50亿/ml。

作为优选，所述淡紫拟青霉孢子数≥10亿/ml。

作为优选，酶解甲壳素其浓度为0.8%-1.2%。

作为优选，萃取楸树汁其浓度为1%-2%。

本发明另一方面提供一种根据上述的具有防治线虫的复合微生物菌剂的制备方法，所述三种菌液按有效活菌数的比例充分混匀，在60摄氏度下处理30min，使活力较弱的菌体死亡，自然沉淀，并保证活菌数在50亿/ml以上；再加入淡紫拟青霉孢子数≥10亿/ml，最后加入酶解甲壳素其浓度为0.8%-1.2%；萃取楸树汁其浓度为1%-2%。

作为优选，所述增效剂甲壳素是将水产废料虾蟹壳通过酶解成小颗粒的甲壳素，并100目过筛除去大颗粒及杂质，在1%醋酸中溶解甲壳素使其在复合菌液中的终浓度为0.8%-1.2%。

作为优选，所述增效剂楸树汁是将修剪楸树汁的枝条，通过粉碎挤压等物理方法将楸树汁液压榨所得，并通过低温条件萃取提纯，保证活性有效成分，并添加在复合菌液中的终浓度为1%-2%。

所述枯草芽孢杆菌（TMQK08）制备方法：蔗糖20g/L、硫酸铵5 g/L、麸皮45 g/L、柠檬酸钠2.0g/L、三水合磷酸氢二钾0.4g/L、七水合硫酸镁0.5 g/L、七水合硫酸铁0.03 g/L，PH值自然，按接种量7%，在37℃发酵24-38小时，活菌数达到200亿/ml，形成芽孢率在98%以上。

所述干酪乳杆菌（TMQR01）制备方法：葡萄糖140 g/L、蛋白胨15 g/L、牛肉膏15 g/L、酵母膏7.5 g/L、无水硫酸钠5 g/L、七水硫酸镁0.2 g/L、七水硫酸锰0.05 g/L、碳酸钙100 g/L，调节PH6.8，按接种量10%，在35℃发酵72-96小时，活菌数达到0.8亿/ml，形成芽孢率在98%以上。

所述胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）制备方法：葡萄糖 100 g/L，硫酸铵15 g/L，酵母膏5.5 g/L，氯化钾2 g/L，7水合硫酸镁3.5 g/L，磷酸氢二钾1 g/L，碳酸钙3.5 g/L；发酵起始的PH为7.2-7.8；在36℃发酵48-72小时，活菌数可达到5亿/ml，芽孢率在98%以上。

所述淡紫拟青霉（TMQMD04）制备方法：葡萄糖45 g/L，硝酸钠12 g/L，硫酸铵3.5g/L，黄豆粉7 g/L，磷酸氢二钾0.45 g/L，七水合硫酸镁0.5 g/L；调节PH为6.5-7.0，在26℃发酵60-72小时，达到孢子数为60亿/ml。

相对于现有防治线虫的菌肥，本发明的有益效果为：

本发明是一种对线虫具有拮抗和杀灭作用的复合菌剂；通过对自然界存在的一些对线虫具有拮抗和杀灭作用的有益细菌的筛选分离，得到优势菌种，通过优势互补将多种拮抗菌按一定的比例搭配，再结合一些生物增效剂，杀灭线虫的同时对土壤具有一定的改良作用，其具有制备方法简单、效果明显，提高经济效益等优势。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

正如背景技术所介绍的，由于根结线虫生活在土壤中，主要对植物的根系造成危害，侵染初期往往不易察觉，除此之外根结线虫体壁可保护其免受外来物质侵害，而且根结线虫寄主广泛，几乎涵盖所有农作物，当根结线虫成功侵染根系并形成根结后，地上部分才会逐渐出现萎蔫、长势不良等症状，即使地上部分开始出现病害症状，有时候可能本误认为是枯萎病等真菌性病害，不能及时有效的对症下药，以至于延误了最佳防治时间，所以对根结线虫防治都非常困难。

本发明创造性提出一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，包括三种芽孢菌：枯草芽孢杆菌（TMQK08），干酪乳杆菌（TMQR01），胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）以及一种霉菌：淡紫拟青霉（TMQMD04）和两种增效剂：酶解甲壳素，萃取楸树汁。

本实施例中，活菌数配比为：枯草芽孢杆菌（TMQK08）：干酪乳杆菌（TMQR01）：胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）=2.5-3：1.5-2：4-5。

本实施例中，所述三种芽孢菌中总有效活菌数≥50亿/ml。

本实施例中，所述淡紫拟青霉孢子数≥10亿/ml。

本实施例中，酶解甲壳素其浓度为0.8%-1.2%。

本实施例中，萃取楸树汁其浓度为1%-2%。

一种上述的具有防治线虫的复合微生物菌剂的制备方法，所述三种菌液按有效活菌数的比例充分混匀，在60摄氏度下处理30min，使活力较弱的菌体死亡，自然沉淀，并保证活菌数在50亿/ml以上；再加入淡紫拟青霉孢子数≥10亿/ml，最后加入酶解甲壳素其浓度为0.8%-1.2%；萃取楸树汁其浓度为1%-2%。

本实施例中，所述增效剂甲壳素是将水产废料虾蟹壳通过酶解成小颗粒的甲壳素，并100目过筛除去大颗粒及杂质，在1%醋酸中溶解甲壳素使其在复合菌液中的终浓度为0.8%-1.2%。

本实施例中，所述增效剂楸树汁是将修剪楸树汁的枝条，通过粉碎挤压等物理方法将楸树汁液压榨所得，并通过低温条件萃取提纯，保证活性有效成分，并添加在复合菌液中的终浓度为1%-2%。

所述的枯草芽孢杆菌（TMQK08）能够分泌一些拮抗类物质，抑制病原菌的繁殖，通过营养和生态位竞争起到杀灭细菌的作用减轻病虫害，提高作物产量；调节植物活力，改善疏松土壤，解决土壤板结，促进作物根系生长；提高肥料利用率，增强作物新陈代谢，促进光合作用和强化叶片保护膜。

所述的干酪乳杆菌（TMQR01）能够在线虫体内寄生，吸取线虫营养，破环线虫正常生理代谢，杀死线虫及虫卵，并且其分泌的活性物质可有效抑制线虫幼虫的生长；能够增强植物防御机制，产生植物免疫，促进细胞分裂，防止细胞衰老，调节土壤内菌群平衡、促进植物吸收等作用。

所述的胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）改善土壤理化性质，提高土壤酶活性，增加土壤活菌数。

所述的淡紫拟青霉（TMQMD04）属于内寄生性真菌，是一些寄生线虫的主要天敌能够寄生在线虫卵中，也能侵染幼虫、雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、孢囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害；当淡紫拟青霉与线虫的孢囊接触后，使得卵壳破裂，到时线虫不能正常发育；同时淡紫拟青霉具有以下优势：

拮抗多种植物病原菌：能够拮抗玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病棉花枯萎病和水稻恶苗病等。

促进植物生长：在淡紫拟青霉的液体发酵过程中，能产生丰富的代谢产物，其包括低浓度的类似吲哚乙酸产物，它能够显著促进植物根系与植株的生长，因此在作物根系补充淡紫拟青霉不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植株营养器官的生长，同时对种子的萌发与生长也有促进作用。

产生多种功能酶：在液体发酵过程中能够产生几丁质酶、细胞裂解酶、葡聚糖酶与丝蛋白酶几丁质酶在促进线虫卵的孵化，提高拟青霉菌对线虫的寄生率，同时还能促进细胞分裂。

降解效应：淡紫拟青霉不但能够促进难溶磷酸盐的溶解，而且还能促进许多化学聚合物(如农药，制革废水等)的分解，这证明淡紫拟青霉具有一定的环保效应。

所述的增效剂甲壳素及其衍生物具有来源广、无毒害、无特殊气味、易降解、同时具有很好的生物相容性、成膜性、吸附性、絮凝性、诱导抗病性、保湿性等特性，可广泛应用于农业、工业、医药和环保等行业中。在农业生产中，甲壳素具有杀虫作用，在生物菌肥中添加酶解后的甲壳素不但能够增加土壤中微生物的活性，而且对线虫具有很好的防治效果，分解后又可以被植物吸收，增加营养成份。此外，被广泛认为具有促进植物生长、增加经济产量、提高农作物品质、诱导植物产生广谱抗病性等优良特性。

所述的增效剂楸树汁是一种综合生物萃取物，其中包括楸树本身产生的具有杀线虫的有机多糖类活性物质，对线虫具有抑制生长和杀死的作用，同时还具有一些赤霉素、细胞分裂素、生长素、脱落酸、多胺，水杨酸类，茉莉酸(酯)、乙烯和油菜素甾醇对植物的生长发育有重要的调节控制作用物质。

相对于同类发明，该发明首先使用的有益菌枯草芽孢杆菌（TMQK08）、干酪乳杆菌（TMQR01）、胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）、淡紫拟青霉（TMQMD04）均来自于土壤本身的有益菌，不破环原来的微生物菌群，不会造成用后压力；该发明所使用的添加物酶解甲壳素、楸树汁无均来自于自然，无化工的原料，分解后均可以被植物吸收利用，不会造成二次污染，是一种环境友好型的、可持续发展的复合微生物菌剂。在防治线虫的防治上其防效能达到80%以上，同时还能够使得植株强壮，提高作物的抗病虫害能力，同时可以改良土壤为生态以及土壤结构，增加土壤透水透气性，调节土壤PH值，达到、抗病、壮苗、键株、增产的多重效果。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。

本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。

实施例1：一种能够防治线虫的复合微生物菌剂，包括一株枯草芽孢杆菌

（TMQK08）一株干酪乳杆菌（TMQR01），一株胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03），一株淡紫拟青霉（TMQMD04），两种增效剂：酶解甲壳素和楸树汁。

所述的枯草芽孢杆菌（TMQK08）发酵液活菌数为208 亿/ml，配比280kg。

所述的干酪乳杆菌（TMQR01）发酵液活菌数为0.88亿/ml，配比450kg。

所述的胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）发酵液活菌数为15.6亿/ml，配比150kg。

所述的淡紫拟青霉（TMQMD04）发酵液孢子数为12.8亿/ml，配比85kg。

所述的增效剂为酶解甲壳素和楸树汁。

所述的增效剂为酶解甲壳素添加量为1%。

所述的增效剂为楸树汁添加量为1.5%。

其余补足灭菌水共35kg，总量共1吨。

所述的复合菌肥实测有效活菌数为59.3亿/ml。

本发明复合微生物菌剂在山东省寿光市添刘镇根结线虫病土壤中进行了实地应用。

测得试验田有机质18.8g/Kg，全氮1.21g/Kg，速效磷22.3g/Kg，速效钾108.6g/Kg，属于**型土壤，由于多季种植西红柿土壤根结线虫较为严重。供试品种为红曼罗，实验组在耕种前5天，每亩冲施稀释300倍的该复合菌肥5L作为预防；到植苗2星期后每亩冲施稀释500倍该复合菌肥8L；在生长60天后开始开花挂果时，冲施第三次，每亩18L稀释600倍，间隔20天进行第四次冲施方法与用量与第三次相同直至采收完毕不在冲施。在此期间试验田和对照田均相同使用化学肥料，包括N 元素20 kg/亩，P₂O₅ 18kg/亩，K₂O 12 kg/亩，其中氮肥 60％作基肥，40％作追肥，追肥分2次施，于第一次采收后和采收高峰时各追施 20％，其他肥料均 100％作基肥宽幅条施。

实验结果如下：

根据实验数据表明，使用本发明的复合微生物肥料对根结线虫具有较好的防治作用，与空白对照组相比，施用本发明的复合微生物肥料后根结线虫明显降低。

Claims

1.一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，其特征在于：包括三种芽孢菌：枯草芽孢杆菌（TMQK08），干酪乳杆菌（TMQR01），胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）以及一种霉菌：淡紫拟青霉（TMQMD04）和两种增效剂：酶解甲壳素，萃取楸树汁。

2.根据权利要求1所述的一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，其特征在于：活菌数配比为：枯草芽孢杆菌（TMQK08）：干酪乳杆菌（TMQR01）：胶冻样芽孢杆菌（TMQJ03）=2.5-3：1.5-2：4-5。

3.根据权利要求1所述的一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，其特征在于：所述三种芽孢菌中总有效活菌数≥50亿/ml。

4.根据权利要求1所述的一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，其特征在于：所述淡紫拟青霉孢子数≥10亿/ml。

5.根据权利要求1所述的一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，其特征在于：酶解甲壳素其浓度为0.8%-1.2%。

6.根据权利要求1所述的一种具有防治线虫的复合微生物菌剂，其特征在于：萃取楸树汁其浓度为1%-2%。

7.一种根据权利要求1～6任一项所述的具有防治线虫的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述三种菌液按有效活菌数的比例充分混匀，在60摄氏度下处理30min，使活力较弱的菌体死亡，自然沉淀，并保证活菌数在50亿/ml以上；再加入淡紫拟青霉孢子数≥10亿/ml，最后加入酶解甲壳素其浓度为0.8%-1.2%；萃取楸树汁其浓度为1%-2%。

8.根据权利要求7所述的具有防治线虫的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述增效剂甲壳素是将水产废料虾蟹壳通过酶解成小颗粒的甲壳素，并100目过筛除去大颗粒及杂质，在1%醋酸中溶解甲壳素使其在复合菌液中的终浓度为0.8%-1.2%。

9.根据权利要求7所述的具有防治线虫的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述增效剂楸树汁是将修剪楸树汁的枝条，通过粉碎挤压等物理方法将楸树汁液压榨所得，并通过低温条件萃取提纯，保证活性有效成分，并添加在复合菌液中的终浓度为1%-2%。