CN109336944A - 雷公藤红素咪唑衍生物及其制备方法与用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种新型雷公藤红素咪唑衍生物及其制备方法与用途，属于生物医药领域。所述雷公藤红素咪唑衍生物具有如式I所示的结构：其中R1、R2、R3分别选自H、烷基、含杂原子的烷基、卤素或硝基；X选自含3至6个碳原子的饱和或不饱和直链脂肪烃片段。该类化合物的制备方法反应条件温和，所用试剂低毒，原料易得，后处理方便，产率较高。药理实验研究表明，本发明化合物具有优良的抗肿瘤活性，可以作为制备抗肿瘤药物中的应用。

Description

雷公藤红素咪唑衍生物及其制备方法与用途
技术领域
本发明涉及药物化学技术，具体涉及一种雷公藤红素衍生物及其制备方法与应用。
技术背景
癌症是影响人类健康与寿命的主要疾病，现已成为全球重要的公共卫生问题之一。国际癌症研究报告数据显示，2012年全球新发癌症病例1410万，因癌症死亡人数达820万；预计至2020年，上述数据将分别增至1685万和1016万。2014年导致我国人群期望寿命损失的疾病以癌症为首，占比高达20.73％，致使越来越多的人关注癌症的治疗。
最常见的癌症治疗方法主要有手术、化疗、放疗及生物疗法，而化疗应用最广泛。临床上用于治疗癌症的药物种类繁多，例如生物烷化剂类、抗代谢类、抗生素类、天然产物等。目前，已有多种天然活性成分被证实具有抗肿瘤活性，但已上市的活性良好的天然抗癌药物较少。因此，开发活性优异的天然产物已经成为癌症治疗的迫切需求。
雷公藤红素(Celastrol，CE)，又名南蛇藤素，是从中药雷公藤根皮中分离得到的五环三萜类化合物。大量研究发现雷公藤红素具有多种生物活性，如抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗真菌、抗神经退行性疾病等。其中，雷公藤红素的抗肿瘤活性已成为近年来研究的热点。体内外活性研究表明，雷公藤红素可以有效抑制多种肿瘤的生长，如多发性骨髓瘤、黑色素瘤、肝癌、胃癌、前列腺癌、肾癌、非小细胞肺癌、胶质瘤和乳腺癌等，是一种广谱的抗肿瘤活性化合物。研究表明，雷公藤红素可以调节多种靶点，发挥其抗肿瘤作用[R.Kannaiyan,M.K. Shanmugam,G.Sethi.Cancer Letters,2011,303,9-20]。
尽管雷公藤红素具有较明确的抗肿瘤活性，但其活性及成药性均有待提高。因此，以其为先导物进行结构修饰改造，寻找活性更强、成药性更佳的衍生物非常必要。
发明内容
发明目的：本发明提供了一种雷公藤红素衍生物及其制备方法，还提供了雷公藤红素衍生物的抗肿瘤制药用途。
技术方案：本发明的所述的一种如通式I所示的雷公藤红素衍生物：
其中R1、R2、R3选自H、烷基、含杂原子的烷基、卤素或硝基；
X选自含3至6个碳原子的饱和或不饱和直链脂肪烃片段。
具体地讲，通式I所示化合物优选自下列化合物I-1到I-34：
本发明通式I所示化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)根据下式制备得到中间体化合物II：
(2)制备雷公藤红素咪唑衍生物I：雷公藤红素与步骤(1)制备所得中间体化合物II 或其无机酸盐在缚酸剂下成酯，得到目标物雷公藤红素咪唑衍生物I：
步骤(1)和步骤(2)的反应体系所采用的溶剂选自DMF、丙酮、乙腈、甲苯、苯、二甲苯、1,4-二氧六环、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃或乙醚中的一种或多种。
步骤(2)中，缚酸剂选自碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸氢钠、三乙胺或吡啶中的一种或多种。
步骤(2)中，反应温度为0℃～60℃。
步骤(2)中，与中间体化合物II成盐的无机酸选自盐酸、氢溴酸或氢碘酸。
进一步的，所述化合物I-1到I-34的制备过程中涉及的步骤(1)中间体化合物II-1～II-34 的制备方法可以采用如下步骤：
II-1～II-8：在一单颈瓶中，加入咪唑类衍生物(6.0mmol，1.0eq)，KHCO3(24.0-30.0mmol, 4.0-5.0eq)，Bu4N+Br-(0.06-0.18mmol,0.01-0.03eq)，二溴烷烃(27.0-33.0mmol,4.5-5.5eq)，加入8-15ml无水CH2Cl2溶解，室温反应48-60h。加入CH2Cl2 30-40ml，用水洗涤多次，直至TLC显示无杂质。有机相加入40％HBr 5-10ml，搅拌，静置于冰箱10-14小时。取水相，浓缩，得固体。
II-9～II-28、II-33-II-34：将咪唑衍生物(6.0mmol，1.0eq)溶于8-12ml丙酮溶液，依次加入二溴烷烃(6.6-9.0mmol，1.1-1.5eq)或1,4-二溴-2-丁烯(9.0-12.0mmol，1.5-2.0eq)， K2CO3(9.0-12.0mmol,1.5-2.0eq)，Bu4N+Br-(0.30-0.48mmol,0.05-0.08eq)，50-55℃加热回流7-8h。反应液旋干，加入20-30ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤 (20-30ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝2:1-1:1)，真空干燥过夜。
II-29～II-32：将咪唑-4-甲酸(12.0mmol，2.0eq)溶于35-45ml无水甲醇中，再加入3-5 ml浓硫酸，68-70℃加热回流反应10-12h，直至TLC检测反应完毕。反应液旋干，加碳酸氢钠调至弱酸性。加入45-50ml乙酸乙酯稀释，有机相用饱和氯化钠洗涤(20-30ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。
将咪唑-4-甲酸甲酯(6.0mmol，1.0eq)溶于8-12ml丙酮溶液，二溴烷烃(6.6-9.0mmol， 1.1-1.5eq)，K2CO3(9.0-12.0mmol,1.5-2.0eq)，Bu4N+Br-(0.30-0.48mmol,0.05-0.08eq)， 50-55℃加热回流7-8h。TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入20-30ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(15-25ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝2:1-1:1)。
步骤(2)中，目标物雷公藤红素咪唑衍生物I-1到I-34的制备可以采用如下步骤：
将雷公藤红素(0.05-0.15mmol，1.0eq)溶于2-5ml溶剂中，加入缚酸剂(0.20-0.75mmol， 4.0-5.0eq)，搅拌，加入步骤(1)制备所得中间体化合物II(0.15-0.60mmol，3.0-4.0eq)， 60-65℃加热回流反应。直至TLC检测显示反应完毕，加入40-60ml CH2Cl2稀释，水洗5-6 次。有机相旋干，柱层析(PE/EA＝8:1-4:1)，真空干燥过夜。
进一步的，含有效剂量的本发明化合物与药学上可接受的载体制成的药物组合物也在本发明的保护范围内。本发明化合物可以单独或与一种或一种以上药用载体制成不同剂型，例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、液体制剂等，以供临床口服、注射或局部用药。在这些不同制剂中，本发明化合物的含量可以是0.1％-99.9％。本发明化合物的给药量可以是0.001-10000 mg/kg/0.3天，根据临床需要可以适度调整。
上述雷公藤红素咪唑衍生物I在制备抗肿瘤药物中的用途也在本发明的保护范围内。本发明化合物可以单独或与临床上常用的抗肿瘤药物如抗代谢药物、烷化剂、抗肿瘤抗生素、抗肿瘤植物药、激素类联合应用，另外还可以与放射治疗联合应用。
有益效果：本发明首次公开了一种雷公藤红素衍生物，还公开了其制备方法，所采用的制备方法反应条件温和、所用试剂低毒、原料易得、后处理方便、产率高。根据药理实验表明，本发明雷公藤红素衍生物的抗肿瘤活性优良、稳定性好，可作为抗肿瘤药物应用，为后续的成药研发提供了理论基础。
附图说明
图1是化合物I-17在PBS中的稳定性检测图谱。
具体实施方案
为进一步阐明本发明，下面列举一系列实施例。这些实施例是例证性的，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1：中间体1-(3-溴丙基)咪唑氢溴酸盐的制备(化合物编号II-1，下同)
在一单颈瓶中，加入咪唑(6mmol，0.41g)，KHCO3(25.6mmol，2.56g)，Bu4N+Br-(0.128 mmol，0.042mg)，1,3-二溴丙烷3ml(30mmol)，加入10ml无水CH2Cl2溶解，室温反应50h。加入CH2Cl2 35ml，用水洗涤多次，直至TLC显示无杂质。有机相加入40％HBr 8ml，搅拌，静置于冰箱12小时。取水相，浓缩，得1-(3-溴丙基)咪唑氢溴酸盐(红棕色固体) 0.56g，产率34.8％。
ESI-MS：溴同位素特征峰189.0、191.0[M+H]+。
反应式如下：
实施例2：I-1的合成
将0.045g(0.1mmol)雷公藤红素溶于2ml DMF，加入0.042g NaHCO3(0.5mmol)，搅拌，加入1-(3-溴丙基)咪唑氢溴酸盐0.080g(0.3mmol)，60℃加热回流反应。直至TLC 检测显示反应完毕，加入50ml CH2Cl2稀释，水洗5-6次。有机相旋干，柱层析(PE/EA＝8:1)，真空干燥过夜得到橙红色固体31.1mg，产率55.7％。
ESI-MS：559.2[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.73(3H,s),0.94(3H,s),1.21(3H,s),1.35(3H,s), 1.56(3H,s),2.43(3H,s),3.95(1H,m),4.01(1H,m),4.09(2H,t,J＝7.3Hz),5.86(1H,d,J＝5.25 Hz),6.33(1H,s),6.78(1H,d,J＝7.13Hz),7.17(1H,d,J＝7.12Hz),7.34(1H,d,J＝5.25Hz), 7.92(1H,s).
实施例3：中间体1-(4-溴丁基)咪唑氢溴酸盐的制备(II-2)
以1,4-二溴丁烷3.6ml(30mmol)替换实施例1中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得 1-(4-溴丁基)咪唑氢溴酸盐(红棕色固体)0.45g，产率26.6％。
ESI-MS：溴同位素特征峰203.0、205.0[M+H]+。
反应式如下：
实施例4：I-2的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-2替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-2(橙红色固体)30.8mg，产率53.7％。
ESI-MS：573.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.70(3H,s),0.93(3H,s),1.20(3H,s),1.36(3H,s), 1.57(3H,s),2.45(3H,s),3.96(1H,m),4.00(1H,m),4.09(2H,t,J＝7.3Hz),5.88(1H,d,J＝5.24 Hz),6.35(1H,s),6.80(1H,d,J＝7.20Hz),7.16(1H,d,J＝7.21Hz),7.37(1H,d,J＝5.25Hz), 7.90(1H,s).
实施例5：中间体1-(5-溴戊基)咪唑氢溴酸盐的制备(II-3)
以1,5-二溴戊烷4.1ml(30mmol)替换实施例1中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得 1-(5-溴戊基)咪唑氢溴酸盐(红褐色固体)0.52g，产率29.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰217.0、219.0[M+H]+。
反应式如下：
实施例6：I-3的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-3替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-3(橙红色固体)29.8mg，产率50.7％。
ESI-MS：587.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.70(3H,s),0.95(3H,s),1.23(3H,s),1.37(3H,s), 1.56(3H,s),2.40(3H,s),3.94(1H,m),4.03(1H,m),4.10(2H,t,J＝7.5Hz),5.89(1H,d,J＝5.23 Hz),6.30(1H,s),6.75(1H,d,J＝7.16Hz),7.18(1H,d,J＝7.17Hz),7.36(1H,d,J＝5.26Hz), 7.95(1H,s).
实施例7：中间体1-(6-溴己基)咪唑氢溴酸盐的制备(II-4)
以1,6-二溴己烷4.6ml(30mmol)替换实施例1中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得 1-(6-溴己基)咪唑氢溴酸盐(红褐色固体)0.49g，产率26.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰231.0、233.0[M+H]+。
反应式如下：
实施例8：I-4的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-4替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-4(橙红色固体)31.9mg，产率53.0％。
ESI-MS：601.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.72(3H,s),0.95(3H,s),1.22(3H,s),1.38(3H,s), 1.57(3H,s),2.45(3H,s),3.94(1H,m),4.03(1H,m),4.11(2H,t,J＝7.3Hz),5.88(1H,d,J＝5.22 Hz),6.34(1H,s),6.79(1H,d,J＝7.11Hz),7.18(1H,d,J＝7.10Hz),7.35(1H,d,J＝5.25Hz), 7.90(1H,s).
实施例9：中间体1-(3-溴丙基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐的制备(II-5)
参照1-(3-溴丙基)咪唑氢溴酸盐的制备，将4-甲基咪唑(6mmol，0.49g)，KHCO3(12.8 mmol，1.28g)，Bu4N+Br-(0.128mmol，0.042g)，1,3-二溴丙烷3.0ml(30mmol)溶于10ml无水CH2Cl2，室温反应46h，加入CH2Cl2 25ml，用水洗涤多次，直至TLC显示无杂质。有机相加入40％HBr 8ml，搅拌，静置于冰箱12小时。取水相，70℃浓缩，得到1-(3-溴丙基) -4-甲基咪唑氢溴酸盐(棕红色粘稠物)0.42g，产率24.8％。
ESI-MS：溴同位素特征峰203.0、205.0[M+H]+。
实施例10：I-5的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-5替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-5(橙红色固体)29.3mg，产率51.2％。
ESI-MS：573.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.74(3H,s),0.88(3H,s),1.26(3H,s),1.30(3H,s), 1.59(3H,s),2.24(3H,s),2.44(3H,s),3.89(1H,m),3.97(1H,m),4.10(2H,t,J＝7.0Hz),5.93 (1H,d,J＝5.78Hz),6.36(1H,s),6.96(1H,s),7.28(1H,d,J＝5.77Hz),8.10(1H,s).
实施例11：中间体1-(4-溴丁基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐的制备(II-6)
以1,4-二溴丁烷3.6ml(30mmol)替换实施例9中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得到1-(4-溴丁基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐(棕红色粘稠物)0.37g，产率21.7％。
ESI-MS：溴同位素特征峰217.0、219.0[M+H]+。
实施例12：I-6的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-6替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-6(橙红色固体)28.6mg，产率48.8％。
ESI-MS：587.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.75(3H,s),0.86(3H,s),1.25(3H,s),1.31(3H,s), 1.58(3H,s),2.23(3H,s),2.46(3H,s),3.88(1H,m),3.95(1H,m),4.11(2H,t,J＝7.1Hz),5.93 (1H,d,J＝5.74Hz),6.35(1H,s),6.97(1H,s),7.26(1H,d,J＝5.73Hz),8.06(1H,s).
实施例13：中间体1-(5-溴戊基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐的制备(II-7)
以1,5-二溴戊烷4.1ml(30mmol)替换实施例9中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得到1-(5-溴戊基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐(棕红色粘稠物)0.40g，产率21.5％。
ESI-MS：溴同位素特征峰231.0、233.0[M+H]+。
实施例14：I-7的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-7替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-7(橙红色固体)31.9mg，产率53.1％。
ESI-MS：601.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.77(3H,s),0.85(3H,s),1.25(3H,s),1.32(3H,s), 1.59(3H,s),2.23(3H,s),2.48(3H,s),3.86(1H,m),3.97(1H,m),4.13(2H,t,J＝7.2Hz),5.95 (1H,d,J＝5.74Hz),6.37(1H,s),6.94(1H,s),7.25(1H,d,J＝5.76Hz),8.10(1H,s).
实施例15：中间体1-(6-溴己基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐的制备(II-8)
以1,6-二溴戊烷4.6ml(30mmol)替换实施例9中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得到1-(6-溴己基)-4-甲基咪唑氢溴酸盐(棕红色粘稠物)0.39g，产率20.1％。
ESI-MS：溴同位素特征峰245.0、247.0[M+H]+。
实施例16：I-8的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-8替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-8(橙红色固体)33.8mg，产率55.0％。
ESI-MS：615.4[M+H]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.75(3H,s),0.87(3H,s),1.27(3H,s),1.33(3H,s), 1.60(3H,s),2.21(3H,s),2.45(3H,s),3.86(1H,m),3.96(1H,m),4.13(2H,t,J＝7.3Hz),5.93 (1H,d,J＝5.72Hz),6.37(1H,s),6.99(1H,s),7.27(1H,d,J＝5.74Hz),8.06(1H,s).
实施例17：中间体1-(3-溴丙基)-4-硝基咪唑的制备(II-9)
将0.68g 4-硝基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,3-二溴丙烷0.66ml(6.6 mmol)，K2CO31.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，真空干燥过夜得1-(3-溴丙基)-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.69g，产率49.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰234.0，236.0[M+H]+。
实施例18：I-9的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-9替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-9(橙红色固体)32.1mg，产率54.0％。
ESI-MS：617.5[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.54(3H,s),1.10(3H,s),1.22(3H,s),1.27(3H,s), 1.48(3H,s),2.23(3H,s),3.96(1H,m),4.07(1H,m),4.11(2H,t,J＝7.4Hz),6.39(1H,d,J＝6.6 Hz),6.55(1H,s),7.01(1H,d,J＝6.5Hz),7.45(1H,s),7.84(1H,s).
实施例19：中间体1-(4-溴丁基)-4-硝基咪唑的制备(II-10)
以1,4-二溴丁烷0.78ml(6.6mmol)替换实施例17中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(4-溴丁基)-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.78g，产率52.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰248.0，250.0[M+H]+。
实施例20：I-10的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-10替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-10(橙红色固体)29.5mg，产率47.8％。
ESI-MS：640.5[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.53(3H,s),1.11(3H,s),1.20(3H,s),1.28(3H,s), 1.47(3H,s),2.22(3H,s),3.97(1H,m),4.08(1H,m),4.12(2H,t,J＝7.3Hz),6.38(1H,d,J＝6.6 Hz),6.52(1H,s),7.03(1H,d,J＝6.4Hz),7.47(1H,s),7.80(1H,s).
实施例21：中间体1-(5-溴戊基)-4-硝基咪唑的制备(II-11)
以1,5-二溴戊烷0.90ml(6.6mmol)替换实施例17中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(5-溴戊基)-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.82g，产率52.2％。
ESI-MS：溴同位素特征峰262.0，264.0[M+H]+。
实施例22：I-11的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-11替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物 I-11(橙红色固体)33.4mg，产率52.9％。
ESI-MS：654.5[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.51(3H,s),1.10(3H,s),1.19(3H,s),1.29(3H,s), 1.49(3H,s),2.26(3H,s),3.99(1H,m),4.06(1H,m),4.15(2H,t,J＝7.2Hz),6.40(1H,d,J＝6.4 Hz),6.52(1H,s),7.06(1H,d,J＝6.6Hz),7.50(1H,s),7.83(1H,s).
实施例23：中间体1-(6-溴己基)-4-硝基咪唑的制备(II-12)
以1,6-二溴己烷1.0ml(6.6mmol)替换实施例17中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(5-溴戊基)-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.87g，产率52.7％。
ESI-MS：溴同位素特征峰276.0，278.0[M+H]+。
实施例24：I-12的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-12替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-12(橙红色固体)33.9mg，产率52.5％。
ESI-MS：668.5[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.54(3H,s),1.12(3H,s),1.23(3H,s),1.26(3H,s), 1.48(3H,s),2.23(3H,s),3.98(1H,m),4.07(1H,m),4.15(2H,t,J＝7.3Hz),6.35(1H,d,J＝6.6 Hz),6.55(1H,s),7.04(1H,d,J＝6.5Hz),7.46(1H,s),7.82(1H,s).
实施例25：中间体1-(3-溴丙基)-4,5-二氰基咪唑的制备(II-13)
将0.71g 4,5-二氰基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,3-二溴丙烷0.66ml (6.6mmol)，K2CO31.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，真空干燥过夜得1-(3-溴丙基)-4,5-二氰基咪唑(淡黄色油状物)，0.69g，产率48.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰239.0，241.0[M+H]+。
实施例26：I-13的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-13替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-13(橙红色固体)32.8mg，产率53.9％。
ESI-MS：631.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.72(3H,s),0.90(3H,s),1.02(3H,s),1.22(3H,s), 1.28(3H,s),2.44(3H,s),3.98(1H,m),4.18(1H,m),4.25(2H,t,J＝7.4Hz),5.87(1H,d,J＝6.1 Hz),6.34(1H,s),7.36(1H,d,J＝6.0Hz),8.45(1H,s).
实施例27：中间体1-(4-溴丁基)-4,5-二氰基咪唑的制备(II-14)
以1,4-二溴丁烷0.78ml(6.6mmol)替换实施例25中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(4-溴丁基)-4，5-二氰基咪唑(淡黄色油状物)0.79g，产率52.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰252.1，254.1[M+H]+。
实施例28：I-14的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-14替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-14(橙红色固体)30.8mg，产率49.5％。
ESI-MS：645.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.70(3H,s),0.89(3H,s),1.01(3H,s),1.20(3H,s), 1.27(3H,s),2.42(3H,s),3.97(1H,m),4.17(1H,m),4.23(2H,t,J＝7.3Hz),5.86(1H,d,J＝6.2 Hz),6.33(1H,s),7.34(1H,d,J＝6.3Hz),8.43(1H,s).
实施例29：中间体1-(5-溴戊基)-4,5-二氰基咪唑的制备(II-15)
以1,5-二溴戊烷0.90ml(6.6mmol)替换实施例25中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(5-溴戊基)-4,5-二氰基咪唑(淡黄色油状物)0.81g，产率50.9％。
ESI-MS：溴同位素特征峰266.1，268.1[M+H]+。
实施例30：I-15的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-15替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-15(橙红色固体)34.3mg，产率53.9％。
ESI-MS：659.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.72(3H,s),0.87(3H,s),1.02(3H,s),1.23(3H,s), 1.28(3H,s),2.45(3H,s),3.99(1H,m),4.15(1H,m),4.26(2H,t,J＝7.4Hz),5.85(1H,d,J＝6.2 Hz),6.30(1H,s),7.35(1H,d,J＝6.1Hz),8.50(1H,s).
实施例31：中间体1-(6-溴己基)-4,5-二氰基咪唑的制备(II-16)
以1,6-二溴己烷1.0ml(6.6mmol)替换实施例25中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(6-溴己基)-4,5-二氰基咪唑(淡黄色油状物)0.85g，产率50.9％。
ESI-MS：溴同位素特征峰280.1，282.1[M+H]+。
实施例32：I-16的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-16替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-16(橙红色固体)34.2mg，产率52.6％。
ESI-MS：673.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.73(3H,s),0.90(3H,s),1.02(3H,s),1.22(3H,s), 1.25(3H,s),2.44(3H,s),3.98(1H,m),4.18(1H,m),4.26(2H,t,J＝7.2Hz),5.87(1H,d,J＝6.5 Hz),6.35(1H,s),7.37(1H,d,J＝6.5Hz),8.47(1H,s).
实施例33：中间体1-(3-溴丙基)-2-氯-4-硝基咪唑的制备(II-17)
将0.88g 2-氯-4-硝基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,3-二溴丙烷0.66ml (6.6mmol)，K2CO31.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，真空干燥过夜得1-(3-溴丙基)-2-氯-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.81g，产率50.6％。
ESI-MS：溴同位素特征峰268.0，270.0[M+H]+。
实施例34：I-17的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-17替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-17(橙红色固体)35.6mg，产率55.9％。
ESI-MS：660.4[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.69(3H,s),0.90(3H,s),1.13(3H,s),1.24(3H,s), 1.36(3H,s),2.33(3H,s),3.87(1H,m),3.92(1H,m),4.15(2H,t,J＝7.2Hz),5.93(1H,d,J＝6.5 Hz),6.13(1H,s),7.10(1H,s),7.37(1H,d,J＝6.6Hz).
实施例35：中间体1-(4-溴丁基)-2-氯-4-硝基咪唑的制备(II-18)
以1,4-二溴丁烷0.78ml(6.6mmol)替代实施例33中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(4-溴丁基)-2-氯-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.84g，产率49.7％。
ESI-MS：溴同位素特征峰282.0，284.0[M+H]+。
实施例36：I-18的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-18替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-18(橙红色固体)36.1mg，产率55.4％。
ESI-MS：674.4[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.70(3H,s),0.91(3H,s),1.14(3H,s),1.24(3H,s), 1.35(3H,s),2.35(3H,s),3.86(1H,m),3.93(1H,m),4.16(2H,t,J＝7.3Hz),5.96(1H,d,J＝6.7 Hz),6.15(1H,s),7.12(1H,s),7.38(1H,d,J＝6.6Hz).
实施例37：中间体1-(5-溴戊基)-2-氯-4-硝基咪唑的制备(II-19)
以1,5-二溴戊烷0.9ml(6.6mmol)替代实施例33中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(5-溴戊基)-2-氯-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.89g，产率50.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰296.0，298.0[M+H]+。
实施例38：I-19的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-19替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-19(橙红色固体)32.4mg，产率48.7％。
ESI-MS：688.4[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.68(3H,s),0.93(3H,s),1.14(3H,s),1.25(3H,s), 1.37(3H,s),2.35(3H,s),3.88(1H,m),3.93(1H,m),4.16(2H,t,J＝7.3Hz),5.94(1H,d,J＝6.9 Hz),6.15(1H,s),7.11(1H,s),7.39(1H,d,J＝6.8Hz).
实施例39：中间体1-(6-溴己基)-2-氯-4-硝基咪唑的制备(II-20)
以1,6-二溴己烷1.0ml(6.6mmol)替代实施例33中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(6-溴己基)-2-氯-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.94g，产率50.5％。
ESI-MS：溴同位素特征峰310.0，312.0[M+H]+。
实施例40：I-20的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-20替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-20(橙红色固体)35.6mg，产率52.4％。
ESI-MS：702.4[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.68(3H,s),0.91(3H,s),1.15(3H,s),1.26(3H,s), 1.37(3H,s),2.36(3H,s),3.88(1H,m),3.93(1H,m),4.16(2H,t,J＝7.4Hz),5.94(1H,d,J＝6.7 Hz),6.15(1H,s),7.14(1H,s),7.40(1H,d,J＝6.6Hz).
实施例41：中间体1-(3-溴丙基)-2-溴-4-硝基咪唑的制备(II-21)
将1.15g 2-溴-4-硝基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,3-二溴丙烷0.66ml (6.6mmol)，K2CO31.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，真空干燥过夜得1-(3-溴丙基)-2-溴-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.89g，产率47.6％。
ESI-MS：溴同位素特征峰311.9，313.9[M+H]+。
实施例42：I-21的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-21替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-21(橙红色固体)35.3mg，产率51.8％。
ESI-MS：704.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.68(3H,s),0.97(3H,s),1.09(3H,s),1.19(3H,s), 1.26(3H,s),2.20(3H,s),3.93(1H,m),3.99(1H,m),4.17(2H,t,J＝7.3Hz),6.32(1H,d,J＝6.2 Hz),6.58(1H,s),7.22(1H,s),7.62(1H,d,J＝6.1Hz).
实施例43：中间体1-(4-溴丁基)-2-溴-4-硝基咪唑的制备(II-22)
以1,4-二溴丁烷0.78ml(6.6mmol)替代实施例41中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(4-溴丁基)-2-溴-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.96g，产率49.2％。
ESI-MS：溴同位素特征峰325.9，327.9[M+H]+。
实施例44：I-22的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-22替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-22(橙红色固体)34.7mg，产率49.9％。
ESI-MS：718.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.69(3H,s),0.98(3H,s),1.10(3H,s),1.20(3H,s), 1.25(3H,s),2.21(3H,s),3.94(1H,m),3.98(1H,m),4.16(2H,t,J＝7.4Hz),6.35(1H,d,J＝6.2 Hz),6.59(1H,s),7.24(1H,s),7.65(1H,d,J＝6.1Hz).
实施例45：中间体1-(5-溴戊基)-2-溴-4-硝基咪唑的制备(II-23)
以1,5-二溴戊烷0.9ml(6.6mmol)替代实施例41中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得 1-(5-溴戊基)-2-溴-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)1.01g，产率49.7％。
ESI-MS：溴同位素特征峰339.9，341.9[M+H]+。
实施例46：I-23的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-23替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-23(橙红色固体)36.8mg，产率51.9％。
ESI-MS：732.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.69(3H,s),0.96(3H,s),1.08(3H,s),1.17(3H,s), 1.27(3H,s),2.22(3H,s),3.92(1H,m),3.98(1H,m),4.16(2H,t,J＝7.2Hz),6.34(1H,d,J＝6.6 Hz),6.56(1H,s),7.24(1H,s),7.63(1H,d,J＝6.5Hz).
实施例47：中间体1-(6-溴己基)-2-溴-4-硝基咪唑的制备(II-24)
以1,6-二溴己烷1.0ml(6.6mmol)替代实施例41中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得 1-(6-溴己基)-2-溴-4-硝基咪唑(淡黄色油状物)1.05g，产率49.5％。
ESI-MS：溴同位素特征峰353.9，355.9[M+H]+。
实施例48：I-24的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-24替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-24(橙红色固体)34.6mg，产率47.8％。
ESI-MS：746.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.70(3H,s),0.99(3H,s),1.07(3H,s),1.17(3H,s), 1.28(3H,s),2.21(3H,s),3.94(1H,m),3.98(1H,m),4.16(2H,t,J＝7.6Hz),6.35(1H,d,J＝6.3 Hz),6.55(1H,s),7.25(1H,s),7.63(1H,d,J＝6.4Hz).
实施例49：中间体1-(3-溴丙基)-2-硝基咪唑的制备(II-25)
将0.68g 2-硝基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,3-二溴丙烷0.66ml(6.6 mmol)，K2CO3 1.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC 监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，真空干燥过夜得1-(3-溴丙基)-2-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.58g，产率41.4％。
ESI-MS：溴同位素特征峰234.0，236.0[M+H]+。
实施例50：I-25的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-25替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-25(橙红色固体)30.9mg，产率51.2％。
ESI-MS：626.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.67(3H,s),1.23(3H,s),1.34(3H,s),1.40(3H,s), 1.49(3H,s),2.46(3H,s),3.87(1H,m),4.01(1H,m),4.22(2H,t,J＝7.2Hz),6.27(1H,d,J＝6.6 Hz),6.63(1H,s),7.14(1H,d,J＝7.1Hz),7.37(1H,d,J＝6.7Hz),7.69(1H,d,J＝7.0Hz).
实施例51：中间体1-(4-溴丁基)-2-硝基咪唑的制备(II-26)
以1,4-二溴丁烷0.78ml(6.6mmol)替换实施例49中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1- (4-溴丁基)-2-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.61mg，产率41.2％。
ESI-MS：溴同位素特征峰248.0，250.0[M+H]+。
实施例52：I-26的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-26替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-26(橙红色固体)30.6mg，产率49.9％。
ESI-MS：640.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.66(3H,s),1.25(3H,s),1.34(3H,s),1.42(3H,s), 1.47(3H,s),2.45(3H,s),3.86(1H,m),4.02(1H,m),4.24(2H,t,J＝7.6Hz),6.28(1H,d,J＝6.6 Hz),6.65(1H,s),7.16(1H,d,J＝7.0Hz),7.38(1H,d,J＝6.8Hz),7.71(1H,d,J＝7.2Hz).
实施例53：中间体1-(5-溴戊基)-2-硝基咪唑的制备(II-27)
以1,5-二溴戊烷0.90ml(6.6mmol)替换实施例49中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得1-(5-溴戊基)-2-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.65mg，产率41.7％。
ESI-MS：溴同位素特征峰262.0，264.0[M+H]+。
实施例54：I-27的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-27替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-27(橙红色固体)31.1mg，产率49.3％。
ESI-MS：654.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.68(3H,s),1.25(3H,s),1.36(3H,s),1.42(3H,s), 1.45(3H,s),2.47(3H,s),3.88(1H,m),4.03(1H,m),4.23(2H,t,J＝7.2Hz),6.25(1H,d,J＝6.5 Hz),6.64(1H,s),7.16(1H,d,J＝7.3Hz),7.35(1H,d,J＝6.6Hz),7.67(1H,d,J＝7.3Hz).
实施例55：中间体1-(6-溴己基)-2-硝基咪唑的制备(II-28)
以1,6-二溴己烷1.0ml(6.6mmol)替换实施例49中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得 1-(6-溴己基)-2-硝基咪唑(淡黄色油状物)0.67mg，产率40.6％。
ESI-MS：溴同位素特征峰276.0，278.0[M+H]+。
实施例56：I-28的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-28替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-28(橙红色固体)32.9mg，产率51.0％。
ESI-MS：668.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.65(3H,s),1.25(3H,s),1.35(3H,s),1.42(3H,s), 1.48(3H,s),2.45(3H,s),3.85(1H,m),4.05(1H,m),4.25(2H,t,J＝7.3Hz),6.25(1H,d,J＝6.5 Hz),6.65(1H,s),7.15(1H,d,J＝7.0Hz),7.35(1H,d,J＝6.7Hz),7.66(1H,d,J＝7.1Hz).
实施例57：中间体1-(3-溴丙基)咪唑-4-甲酸甲酯的制备(II-29)
57.1咪唑-4-甲酸甲酯的制备
将1.34g(12mmol)咪唑-4-甲酸溶于40ml无水甲醇中，再加入3ml浓硫酸，69.6℃加热回流反应12h，直至TLC检测反应完毕。反应液旋干，加碳酸氢钠调至弱酸性。加入60ml 乙酸乙酯稀释，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，得到咪唑-4-甲酸甲酯(黄褐色固体)1.31g，产率79.1％。
ESI-MS：127.1[M+H]+。
57.2 1-(3-溴丙基)咪唑-4-甲酸甲酯的制备
将0.76g咪唑-4-甲酸甲酯(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,3-二溴丙烷0.66ml (6.6mmol)，K2CO31.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，得到1- (3-溴丙基)咪唑-4-甲酸甲酯(淡黄色固体)0.57mg，产率38.9％。
ESI-MS：溴同位素特征峰247.0，249.0[M+H]+。
实施例58：I-29的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-29替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-29(橙红色固体)30.5mg，产率49.5％。
ESI-MS：617.4[M+H]+；639.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.75(3H,s),1.29(3H,s),1.38(3H,s),1.47(3H,s), 1.53(3H,s),2.46(3H,s),3.79(3H,s),3.95(1H,m),4.11(1H,m),4.31(2H,t,J＝7.2Hz),6.37 (1H,d,J＝6.6Hz),6.76(1H,s),6.97(1H,s),7.37(1H,d,J＝6.5Hz),7.81(1H,s).
实施例59：中间体1-(4-溴丁基)咪唑-4-甲酸甲酯的制备(II-30)
以1,4-二溴丁烷0.78ml(6.6mmol)替代实施例57.2中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得到1-(4-溴丁基)咪唑-4-甲酸甲酯(淡黄色固体)0.59mg，产率37.9％。
ESI-MS：溴同位素特征峰261.0，263.0[M+H]+。
实施例60：I-30的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-30替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-30(橙红色固体)32.6mg，产率51.6％。
ESI-MS：631.4[M+H]+；653.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.76(3H,s),1.28(3H,s),1.37(3H,s),1.46(3H,s), 1.54(3H,s),2.45(3H,s),3.78(3H,s),3.96(1H,m),4.12(1H,m),4.33(2H,t,J＝7.6Hz),6.39 (1H,d,J＝6.5Hz),6.75(1H,s),6.95(1H,s),7.35(1H,d,J＝6.6Hz),7.80(1H,s).
实施例61：中间体1-(5-溴戊基)咪唑-4-甲酸甲酯的制备(II-31)
以1,5-二溴戊烷0.90ml(6.6mmol)替代实施例57.2中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得到1-(5-溴戊基)咪唑-4-甲酸甲酯(淡黄色固体)0.62mg，产率37.6％。
ESI-MS：溴同位素特征峰275.0，277.0[M+H]+。
实施例62：I-31的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-31替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-31(橙红色固体)33.9mg，产率52.6％。
ESI-MS：645.4[M+H]+；667.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.74(3H,s),1.28(3H,s),1.39(3H,s),1.46(3H,s), 1.54(3H,s),2.47(3H,s),3.80(3H,s),3.97(1H,m),4.14(1H,m),4.35(2H,t,J＝7.6Hz),6.36 (1H,d,J＝6.5Hz),6.74(1H,s),6.93(1H,s),7.34(1H,d,J＝6.6Hz),7.85(1H,s).
实施例63：中间体1-(6-溴己基)咪唑-4-甲酸甲酯的制备(II-32)
以1,6-二溴己烷1.0ml(6.6mmol)替代实施例57.2中的1,3-二溴丙烷，其他条件不变，得到1-(6-溴己基)咪唑-4-甲酸甲酯(淡黄色固体)0.68mg，产率39.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰289.0，291.0[M+H]+。
实施例64：I-32的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-32替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-32(橙红色固体)33.0mg，产率50.1％。
ESI-MS：659.4[M+H]+；681.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.74(3H,s),1.27(3H,s),1.36(3H,s),1.46(3H,s), 1.55(3H,s),2.45(3H,s),3.76(3H,s),3.97(1H,m),4.12(1H,m),4.32(2H,t,J＝7.4Hz),6.35 (1H,d,J＝6.5Hz),6.74(1H,s),6.95(1H,s),7.34(1H,d,J＝6.7Hz),7.80(1H,s).
实施例65：中间体1-(1,4-二溴-2-丁烯基)-4-硝基咪唑的制备(II-33)
将0.68g 4-硝基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,4-二溴-2-丁烯1.93g(9 mmol)，K2CO31.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，得1-(1,4-二溴 -2-丁烯基)-4-硝基咪唑(白色针状固体)0.63g，产率42.3％。
ESI-MS：溴同位素特征峰245.0，247.0[M+H]+。
实施例66：I-33的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-33替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-33(橙红色固体)30.2mg，产率49.1％。
ESI-MS：638.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.67(3H,s),1.23(3H,s),1.34(3H,s),1.40(3H,s), 1.49(3H,s),2.46(3H,s),3.94(1H,d,J＝5.9Hz),4.98(1H,d,J＝6.1Hz),5.93(2H,m),6.27(1H, s),6.35(1H,d,J＝6.3Hz),6.68(1H,s),7.27(1H,d,J＝6.5Hz),7.93(1H,s).
实施例67：中间体1-(1,4-二溴-2-丁烯基)-2-氯-4-硝基咪唑的制备(II-34)
将0.88g 2-氯-4-硝基咪唑(6mmol)溶于10ml丙酮溶液，依次加入1,4-二溴-2-丁烯1.93 g(9mmol)，K2CO3 1.66g(12mmol)，Bu4N+Br-0.12g(0.36mmol)，51℃加热回流7.5h，TLC监测显示反应完毕。反应液旋干，加入25ml乙酸乙酯稀释，水洗5-6次，有机相用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(PE/EA＝1:1)，得1-(1,4- 二溴-2-丁烯基)-2-氯-4-硝基咪唑(白色针状固体)0.83g，产率49.2％。
ESI-MS：溴同位素特征峰278.9，280.9[M+H]+。
实施例68：I-34的合成
参照化合物I-1的制法，以化合物II-34替换化合物II-1，其他条件不变，制得目标化合物I-34(橙红色固体)32.8mg，产率50.5％。
ESI-MS：672.3[M+Na]+。
1H-NMR(300MHz,CDCl3,TMS),δppm:0.65(3H,s),1.29(3H,s),1.37(3H,s),1.42(3H,s), 1.59(3H,s),2.42(3H,s),3.95(1H,d,J＝6.0Hz),4.97(1H,d,J＝6.1Hz),5.95(2H,m),6.27(1H, s),6.37(1H,d,J＝6.4Hz),7.26(1H,d,J＝6.3Hz),7.83(1H,s).
实施例69：化合物的药理实验
采用四甲基氮唑蓝比色法(MTT法)对本发明化合物进行抗肿瘤活性测试，选取雷公藤红素(CE)作为阳性对照药。
仪器：超净工作台(SW-CJ-1FD，AIRTECH，苏净安泰)、恒温CO2培养箱(3111，Thermo，美国)、倒置生物显微镜(IX71，OLYMPUS，日本)、酶联免疫检测仪(Model680，BIO-RAD，美国)、平板摇床(Kylin-bell lab Instruments)、高压灭菌锅(YXO.SG41.280，上海华线)，离心机(SIGMA)。
试剂：DMEM(GIBCO)、胎牛血清(GIBCO)、胰蛋白酶(SIGMA)，DMSO(SIGMA)。
细胞株：人非小细胞肺癌细胞株A549，人结肠癌细胞株HCT116，人骨肉瘤细胞株U2OS，人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，人肾小管上皮细胞HK-2，人肝细胞L-20(均由江苏凯基生物技术股份有限公司提供)。
方法：将冻存的细胞株复苏，置于恒温37℃CO2培养箱中培养，每天换液一次，待其处于指数生长期状态良好时即可铺板。加入1ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化1-2min，在显微镜下观察细胞状态，当贴壁细胞变圆收缩时即可吸除消化液，加入1-2ml含10％胎牛血清的DMEM培养基制成细胞悬液，进行细胞计数，按照每孔5×104个细胞数及总孔数计算所需细胞悬液的量，将此细胞悬液接种于96孔板上，100μl/孔，周围用PBS液封，置于恒温 37℃CO2培养箱中培养24h。
用DMEM培养基配制受试药物、阳性对照雷公藤红素、空白对照DMSO，使其终浓度为5μM/孔，每个药物3个复孔，培养48小时。将MTT试剂加入到96孔板中，10μl/孔，继续孵育4h。吸除板内培养基，每孔加入100μl DMSO，平板摇床振摇10min使结晶溶解。用酶联免疫检测仪在波长570nm处检测每孔的吸光值，并按下列公式计算细胞抑制率。3次初筛结果平均值为其最终抑制率，初筛抑制率大于60％的化合物进行浓度梯度筛选(5倍稀释)，以备计算受试药物的IC50值(graphpad软件计算)，3次重复实验结果为所测化合物的最终IC50值。
细胞抑制率％＝[(空白对照OD值－给药组OD值)/空白对照组OD值]×100％
结果：受试化合物的抑制率均大于50％，因此对所有目标化合物进行IC50的测试。
表1.部分受试化合物对A549细胞株的抑制作用
由表1可知，本发明大部分化合物对A549的抑制活性均显著优于雷公藤红素，其中以化合物I-17活性最佳，其IC50值为0.58±0.08μM。
表2.部分受试化合物对HCT116细胞株的抑制作用
由表2可知，本发明大部分化合物对HCT116细胞活性明显强于雷公藤红素，其中化合物I-17活性最优，与雷公藤红素相比，活性提高约3倍。
表3.部分受试化合物对U2OS细胞株的抑制作用
由表3数据可知本发明部分化合物对U2OS细胞活性明显高于雷公藤红素(I-9至I-12， I-17至I-23，I-25至I-28，I-31，I-33，I-34)，其余化合物基本保持雷公藤红素的活性，其中以化合物I-17活性最佳，其IC50值为0.57±0.01μM。
表4.受试化合物对MDA-MB-231细胞株的抑制作用
由表4数据可知本发明部分化合物对MDA-MB-231细胞活性明显高于雷公藤红素(I-9 至I-12，I-17)，部分化合物与雷公藤红素的活性相当，其中以化合物I-17活性最佳，其IC50值为0.58±0.02μM。
综上所述，所有受试化合物较于雷公藤红素对A549、HCT116、U2OS、MDA-MB-231细胞株均具有较强抑制作用。所有受试化合物中以化合物I-17活性最佳，对四种细胞株的IC50值分别为0.58±0.08μM、0.59±0.07μM、0.57±0.01μM、0.57±0.02μM，相较于母体活性提高约至3倍，有望成为新的抗肿瘤药物，值得深入研究。
实施例70：雷公藤红素咪唑衍生物稳定性体外试验
仪器：高效液相色谱仪(Shimadzu LC-20A，岛津公司，日本)；恒温水浴锅(3111，Thermo，美国)；分析天平(Sartorius BT25S，Max 21g，d＝0.001mg)。
材料：雷公藤红素；I-17；CE-S(结构如下式)；GAS(结构如下式)。甲醇(色谱纯，TEDIA，美国)；pH 7.4磷酸缓冲液(PBS)。
方法：将109.6mg齐墩果酸(0.24mmol)溶于5ml的DMF中，依次加入24μl溴苄(0.2mmol)，70.4mg NaHCO3(0.8mmol)反应6h，将反应液溶于乙酸乙酯中，用水洗三次(20 ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析 (PE/EA＝4:1)，真空干燥过夜得GAS(63.6mg，58.0％)。
将225.5mg雷公藤红素(0.5mmol)溶于5ml DMF中，加入147.8mg NaHCO3(1.68mmol) 活化2h，再缓慢滴加29.8μl溴乙醇(0.42mmol)，搅拌6h。将反应液溶于二氯甲烷，用水洗三次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干，快速柱层析(DCM/MeOH＝50:1)，真空干燥过夜得CE-S(125.7mg，55.7％)。
称取雷公藤红素2.0mg，CE-S 2.0mg，I-17 2.0mg，分别加入内标化合物GAS1.0mg，加入1ml甲醇，充分溶解，再将该甲醇溶液混合于1ml PBS中，混匀，37℃孵育。分别于0、 3、6小时取样检测。样品经0.45μm微孔滤膜过滤后，采用高效液相色谱法测定。色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6×250mm，5μm)；流动相,甲醇:水＝9:1，进样量20μl，流速：1.0ml/min；柱温：室温；检测波长：254nm。
结果：如图1所示，雷公藤红素在PBS中随着时间的延长迅速变少(图1a)，而化合物I-17随着时间的增加并未减少(图1b)，说明化合物I-17相较于雷公藤红素具有更高的稳定性。研究发现，在该条件下雷公藤红素的降解可能是由于其结构中具有羧基。为了进一步验证该观点，我们取化合物CE-S进一步检测，如图1c所示，在相同条件下CE-S并没有随时间的改变而减少。因此，可以推测雷公藤红素结构中的羧基可能是降低其稳定性的原因之一。本发明化合物通过对先导物羧基的修饰，合成雷公藤红素C-29酯类衍生物，改善了化合物稳定性。

Claims (9)

1.一种雷公藤红素咪唑衍生物，其特征在于，具有式I所示的结构：
其中，R1、R2、R3选自H、烷基、含杂原子的烷基、卤素或硝基；
X选自含3至6个碳原子的饱和或不饱和直链脂肪烃片段。
2.根据权利要求1所述的雷公藤红素咪唑衍生物，其特征在于，选自化合物I-1到I-34：
3.权利要求1或2所述雷公藤红素咪唑衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)根据如下反应式制备得到中间体化合物II：
(2)制备雷公藤红素咪唑衍生物I：雷公藤红素与步骤(1)制备所得中间体化合物II或其无机酸盐在缚酸剂下成酯，得到目标物雷公藤红素咪唑衍生物I：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述缚酸剂选自碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸氢钠、三乙胺或吡啶中的一种或多种。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)的反应体系所采用的溶剂选自DMF、丙酮、乙腈、甲苯、苯、二甲苯、1,4-二氧六环、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃或乙醚中的一种或多种。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，反应温度为0℃～60℃。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，与中间体化合物II成盐的无机酸选自盐酸、氢溴酸或氢碘酸。
8.一种以权利要求1或2所述雷公藤红素咪唑衍生物I为有效成分的药物组合物。
9.权利要求1或2所述雷公藤红素咪唑衍生物I在制备抗肿瘤药物中的用途。
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