TW202320858A - 免疫接合物及方法 - Google Patents

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Abstract

式(I)之免疫接合物包括用於將抗體靶向配體(Ab)鍵聯至藥物(D)之鍵聯基。此類免疫接合物之實施例可用於將藥物遞送至所選擇之細胞或組織，例如用於治療癌症。 Ab-[S-L 1- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D] n　　　　　　　　　(I)

Description

免疫接合物及方法
本申請案係關於包括用於將抗體靶向配體鍵聯至細胞殺滅部份（諸如藥物）之鍵聯基之接合物，製作此類接合物之方法，以及使用此類接合物將細胞殺滅部份遞送至所選擇的細胞或組織的方法，例如用於治療或抑制癌症。
已開發用於醫療用途之多種抗體藥物接合物(antibody-drug conjugate, ADC)。參見例如Nejadmoghaddam, M. et al., 「Antibody-Drug Conjugates: Possibilities and Challenges」, Avicenna J Med Biotech 11(1), 3-23 (2019)。ADC中之抗體用作將藥物遞送至所選擇的細胞或組織，諸如癌細胞或腫瘤之靶向劑。在美國，美國食品及藥物管理局(FDA)已批准若干ADC配方，包括英妥珠單抗奧佐米星(inotuzumab ozogamicin)（商品名BESPONSA）、吉妥珠單抗奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin)（商品名MYLOTARG）、布妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)（商品名ADCETRIS）、及阿多-曲妥珠單抗恩他新(ado-trastuzumab emtansine)（商品名KADCYLA）。
美國專利第10,155,821號揭示抗腫瘤化合物經由連接子與抗HER2抗體接合之ADC。亦參見美國專利公開案第2020/0385486號及第2019/0077880號。曲妥珠單抗德魯替康係ADC之實例，其中抗HER2抗體（曲妥珠單抗）經由可裂解之馬來醯亞胺四肽連接子附接至抗腫瘤化合物（德魯替康）。FDA已批准稱為fam-曲妥珠單抗德魯替康-nxki（商品名ENHERTU）之配方，用於治療患有不可切除或轉移性HER2陽性乳癌的成年患者，該等患者在轉移性背景下已經接受了二或更多次基於抗HER2的治療方案。圖1繪示據信連接子將抗體(mAb)連接至藥物部份之方式。
FDA的批准代表治療性ADC之持續發展的里程碑。然而，仍然需要改進的ADC，以幫助解決長期以來感受到的對治療癌症及/或向所選擇的細胞或組織遞送治療酬載的額外選項的需求。
一些實施例提供式(I)之免疫接合物，其包含抗體或抗原結合片段(Ab)及藥物部份(D)以及將Ab連接至D之連接子。在一實施例中，式(I)之免疫接合物包含式(II)之藥物部份。
一實施例提供具有式(I)之免疫接合物， Ab-[S-L 1- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D] n(I) 其中： Ab係抗體或抗原結合片段； L 1係
Figure 02_image001
； L 2不存在、係
Figure 02_image003
或
Figure 02_image005
； Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基； L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–或–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–； n 1獨立地係0至12之整數； L 4係四肽殘基； L 5不存在或係–[NH(CH 2)n 2]n 3–； n 2係0至6之整數； n 3係0至2之整數； L 6不存在、或係
Figure 02_image007
； L 7不存在、係
Figure 02_image009
； D係藥物部份；且 n係1至10之整數。
在一實施例中，式(I)中之D係具有以下結構之式(II)之藥物部份：
Figure 02_image011
(II) 其中： R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環； R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、或經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2； X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–； X 2係–OR 9、-SR 9、或-NHR 9； R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； m係1或2； n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0； n 6係0、1或2； 各Y獨立地係H或鹵素； 各p獨立地係1、2、3、4、5、或6； 各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6； 各t獨立地係1、2、3、4、5、或6； R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7； R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3； R 9係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7，其限制條件係R 7及R 9中僅一者係L 4、L 5、L 6、或L 7；且 各X 3獨立地係–H、–OH、–SH、或–NH 2。
一實施例提供一種式(IV)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，該化合物具有以下結構：
Figure 02_image011
(IV) 其中： R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環； R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、或經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2； X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–； X 2係–OH、–SH、或–NR 5R 6； R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、或–(CO)-NHR 8； R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； m係1或2； n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0； n 6係0、1或2；且 各Y獨立地係H或鹵素； 各p獨立地係1、2、3、4、5、或6； 各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6；且 各t獨立地係1、2、3、4、5、或6； 其限制條件係式(IV)不表示德魯替康或依喜替康。
一實施例提供一種醫藥組成物，其包含本文所述之免疫接合物、本文所述之藥物化合物、或其醫藥上之活性鹽、及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑、或其組合。
一實施例提供一種用於治療癌症或腫瘤之方法，其包含對患有癌症或腫瘤之對象投予有效量之本文所述之免疫接合物、本文所述之藥物化合物或其醫藥上活性之鹽、或本文所述之醫藥組成物。
一實施例提供一種有效量之本文所述之免疫接合物、本文所述之藥物化合物或其醫藥上活性之鹽、或本文所述之醫藥組成物在製造用於治療癌症或腫瘤之藥劑中的用途。
一些實施例提供式(III)之接合物，其包含官能基M1、藥物部份(D)及將Mi連接至D之連接子。在一實施例中，式(III)之接合物包含式(II)之藥物部份。
一實施例提供一種具有式(III)之接合物， Mi- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D (III) 其中： Mi係
Figure 02_image014
； L 2不存在、係
Figure 02_image003
或
Figure 02_image005
； Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基； L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–或–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–； n 1獨立地係0至12之整數； L 4係四肽殘基； L 5不存在或係–[NH(CH 2)n 2]n 3–； n 2係0至6之整數； n 3係0至2之整數； L 6不存在、或係
Figure 02_image007
； L 7不存在、係
Figure 02_image019
；且 D係藥物部份。
一實施例提供一種生產免疫接合物之程序，其包含使有效量之硫醇官能化抗體或抗原結合片段與本文所述之接合物在有效形成本文所述之免疫接合物之反應條件下反應。
較佳替代方案包括： 1.  一種抗體或其抗原結合片段，其包含： a)  重鏈，其包含： VHCDR 1，其包含與SEQ ID NO:1之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VHCDR 2，其包含與SEQ ID NO:2之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VHCDR 3，其包含與SEQ ID NO:3之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；以及 b)輕鏈，其包含： VLCDR 1，其包含與SEQ ID NO:8之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VLCDR 2，其包含與AAS之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VLCDR 3，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； 其中該抗體或其抗原結合片段特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)之細胞外域。
2.如替代方案1之抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 5、7、12、或14中任一者之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
3.一或多種核酸，其編碼如替代方案1或2中任一項之抗體或其抗原結合片段，諸如由一或多種核酸編碼之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 4、6、11、或13中任一者所述之核酸序列具有至少95%序列同一性之序列。
4.一種宿主細胞，其包含如替代方案3之一或多種核酸。
5.如前述實施例中任一項之免疫接合物，其中Ab係如請求項替代方案1或2之抗體或抗原結合片段。
6.一種抗體或其抗原結合片段，其包含： a)  重鏈，其包含： VHCDR 1，其包含與SEQ ID NO:15之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VHCDR 2，其包含與SEQ ID NO:16之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VHCDR 3，其包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 b)  輕鏈，其包含： VLCDR 1，其包含與SEQ ID NO:22之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VLCDR 2，其包含與DAY之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VLCDR 3，其包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； 其中該抗體或其抗原結合片段特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)之細胞外域。
7.如替代方案6之抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 19、21、26或28中任一者之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
8.一或多種核酸，其編碼如替代方案6或7中任一項之抗體或其抗原結合片段，諸如由一或多種核酸編碼之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 18、20、25、或27中任一者所述之核酸序列具有至少95%序列同一性之序列。
9.一種宿主細胞，其包含如替代方案8之一或多種核酸。
10.如前述實施例中任一項之免疫接合物，其中Ab係如替代方案6或7之抗體或抗原結合片段。
11.一種抗體或其抗原結合片段，其包含： a)  重鏈，其包含： VHCDR 1，其包含與SEQ ID NO:29之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VHCDR 2，其包含與SEQ ID NO:30之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VHCDR 3，其包含與SEQ ID NO:31之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 b)  輕鏈，其包含： VLCDR 1，其包含與SEQ ID NO:36之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VLCDR 2，其包含與DAS之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VLCDR 3，其包含與SEQ ID NO:38之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； 其中該抗體或抗原結合片段特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)之細胞外域。
12.如替代方案11之抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 33、35、40或42中任一者之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
13.一或多種核酸，其編碼如替代方案11或12中任一項之抗體或其抗原結合片段，諸如由一或多種核酸編碼之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 32、34、39、或41中任一者所述之核酸序列具有至少95%序列同一性之序列。
14.一種宿主細胞，其包含如替代方案13之一或多種核酸。
15.如前述實施例中任一項之免疫接合物，其中Ab係如替代方案11或12之該抗體或抗原結合片段。
16.一種抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中重鏈由SEQ ID NO: 6所述之核酸序列編碼，且輕鏈由SEQ ID NO: 13所述之核酸序列編碼。
17.如替代方案16之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體之該重鏈包含SEQ ID NO:7之多肽序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 14之多肽序列。
18.如替代方案16或17中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體或其結合片段與分子接合。
19.如替代方案18之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該分子係藥物、毒素、或細胞介素。
20.如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中該抗體或其結合片段係如替代方案16或17中任一項之抗體或其結合片段。
21.一種使用如替代方案16至19中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如替代方案20之免疫接合物用於抑制或治療疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之對象投予如替代方案16至19中任一項之抗體或其結合片段或該組成物，可選地選擇對象以接受用於該疾病，諸如癌症之療法，及/或可選地判定在投予該抗體或其結合片段之後對該疾病，諸如癌症之該抑制。
22.如替代方案16至19中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如替代方案20之免疫接合物，其用作藥劑，諸如用於抑制或治療疾病，諸如癌症之目的。
23.一種抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中重鏈由SEQ ID NO: 20所述之核酸序列編碼，且輕鏈由SEQ ID NO: 27所述之核酸序列編碼。
24.如替代方案23之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體之該重鏈包含SEQ ID NO:21之多肽序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 28之多肽序列。
25.如替代方案23或24中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體或其結合片段與分子接合。
26.如替代方案25之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該分子係藥物、毒素、或細胞介素。
27.如替代方案1至25中任一項之免疫接合物，其中該抗體或其結合片段係如替代方案23或24中任一項之抗體或其結合片段。
28.一種使用如替代方案23至26中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如替代方案27之免疫接合物用於抑制或治療疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之對象投予如請求項替代方案23至26中任一項之抗體或其結合片段或該組成物，可選地選擇對象以接受用於該疾病，諸如癌症之療法，及/或可選地判定在投予該抗體或其結合片段之後對該疾病，諸如癌症之該抑制。
29.如替代方案23至26中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如替代方案27之免疫接合物，其用作藥劑，諸如用於抑制或治療疾病，諸如癌症之目的。
30.一種抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中重鏈由SEQ ID NO: 34所述之核酸序列編碼，且輕鏈由SEQ ID NO: 41所述之核酸序列編碼。
31.如替代方案30之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體之該重鏈包含SEQ ID NO:35之多肽序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 42之多肽序列。
32.如替代方案30或31中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體或其結合片段與分子接合。
33.如替代方案32之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該分子係藥物、毒素、或細胞介素。
34.如替代方案1至25中任一項之免疫接合物，其中該抗體或其結合片段係如替代方案30或31中任一項之抗體或其結合片段。
35.一種使用如替代方案30至33中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如替代方案34之免疫接合物用於抑制或治療疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之對象投予如替代方案30至33中任一項之抗體或其結合片段或該組成物，可選地選擇對象以接受用於該疾病，諸如癌症之療法，及/或可選地判定在投予該抗體或其結合片段之後對該疾病，諸如癌症之該抑制。
36.如替代方案30至33中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如替代方案34之免疫接合物，其用作藥劑，諸如用於抑制或治療疾病，諸如癌症之目的。
以引用方式併入任何優先權申請案中
任何及所有在隨本申請案提交的申請書資料表中聲明主張國際或國內優先權的申請案，特此根據37 CFR 1.57以引用方式明示地併入本文中。 定義
除非另外定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語具有與所屬技術領域中具有通常知識者所共同理解的相同含義。除非另有說明，本文所引用之所有專利、申請案、公開申請案、及其他出版物之全文均以引用之方式併入本文中。若在本文中之用語具有複數個定義，除非另有說明，否則以此節之定義為主。
如本文中所使用，「接合物(conjugate)」係包含藉由化學鍵連接在一起的二或更多種物質（諸如抗體、連接子部份及/或藥物部份）之化合物。接合物的實例包括抗體藥物接合物（其可以可選地包括連接子部份）、藥物連接子接合物及抗體連接子接合物。「免疫接合物(immunoconjugate)」係包含免疫物質，諸如抗體之接合物。
如本文中所使用，「抗體(antibody)」(Ab)係由免疫系統所製成之蛋白質，或其合成變體，其結合至細胞或組織上之特定位點。「抗原結合片段(antigen-binding fragment)」(Fab)係結合至特定抗原之抗體的一部分。單株抗體係一種類型之合成抗體。在癌症治療中，單株抗體可直接殺滅癌細胞，其可阻斷腫瘤血管之發展，或其可幫助免疫系統殺滅癌細胞。
每當基團經描述為「可選地經取代的(optionally substituted)」時，該基團可未經取代或經一或多個指示取代基取代。同樣，當基團經描述為「未經取代或經取代(unsubstituted or substituted)」時，若經取代，則（多個）取代基可選自一或多個指示的取代基。如果沒有指示取代基，則代表所指示之「可選地經取代(optionally substituted)」或「經取代(substituted)」基團可經一或多個個別地且獨立地選自下列之基團所取代：烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、芳基、雜芳基、雜環基、芳基(烷基)、環烷基(烷基)、雜芳基(烷基)、雜環基(烷基)、羥基、烷氧基、醯基、氰基、鹵素、硫羰基、O-胺甲醯基、N-胺甲醯基、O-胺硫甲醯基、N-胺硫甲醯基、C-醯胺基、N-醯胺基、S-磺醯胺基、N-磺醯胺基、C-羧基、O-羧基、硝基、次磺醯基(sulfenyl)、亞磺醯基、磺醯基、鹵烷基、鹵烷氧基、胺基、經單取代胺基、經二取代胺基、經單取代胺(烷基)、及經二取代胺(烷基)。
如本文中所使用，「C a至C b」中之「a」及「b」係整數，其係指基團中之碳原子數目。所指示的基團可包括性(inclusive)的含有「a」至「b」個碳原子。因此，「C 1至C 4烷基」係指所有具有1至4個碳之烷基，亦即CH 3-、CH 3CH 2-、CH 3CH 2CH 2-、(CH 3) 2CH-、CH 3CH 2CH 2CH 2-、CH 3CH 2CH(CH 3)-、及(CH 3) 3C-。如果未指定「a」及「b」，則假定此等定義中描述之最寬範圍。
如果將兩個「R」基團描述為「一起(taken together)」，則該等R基團及其等所附接之原子可形成環烷基、環烯基、芳基、雜芳基、或雜環。例如但不限於，若苯環上之鄰位R 1及R 2取代基表示為–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2「合在一起」形成環，其意謂–O-(CR 5R 6) m–O–在R 1及R 2位置共價鍵合至苯環形成雜環。
Figure 02_image021
如本文中所使用，用語「烷基(alkyl)」係指完全飽和之脂族烴基。烷基部份可係支鏈或直鏈。支鏈烷基之實例包括但不限於異丙基、二級丁基、三級丁基、及類似者。直鏈烷基之實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、及類似者。烷基可具有1至30個碳原子（每當其出現於本文中時，諸如「1至30」的數值範圍係指在給定範圍內之各個整數；例如，「1至30個碳原子」意指烷基可由1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等、至多且包括30個碳原子所組成，雖然本定義亦涵蓋未指定數值範圍情况下出現之用語「烷基」）。烷基亦可係具有1至12個碳原子之中等大小烷基。烷基亦可係具有1至6個碳原子之低級烷基。烷基可係經取代的或未經取代的。除非上下文另外指示，否則烷基一般係單價的。例如，所屬技術領域中具有通常知識者認識到C 1-C 6烷基在以下式中係二價的：–(C 1-C 6烷基)-X 2。
如本文中所使用，用語「伸烷基(alkylene)」係指二價完全飽和之直鏈脂族烴基。伸烷基之實例包括但不限於亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基、伸戊基、伸己基、伸庚基、及伸辛基。伸烷基可由
Figure 02_image023
代表，後面接著碳原子數目，然後再接著「*」。例如，
Figure 02_image025
代表伸乙基。伸烷基可具有1至30個碳原子（每當出現於本文中時，諸如「1至30」之數值範圍係指該給定範圍內之各個整數；例如，「1至30個碳原子」意謂烷基可由1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等，至多且包括30個碳原子組成，但當前定義亦涵蓋未指定數值範圍情况下出現之用語「伸烷基」）。伸烷基亦可係具有1至12個碳原子之中等大小烷基。伸烷基亦可係具有1至4個碳原子之低級烷基。伸烷基可係經取代的或未經取代的。例如，低級伸烷基可藉由置換該低級伸烷基之一或多個氫及/或藉由用C 3-6單環環烷基（例如，
Figure 02_image027
）取代同一個碳上的兩個氫來取代。
本文中所使用之用語「烯基(alkenyl)」係指含有（多個）碳雙鍵之二至二十個碳原子的單價直鏈或支鏈基團，包括但不限於1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、及類似者。烯基可係未經取代或經取代的。
本文中所使用之用語「炔基(alkynyl)」係指含有（多個）碳三鍵之二至二十個碳原子的單價直鏈或支鏈基團，包括但不限於1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、及類似者。炔基可係未經取代或經取代的。
如本文中所使用之用語「鹵素原子(halogen atom)」或「鹵素(halogen)」意指元素週期表第7欄之任一種放射穩定原子，諸如氟、氯、溴、及碘。
如本文中所使用，「鹵烷基(haloalky)」係指其中一或多個氫原子係經鹵素置換的烷基（例如，單鹵烷基、二鹵烷基、三鹵烷基、及多鹵烷基）。此類基團包括但不限於氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟甲基、2-氟異丁基、及五氟乙基。鹵烷基可係經取代或未經取代的。
如本文中所使用，「鹵烯基(haloalkenyl)」係指其中一或多個氫原子係經鹵素置換的烯基（例如，單鹵烯基、二鹵烯基、三鹵烯基、及多鹵烯基）。
如本文中所使用，「鹵炔基(haloalkynyl)」係指其中一或多個氫原子係經鹵素置換的炔基（例如，單鹵炔基、二鹵炔基、三鹵炔基、及多鹵炔基）。
如本文中所使用，「鹵烷氧基(haloalkoxy)」係指其中一或多個氫原子係經鹵素置換的烷氧基（例如，單鹵烷氧基、二鹵烷氧基、及三鹵烷氧基）。此類基團包括但不限於氯甲氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、1-氯-2-氟甲氧基、及2-氟異丁氧基。鹵烷氧基可係經取代或未經取代的。
當未指定取代基的數目（例如，鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基）時，則可能有一或多個取代基存在。例如，「鹵烷基(haloalkyl)」可包括一或多個相同或不同的鹵素。作為另一個實例，「C 1-C 3烷氧基苯基(C 1-C 3alkoxyphenyl)」可包括一或多個相同或不同之含有一、二、或三個原子的烷氧基。
如本文中所使用，基表示具有單個未成對電子之物種，使得含有該基之物種可共價鍵結至另一種物種。因此，在此上下文中，基不一定是自由基。相反地，基表示較大分子之特定部分。用語「基(radical)」可與用語「基團(group)」互換使用。
用語「醫藥上可接受之鹽(pharmaceutically acceptable salt)」係指不會對其所投予至之生物體造成顯著刺激且不會使化合物之生物活性及性質無效化的化合物之鹽。在一些實施例中，鹽係化合物之酸加成鹽。醫藥鹽可藉由使化合物與無機酸反應而獲得，無機酸諸如氫鹵酸（例如，氫氯酸或氫溴酸）、硫酸、硝酸、及磷酸（諸如2,3-二羥丙基磷酸二氫鹽）。醫藥鹽亦可藉由使化合物與有機酸反應而獲得，有機酸諸如脂族或芳族羧酸或磺酸，例如甲酸、乙酸、琥珀酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、菸鹼酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸、苯甲酸、水楊酸、2-側氧戊二酸或萘磺酸。醫藥鹽亦可藉由使化合物與鹼反應以形成鹽而獲得，鹽諸如銨鹽、鹼金屬鹽（諸如鈉鹽、鉀鹽、或鋰鹽）、鹼土金屬鹽（諸如鈣鹽或鎂鹽）、碳酸鹽、碳酸氫鹽、有機鹼（諸如二環己基胺、N-甲基-D-還原葡糖胺、參(羥甲基)甲基胺、C 1-C 7烷基胺、環己基胺、三乙醇胺、乙二胺）之鹽、及與胺基酸（諸如精胺酸及離胺酸）之鹽。針對式(I)之化合物，所屬技術領域中具有通常知識者理解，當鹽係藉由基於氮之基團（例如，NH 2）的質子化而形成時，基於氮之基團可與正電荷締合（例如，NH 2可變成NH 3 +），且該正電荷可由帶負電荷之相對離子（諸如Cl -）平衡。
應理解，在本文所述之具有一或多個掌性中心之任何化合物中，若未明確指示絕對立體化學，則各中心可獨立地具有R-組態、或S-組態、或其混合物。因此，本文中所提供之化合物可係鏡像異構地純的、鏡像異構地富集的外消旋混合物、非鏡像異構地純的、非鏡像異構地富集的或立體異構的混合物。此外，應當理解，在具有一或多個雙鍵產生幾何異構物（可定義為E或Z）之任何本文中所述化合物中，各雙鍵可獨立地係E或Z或其混合。同樣地，應理解，在任何所述化合物中，亦意欲將所有互變異構形式包括在內。
應理解，在本文中揭示之化合物具有未填滿價數時，則價數應以氫或其同位素填滿，例如氫-1（氕）及氫-2（氘）。
應理解，本文所述之化合物可經同位素標示。以諸如氘之同位素取代可得到由較高代謝穩定性帶來的某些治療優點，例如體內半衰期增長或劑量需求降低。在化合物結構中表示之各化學元素可包括該元素之任何同位素。例如，在化合物結構中，氫原子可明確揭示或理解成存在於化合物中。在化合物之可能存在氫原子的任何位置處，氫原子可係氫之任何同位素，包括但不限於氫-1（氕）及氫-2（氘）。因此，在本文中參照之化合物涵蓋所有潛在同位素形式，除非上下文清楚另行表明。
應理解，本文所述之方法及組合包括結晶形式（亦稱為多形體，其包括化合物之相同元素組成之不同晶體堆積排列）、非晶相、鹽、溶劑合物、及水合物。在一些實施例中，本文所述之化合物以與醫藥上可接受之溶劑（諸如水、乙醇、或類似者）之溶劑合形式存在。在其他實施例中，本文所述之化合物以非溶劑合形式存在。溶劑合物含有化學計量或非化學計量之量的溶劑，且可與醫藥上可接受之溶劑（諸如水、乙醇、或類似者）在結晶程序期間形成。當溶劑係水時即形成水合物，當溶劑係醇時即形成醇合物。此外，本文中所提供之化合物可以非溶劑合形式以及溶劑合形式存在。一般而言，針對本文中所提供之化合物及方法的目的，將溶劑合形式視為等同於非溶劑合形式。
當提供數值之範圍時，應理解範圍之上限及下限以及在上限及下限之間的各介入數值皆涵蓋於實施例之中。
除非另外明確說明，否則本申請案中所使用之用語、及片語、及其變化（尤其在隨附申請專利範圍中）應理解為開放式的而非限制性的。作為前述之實例，用語「包括(including)」應解讀為意指「包括但不限於(including, without limitation/including but not limited to)」或類似者；如本文中所使用之用語「包含(comprising)」與「包括(including)」、「含有(containing)」、或「其特徵為(characterized by)」係同義詞，且係包含式或開放式且不排除額外、未列舉之元件或方法步驟；用語「具有(having)」應解讀為「至少具有(having at least)」；用語「包括(include)」應解讀為「包括但不限於」；用語「實例(example)」係用於提供討論項目之例示性例子而非其詳盡或限制性列表；且用語如「較佳地(preferably)」、「較佳的(preferred)」、或「所欲(desired/desirable)」及類似意義文字的使用，不應理解為暗示某些特徵對於結構或功能而言係關鍵、必要、甚或重要的，反而只是意圖強調可在一具體實施例中利用或不利用之替代或額外特徵。此外，用語「包含(comprising)」應與片語「至少具有(having at least)」或「至少包括(including at least)」同義地解釋。當用於化合物、組成物、或裝置之上下文中時，用語「包含」意指化合物、組成物、或裝置至少包括所列舉特徵或組分，但亦可包括額外特徵或組分。
關於在本文中使用實質上任何複數及/或單數用語，所屬技術領域中具有通常知識者可視適合上下文及/或應用之情況，從複數轉換成單數及/或從單數轉換成複數。各種單數/複數排列組合可在本文中明確闡述以求清晰。不定冠詞「一（a或an）」並不排除複數。在互不相同的附屬項中列舉某些措施的單純事實，並不表示這些措施之組合無法有益地使用。申請專利範圍中之任何元件符號不應解讀為範圍限制。 化合物
本文中所揭示之各種實施例係關於一種式(IV)之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有以下結構：
Figure 02_image011
(IV)
在各種實施例中，式(IV)中之R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係氫。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係鹵素。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係氟基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係–CN。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係–OR 5，其中R 5係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係甲氧基。
在一實施例中，式(IV)中之R 1及R 2中之至少一者係–NR 5R 6，其中R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係甲基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係二氟甲基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係甲氧基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3。在一實施例中，R 1及R 2係經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環，其中–O-(CR 5R 6) m–O–之末端在式(IV)的R 1及R 2位置處共價鍵合至苯環，形成雜環。
在一實施例中，式(IV)中之R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係鹵素。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者係氫。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係氫。
在一實施例中，式(IV)中之R 1及R 2中之一者係鹵素，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係鹵素，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係鹵素，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係鹵素。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係鹵素。
在一實施例中，式(IV)中之R 1及R 2中之一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係係經取代或未經取代C 1-C 6烷基，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。
在一實施例中，式(IV)中之R 1及R 2中之一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。
在一實施例中，式(IV)中之R 1及R 2中之一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2係經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。在各種實施例中，R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氟基、甲氧基、甲基、二氟甲基、及–O-(CH 2)–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。
在各種實施例中，式(IV)中之R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中各Y獨立地係H或鹵素。在一實施例中，R 3係氫。在一實施例中，R 3係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。例如，在一實施例中，R 3係甲基。在一實施例中，R 3係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 3係–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中各Y單獨地係H或鹵素。
在各種實施例中，式(IV)中之R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2，其中X 2係–OH、–SH、或–NR 5R 6。在一實施例中，R 4係氫。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代(C 1-C 6烯基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2。
在各種實施例中，式(IV)中之X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–，其中n 6係0、1或2。在一實施例中，X 1係–O–。在一實施例中，X 1係–S(O n6)–。在一實施例中，X 1係–NH–。在一實施例中，X 1係–O-(C=O)–。在一實施例中，X 1係–NH-(C=O)–。在一實施例中，X 1係–NH-(C=O)-O–。在一實施例中，X 1係–NH-(C=O)-NH–。在一實施例中，X 1係–NH-S(O n6)–。
在各種實施例中，式(IV)中之X 2係–OH、–SH、或–NR 5R 6，其中R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3 。在一實施例中，X 2係–OH。在一實施例中，X 2係–SH。在一實施例中，X 2係–NR 5R 6。
在各種實施例中，式(IV)中之R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中各Y獨立地係H或鹵素，且變數p、q及t如本文中別處所述。在一實施例中，R 5及R 6各自獨立地係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 5及R 6兩者係氫。在一實施例中，R 5及R 6各自獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。
在各種實施例中，式(IV)中之R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、或–(CO)-NHR 8，其中R 8在本文別處描述。在一實施例中，R 7係H。在一實施例中，R 7係–COR 8。在一實施例中，R 7係–CO 2R 8。在一實施例中，R 7係–(CO)-NHR 8。
在各種實施例中，式(IV)中之R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中變數p、q、t及Y在本文別處描述。在一實施例中，R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 8係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 8係–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3。
在各種實施例中，式(IV)中之m係1或2。在一實施例中，m係1。在另一實施例中，m係2。
在各種實施例中，式(IV)中之n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0。在一實施例中，n 4及n 5兩者係1。在一實施例中，n 4係0且n 5係1。在一實施例中，n 4係0且n 5係2。在一實施例中，n 4係1且n 5係0。在一實施例中，n 4係2且n 5係0。
在各種實施例中，式(IV)中之n 6係0、1或2。在一實施例中，n 6係0，在此種情況下X 1係–S–或–NH-S–。在一實施例中，n 6係1，在此種情況下X 1係–S(=O)–或–NH-S(=O)–。在一實施例中，n 6係2，在此種情況下X 1係–S(=O) 2–或–NH-S(=O) 2–。
在各種實施例中，式(IV)中之各Y獨立地係H或鹵素。在一實施例中，各Y係氫。在一實施例中，–CY 2係CH 2。在一實施例中，–CY 3係CH 3。在一實施例中，–CY 3係CHF 2。在一實施例中，–CH 2F係CH 3。在一實施例中，–CY 3係CF 3。
在各種實施例中，式(IV)中之各p獨立地係1、2、3、4、5、或6。在一實施例中，p係1。在一實施例中，p係2。
在各種實施例中，式(IV)中之各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6。在一實施例中，q係1。在一實施例中，q係2。
在各種實施例中，式(IV)中之各t獨立地係1、2、3、4、5、或6。在一實施例中，t係1。在一實施例中，p係t。
在各種實施例中，式(IV)不代表德魯替康或依喜替康。
在各種實施例中，式(IV)之化合物由式(IVa)表示：
Figure 02_image030
(IVa)
在式(IVa)中，變數與本文別處針對式(IV)定義的相同。
在各種實施例中，式(IV)之化合物由式(IVb)表示：
Figure 02_image032
(IVb)。
在式(IVb)中，變數與本文別處針對式(IV)定義的相同。
在各種實施例中，式(IV)之化合物由式(IVc)表示：
Figure 02_image034
(IVc)
在式(IVc)中，變數與本文別處針對式(IV)定義的相同。
在各種實施例中，式(IV)之化合物由選自以下化合物、或其醫藥上可接受之鹽之結構表示：
Figure 02_image036
Figure 02_image038
Figure 02_image040
Figure 02_image042
Figure 02_image044
Figure 02_image046
Figure 02_image048
Figure 02_image050
Figure 02_image052
Figure 02_image054
接合物
本文所揭示之各種實施例係關於式(III)之接合物，其具有以下結構： Mi- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D (III)
在各種實施例中，式(III)中之Mi係
Figure 02_image014
，D係藥物部份且–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–係將Mi連接至D之連接子。
在各種實施例中，式(III)中之L 2不存在、係
Figure 02_image003
、或
Figure 02_image005
，其中Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基。在一實施例中，式(III)中之L 2不存在。在一實施例中，式(III)中之L 2係
Figure 02_image003
。在一實施例中，式(III)中之L 2係
Figure 02_image005
。
在各種實施例中，式(III)中之Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係氫。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係鹵素。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係NO 2。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係–O–(C 1-C 6烷基)。例如，在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係甲氧基。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係C 1-C 6烷基。例如，在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係甲基。
在各種實施例中，式(III)中之L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–或–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–，其中n 1獨立地係0至12之整數。在一實施例中，L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–。例如，在一實施例中，L 3係–C(=O)–。在一實施例中，L 3係–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–。例如，在一實施例中，L 3係–CH 2C(=O)–。在實施例中，n 1係1至12之整數，諸如1至6或1至3。
在各種實施例中，式(III)中之L 4係四肽殘基。例如，在一實施例中，L 4係選自GGFG (gly-gly-phe-gly)、EGGF (glu-gly-gly-phe)、SGGF (ser-gly-gly-phe)及KGGF (lys-gly-gly-phe)之四肽殘基。
在各種實施例中，式(III)中之L 5不存在或係–[NH(CH 2)n 2]n 3–，其中n 2係0至6之整數，且n 3係0至2之整數。在一實施例中，L 5不存在。在一實施例中，L 5係–[NH(CH 2)n 2]n 3–。例如，在一實施例中，L 5係–NH–。在另一實施例中，L 5係–NHCH 2–。
在各種實施例中，式(III)中之L 6不存在或係
Figure 02_image007
。在一實施例中，L 6不存在。在另一實施例中，L 6係
Figure 02_image007
。
在各種實施例中，式(III)中之L 7不存在，係
Figure 02_image062
。在一實施例中，L 7不存在。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image007
。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image064
。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image066
。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image068
。在各種實施例中，式(III)之接合物中之D係如本文（例如，在下文標題「藥物部份」下）之藥物部份。在一實施例中，D係細胞毒性抗癌藥物部份。
在各種實施例中，式(III)之接合物由選自以下之結構表示，其中Z 1及Z 2各自獨立地選自氫、氟基、氯基、–NO 2、及–OCH 3：
Figure 02_image070
Figure 02_image072
Figure 02_image074
Figure 02_image076
Figure 02_image078
Figure 02_image080
Figure 02_image082
Figure 02_image084
Figure 02_image086
Figure 02_image088
Figure 02_image090
Figure 02_image092
Figure 02_image094
Figure 02_image096
Figure 02_image098
Figure 02_image100
Figure 02_image102
Figure 02_image104
Figure 02_image106
Figure 02_image108
Figure 02_image110
Figure 02_image112
藥物部份
在各種實施例中，在式(I)之免疫接合物或式(III)之接合物中之D係藥物部份。藥物部份可係本文所述（例如如上文在標題「化合物」下所描述）之式(IV)之任何化合物，其中適當修飾使得連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–連接至D。例如，在各種實施例中，藥物部份D係式(II)之化合物，其具有以下結構：
Figure 02_image011
(II)
所屬技術領域中具有通常知識者將理解，式(II)之化合物經由R 4（當定義為包括X 2且因此包括R 9時）或如下文所述經由R 7連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–。
在各種實施例中，式(II)中之R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係氫。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係鹵素。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係氟基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係–CN。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係–OR 5，其中R 5係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係甲氧基。
在一實施例中，式(II)中之R 1及R 2中之至少一者係–NR 5R 6，其中R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係甲基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係二氟甲基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。例如，在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係甲氧基。在一實施例中，R 1及R 2中之至少一者係–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3。在一實施例中，R 1及R 2係經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環，其中–O-(CR 5R 6) m–O–之末端在式(IV)的R 1及R 2位置處共價鍵合至苯環，形成雜環。
在一實施例中，式(II)中之R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係鹵素。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係氫，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者係氫。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係氫。
在一實施例中，式(II)中之R 1及R 2中之一者係鹵素，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係鹵素，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係鹵素，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係鹵素。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係鹵素。
在一實施例中，式(II)中之R 1及R 2中之一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2中之一者係係經取代或未經取代C 1-C 6烷基，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。
在一實施例中，式(II)中之R 1及R 2中之一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基，且R 1及R 2中之另一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。
在一實施例中，式(II)中之R 1及R 2中之一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者獨立地係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2兩者皆不係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。在一實施例中，R 1及R 2係經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。在各種實施例中，R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氟基、甲氧基、甲基、二氟甲基、及–O-(CH 2)–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。
在各種實施例中，式(II)中之R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中各Y獨立地係H或鹵素。在一實施例中，R 3係氫。在一實施例中，R 3係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。例如，在一實施例中，R 3係甲基。在一實施例中，R 3係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。在一實施例中，R 3係–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中各Y單獨地係H或鹵素。
在各種實施例中，式(II)中之R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2，其中X 2係–OR 9、-SR 9或-NHR 9，且R 9係H，不存在，係-COR 8、-CO 2R 8、-(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7。在一實施例中，R 4係氫，在此情況下，X 2不存在且式(II)之化合物經由R 7連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–，如下文更詳細所述。
在其他實施例中，當R 4包括X 2且R 9係L 4、L 5、L 6、或L 7時，式(II)之化合物經由R 4連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代(C 1-C 6烯基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2。在一實施例中，R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2。在其中R 4包括X 2之各此類實施例中，提供了R 9成為L 4、L 5、L 6、或L 7之選項，從而提供了由此將式(II)之化合物經由R 4連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–之選項。
在各種實施例中，式(II)中之X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–，其中n 6係0、1或2。在一實施例中，X 1係–O–。在一實施例中，X 1係–S(O n6)–。在一實施例中，X 1係–NH–。在一實施例中，X 1係–O-(C=O)–。在一實施例中，X 1係–NH-(C=O)–。在一實施例中，X 1係–NH-(C=O)-O–。在一實施例中，X 1係–NH-(C=O)-NH–。在一實施例中，X 1係–NH-S(O n6)–。
在各種實施例中，式(II)中之R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3，其中各Y獨立地係H或鹵素，且變數p、q及t如本文中別處所述。在一實施例中，R 5及R 6各自獨立地係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基。在一實施例中，R 5及R 6兩者係氫。在一實施例中，R 5及R 6各自獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。
在各種實施例中，式(II)中之R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7，其中各R 8獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3。在一實施例中，R 7係H。在一實施例中，R 7係–COR 8。在一實施例中，R 7係–CO 2R 8。在一實施例中，R 7係–(CO)-NHR 8。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，當R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、或–(CO)-NHR 8時，將式(II)之化合物連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7係經由R 4，如在本文別處所述。
在各種實施例中，式(II)中之各R 8獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3，其中X 3係–H、–OH、–SH、或–NH 2。在一實施例中，各R 8獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3。在一實施例中，各R 8獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3。在一實施例中，各R 8獨立地係–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3。
在各種實施例中，式(II)中之X 2係–OR 9、–SR 9或–NHR 9，其中R 9係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7。在一實施例中，X 2係–OR 9。在一實施例中，X 2係–SR 9。在一實施例中，X 2係–NHR 9。
在各種實施例中，式(II)中之R 9係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7，其中R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3。在一實施例中，R 9係H。在一實施例中，R 9係–COR 8。在一實施例中，R 9係–CO 2R 8。在一實施例中，R 9係–(CO)-NHR 8。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，當R 9係H、–COR 8、–CO 2R 8、或–(CO)-NHR 8時，將式(II)之化合物連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7係經由R 7，如在本文別處所述。
在各種實施例中，式(II)中之R 9係L 4、L 5、L 6、或L 7。在一實施例中，R 9係L 4。在一實施例中，R 9係L 5。在一實施例中，R 9係L 6。在一實施例中，R 9係L 7。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，當R 9係L 4、L 5、L 6、或L 7時，將式(II)之化合物連接至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7係經由R 4，如在本文別處所述。在一實施例中，R 7及R 9中僅一者係L 4、L 5、L 6、或L 7，在此種情況下單一共價鍵將藥物D鍵聯至連接子–L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7–，從而鍵聯至Mi。
在各種實施例中，式(II)中之各X 3獨立地係–H、–OH、–SH、或–NH 2。在一實施例中，X 3係–H。在一實施例中，X 3係–OH。在一實施例中，X 3係–SH。在一實施例中，X 3係–NH 2。
在各種實施例中，式(II)中之m係1或2。在一實施例中，m係1。在另一實施例中，m係2。
在各種實施例中，式(II)中之n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0。在一實施例中，n 4及n 5兩者係1。在一實施例中，n 4係0且n 5係1。在一實施例中，n 4係0且n 5係2。在一實施例中，n 4係1且n 5係0。在一實施例中，n 4係2且n 5係0。
在各種實施例中，式(II)中之n 6係0、1或2。在一實施例中，n 6係0，在此種情況下X 1係–S–或–NH-S–。在一實施例中，n 6係1，在此種情況下X 1係–S(=O)–或–NH-S(=O)–。在一實施例中，n 6係2，在此種情況下X 1係–S(=O) 2–或–NH-S(=O) 2–。
在各種實施例中，式(II)中之各Y獨立地係H或鹵素。在一實施例中，各Y係氫。在一實施例中，–CY 2係CH 2。在一實施例中，–CY 3係CH 3。在一實施例中，–CY 3係CHF 2。在一實施例中，–CH 2F係CH 3。在一實施例中，–CY 3係CF 3。
在各種實施例中，式(II)中之各p獨立地係1、2、3、4、5、或6。在一實施例中，p係1。在一實施例中，p係2。
在各種實施例中，式(II)中之各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6。在一實施例中，q係1。在一實施例中，q係2。
在各種實施例中，式(II)中之各t獨立地係1、2、3、4、5、或6。在一實施例中，t係1。在一實施例中，p係t。
在各種實施例中，式(II)不代表德魯替康或依喜替康。 免疫接合物
本文所揭示之各種實施例係關於式(I)之免疫接合物，其具有以下結構： Ab-[S-L 1- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D] n(I)
在各種實施例中，式(III)中之L 1係L 1係
Figure 02_image001
。
在各種實施例中，式(III)中之L 2不存在、係
Figure 02_image003
、或
Figure 02_image005
，其中Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基。在一實施例中，式(III)中之L 2不存在。在一實施例中，式(III)之L 2係
Figure 02_image003
。在一實施例中，式(III)之L 2係
Figure 02_image005
。
在各種實施例中，式(III)中之Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係氫。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係鹵素。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係NO 2。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係–O–(C 1-C 6烷基)。例如，在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係甲氧基。在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係C 1-C 6烷基。例如，在一實施例中，Z 1及Z 2中之至少一者係甲基。
在各種實施例中，式(III)中之L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–或–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–，其中n 1獨立地係0至12之整數。在一實施例中，L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–。例如，在一實施例中，L 3係–C(=O)–。在一實施例中，L 3係–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–。例如，在一實施例中，L 3係–CH 2C(=O)–。在實施例中，n 1係1至12之整數，諸如1至6或1至3。
在各種實施例中，式(III)中之L 4係四肽殘基。例如，在一實施例中，L 4係選自GGFG (gly-gly-phe-gly)、EGGF (glu-gly-gly-phe)、SGGF (ser-gly-gly-phe)及KGGF (lys-gly-gly-phe)之四肽殘基。
在各種實施例中，式(III)中之L 5不存在或係–[NH(CH 2)n 2]n 3–，其中n 2係0至6之整數，且n 3係0至2之整數。在一實施例中，L 5不存在。在一實施例中，L 5係–[NH(CH 2)n 2]n 3–。例如，在一實施例中，L 5係–NH–。在另一實施例中，L 5係–NHCH 2–。
在各種實施例中，式(III)中的L 6不存在或係
Figure 02_image007
。在一實施例中，L 6不存在。在另一實施例中，L 6係
Figure 02_image007
。
在各種實施例中，式(III)中之L 7不存在、係
Figure 02_image121
。在一實施例中，L 7不存在。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image007
。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image064
。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image066
。在一實施例中，L 7係
Figure 02_image068
。
在各種實施例中，式(I)之免疫接合物中之D係如本文（例如，在上文標題「藥物部份」下）所述之藥物部份。在一實施例中，D係細胞毒性抗癌藥物部份。在一實施例中，藥物部份係依喜替康。
在各種實施例中，式(III)中之Ab係抗體或抗原結合片段。在一實施例中，Ab特異性結合至人受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)。在一實施例中，Ab結合至癌細胞表面。在一實施例中，Ab係抗HER2抗體。
在各種實施例中，式(I)之免疫接合物由選自以下之結構表示，其中Z 1及Z 2各自獨立地選自氫、氟基、氯基、–NO 2、及–OCH 3：
Figure 02_image126
Figure 02_image128
Figure 02_image130
Figure 02_image132
Figure 02_image134
Figure 02_image136
Figure 02_image138
Figure 02_image140
Figure 02_image142
Figure 02_image144
Figure 02_image146
Figure 02_image148
Figure 02_image150
Figure 02_image152
Figure 02_image154
Figure 02_image156
。 醫藥組成物
本文中所述之一些實施例係關於一種醫藥組成物，其可包括有效量之一或多種本文中所述之化合物（例如式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物、或其醫藥上可接受之鹽）及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑、或其組合。
用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」係指本文中所揭示之一或多種化合物及/或鹽與其他化學組分（諸如稀釋劑或載劑）之混合物。醫藥組成物促進化合物向生物體之投予。醫藥組成物亦可藉由使化合物與無機酸或有機酸（諸如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、及水楊酸）反應來獲得。醫藥組成物通常將針對特定意圖投予途徑設計。
用語「生理上可接受之(physiologically acceptable)」定義載劑、稀釋劑、或賦形劑，其不會消除化合物之生物活性及性質，亦不會對預期遞送組成物之動物引起明顯損傷或損害。
如本文中所使用，「載劑(carrier)」係指促進化合物併入細胞或組織中之化合物。例如（但不限於），二甲基亞碸(DMSO)係經常利用的載劑，其促進許多有機化合物被攝入對象的細胞或組織中。
如本文中所使用，「稀釋劑(diluent)」係指醫藥組成物中缺乏明顯藥理學活性但可能為醫藥上必需或所欲之成分。例如，稀釋劑可用於增加質量過小而無法用於製造及/或投予之有效藥物的體積。其亦可係用於溶解將藉由注射、攝取或吸入投予之藥物的液體。所屬技術領域中常見形式的稀釋劑為緩衝水溶液，諸如但不限於模擬人類血液之pH及等滲性之磷酸鹽緩衝鹽水。
如本文中所使用，「賦形劑(excipient)」係指基本上惰性的物質，其經添加至醫藥組成物中以向該組成物提供（但不限於）體積、稠度、穩定性、結合能力、潤滑、崩解能力等。例如，諸如抗氧化劑及金屬螯合劑之穩定劑係賦形劑。在一實施例中，醫藥組成物包含抗氧化劑及/或金屬螯合劑。「稀釋劑(diluent)」係一種類型的賦形劑。
在本文中描述之醫藥組成物本身可向人類患者投予，或可以其中彼等與其他活性成分（如在組合療法中）、或載劑、稀釋劑、賦形劑或其組合混合之醫藥組成物向人類患者投予。適當配方取決於選擇的投予途徑。用於本文所述之化合物的配方及投予之技術係所屬技術領域中具有通常知識者已知的。
在本文中揭示之醫藥組成物可以本身已知之方式製造，例如藉由習知之混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、研調、乳化、囊封、包封、或製錠程序。此外，所含有的活性成分之量可有效達成其意圖目的。在本文中揭示之醫藥組合中使用的許多化合物可提供為含有醫藥上相容的相對離子之鹽。
所屬技術領域存在多種投予化合物、鹽、及/或組成物之技術，包括但不限於口服、直腸、肺、外用、氣溶膠、注射、輸注、及非經腸遞送，包括肌肉內、皮下、靜脉內、髓內注射、鞘內、直接心室內、腹膜內、鼻內、及眼內注射。在一些實施例中，式(I)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽可經口服投予。
亦可以局部而非全身方式投予化合物、鹽、及/或組成物，例如經由將通常呈貯劑或持續釋放配方之化合物直接注射或植入至感染區域中。另外，可以標靶藥物遞送系統（例如以針對特異性細胞或組織類型之靶向配體包被之脂質體）投予化合物。脂質體將靶向細胞或組織且由標靶細胞或組織選擇性吸收。
所欲時，組成物可呈現於可含有一或多個（含有活性成分之）單位劑型之包裝或分配裝置中。包裝可例如包含金屬或塑膠箔，例如泡殼包裝。包裝或分配器裝置可隨附投予說明。包裝或分配器亦可隨附與該容器相關聯之通知來規範藥品的製造、使用、或銷售，通知之形式係由政府機構規定，該通知反映該機構核准該藥物形式用於人類或獸醫投予。舉例來說，該通知可係美國食品與藥品管理局批准用於處方藥的標籤或產品仿單。亦可製備可包括在相容醫藥載劑中配製的本文描述之化合物及/或鹽的組成物、置於適當容器中並標示用來治療所指示之病況。 治療用途及方法
本文中所述之一些實施例係關於一種用於治療本文中所述之癌症或腫瘤之方法，其可包括向患有癌症或腫瘤之對象投予有效量之本文所述的化合物（例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽）、或包括本文所述化合物（例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物。本文中所述之其他實施例係關於一種有效量之本文所述之化合物（例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽）或包括本文中所述之化合物（例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物在製造用於治療本文中所述之癌症或腫瘤之藥劑之用途。本文中所述之又一些實施例係關於一種有效量之本文中所述化合物（例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽）或包括本文中所述化合物（例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽）之醫藥組成物，其用於治療本文中所述之癌症或腫瘤。
癌症或腫瘤之實例包括但不限於：肺癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸間質瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀細胞癌、腹膜癌、肝癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、外陰癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
如本文中所使用，「對象(subject)」係指作為治療、觀察、或實驗之目標的動物。「動物(animal)」包括冷血及溫血脊椎動物及無脊椎動物，例如魚、甲殼類動物、爬蟲類及特別是哺乳動物。「哺乳動物(mammal)」包括但不限於小鼠、大鼠、兔、天竺鼠、犬、貓、綿羊、山羊、牛、馬、靈長類動物，諸如猴、黑猩猩、及猿，且特別是人類。在一些實施例中，對象可以是人。在一些實施例中，對象可以是兒童及/或嬰兒，例如患有發燒的兒童或嬰兒。在其他實施例中，對象可係成人。
如本文中所使用，用語「治療(treat, treating, treatment, therapeutic)」及「療法(therapy)」不必然意指完全治癒或消除疾病或病況。可將疾病或病況之任何非所欲的徵象或症狀有任何程度的任何減輕視為治療及/或療法。另外，治療可包括可使對象對福祉或外觀的整體感覺惡化之行動。
用語「治療有效量(therapeutically effective amount)」及「有效量(effective amount)」用於指示引發指示生物或藥物反應之活性化合物或醫藥製劑的量。例如，治療有效量之化合物、鹽、或組成物可係預防、減輕、或改善疾病或病況之症狀、或延長所治療對象之存活所需的量。此反應可以在組織、系統、動物、或人類中發生，且包括減輕所治療疾病或病況之徵象或症狀。鑒於在本文中提供之揭露，有效量之判定完全在所屬技術領域中具有通常知識者之能力範圍以內。作為劑量所需之本文中所揭示之化合物的治療有效量將取決於投予途徑、所治療的動物類型（包括人類）、及所考慮的特定動物之身體特徵。可調整劑量以達到所預的效果，但是取決於諸如體重、飲食、併用藥物、及所屬醫學領域中具有通常知識者將認識到的其他因素之因素。
例如，化合物之有效量係導致下列者的量：(a)由癌症引起之一或多種症狀減少、減輕、或消失，(b)腫瘤大小減小，(c)腫瘤消除，及/或(d)腫瘤之長期疾病穩定（生長停滯）。在肺癌（諸如非小細胞肺癌）的治療中，治療有效量係減輕或消除咳嗽、呼吸急促、及/或疼痛的量。
用於治療所需的式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽的量將不僅隨著所選特定化合物或鹽而變化，且亦隨著投予途徑、所治療的疾病或病況之性質及/或症狀、及患者的年齡及身體狀況而變化，而最終將由主治醫師或臨床醫師來決定。在投予醫藥上可接受之鹽的情況下，劑量可以游離鹼計算。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，在某些情况下，可能需要以超過或甚至遠超過本文所述劑量範圍之量投予本文中所揭示之化合物，以有效及積極地治療特別是侵襲性疾病或病況。
然而，通常，合適之劑量將常常在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg之範圍內。例如，合適之劑量可在約0.10 mg/kg至約7.5 mg/kg體重/天，諸如約0.15 mg/kg至約5.0 mg/kg/接受者體重/天、約0.2 mg/kg至約4.0 mg/kg/接受者體重/天、或介於其間之任何量的範圍內。化合物可以單位劑型投予；例如，每單位劑型含有1至500 mg、10至100 mg、5至50 mg、或介於其間之任何量的活性成分。
所欲劑量可便利地以單一劑量呈現，或呈以適當間隔投予之分開劑量，例如，以每天二、三、四、或更多個亞劑量。亞劑量本身可進一步劃分成例如多次不連續的寬鬆間隔開投予。
如所屬技術領域中具有通常知識者將顯而易知的，欲投予之有用體內劑量及特定投予模式將視年齡、體重、病痛嚴重性及所治療哺乳動物物種、所採用之特定化合物及所採用之這些化合物的特定用途而變化。有效劑量水準（即達到所欲效果所需之劑量水準）的判定可由所屬技術領域中具有通常知識者使用常規方法來達成，例如，人體臨床試驗、體內研究、及體外研究。例如，式(I)之免疫接合物化合物、式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽之有用劑量可藉由比較其體外活性及在動物模型中體內活性來判定。這種比較可藉由與已建立之藥物（諸如順鉑及/或吉西他濱）比較來進行。
劑量及時間間隔可經個別地調節，以提供足以維持調節效應之活性部份之血漿水準或最小有效濃度(MEC)。各化合物之MEC將有所不同，但可自體內及/或體外數據估計。達成MEC所需之劑量將取決於個體特徵及投予途徑。然而，可使用HPLC檢定或生物檢定來判定血漿濃度。劑量時間間隔亦可使用MEC值來判定。組成物應使用維持血漿水準高於MEC達10至90%的時間、較佳地介於30至90%之間的時間且最佳的是介於50至90%之間的時間的方案投予。在局部投予或選擇性吸收之情況下，藥物之局部有效濃度可能與血漿濃度無關。
應注意，主治醫師會瞭解如何及何時因毒性或器官功能異常而終止、中斷或調整投予。相反地，主治醫師亦會知道若臨床反應不充足（排除毒性），則將治療調整至較高水平。管理所關注病症時投予劑量之量值將隨所治療疾病或病況之嚴重性及投予途徑而異。疾病或病況之嚴重程度可例如部分地依據標準預後評估方法來評估。另外，劑量及可能的給藥頻率亦將根據個別患者之年齡、體重及反應而異。與以上討論之計畫類似的計畫可用於獸醫學。
可使用已知方法評估本文中所揭示之化合物、鹽、及組成物之療效及毒性。例如，特定化合物或共用某些化學部份之化合物亞組之毒物學可藉由判定對細胞系（例如哺乳動物且較佳人類細胞系）之體外毒性來建立。此類研究之結果通常可預測在動物（例如哺乳動物）或更具體而言在人類中之毒性。替代地，可使用已知方法判定動物模型（諸如小鼠、大鼠、兔、狗、或猴）中特定化合物之毒性。特定化合物之療效可使用數種公認方法（例如體外方法、動物模型或人體臨床試驗）來建立。當選擇模型來判定療效時，熟習此項技術者可由目前最佳技術的引導以選擇適當模型、劑量、投予途徑及/或方案。 合成
式(IV)之藥物化合物或其醫藥上可接受之鹽可由具有通常知識者使用已知技術以各種方式製備，如本文提供之詳細技術作為引導。例如，在一實施例中，根據圖2至圖4中所繪示之通用方案製備式(IV)之藥物化合物。
式(III)之接合物可由具有通常知識者使用已知技術以各種方式製備，如本文提供之詳細技術作為引導。例如，在一實施例中，根據圖5至圖10中所繪示之通用方案製備式(II)之接合物。雖然以特定連接子及酬載繪示，但所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解，可以類似方式使用其他連接子及/或酬載。
式(I)之免疫接合物可由具有通常知識者使用已知技術以各種方式製備，如本文提供之詳細技術作為引導。例如，在一實施例中，根據圖11中所繪示之通用方案製備式(I)之免疫接合物。在一實施例中，一種生產本文所述之免疫接合物之製程包含使有效量之硫醇官能化抗體或抗原結合片段與本文所述之接合物在有效形成免疫接合物之反應條件下反應。在一實施例中，該程序進一步包含在有效形成該硫醇-官能化抗體或抗原結合片段之還原條件下還原抗體或抗原結合片段。 實例
額外實施例在下列實例中進一步詳細揭示，其並非以任何方式意圖限制申請專利範圍之範圍。 實例1 N-((1S,8S)-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-9,12-二側氧基-1,2,8,9,12,14-六氫-11H-環戊[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
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并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 1-14)（ 圖 12）
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1-14（在任意指派之*碳處之立體化學） 1-溴-3-氟-2-甲基-5-硝基苯( 1-2)：
將2-氟-1-甲基-4-硝基苯( 1-1)（25.0 g，322 mmol，1.0當量）於庚烷(250 mL)及H 2SO 4(250 mL)中之混合物在70℃下加熱。然後在70℃下將 N-溴琥珀醯亞胺（68.84 g，386.78 mmol，1.2當量）分批加入到上述混合物中。將所得紅色懸浮液在70℃下攪拌15h。TLC（石油醚/乙酸乙酯= 10/1，R f= 0.6）顯示出形成了新的主斑點。將反應混合物倒入冰水(1 L)，並且用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取。將合併之有機相用鹽水(500 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物藉由以石油醚洗提的矽膠管柱層析法純化，得到1-溴-3-氟-2-甲基-5-硝基苯( 1-2)（17.0 g，產率係20%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 8.27 (t, J= 1.79 Hz, 1 H), 7.89 (dd, J= 8.76, 2.21 Hz, 1 H), 2.44 (d, J= 2.50 Hz, 3 H)。 3-溴-5-氟-4-甲基苯胺( 1-3)：
向溴-3-氟-2-甲基-5-硝基苯( 1-2)（15.0 g，64.1 mmol，1.0當量）於乙醇(750 mL)及水(150 mL)中之溶液中加入鐵粉末（10.7 g，192 mmol，3.0當量）及NH 4Cl（6.86 g，128 mmol，2.0當量）。將懸浮液在80℃下攪拌2h。TLC（石油醚/乙酸乙酯= 10/1，R f= 0.3）顯示出形成了新的主斑點。在冷卻至25℃之後，將反應混合物藉由矽藻土墊過濾，用乙醇(500 mL)洗滌。將合併之濾液濃縮至乾燥並且將殘餘物藉由以9%的石油醚中的乙酸乙酯洗提的矽膠管柱層析法純化，得到3-溴-5-氟-4-甲基苯胺( 1-3)（8.0 g，產率係55%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 6.67 - 6.73 (m, 1 H), 6.34 (dd, J= 10.97, 2.27 Hz, 1 H), 3.65 (br s, 2 H), 2.20 (d, J= 2.15 Hz, 3 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -111.86。 N-(3-溴-5-氟-4-甲基苯基)乙醯胺( 1-4)：
向3-溴-5-氟-4-甲基苯胺( 1-3)（8.00 g，39.2 mmol，1.0當量）於乙酸乙酯(100 mL)中之混合物中加入三乙胺（8.13 g，80.4 mmol，11.2 mL，2.05當量）及乙酸酐（5.20 g，51.0 mmol，4.77 mL，1.3當量）。將反應混合物在25℃下攪拌3h。TLC（石油醚/乙酸乙酯= 3/1，R f= 0.25）顯示出形成了新的主斑點。將反應混合物用水淬熄，並且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。將合併之有機相用鹽水(100 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺( 1-4)（8.8 g，產率係91%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7.59 (d, J= 1.53 Hz, 1 H), 7.41 (dd, J= 11.55, 2.02 Hz, 1 H), 2.26 (d, J= 2.20 Hz, 3 H), 2.11 (s, 3 H)。 (E)-3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)醯化三級丁酯( 1-5)：
向 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺( 1-4)（8.00 g，32.5 mmol，1.0當量）及丙烯酸三級丁酯（4.58 g，35.8 mmol，5.19 mL, 1.1當量）於二
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烷(100 mL)中的橙色溶液中加入 N-環己基- N-甲基環己胺（6.99 g，35.8 mmol，7.58 mL，1.1當量）及Pd(t-Bu 3P) 2（831 mg，1.63 mmol，0.05當量）。將反應混合物在100℃下在氮氣氣氛下攪拌16h。LCMS（滯留時間=0.797 min）顯示出所欲產物之形成。將反應混合物用水(100 mL)淬熄，並且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮至乾燥。將殘餘物藉由以16%的石油醚中的乙酸乙酯洗提的矽膠管柱層析法純化，得到( E)-3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)醯化三級丁酯( 1-5)（10.0 g，產率係94%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 10.06 (s, 1 H), 7.72 (d, J= 15.77 Hz, 1 H), 7.61 (s, 1 H), 7.51 (dd, J= 11.98, 1.47 Hz, 1 H), 6.22 (d, J= 15.77 Hz, 1 H), 2.20 (d, J= 1.59 Hz, 3 H), 2.04 (s, 3 H) 1.49 (s, 9 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -115.02。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 21FNO 3 +計算之[MH] +：294.1，實驗值：294.0。 3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)丙酸三級丁酯( 1-6)：
在氬氣氣氛下，向( E)-3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)丙烯酸三級丁酯( 1-5)（2.80 g，9.55 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(20 mL)及甲醇(20 mL)中之溶液中加入Pd/C (10 wt%) (1.01 g，0.1當量）。將懸浮液在真空下除氣並以H 2吹掃三次。將混合物在H 2(15 psi)下在25℃下攪拌12h。TLC（石油醚/乙酸乙酯= 3/1，R f= 0.2）顯示出形成了新的主斑點。在H 2氣氛與氬氣交換之後，將其藉由矽藻土墊過濾並且將濾餅用甲醇(100 mL)洗滌。將合併之濾液在減壓下濃縮，得到3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)丙酸三級丁酯( 1-6)（2.6 g，產率係83%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7.33 (dd, J= 11.80, 2.02 Hz, 1 H), 7.06 (s, 1 H), 2.88 (t, J= 7.64 Hz, 2 H), 2.49 (t, J= 7.70 Hz, 2 H), 2.17 (d, J= 1.96 Hz, 3 H), 2.10 (s, 3 H), 1.41 (s, 9 H)。 3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)丙酸( 1-7)：
在25℃下，向3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)丙酸三級丁酯( 1-6)（2.60 g，8.80 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(30 mL)中之溶液中加入三氟乙酸(10 mL)。將反應混合物在25℃下攪拌12h。TLC（石油醚/乙酸乙酯=3/1，R f= 0.01）顯示出形成了新的主斑點。將反應混合物濃縮，得到3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)丙酸( 1-7)（2.1 g，產率係89%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7.35 (dd, J= 11.86, 1.83 Hz, 1 H), 7.04 (s, 1 H), 2.91 (t, J= 7.76 Hz, 2 H), 2.55 (t, J= 7.83 Hz, 2 H), 2.17 (d, J= 1.83 Hz, 3 H), 2.10 (s, 3 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -117.33, -77.77。 N-(6-氟-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺( 1-8)：
向3-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丙酸( 1-7)（2.10 g，8.78 mmol，1.0當量）於三氟乙酸(7 mL)中之溶液中加入三氟乙酸酐（7.37 g，35.1 mmol，4.88 mL，4.0當量）。將反應混合物在60℃下攪拌15h。LCMS顯示出所欲產物之形成。將反應混合物用50%的乙腈/H 2O溶液(100 mL)稀釋，並且藉由在0℃下添加25%的NaOH水溶液而將pH調節至~7。將混合物用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到 N-(6-氟-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺( 1-8)（1.5 g，產率係69%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 8.02 (d, J= 12.57 Hz, 1 H), 3.01 - 3.08 (m, 2 H), 2.72 - 2.79 (m, 2 H), 2.18 - 2.23 (m, 6 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 13FNO 2 +計算之[MH] +：222.1，實驗值：222.0。 N-(6-氟-2-羥基亞胺基-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺( 1-9)：
將三級丁氧化鉀（1.19 g，10.58 mmol，1.3當量）於四氫呋喃(12 mL)、乙醇(2.4 mL)及丁醇(2.4 mL)中之溶液在0℃攪拌0.5h。將亞硝酸異戊酯（1.43 g，12.2 mmol，1.64 mL，1.5當量）及 N-(6-氟-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺( 1-8)（1.80 g，8.14 mmol，1.0當量）加入上述混合物中。將反應混合物在20℃下攪拌3h。TLC（石油醚/乙酸乙酯=1/1，R f= 0.4）顯示出形成了新的主斑點。將所得紅色懸浮液冷卻至0℃並且用1N鹽酸溶液(50 mL)淬熄，並且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到 N-(6-氟-2-羥基亞胺基-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺( 1-9)（2.0 g，產率係88%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 12.81 (s, 1 H), 10.33 (s, 1 H), 8.03 (d, J= 12.57 Hz, 1 H), 3.71 (s, 2 H), 2.20 (s, 3 H), 2.16 (s, 3 H)。 N-(2-胺基-6-氟-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺鹽酸鹽( 1--10)：
在氮氣氣氛下，向 N-(6-氟-2-羥基亞胺基-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺( 1-9)（2.00 g，6.98 mmol，1當量）於甲醇(100 mL)中之溶液中加入Pd/C (10 wt%)（1.48 g，0.2當量）及鹽酸（12 M，1.74 mL，3當量）。將懸浮液在真空下除氣並以H 2吹掃三次。將混合物在H 2(15 psi)下在20℃下攪拌3h。TLC（石油醚/乙酸乙酯= 1/1，R f= 0）顯示出形成了新的主斑點。在H 2氣氛與氮氣交換之後，將其藉由矽藻土墊過濾並且用甲醇(200 mL)洗滌。將合併之濾液濃縮至乾燥，得到 N-(2-胺基-6-氟-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺鹽酸鹽( 1-10)（1.5 g，產率係71%）。將此材料用於下一個步驟中而未進行進一步純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 9.99 (s, 1 H), 8.02 (d, J= 12.59 Hz, 1 H), 4.33 (br s, 1 H), 3.98 (br s, 2 H), 3.50 (dd, J= 16.99, 8.19 Hz, 1 H), 3.00 (dd, J= 17.18, 4.46 Hz, 1 H), 2.21 (s, 3 H), 2.18 (s, 3 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -102.81。 N-(7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基)乙醯胺( 1-11)：
向 N-(2-胺基-6-氟-7-甲基-3-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-4-基)乙醯胺鹽酸鹽( 1-10)（1.50 g，6.35 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(45 mL)中之混合物中加入三乙胺（1.93 g，19.0 mmol，2.65 mL，3.0當量）及乙酸酐（778 mg，7.62 mmol，0.714 mL，1.2當量）。將反應混合物在25℃下攪拌2h。TLC（石油醚/乙酸乙酯=1/1，R f= 0.1）顯示出形成了新的主斑點。將反應混合物用水(50 mL)淬熄，並用二氯甲烷(3 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(50 mL)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到紅色膠狀物。
將膠狀物溶解在HCl/MeOH（20 mL，4M）中，並在25℃下攪拌2h。LCMS顯示出所欲產物之形成。將所得紅色懸浮液濃縮，得到紅色殘餘物。將殘餘物用甲醇(2 mL)稀釋且藉由製備型HPLC（管柱：Phenomenex luna C18 80*40 mm*3um；流動相：[水(HCl)-ACN]；B%：28%至48%，7 min）純化，得到 N-(7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基)乙醯胺( 1-11)（0.70 g，產率係47%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 6.52 (d, J= 11.56 Hz, 1 H), 4.48 (dd, J= 8.23, 5.01 Hz, 1 H), 3.44 (dd, J= 17.05, 8.23 Hz, 1 H), 2.83 (dd, J= 17.11, 4.95 Hz, 1 H), 2.11 (d, J= 1.07 Hz, 3 H), 2.02 (s, 3 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -107.29。 13CNMR (100 MHz, CD 3OD): 201.9, 172.1, 167.9, 165.4, 153.8, 153.7, 143.1, 143.0, 117.0, 112.6, 112.4, 101.6, 101.3, 55.5, 31.8, 20.8, 8.0。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 14FN 2O 2 +計算之[MH] +：237.1，實驗值：237.0。 ( R)-N-(7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基]乙醯胺( 1-12-P1)及( S)-N-7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氯-1 H-茚-2-基]乙醯胺( 1-12-P2)：
將 N-(7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基)乙醯胺( 1-11)（0.70 g，2.96 mmol）溶解在MeOH中，用NH 4OH中和並藉由掌性SFC分離，得到( R)-N-7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基)乙醯胺( 1-12-P1)（化合物 1-12-P1可係所示者之相對鏡像異構物）（200 mg，產率係28%）及( S)-N-7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基]乙醯胺( 1-12-P2)（化合物 1-12-P2可係所示者之相對鏡像異構物）（180 mg，產率係26%）。備註：立體化學係任意指派的。SFC分離方法：管柱：DAICEL CHIRALPAK AD（250 mm*30 mm，10um）；流動相：[0.1%NH 3H 2O IPA]；B%：30%至30%，12 min，SFC（ 1-12-P1，RT = 3.012 min），及SFC（ 1-12-P2，RT = 3.270 min）。
1-12-P1之光譜： 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 2.01 (s, 3 H) 2.05 (s, 3 H) 2.74 (dd, J=16.81, 5.01 Hz, 1 H) 3.40 (br d, J=8.70 Hz, 1 H) 4.50 (dd, J=8.23, 5.01 Hz, 1 H) 6.26 (d, J=12.40 Hz, 1 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -108.05。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 14FN 2O 2計算之[MH] +：237.10，實驗值：237.0。
12-P2之光譜： 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 2.01 (s, 3 H) 2.05 (s, 3 H) 2.74 (dd, J=17.11, 4.95 Hz, 1 H) 3.40 (br d, J=8.82 Hz, 1 H) 4.50 (dd, J=8.29, 5.07 Hz, 1 H) 6.26 (d, J=12.40 Hz, 1 H)。 19F NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm -108.03。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 14FN 2O 2計算之[MH] +：237.10，實驗值：237.1。 N-((1S,8S)-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-9,12-二側氧基-1,2,8,9,12,14-六氫-11H-環戊[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 1-14)
將 N-(7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-茚-2-基)乙醯胺( 1-11) (50 mg, 0.21 mmol)、(S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-哌喃并[3,4-f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4H)-三酮( 1-13) (111.4 mg, 0.42 mmol)、TsOH (36.2 mg, 0.21 mmol)在二甲苯(2 mL)中之混合物在140℃加熱12h。將所有揮發物在高真空下移除，且首先使殘餘物歷經層析法，然後進行掌性SFC分離，得到 1-14a及 1-14b。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 23FN 3O 5計算之[MH] +：464.2，實驗值：464.3。 實例2 N-((1S,9S)-9-乙基-9-羥基-10,13-二側氧基-1,2,9,10,13,15-六氫-12H-環-戊[ de][1,3]二
Figure 02_image162
呃并[4,5-g]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 2-30)（ 圖 13）
Figure 02_image164
2-30（在任意指派之*碳處之立體化學） 2-溴-6-甲氧基-4-硝基苯酚( 2-16)：
在20℃下，使用滴液漏斗向2-甲氧基-4-硝基苯酚( 2-15)（50.0 g，296 mmol，1.0當量）於冰乙酸(500 mL)中之溶液中緩慢加入溴（52.0 g，325 mmol，16.8 mL，1.1當量）。將所得混合物在20℃下攪拌2h。TLC（石油醚∶乙酸乙酯= 2∶1）指示起始材料已消耗，且形成了具有較低極性之主斑點。將反應混合物在攪拌的同時緩慢倒入水(1.5 L)中，且將所得混合物在20℃下再攪拌10 min。將混合物過濾，且在減壓下濃縮至乾燥。將殘餘物用水(2 × 500 mL)研製，將所得產物藉由過濾收集並在真空烘箱中乾燥，得到2-溴-6-甲氧基-4-硝基苯酚( 2-16)（60.0 g，產率係73）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ ppm 8.13 (d, J= 2.4 Hz, 1 H), 7.74 (d, J= 2.4 Hz, 1 H), 6.61 (s, 1 H), 4.03 (s, 3 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 7H 5BrNO 4 -計算之[MH] -：245.9，實驗值：245.9。 3-溴-5-硝基苯-1,2-二醇( 2-17)：
在0℃下，向2-溴-6-甲氧基-4-硝基苯酚( 2-16)（30.0 g，121 mmol，1當量）於CH 2Cl 2(1.5 L)中之溶液中加入三溴化硼（45.4 g，181 mmol，17.5 mL，1.5當量）。使反應混合物升溫至30℃並攪拌15h。TLC（石油醚∶乙酸乙酯= 1:1）指示起始材料已消耗，並且形成了具有較高極性之新的主斑點。將反應混合物用甲醇(200 mL)淬熄，並在減壓下濃縮，得到3-溴-5-硝基苯-1,2-二醇( 2-17)（26.9 g，產率係95%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6): δ ppm 10.94 (s, 2 H), 7.87 (d, J= 2.8 Hz, 1 H), 7.62 (d, J= 2.8 Hz, 1 H)。 4-溴-6-硝基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃( 2-18)：
在20℃下，向3-溴-5-硝基苯-1,2-二醇( 2-17)（30.0 g，128 mmol， 1.0當量）於 N, N-二甲基甲醯胺(1 L)中之溶液中加入Cs 2CO 3（125 g，385 mmol，3當量）及二碘甲烷（54.9 g，205 mmol，16.6 mL，1.6當量）。將反應混合物在100℃下攪拌12h。TLC（石油醚∶乙酸乙酯= 3∶1）指示起始材料已消耗，且形成了具有較低極性之新的主斑點。將反應混合物冷卻至20℃，倒入冰水 (1.5 L)中，並且用乙酸乙酯(2 × 1.5 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 × 1 L)洗滌，以無水Na 2SO 4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到棕色油狀物。將油狀物用甲苯(20 mL)研製，且將所得產物藉由過濾收集，在真空烘箱中乾燥，以得到4-溴-6-硝基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃( 2-18)（17 g，產率係48%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ ppm 8.06 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 7.63 (d, J= 2.4 Hz, 1 H), 6.23 (s, 2 H)。 7-溴苯并[d][1,3]二
Figure 02_image162
呃-5-胺( 2-19)：
在20℃下向4-溴-6-硝基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃( 2-18)（10.0 g，40.6 mmol，1.0當量）於乙醇(500 mL)及水(100 mL)中之溶液中加入鐵（6.81 g，122 mmol，3.0當量）及NH 4Cl（4.35 g，81.3 mmol，2.0當量）。將混合物在80℃下攪拌2h。TLC（石油醚∶乙酸乙酯= 1:1）指示起始材料已消耗，且形成了具有較低極性之新的主斑點。將反應混合物冷卻至20℃後，將其藉由矽藻土墊過濾，用乙醇(500 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮並且加入碎冰。將所得產物藉由過濾收集，用水洗滌，在真空烘箱中乾燥，得到7-溴苯并[d][1,3]二
Figure 02_image162
呃-5-胺( 2-19)（7.5 g，產率係76%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ ppm 6.29 (s, 1 H), 6.21 (s, 1 H), 5.94 (s, 2 H), 3.51 (s, 2 H)。 N-(7-溴苯并[d][1,3]二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-20)：
在20℃下，向7-溴-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-5-胺( 2-19)（6.00 g，27.78 mmol，1.0當量）於乙酸乙酯(50 mL)中之溶液中加入乙酸酐（3.40 g，33.33 mmol，3.12 mL，1.2當量）及三乙胺（8.43 g，83.3 mmol，11.6 mL，3.0當量），並將所得混合物攪拌10h。TLC（乙酸乙酯:甲醇= 4:1）指示起始材料已消耗並且形成了具有較高極性之新的主斑點。將反應混合物藉由在0℃下加入飽和NaHCO 3(50 mL)淬熄，並用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。將合併之有機層以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法（用石油醚/乙酸乙酯= 1/3至1/4洗提）純化，得到N-(7-溴苯并[ d][1,3]二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-20)（5.5 g，產率係69%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ ppm 7.19 (s, 1 H), 7.13 (d, J= 1.6 Hz, 1 H), 7.02 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 6.02 (s, 2 H), 2.15 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 9H 9BrNO 3 +計算之[MH] +：258.0，實驗值：257.9。 ( E)-3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙烯酸三級丁酯( 2-21)：
在氮氣氣氛下，向 N-(7-溴-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-20)（2.00 g，7.75 mmol，1.0當量）及丙烯酸三級丁酯（1.09 g，8.52 mmol，1.24 mL，1.1當量）於二
Figure 02_image162
烷(20 mL)中之溶液中加入 N-環己基- N-甲基-環己胺（1.67 g，8.52 mmol，1.81 mL，1.1當量）及雙(三-三級丁基膦)鈀(0)（198 mg，0.387 mmol，0.05當量）。將混合物在100℃下攪拌5h。TLC（石油醚:乙酸乙酯=2:1，R f=0.4）及LCMS顯示出起始材料已消耗，且形成了所欲產物。冷却至RT之后，將反應混合物過濾，並且將濾液濃縮，得到產物，接着將該產物在20℃下用乙酸乙酯(40 mL)研製10 min，然後過濾並且將濾液在減壓下濃縮，得到( E)-3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙烯酸三級丁酯( 2-21)（2.0 g，產率係76%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7.44 (d, J= 16.09 Hz, 1 H) 7.23 (d, J= 1.91 Hz, 1 H) 7.05 (br s, 1 H) 6.86 (d, J= 1.91 Hz, 1 H) 6.55 (d, J= 15.97 Hz, 1 H) 6.06 (s, 2 H) 2.17 (s, 3 H) 1.53 (s, 9 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 20NO 5-C 4H 9( t Bu) + H ]+計算之[M-56] +：249.1，實驗值：249.9。 3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙酸三級丁酯( 2-22)：
在20℃下，向Pd/C（2.90 g，2.46 mmol，10%的純度，0.5當量）於MeOH (20 mL)中之懸浮液中加入( E)-3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙烯酸三級丁酯( 2-21)（1.50 g，4.91 mmol，1.0當量）於MeOH (20 mL)中之溶液。將混合物在20℃下在15 psi之氫氣氣氛下氫化2 h。TLC（石油醚/乙酸乙酯=1/1，R f=0.48）顯示出起始材料已消耗，並且形成了新的斑點。在將H 2氣氛與氮氣交換後，將反應混合物過濾，並且將濾液濃縮，得到3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙酸三級丁酯( 2-22)（1.4 g，產率係83%）。將其用於下一個步驟中而未進行進一步純化。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7.09 (d, J= 1.96 Hz, 1 H), 6.98 (br s, 1 H), 6.64 (s, 1 H), 5.94 (s, 2 H), 2.83 (t, J= 7.76 Hz, 2 H), 2.51 - 2.59 (m, 2 H), 2.14 (s, 3 H), 1.43 (s, 9 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 21NO 5Na +計算之[M+Na] +：330.1，實驗值：330.1。 3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙酸( 2-23)：
在20℃下，向3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙酸三級丁酯( 2-22)（1.40 g，4.56 mmol，1.0當量）於CH 2Cl 2(15 mL)中之溶液中加入TFA (3 mL)，且將混合物攪拌2 h。TLC（石油醚:乙酸乙酯＝0: 1，R f=0.48）顯示出起始材料已消耗，並且形成了新的斑點。將反應混合物在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由管柱層析法（用石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/9洗提）純化，得到3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙酸( 2-23)（0.85 g，產率係71%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7.08 (d, J= 1.91 Hz, 1 H), 6.76 (d, J= 1.79 Hz, 1 H), 5.93 (s, 2 H), 2.80 - 2.88 (m, 2 H), 2.57 - 2.65 (m, 2 H), 2.07 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 14NO 5 +計算之[MH] +：252.1，實驗值：251.9。 N-(6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-24)：
在20℃下向3-(6-乙醯胺基-1,3-苯并二
Figure 02_image162
呃-4-基)丙酸( 2-23)（16.0 g，63.7 mmol，1.0當量）於TFA (64 mL)中之溶液中逐滴加入TFAA（53.5 g，255 mmol，35.4 mL，4當量）。將所得溶液加熱至60℃，持續10 h。TLC（石油醚:乙酸乙酯= 2: 1，R f= 0.40）及LCMS指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應混合物倒入乙腈(100 mL)及水(100 mL)之溶液中。在冷卻至0℃之後，將混合物之pH用25%的水性氫氧化鈉(150 mL)調節至7，且加入水(100 mL)。將所得混合物用乙酸乙酯(500 mL × 3)萃取。將合併之有機層用鹽水(800 mL)洗滌，以無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(100 mL)研製，過濾且收集濾餅以得到 N-(6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-24)（10.4 g，產率係59%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 10.47 (s, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 6.15 (s, 2 H), 2.84 - 3.04 (m, 2 H), 2.60 - 2.74 (m, 2 H), 2.17 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 12NO 4 +計算之[MH] +：234.1，實驗值：234.0。 N-(7-羥基亞胺基-6-側氧基-8H-環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-25)：
將三級丁氧化鉀（1.0 M，45.0 mL，2.1當量）於THF (41.6 mL)、EtOH (6.7 mL)及 n-BuOH (6.7 mL)中之溶液在0℃下攪拌30 min。在0℃下，將亞硝酸異戊酯（3.01 g，25.7 mmol，3.46 mL，1.2當量）及 N-(6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-24)（5.00 g，21.4 mmol，1.0當量）加入到上述溶液中。將所得混合物在20℃下攪拌3 h。LCMS顯示出所欲產物之形成。將反應混合物藉由1.0N的鹽酸(200 mL)淬熄，且加入了乙酸乙酯(200 mL)。藉由過濾收集所得沉澱。將濾液用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取，然後將合併之有機層用鹽水洗滌，以硫酸鈉乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮。將所得產物與濾餅合併，得到 N-(7-羥基亞胺基-6-側氧基-8H-環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-25)（5.6 g，產率係99%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 12.71 (s, 1 H), 10.53 (s, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 6.19 (s, 2 H), 3.63 (s, 2 H), 2.17 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 11N 2O 5 +計算之[MH] +：263.1，實驗值：263.0。 N-(7-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺鹽酸鹽( 2-26)：
向 N-(7-羥基亞胺基-6-側氧基-8H-環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-25)（550 mg，2.10 mmol，1.0當量）及HCl（12 M，0.26 mL，1.5當量）於MeOH (50 mL)中之混合物中加入Pd/C (10 wt.%) (300 mg)。將反應混合物用氫氣吹掃三次，且在20℃下在15 psi之氫氣氣氛下攪拌2h。LCMS指示反應完成。在H 2氣氛與氮氣交換後，將反應混合物藉由矽藻土墊過濾，且將濾液在減壓下濃縮，得到 N-(7-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺鹽酸鹽( 2-26)（500 mg，產率係83%）。將其用於下一個步驟中而未進行進一步純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 10.09 (br s, 1 H), 9.05 (br s, 2 H), 8.82 (br s, 2 H), 7.85 (s, 1 H), 6.23 - 6.70 (m, 2 H), 3.98 - 4.39 (m, 2 H), 3.35 - 3.48 (m, 1 H), 2.16 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 13N 2O 4 +計算之[MH] +：249.1，實驗值：249.0。 N-(7-乙醯胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-27)：
在20℃下向 N-(7-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺鹽酸鹽( 2-26)（4.50 g，15.8 mmol，1.0當量）於DCM (150 mL)中之溶液中加入TEA（4.80 g，47.4 mmol，6.60 mL，3.0當量）、乙酸酐（1.94 g，19.0 mmol，1.78 mL，1.2當量），並且將混合物攪拌3 h。TLC（乙酸乙酯，R f= 0.40）及LCMS指示反應完成。將混合物用DCM (500 mL)稀釋，並且用水(100 mL)洗滌。將有機層以無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法（用石油醚/乙酸乙酯=2/1至0/1洗提，5% THF）純化，得到 N-(7-乙醯胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-27)（2.55 g，產率係50%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 10.35 (s, 1 H), 8.53 (d, J= 7.51 Hz, 1 H), 7.87 (s, 1 H), 6.13 - 6.19 (m, 2 H), 4.30 - 4.37 (m, 1 H), 3.17 - 3.32 (m, 1 H), 2.79 (dd, J= 16.75, 5.07 Hz, 1 H), 2.14 (s, 3 H), 1.85 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 15N 2O 5 +計算之[MH] +：291.1，實驗值：291.0。 N-(5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基)乙醯胺( 2-28)：
在20℃下，向 N-(7-乙醯胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-5-基)乙醯胺( 2-27)（2.55 g，8.78 mmol，1.0當量）於MeOH (110 mL)中之溶液中加入HCl/MeOH（4 M，110 mL，50當量），並且將溶液攪拌3 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於MeOH (10 mL)中且將pH用飽和NaHCO 3調節至7，然後用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。將合併之有機相以無水Na 2SO 4乾燥，過濾並且在減壓下濃縮，得到 N-(5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基)乙醯胺( 2-28)（2.0 g，產率係91%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.40 (d, J= 7.89 Hz, 1 H), 6.21 (s, 1 H), 5.97 (d, J= 15.79 Hz, 2 H), 4.35 (td, J= 8.17, 5.37 Hz, 1 H), 3.20 (dt, J= 16.55, 8.17 Hz, 1 H), 2.62 (dd, J= 16.66, 5.26 Hz, 1 H), 1.84 (s, 3 H)。 13CNMR (100 MHz, DMSO-D 6): δ 199.6, 169.1, 154.3, 145.6, 133.4, 127.7, 111.3, 101.3, 93.5, 54.5, 28.7, 22.3。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 13N 2O 4 +計算之[MH] +：249.1，實驗值：249.0。 N-[(7R)-5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基]乙醯胺( 2-29-P1)及 N-[(7S)-5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基]乙醯胺( 2-29-P2)：
將 N-(5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基)乙醯胺( 2-28) (1.0 g)溶解於MeOH中並且藉由掌性SFC分離，以得到 N-[(7 R)-5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基]乙醯胺( 2-29-P1)（化合物 22-9-P1可以係所示者之相對鏡像異構物）（250 mg，產率係24%），及 N-[(7 S)-5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基]乙醯胺( 2-29-P2)（化合物 2-29-P2可以係所示者之相對鏡像異構物（250 mg，產率係24%）。
SFC分離方法：管柱（管柱：Phenomenex-Cellulose-2 (250 mm × 30 mm，10um）；流動相：[Neu-ETOH]；B%：40%至40%，5 min）。將化合物（ 2-29-P1，RT = 2.719 min）及（ 2-29-P2，RT = 2.942 min）藉由掌性SFC分離。備註： 2-29-P1及 2-29-P2之立體化學係任意指派的。
2-29-P1 之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.30 (br d, J= 7.95 Hz, 1 H), 6.59 (s, 2 H), 6.17 (s, 1 H), 5.96 (d, J= 15.89 Hz, 2 H), 4.36 (td, J= 8.16, 5.32 Hz, 1 H), 3.16 - 3.25 (m, 1 H), 2.61 (dd, J= 16.69, 5.20 Hz, 1 H), 1.84 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 13N 2O 4 +計算之[MH] +：249.1，實驗值：248.9。
2-29-P2 之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.30 (br d, J=7.95 Hz, 1 H), 6.59 (s, 2 H), 6.17 (s, 1 H), 5.96 (d, J=15.89 Hz, 2 H), 4.36 (td, J=8.19, 5.26 Hz, 1 H), 3.21 (dd, J=16.69, 8.50 Hz, 1 H), 2.61 (dd, J=16.69, 5.20 Hz, 1 H), 1.85 (s, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 12H 13N 2O 4 +計算之[MH] +：249.1，實驗值：248.9。
N-[(7 R)-5-胺基-6-側氧基-7,8-二氫環戊[g][1,3]苯并二
Figure 02_image162
呃-7-基]乙醯胺( 2-29-P1) (30 mg, 0.12 mmol)、(S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-哌喃并[3,4-f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4H)-三酮( 1-13) (63.6 mg, 0.24 mmol)、TsOH(20.7 mg, 0.12 mmol)在二甲苯(2 mL)中之混合物在140℃下加熱12h。將所有揮發物在高真空下移除，且使殘餘物歷經層析法以得到 2-30。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 22N 3O 7計算之[MH] +：476.5，實驗值：476.4。 實例3 (1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15 -四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮 (3-34)及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15 -四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-35)（ 圖 14）
Figure 02_image173
Figure 02_image175
3-34 3-33（在任意指派之*碳處之立體化學） ( S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3-二氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-1,10,13(9 H,12 H,15 H)-三酮( 3-32)：
在25℃下向(1 S,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10H,13H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮甲磺酸鹽（100 mg，0.230 mmol，1當量）於甲醇(20 mL)中之溶液中加入鹼性樹脂(300 mg)，並且將混合物在超音波下攪拌30 min。將混合物過濾並且將濾液濃縮以得到游離鹼。
向上述獲得之游離鹼於甲醇(2 mL)中之溶液中加入3,5-二三級丁基-1,2-苯并醌（101 mg，0.459 mmol，2當量）。將反應混合物在60℃攪拌10 min。反應混合物的顏色從紅色變為深黃色。將反應混合物在25℃再攪拌3h。TLC（乙酸乙酯:甲醇= 8:1）指示剩餘約10%的未反應起始材料並且形成了新的斑點。將反應混合物藉由在25℃下加入草酸（2 M於四氫呋喃/HH 2O =3:1溶液中，0.5 mL）來淬熄，並且將混合物攪拌3h。將反應混合物用四氫呋喃(5 mL)稀釋，過濾並將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC（在HCl條件下）純化，得到( S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3-二氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-1,10,13(9H,12H,15H)-三酮( 3-32)（70 mg，產率係25%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.94 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.39 (s, 2H), 3.55 - 3.47 (m, 2H), 3.09 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 0.91 - 0.85 (m, 3H)。LCMS (ESI) m/z：針對C 24H 2OFN 2O 5 +計算之[M + H +]：435.1，實驗值：435.2。 製備型HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：HCl/H 2O=0.040% v/v；B：CH 3CN 管柱：Phenomenex Luna 80*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     30 8.0     60 8.1     60 8.2     100 10.2    100 10.3    30 11.5    30 (9S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[de]哌喃并-[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13(1H,9H)-二酮( 3-33)：
向得到的( S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3-二氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-1,10,13(9H,12H,15H)-三酮( 3-32)（70 mg，0.16 mmol，1.0當量）於甲醇(2 mL)中之溶液中加入AcOH（27.6 mg，0.460 mmol，26.3 mL，10當量）及NaBH 3CN（20.1 mg，0.322 mmol，2.0當量）。將混合物在0℃攪拌10 min，然後在20℃攪拌12h。TLC（乙酸乙酯:甲醇= 8:1）指示起始材料已消耗，並且形成了新的主斑點。將反應混合物在25℃藉由H 2O (0.5 mL)淬熄並且在減壓下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到(9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13(1H,9H)-二酮( 33)（20 mg，產率係29%）。
化合物 3-33的掌性SFC分離得到了(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10 H,13 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮( 3-34)（化合物 3-34可以係所示者之相對非鏡像異構物）（2.9 mg，產率係4%）（在1.429 min在SFC中之峰值1）及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10H,13H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮( 3-35)（化合物 3-35可以係所示者之相對非鏡像異構物）（4.7 mg，產率係7%）（在1.534 min在SFC中之峰值2）。備註：立體化學係任意指派的。
(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10 H,13 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮( 3-34)之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.73 (dd, J= 10.8, 1.8 Hz, 7.31 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.97 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.41 (d, J= 19.2 Hz, 1H), 5.28 (d, J= 18.6 Hz, 1H), 5.12 – 5.17 (m, 1H), 3.20 – 3.26 (m, 1H), 2.98 – 3.05 (m, 1H), 2.31 – 2.35 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.95 – 2.00 (m, 1H), 1.84 – 1.90 (m, 2H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (400 MHz, DMSO-D 6): δ ppm −111.8 (s, 1F)。LCMS (ESI) m/z：針對C 24H 22FN 2O 5 +計算之[MH +]：437.1，實驗值：437.1。
(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10H,13H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮( 3-35)之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.73 (dd, J= 10.8, 1.8 Hz, 7.31 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.97 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.41 (d, J= 19.2 Hz, 1H), 5.28 (d, J= 18.6 Hz, 1H), 5.12 – 5.17 (m, 1H), 3.20 – 3.26 (m, 1H), 2.98 – 3.05 (m, 1H), 2.31 – 2.35 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.95 – 2.00 (m, 1H), 1.84 – 1.90 (m, 2H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 19F NMR (400 MHz, DMSO-D 6): δ ppm −111.8 (s, 1F)。LCMS (ESI) m/z：針對C 24H 22FN 2O 5 +計算之[MH +]：437.1，實驗值：437.1。 製備型HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：HCl/H 2O=0.040% v/v；B：CH 3CN 管柱：Phenomenex Luna 80 * 30 mm * 3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220 &254 nm 時間   B% 0.0     20 8.0     50 8.1     50 8.2     100 10.2    100 10.3    20 11.5    20 SFC分離方法：
儀器：Waters SFC150AP製備型SFC 管柱：DAICEL CHIRALCEL OD (250 mm*30 mm,10um) 流動相：A用於CO2且B用於EtOH 梯度：B%=45%等度洗提模式 流速：70 g/min 波長：220 nm 管柱溫度：35攝氏度 系統背壓：120巴 實例4 (1 R,8 S)-1-胺基-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-11,14-二氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-9,12(2 H,8 H)-二酮鹽酸鹽( 4-36)及(1 S,8 S)-1-胺基-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-11,14-二氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-9,12(2 H,8 H)-二酮鹽酸鹽( 4-37) （圖15）
Figure 02_image177
N-((8 S)-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-9,12-二側氧基-2,8,9,11,12,14-六氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 1-14)：
在140℃下向 N-(7-胺基-5-氟-4-甲基-1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-2-基)乙醯胺（100 mg，0.423 mmol，1.0當量）( 1-11)及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1 H-哌喃并[3,4-f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮( 1-13)（223 mg，0.847 mmol，2.0當量）於二甲苯(10 mL)中之混合物中加入4-甲基苯磺酸（29.1 mg，0.169 mmol，0.4當量），並且將混合物在140℃下在40 mL密封管中攪拌36 h。將其冷卻至室溫並且在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以9%的二氯甲烷中之MeOH洗提的矽膠管柱層析法純化，得到 N-((8 S)-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-9,12-二側氧基-2,8,9,11,12,14-六氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 1-14)（8.50 mg，產率係4.3%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.65 (d, J= 8.11 Hz, 1 H), 7.72 (d, J= 11.56 Hz, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 6.51 (d, J= 2.27 Hz, 1 H), 5.95 (br d, J= 5.01 Hz, 1 H), 5.43 (s, 2 H), 5.09 - 5.13 (m, 2 H), 3.82 - 3.93 (m, 1 H), 3.30 (br s, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 1.94 (d, J= 2.86 Hz, 3 H), 1.87 (br d, J= 7.39 Hz, 2 H), 0.87 (br d, J= 4.41 Hz, 3 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 23FN 3O 5 +計算之[MH] +：464.1，實驗值：464.2。 (1R,8 S)-1-胺基-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-11,14-二氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-9,12(2 H,8 H)-二酮鹽酸鹽( 4-36)及(1 S,8 S)-1-胺基-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-11,14-二氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-9,12(2 H,8 H)-二酮鹽酸鹽( 4-37)：
將 N-((8 S)-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-9,12-二側氧基-2,8,9,11,12,14-六氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 1-14)（150 mg，0.323 mmol，1.0當量）於6N HCl水溶液(15 mL)中之溶液在60℃在密封管中攪拌15 h。冷卻至25℃後，將反應混合物在減壓下濃縮，將殘餘物用甲醇(5 mL)稀釋，且藉由製備型HPLC純化，得到(1 R,8 S)-1-胺基-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-11,14-二氫-1 H-環戊[ de]-哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-9,12(2 H,8 H)-二酮鹽酸鹽( 4-36)（5.0 mg，產率係3.3%）（化合物 4-36可以係所示者之相對鏡像異構物）及(1 S,8 S)-1-胺基-8-乙基-4-氟-8-羥基-3-甲基-11,14-二氫-1 H-環戊[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-9,12(2 H,8 H)-二酮鹽酸鹽( 4-37)（3.0 mg，產率係1.4%）（化合物 4-37可以係所示者之相對鏡像異構物）。備註：立體化學係任意指派的。 製備型HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：HCl/H 2O=0.040% v/v；B：CH 3CN 管柱：Phenomenex luna C18 80*40 mm*3 um 流速：40 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     13 7.0     38 7.1     38 7.2     100 9.2     100 9.3     13 10.5    13
4-36之光譜： 1H NMR (400 MHz, D 2O) δ ppm 7.33 - 7.40 (m, 2 H), 5.65 (br d, J= 5.72 Hz, 1 H), 5.44 - 5.52 (m, 1 H), 5.33 (br d, J= 17.17 Hz, 2 H), 5.18 - 5.26 (m, 1 H), 4.00 (br dd, J= 18.06, 7.81 Hz, 1 H), 3.45 (br d, J= 18.84 Hz, 1 H), 2.30 (s, 3 H), 1.90 (q, J= 7.27 Hz, 2 H), 0.87 (t, J= 7.27 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, D 2O) δ ppm -106.41。LCMS (ESI+) m/z：針對C 23H 21FN 3O 4 +計算之[MH] +：422.1，實驗值：422.0。SFC (RT = 1.208 min)。
4-37之光譜： 1H NMR (400 MHz, D 2O) δ ppm 7.43 (s, 1 H), 7.24 (br d, J= 11.26 Hz, 1 H), 5.58 (br dd, J= 8.00, 3.25 Hz, 1 H), 5.54 (d, J= 16.26 Hz, 1 H), 5.37 - 5.45 (m, 2 H), 5.22 (br d, J= 19.01 Hz, 1 H), 4.05 (br dd, J= 18.01, 8.13 Hz, 1 H), 3.52 - 3.61 (m, 1 H), 2.36 (s, 3 H), 1.95 (q, J= 7.30 Hz, 2 H), 0.93 (t, J= 7.38 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, D 2O) δ ppm -106.53。LCMS (ESI+) m/z：針對C 23H 21FN 3O 4 +計算之[MH] +：422.1，實驗值：422.0。SFC (RT = 1.252 min)。 實例5 (1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-47)及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-48)之合成（ 圖 16 ）
Figure 02_image180
3-溴-5-氟-4-甲基-苯胺( 1-3)：
在氬氣氛圍下向1-溴-3-氟-2-甲基-5-硝基苯( 1-2)（100 g，427 mmol，1.0當量）於乙酸乙酯(1.50 L)中之溶液中加入Pt/C（10 wt%，10.0 g）。在真空下使所得懸浮液除氣且用H 2吹掃三次後，將其在H 2(15 psi)下在60℃下攪拌4h。然後，將H 2氣氛與氬氣交換，且將合併之反應混合物藉由矽藻土墊過濾，並且將濾餅用乙酸乙酯(10.0 L)洗滌。（如上所述設置了十八個額外的反應並且將所有十九種反應混合物合併）。將合併之濾液在減壓下濃縮，得到3-溴-5-氟-4-甲基-苯胺( 1-3)（1.8 kg，純度係71%，產率係77%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 6.79 (s, 1 H), 6.50 (dd, J= 11.74, 2.08 Hz, 1 H), 2.10 (d, J= 2.08 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CD 3OD) δ = -112.13。LCMS (ESI+) m/z：針對C 7H 8BrFN +計算之[MH] +：205.0，實驗值：205.8。 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺( 1-4)：
向3-溴-5-氟-4-甲基-苯胺( 1-3)（300 g，1.47 mol，1.0當量）於乙酸乙酯(4.50 L)中之溶液中加入三乙胺（420 mL，3.02 mol，2.1當量）及乙酸酐（179 mL，1.91 mol，1.3當量），並且將混合物在15℃下攪拌12h。（如上文所述設置五個額外的小瓶並且將所有六種反應混合物合併）。將合併之混合物用飽和NH 4Cl溶液(15.0 L)淬熄，且用乙酸乙酯(3 × 5.0 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(8.0 L)洗滌，以Na 2SO 4乾燥，濃縮，將殘餘物溶解於二氯甲烷(2.00 L)中，且藉由以15%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠管柱層析法純化，得到 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺( 1-4)（1.2 kg，產率係55%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ = 7.59 (t, J= 1.5 Hz, 1 H), 7.41 (dd, J= 2.0, 11.6 Hz, 1 H), 2.26 (d, J= 2.2 Hz, 3 H), 2.11 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CD 3OD) δ = -112.95。LCMS (ESI+) m/z：針對C 9H 10BrFNO +計算之[MH] +：247.0，實驗值：247.8。 ( E)-4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丁-3-烯酸( 5-38)：
在N 2下向 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺( 1-4)（200 g，813 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(1.00 L)及水(200 mL)中之混合物中加入二異丙基乙胺（566 mL，3.25 mol，4.0當量）、參鄰甲苯基磷烷（49.5 g，163 mmol，0.20當量）、丁-3-烯酸（168 g，1.95 mol，2.4當量）、及Pd(OAc) 2（18.2 g，81.3 mmol，0.10當量），且將反應混合物在75℃下攪拌16h。（如上所述設置五個額外的反應，並且將所有六種反應混合物合併）。將合併之反應混合物用水(2.0 L)稀釋，藉由添加3N HCl調節至pH = 2，將混合物藉由矽藻土墊過濾，且將濾餅用乙酸乙酯(4.0 L)洗滌。將混合物用水(4.0 mL)淬熄，且將水相用乙酸乙酯(3 × 1.80 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(4.0 L)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，且將殘餘物藉由以70%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠管柱層析法純化，得到( E)-4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丁-3-烯酸( 5-38)（400 g，產率係49%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 12.32 (br s, 1 H), 10.02 (s, 1 H), 7.48 (ddd, J= 1.6, 8.3, 12.0 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 7.08 - 6.98 (m, 1 H), 6.94 - 6.83 (m, 1 H), 6.75 - 6.50 (m, 1 H), 6.13 (td, J= 7.2, 15.7 Hz, 1 H), 5.69 (d, J= 15.5 Hz, 1 H), 3.59 (ddd, J= 2.5, 4.1, 6.5 Hz, 1 H), 3.56 - 3.46 (m, 1 H), 3.31 - 3.21 (m, 1 H), 2.16 - 2.06 (m, 3 H), 2.05 - 1.99 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6) δ = -115.3。LCMS (ESI+) m/z：針對C 13H 15FNO 3 +計算之[MH] +：252.1，實驗值：252.0。 4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丁酸( 5-39)：
在氬氣氣氛下，向( E)-4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丁-3-烯酸( 5-38)（100 g，398 mmol，1.0當量）於甲醇(1.50 L)中之溶液中加入Pd/C（30.0 g，39.8 mmol，10 wt%，0.10當量）。將所得懸浮液在真空下除氣且用H 2吹掃三次，並且在H 2(15 psi)下在35℃下攪拌12h。（如上文所述設置三個額外的反應且將所有四種反應混合物合併）。在H 2氣氛用氬氣置換之後，將合併之混合物藉由矽藻土墊過濾並且將濾餅用甲醇(8 L)洗滌。將合併之濾液在減壓下濃縮，得到4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丁酸( 5-39)（330 g，產率係82%），其直接用於下一步驟中而未經純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 12.77 - 11.04 (m, 1 H), 9.98 (s, 1 H), 7.42 (dd, J= 1.7, 12.2 Hz, 1 H), 7.04 (s, 1 H), 2.59 - 2.53 (m, 2 H), 2.27 (t, J= 7.2 Hz, 2 H), 2.09 (d, J= 1.8 Hz, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.71 (quin, J= 7.5 Hz, 2 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6) δ = -115.64。LCMS (ESI+) m/z：針對C 13H 17FNO 3 +計算之[MH] +：254.1，實驗值：254.0。 N-(7-氟-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-40)：
在N 2下在0℃，向4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基-苯基)丁酸( 5-39)（110 g，434 mmol，1.0當量）於三氟乙酸(330 mL)中之溶液中加入三氟乙酸酐（121 mL，869 mmol，2.0當量），並且將混合物在15℃下攪拌15h。（如上所述設置兩個額外的反應，並且將所有三種反應混合物合併）。將合併之反應混合物在0℃下倒入50%的乙腈水溶液(6.0 L)中，並在0℃攪拌0.5h。將所得懸浮液在0℃下用25%的NaOH水溶液調節至pH = 7。將混合物過濾且將殘餘物用水(1.00 L)、甲基三級丁酯(2.00 L)洗滌，然後在高真空下乾燥。將此殘餘物用甲基甲基三級丁酯(600 mL)研製，並過濾以得到 N-(7-氟-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-40)（300 g，產率係88%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 12.18 (s, 1 H), 8.28 (d, J= 13.2 Hz, 1 H), 2.89 (t, J= 6.1 Hz, 2 H), 2.68 - 2.60 (m, 2 H), 2.18 - 2.08 (m, 6 H), 1.99 (quin, J= 6.4 Hz, 2 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6) δ = -103.89。LCMS (ESI+) m/z：針對C 13H 15FNO 2 +計算之[MH] +：236.1，實驗值：236.0。 N-(7-氟-3-羥基-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-41)：
在0℃下在氬氣下向 N-(7-氟-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-40)（75.0 g，319 mmol，1.0當量）於甲醇(1.20 L)中之溶液中加入KOH（53.7 g，956 mmol，3當量）於甲醇(600 mL)及(二乙醯氧碘)苯（113 g，351 mmol，1.1當量）中之溶液，且將混合物在15℃下攪拌3 h。（如上所述設置三個額外的反應，並且將所有四種反應混合物合併）。藉由添加1N HCl將合併之混合物調節至pH ~ 4，在35℃下濃縮以去除大部分甲醇，並且將混合物用二氯甲烷(3 × 1.0 L)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，且將殘餘物藉由矽膠層析法（石油醚/乙酸乙酯=5/1至4/1）純化，得到 N-(7-氟-3-羥基-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-41)（210 g，產率係66%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.92 (s, 1 H), 8.26 (d, J= 13.1 Hz, 1 H), 5.90 - 4.94 (m, 1 H), 4.28 (dd, J= 5.0, 12.7 Hz, 1 H), 3.07 - 2.97 (m, 1 H), 2.96 - 2.84 (m, 1 H), 2.29 - 2.20 (m, 1 H), 2.16 (s, 3 H), 2.10 (d, J= 1.2 Hz, 3 H), 1.95 - 1.82 (m, 1 H)。 19F NMR (377 MHz, DMSO- d 6) δ = -104.3。LCMS (ESI+) m/z：針對C 13H 15FNO 3 +計算之[MH] +：252.1，實驗值：252.0。 N-(3-烯丙氧基-7-氟-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-42)：
在15℃下向 N-(7-氟-3-羥基-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-41)（70.0 g，279 mmol，1.0當量）於乙腈(1.40 L)中之溶液中加入Ag 2O（129 g，557 mmol，2.0當量）及3-碘丙-1-烯（140 g，836 mmol，76.3 mL，3.0當量）於乙腈(280 mL)中之溶液，且將混合物在40℃下攪拌5 h。（如上所述設置兩個額外的反應，並且將所有三種反應混合物合併）。將合併之混合物藉由矽藻土墊過濾，且將濾餅用二氯甲烷(5.00 L)洗滌。將合併之濾液濃縮，且將殘餘物藉由矽膠層析法（石油醚/乙酸乙酯=9/1至4/1）純化，得到材料。將此材料用甲基三級丁酯(500 mL)研製，並過濾以得到 N-(3-烯丙氧基-7-氟-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-42)（198 g，產率係81%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 11.81 (s, 1 H), 8.27 (d, J= 13.1 Hz, 1 H), 5.93 (tdd, J= 5.3, 10.5, 17.2 Hz, 1 H), 5.29 (qd, J= 1.8, 17.2 Hz, 1 H), 5.16 (dd, J= 1.7, 10.5 Hz, 1 H), 4.32 - 4.06 (m, 3 H), 3.12 - 2.83 (m, 2 H), 2.32 - 2.23 (m, 1 H), 2.17 (s, 3 H), 2.11 (d, J= 1.5 Hz, 3 H), 2.09 - 1.98 (m, 1 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- d 6) δ = -104.2。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 19FNO 3 +計算之[MH] +：292.1，實驗值：291.9。 N-[7-氟-8-甲基-4-側氧基-3-(2-側氧基乙氧基)四氫萘-5-基]乙醯胺( 5-43)：
將 N-(3-烯丙氧基-7-氟-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基)乙醯胺( 5-42)（42.0 g，144 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(840 mL)及甲醇(420 mL)中之混合物冷卻至-70℃，將臭氧（6.92 g，144 mmol，1.0當量）鼓泡至混合物中達60 min，然後用O 2鼓泡30 min。然後在-70℃下將甲基氫硫基甲烷（26.5 mL，360 mmol，2.5當量）加入至混合物中，且將其升溫至15℃且在15℃下攪拌1h。（如上所述設置三個額外的反應且將所有四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物用水(5.0 L)淬熄，並用二氯甲烷(3 × 1.0 L)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾並濃縮，得到N-[7-氟-8-甲基-4-側氧基-3-(2-側氧基乙氧基)四氫萘-5-基]乙醯胺( 5-43)（168 g，產率係59%），其直接用於下一步驟中而不進一步純化。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 11.94 (br s, 1 H), 9.80 (s, 1 H), 8.44 (d, J= 12.7 Hz, 1 H), 4.55 - 4.30 (m, 1 H), 3.85 - 3.69 (m, 2 H), 3.51 - 3.48 (m, 1 H), 3.18 - 3.03 (m, 1 H), 2.96 - 2.78 (m, 1 H), 2.52 - 2.34 (m, 1 H), 2.26 - 2.21 (m, 3 H), 2.14 (br dd, J= 1.7, 3.9 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ = -100.7。LCMS (ESI+) m/z：針對C 15H 17FNO 4 +計算之[MH] +：294.1，實驗值：293.9。 N-[7-氟-3-(2-羥基乙氧基)-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基]乙醯胺( 5-44)：
在0℃下，向 N-[7-氟-8-甲基-4-側氧基-3-(2-側氧基乙氧基)四氫萘-5-基]乙醯胺( 5-43)（42 g，85.9 mmol，60%的純度，1.0當量）於THF (850 mL)及H 2O (425 mL)中之溶液中分批加入NaBH 4（975 mg，25.8 mmol，0.30當量），將混合物在0℃下攪拌10 min，且用冷水(2.0 L)淬熄。（如上所述設置了三個額外的反應並且將所有四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物用二氯甲烷(3 × 1.0 L)萃取，將有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，且將殘餘物藉由矽膠層析法（石油醚/乙酸乙酯＝1/1-1/3）純化，得到 N-[7-氟-3-(2-羥基乙氧基)-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基]乙醯胺( 5-44)（70 g，產率係61%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ = 11.96 (br s, 1 H), 8.45 (d, J= 12.7 Hz, 1 H), 4.06 (dd, J= 4.6, 12.0 Hz, 1 H), 4.01 - 3.62 (m, 4 H), 3.11 (td, J= 4.6, 17.6 Hz, 1 H), 3.03 - 2.79 (m, 2 H), 2.45 - 2.36 (m, 1 H), 2.24 (s, 3H), 2.15 (d, J= 1.5 Hz, 4 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ = -100.9。LCMS (ESI+) m/z：針對C 15H 19FNO 4 +計算之[MH] +：296.1，實驗值：296.1。 8-胺基-6-氟-2-(2-羥基乙氧基)-5-甲基-四氫萘-1-酮( 5-45)：
在氬氣下向 N-[7-氟-3-(2-羥基乙氧基)-8-甲基-4-側氧基-四氫萘-5-基]乙醯胺( 5-44)（21.0 g，71.0 mmol，1.0當量）於甲醇(400 mL)中之溶液中加入HCl（2 N，630 mL，18當量），將混合物在15℃下攪拌18h，且藉由添加飽和NaHCO 3調節至pH = 7~ 8。（如上所述設置了三個額外的反應並且將所有四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物用乙酸乙酯(3 ×2.0 L)萃取，將有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物用甲基三級丁酯/二氯甲烷（1:2，300 mL）一起研製並過濾，得到8-胺基-6-氟-2-(2-羥基乙氧基)-5-甲基-四氫萘-1-酮( 5-45)（42 g，產率係81%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ = 6.30 (d, J= 12.3 Hz, 1 H), 4.06 (dd, J= 4.4, 11.2 Hz, 1 H), 3.83 - 3.67 (m, 4 H), 3.04 (td, J= 4.9, 17.5 Hz, 1 H), 2.85 - 2.73 (m, 1 H), 2.40 - 2.30 (m, 1 H), 2.09 - 1.93 (m, 4 H)。 19F NMR (376 MHz, CD 3OD) δ = -108.7。LCMS (ESI+) m/z：針對C 13H 17FNO 3 +計算之[MH] +：254.1，實驗值：254.1。 (9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-46)：
在120℃下在氬氣下，向8-胺基-6-氟-2-(2-羥基乙氧基)-5-甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮 (5-45)（10.5 g，41.4 mmol，1.0當量）及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1 H-哌喃并[3,4- f]-吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮 (1-13)（12.0 g，45.6 mmol，1.1當量）於甲苯(525 mL)中之混合物中加入鄰甲酚（31.5 mL，303 mmol，7.3當量）及吡啶-1-鎓-4-甲基苯磺酸鹽（1.56 g，6.23 mmol，0.15當量），且將混合物在120℃下攪拌13 h。（如上所述設置三個額外的反應，並且將四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以13%的乙酸乙酯中之甲醇洗提的矽膠管柱層析法純化，得到(9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-46)（34.2 g，產率係43%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.58 (dd, J =10.8, 1.91 Hz, 1 H), 7.23 (d, J =6.8 Hz, 1 H), 6.49 (s, 1 H), 5.40 (s, 2 H), 4.95 - 5.24 (m, 2 H), 4.88 (dt, J =8.4, 4.4 Hz, 1 H), 4.69 - 4.81 (m, 1 H), 3.78 - 3.91 (m, 1 H), 3.56 - 3.76 (m, 3 H), 3.10 (d, J =16.4 Hz, 1 H), 2.77 - 2.92 (m, 1 H), 2.33 - 2.45 (m, 1 H), 2.21 (s, 3 H), 1.83 - 2.04 (m, 3 H), 0.77 - 1.00 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.57。LCMS (ESI+) m/z：針對C 26H 26FN 2O 6 +計算之[M+H] +：481.2，實驗值：481.0。 (1R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-47)及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-48)：
將(9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-46)（31.0 g，64.3 mmol，1.0當量）藉由掌性SFC（儀器：Waters SFC350製備型SFC；管柱：DAICEL CHIRALCEL OD (250 mm*50 mm, 10um)；流動相：A用於CO 2且B用於MeOH；梯度：B%=60%等度洗提模式：流速：200 g/min；波長：220 nm；管柱溫度：40攝氏度；系統背壓：100巴）分離，得到(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-47)（13.5 g，產率係43%）（化合物 5-47可以係所示者之相對鏡像異構物）及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-48)（10.0 g，產率係32%）（化合物 5-48可以係所示者之相對鏡像異構物）。備註：立體化學係任意指派的。
5-47之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.64 (d, J =10.88 Hz, 1 H), 7.25 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.13 - 5.52 (m, 4 H), 4.95 (br dd, J =8.25, 3.75 Hz, 1 H), 4.74 (br t, J =5.00 Hz, 1 H), 3.84 (dt, J =9.72, 4.96 Hz, 1 H), 3.59 - 3.76 (m, 3 H), 3.10 - 3.21 (m, 1 H), 2.84 - 2.99 (m, 1 H), 2.23 - 2.46 (m, 4 H), 2.04 (m, 1 H), 1.87 (m, 2 H), 0.88 (t, J =7.32 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.59。LCMS (ESI+) m/z：針對C 26H 26FN 2O 6 +計算之[M+H] +：481.2，實驗值：481.0。掌性SFC：RT = 1.48 min。
5-48之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.74 (d, J =10.97 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 5.31 - 5.46 (m, 4 H), 5.03 (dd, J =8.11, 3.70 Hz, 1 H), 4.74 (t, J =5.36 Hz, 1 H), 3.81 - 3.89 (m, 1 H), 3.59 - 3.75 (m, 3 H), 3.21 (dt, J =17.02, 5.38 Hz, 1 H), 2.94 - 3.07 (m, 1 H), 2.31 - 2.45 (m, 4 H), 2.08 (m, 1 H), 1.88 (dt, J =13.23, 6.62 Hz, 2 H), 0.89 (t, J =7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.53。LCMS (ESI+) m/z：針對C 26H 26FN 2O 6 +計算之[M+H] +：481.2，實驗值：481.0。掌性SFC：RT = 1.61 min。 實例6 (1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-34)及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-35)之合成（ 圖 17）
Figure 02_image182
2-(烯丙氧基)-8-胺基-6-氟-5-甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 6-49)：
在0℃下在氬氣下，向 N-(7-(烯丙氧基)-3-氟-4-甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 5-42)（600 mg，2.06 mmol，1.0當量）於甲醇(6.0 mL)中之混合物中加入HCl/甲醇（6.0 mL，4M，11.65當量），將混合物在25℃下攪拌2h，冷卻至0℃且藉由添加飽和NaHCO 3將pH調節至8。將其用二氯甲烷(3 × 40 mL)洗滌，將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以10%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠管柱層析法純化，得到2-(烯丙氧基)-8-胺基-6-氟-5-甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 6-49)（415 mg，產率係81%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 6.24 - 6.68 (m, 2 H), 6.20 (d, J =11.62 Hz, 1 H), 5.91 - 6.03 (m, 1 H), 5.33 (dq, J =17.24, 1.63 Hz, 1 H), 5.20 (dq, J =10.38, 1.35 Hz, 1 H), 4.36 (m, 1 H), 4.17 (m, 1 H), 3.97 (dd, J =10.15, 4.16 Hz, 1 H), 3.01 (dt, J =17.45, 5.33 Hz, 1 H), 2.75 (m, 1 H), 2.27 (dq, J =13.17, 5.02 Hz, 1 H), 2.09 - 2.19 (m, 1 H), 2.04 (d, J =1.71 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ ppm -106.28。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 17FNO 2 +計算之[MH] +：250.1，實驗值：250.1。 (9S)-1-(烯丙氧基)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 6-50)：
在120℃下在氬氣下，向2-(烯丙氧基)-8-胺基-6-氟-5-甲基-3,4 -二氫萘-1(2 H)-酮( 6-49)（200 mg，0.802 mmol，1.0當量）及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1 H-哌喃并[3,4- f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮( 1-13)（232 mg，0.883 mmol，1.1當量）於甲苯(10 mL)中之混合物中加入鄰甲酚（0.609 mL，5.86 mmol，7.3當量）及吡啶-1-鎓-4-甲基苯磺酸鹽（30.2 mg，0.120 mmol，0.15當量），將混合物在120℃下攪拌32 h，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以55%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠管柱層析法純化，得到(9 S)-1-(烯丙氧基)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 6-50)（100 mg，產率係26%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7.58 - 7.67 (m, 2 H), 6.03 - 6.16 (m, 1 H), 5.74 (dd, J =16.26, 1.83 Hz, 1 H), 5.39 - 5.52 (m, 2 H), 5.21 - 5.36 (m, 3 H), 4.94 (m, 1 H), 4.38 - 4.47 (m, 1 H), 4.26 (m, 1 H), 3.87 (d, J =19.32 Hz, 1 H), 3.23 - 3.36 (m, 1 H), 2.99 (br t, J =13.02 Hz, 1 H), 2.45 - 2.57 (m, 1 H), 2.40 (br s, 3 H) 2.11 - 2.25 (m, 1 H), 1.82 - 1.98 (m, 2 H), 1.04 (td, J =7.37, 2.87 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ ppm -110.35。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 26FN 2O 5 +計算之[MH] +：477.2，實驗值：477.2。 (9S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-33)：
在25℃下在氬氣下，向(9 S)-1-(烯丙氧基)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 6-50)（300 mg，0.63 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(15 mL)中之混合物中加入ZnCl 2（110 mg，0.82 mmol，1.3當量），在0.25 h後加入Pd(PPh 3) 4（58.0 mg，0.157 mmol，0.25當量），且在另一0.25 h後加入Bu 3SnH（3.33 mL，12.6 mmol，20當量），並且將混合物在50℃下攪拌1.5 h。將其在減壓下濃縮，並且將殘餘物藉由以5%的乙酸乙酯中之甲醇洗提的矽膠管柱層析法純化，得到殘餘物，該殘餘物藉由製備型HPLC進一步純化得到(9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-33)（90.0 mg，產率係32%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.72 (d, J =10.97 Hz, 1 H), 7.30 (d, J =2.27 Hz, 1 H), 6.50 (d, J =0.72 Hz, 1 H), 5.98 (dd, J =5.90, 2.92 Hz, 1 H), 5.36 - 5.46 (m, 3 H), 5.23 - 5.32 (m, 1 H), 5.14 (dt, J =9.60, 4.86 Hz, 1 H), 3.23 (dt, J =16.90, 4.60 Hz, 2 H), 2.96 - 3.06 (m, 1 H), 2.35 (s, 3 H), 1.94 - 2.06 (m, 1 H), 1.80 - 1.93 (m, 2 H), 0.88 (td, J =7.30, 1.49 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.78。LCMS (ESI+) m/z：針對C 24H 22FN 2O 5 +計算之[MH] +：437.2，實驗值：437.0。 製備型HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H2O；B：MeOH 管柱：Phenomenex Luna 80*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     45 8.0     70 8.1     70 8.2     100 10.2    100 10.3    45 11.5    45 (1R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-34)及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-35)：
將(9S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-33)（90.0 mg，0.206 mmol，1.0當量）藉由掌性SFC（儀器：Waters SFC80製備型SFC；管柱：DAICEL CHIRALCEL OD (250 mm*30 mm, 10um)；流動相：A用於CO 2且B用於EtOH；梯度：B%=55%等度洗提模式：流速：60 g/min；波長：220 nm；管柱溫度：40℃；系統背壓：100巴）分離，得到(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-34)（26.1 mg，產率係29%）（化合物 3-34可以係所示者之相對鏡像異構物）及(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 3-35)（25.1 mg，產率係28%）（化合物 3-35可以係所示者之相反鏡像異構物）。備註：兩種產物之立體化學係任意指派的。
3-34之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.73 (d, J =10.97 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.98 (d, J =5.84 Hz, 1 H), 5.37 - 5.47 (m, 3 H), 5.26 - 5.35 (m, 1 H), 5.10 - 5.20 (m, 1 H), 3.20 - 3.30 (m, 2 H), 2.97 - 3.07 (m, 1 H), 2.35 (s, 3 H), 1.95 - 2.05 (m, 1 H), 1.78 - 1.94 (m, 2 H), 0.88 (t, J =7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.78。LCMS (ESI+) m/z：針對C 24H 22FN 2O 5 +計算之[MH] +：437.2，實驗值：437.0。掌性SFC：RT = 1.43 min。
3-35之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.73 (d, J =11.09 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.97 (d, J =5.84 Hz, 1 H), 5.34 - 5.48 (m, 3 H), 5.21 - 5.32 (m, 1 H), 5.09 - 5.20 (m, 1 H), 3.20 - 3.24 (m, 2 H), 2.96 - 3.08 (m, 1 H), 2.35 (s, 3 H), 1.99 (d, J =9.54 Hz, 1 H), 1.80 - 1.93 (m, 2 H), 0.89 (t, J =7.09 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.80。LCMS (ESI+) m/z：針對C 24H 22FN 2O 5 +計算之[MH] +：437.2，實驗值：437.0。掌性SFC：RT = 1.54 min。 實例7 (1 S,10 S)-1-胺基-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-3,4,13,16-四氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-11,14(2 H,10 H)-二酮甲磺酸鹽( 7-59)及(1 R,10 S)-1-胺基-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-3,4,13,16-四氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-11,14(2 H,10 H)-二酮甲磺酸鹽( 7-60)（ 圖 18）
Figure 02_image184
5-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)戊-4-烯酸( 7-51)：
在N 2氣氛下，向 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺( 1- 4)（50.0 g，203 mmol，1.0當量）於THF (250 mL)及H 2O (50.0 mL)中之溶液中加入戊-4-烯酸（49.9 mL，487 mmol，2.4當量）、二異丙基乙胺（155 mL，894 mmol，4.4當量）、參鄰甲苯基磷烷（12.4 g，40.6 mmol，0.20當量）、及二乙酸鈀(II)（4.56 g，20.3 mmol，0.10當量），將混合物在75℃下攪拌24 h並冷卻至30℃。（如上所述設置三個額外的反應且將所有四種反應混合物合併）。將合併之混合物藉由矽藻土墊過濾，且將濾餅用水(2.0 L)及乙酸乙酯(3.0 L)洗滌。將混合物用HCl溶液(5N)調節至pH 4~5，用乙酸乙酯(3 × 800 mL)萃取，將有機層以Na 2SO 4乾燥，濃縮，且將殘餘物藉由以30%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到5-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)戊-4-烯酸( 7-51)（0.20 kg，產率係83%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.19 (br s, 1H), 9.99 (s, 1H), 7.51 - 7.28 (m, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.17 - 5.36 (m, 2H), 3.35 - 3.24 (m, 2H), 3.19 - 2.93 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.01 (s, 3H) 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -115.96。 5-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)戊酸( 7-52)：
在氬氣氣氛下，向5-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)戊-4-烯酸( 7-51)（50.0 g，170 mmol，90%的純度，1.0當量）於甲醇(500 mL)中之混合物中加入Pd/C（25.0 g，170 mmol，10 wt%，1.0當量）。在將混合物抽真空且用H 2填充三次後，將其在25℃下在H 2(15 psi)下攪拌12h。（如上所述設置了三個額外的反應並且將所有四種反應混合物合併）。在H 2氣氛用氬氣置換後，將其藉由矽藻土墊過濾，將濾餅用甲醇(6.00 L)洗滌，將濾液濃縮，得到5-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)戊酸( 7-52)（190 g，產率係94%），其直接用於下一步驟而不進一步純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.97 (s, 1H), 7.41 (dd, J= 1.7, 12.2 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 2.54 (br t, J= 7.4 Hz, 2H), 2.23 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.08 (d, J= 1.7 Hz, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.59 - 1.43 (m, 4H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ ppm -115.806。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 19FNO 3 +計算之[MH] +：268.1，實驗值：268.0。 N-(3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1-基)乙醯胺( 7-53)：
將5-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)戊酸( 7-52)（38.0 g，142 mmol，1.0當量）於聚磷酸(500 mL)中之混合物在110℃下攪拌3h。（如上所述設置四個額外的反應且將所有五種反應混合物合併）。將合併之反應混合物緩慢倒入攪拌冰水(10.0 L)中，用飽和NaHCO 3溶液將pH調節至7，將混合物用乙酸乙酯(3 × 1.00 L)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以無水Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，並且將殘餘物藉由以15%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-(3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1-基)乙醯胺( 7-53)（91 g，產率係64%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.83 (s, 1H), 7.19 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 2.69 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 2.58 - 2.52 (m, 2H), 2.16 (d, J= 2.0 Hz, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.74 - 1.58 (m, 4H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.49。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 17FNO 2 +計算之[MH] +：250.12，實驗值：250.0。 ( Z)- N-(3-氟-8-(羥基亞胺基)-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1-基)乙醯胺( 7-54)：
在0℃下向三級丁氧化鉀（1 M於四氫呋喃中，191 mL，2.1當量）於四氫呋喃(194 mL)、乙醇(31.4 mL)、及正丁醇(31.4 mL)中之混合物中加入 N-(2-氟-1-甲基-5-側氧基-6,7,8,9 -四氫苯并[7]輪烯-4-基)乙醯胺( 7-53)（22.7 g，90.9 mmol，1.0當量）及亞硝酸異戊酯（14.8 mL，109 mmol，1.2當量），且將混合物在20℃下攪拌3h。（如上所述設置了三個額外的反應並且將所有四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物冷卻至0℃，用0.5N鹽酸(1.00 L)淬熄，且用乙酸乙酯(3 × 300 mL)萃取，將有機層用鹽水洗滌，以硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮。將殘餘物用甲基三級丁酯(500 mL)研製，並過濾以得到( Z)- N-(3-氟-8-(羥基亞胺基)-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1-基)乙醯胺( 7-54)（80.0 g，產率係88%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.69 - 11.95 (m, 1H), 10.10 (s, 1H), 7.28 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 2.68 (br t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.57 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.17 (d, J= 1.8 Hz, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.78 – 1.75 (m, 2H) 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -107.85, -109.67, -110.39。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 16FN 2O 3 +計算之[MH] +：279.1，實驗值：279.1。 N-(8-胺基-3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1-基)乙醯胺鹽酸鹽( 7-55)：
在N 2氣氛下，向 N-[(5 E)-2-氟-5-羥基亞胺基-1-甲基-6,7,8,9-四氫苯并[7]輪烯-4-基)乙醯胺( 7-54)（20.0 g，75.7 mmol，1.0當量）於甲醇(240 mL)中之混合物中加入鹽酸（12M，18.9 mL，3.0當量）及Pd/C（4.00 g，75.7 mmol，10 wt%，1.0當量），將混合物抽真空並用H 2填充三次，並且在20℃下在H 2(15 psi)下攪拌3h。（如上所述設置了三個額外的反應並且將所有四種反應混合物合併）。在將H 2氣氛用氬氣置換後，將反應混合物合併，用甲醇(800 mL)稀釋，藉由矽藻土墊過濾，將濾餅用甲醇(10.0 L)洗滌，將合併之濾液在減壓下濃縮至乾燥。將殘餘物用甲基三級丁醚(800 mL)研製，並過濾，得到 N-(8-胺基-3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1-基)乙醯胺鹽酸鹽( 7-55)（75 g，產率係98%）。 1H NMR顯示出此材料含有約25%的de-Ac副產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.34 (s, 1H), 8.75 - 8.40 (m, 3H), 7.31 - 7.20 (m, 1H), 4.44 - 4.21 (m, 1H), 2.98 (dt, J= 6.1, 7.9 Hz, 1H), 2.85 - 2.75 (m, 1H), 2.47 (br s, 1H), 2.27 - 2.11 (m, 3H), 2.10 - 1.94 (m, 3H), 1.94 - 1.50 (m, 3H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -107.88, -110.63。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 16FN 2O 3 +計算之[MH] +：265.1，實驗值：265.0。 N, N'-(3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1,8-二基)二乙醯胺( 7-56)：
向 N-(5-胺基-2-氟-1-甲基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-4-基)乙醯胺鹽酸鹽( 7-55)（25.0 g，87.2 mmol，1.0當量）於二氯甲烷（225 mL）中之懸浮液中加入三乙胺（36.4 mL，262 mmol，3.0當量）及乙酸酐（9.80 mL，105 mmol，1.2當量），且將混合物在20℃下攪拌3h。（如上所述設置三個額外的反應且將所有四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物用飽和NH 4Cl溶液(2.00 L)萃取，將水相用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取，將合併之有機層以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以30%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N,N'-(3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1,8-二基)二乙醯胺( 7-56)（54.0 g，產率係53%）及 N-(4-胺基-2-氟-1-甲基-6, 7, 8, 9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-5-基)乙醯胺( 7-57)（9.00 g，產率係10%）。
7-56之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.61 (br s, 1H), 8.69 (br d, J= 4.5 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 4.56 - 4.39 (m, 1H), 2.93 (br dd, J= 7.0, 12.3 Hz, 1H), 2.43 (br dd, J= 10.3, 14.7 Hz, 1H), 2.14 (d, J= 1.2 Hz, 3H), 2.01 (s, 4H), 1.93 (s, 4H), 1.81 - 1.61 (m, 2H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.86。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 20FN 2O 3 +計算之[M+H] +：307.1，實驗值：307.1。
7-57之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.25 (br d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.45 - 6.33 (m, 3H), 4.57 (td, J= 6.7, 11.5 Hz, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.81 - 2.70 (m, 1H), 2.07 - 1.97 (m, 4H), 1.95 - 1.88 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.70 - 1.59 (m, 1H), 1.57 - 1.42 (m, 1H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO) δ ppm -110.23。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 18FN 2O 3 +計算之[M+H] +：265.1，實驗值：265.1。 N-(4-胺基-2-氟-1-甲基-5-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-6-基)乙醯胺( 7-57)：
向 N,N'-(3-氟-4-甲基-9-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-1,8-二基)二乙醯胺( 7-56)（18.0 g，61.6 mmol，1.0當量）於甲醇(180 mL)中之混合物中加入鹽酸/甲醇（4M，180 mL，11.7當量），且將混合物在25℃下攪拌2h。（如上所述設置三個額外的反應且將所有四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物在減壓下濃縮，且將殘餘物用飽和NaHCO 3溶液(2.00 L)及乙酸乙酯/甲醇（10/1，3 × 800 mL）萃取。將合併之有機相用鹽水洗滌，以無水Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，並且將殘餘物藉由以30%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-(4-胺基-2-氟-1-甲基-6, 7, 8, 9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-5-基)乙醯胺( 7-57)（25 g，產率係54%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.25 (br d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.45 - 6.33 (m, 3H), 4.57 (td, J= 6.7, 11.5 Hz, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.81 - 2.70 (m, 1H), 2.07 - 1.97 (m, 4H), 1.95 - 1.88 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.70 - 1.59 (m, 1H), 1.57 - 1.42 (m, 1H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ ppm -111.22。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 18FN 2O 3 +計算之[M+H] +：265.1，實驗值：265.1。 N-((10 S)-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-11,14-二側氧基-2,3,4,10,11,13,14,16-八氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 7-58)：
向 N-(4-胺基-2-氟-1-甲基-5-側氧基-6,7,8,9-四氫-5 H-苯并[7]輪烯-6-基)乙醯胺( 7-57)（230 mg，0.870 mmol，1.0當量）及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1 H-哌喃并[3,4- f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮( 1-13)（458 mg，1.74 mmol，2.0當量）於甲苯(23 mL)中之混合物中加入吡啶-1-鎓-4-甲基苯磺酸鹽（87.4 mg，0.348 mmol，0.4當量），並且將混合物在120℃下在密封管中攪拌16 h。將反應混合物在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以50%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-((10 S)-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-11,14-二側氧基-2,3,4,10,11,13,14,16-八氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚-
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 7-58)（240 mg，產率係54%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ = 8.71 (br d, J= 6.2 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.52 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 5.62 - 5.50 (m, 1H), 5.46 - 5.31 (m, 3H), 5.22 - 5.11 (m, 1H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 3.17 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 1.97 (s, 3H), 1.84 - 1.60 (m, 2H), 0.87 (q, J= 7.4 Hz, 3H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 27FN 3O 5 +計算之[MH] +：492.2，實驗值：492.1。 (1S,10 S)-1-胺基-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-3,4,13,16-四氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-11,14(2 H,10 H)-二酮甲磺酸鹽( 7-59)及(1 R,10 S)-1-胺基-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-3,4,13,16-四氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-11,14(2 H,10 H)-二酮甲磺酸鹽( 7-60)：
在氬氣下，將 N-((10 S)-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-11,14-二側氧基-2,3,4,10,11,14,16-八氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 7-58)（160 mg，0.101 mmol，1.0當量）於2-甲氧基乙醇(0.8 mL)中之混合物加入甲基環己烷(0.8 mL)、H 2O (0.75 mL)及甲磺酸(0.25 mL)中，將混合物在100℃下攪拌8h，濃縮，並且將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到(1 S,10 S)-1-胺基-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-3,4,13,16-四氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-11,14(2 H,10 H)-二酮甲磺酸鹽( 7-59)（5.5 mg，產率係2.4%）（化合物 7-59可以係所示者之相對鏡像異構物）及(1 R,10 S)-1-胺基-10-乙基-6-氟-10-羥基-5-甲基-3,4,13,16-四氫-1 H-環庚[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-11,14(2 H,10 H)-二酮甲磺酸鹽( 7-60)（6.4 mg，產率係3.6%）（化合物 7-60可以係所示者之相對鏡像異構物）。備註：立體化學係任意指派的。 製備型HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H 2O；B：MeOH 管柱：Phenomenex Luna 80*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     40 6.0     75 6.1     75 8.2     100 10.2    100 10.3    40 11.5    40
7-59之光譜： 1H NMR (400 MHz, D 2O) δ ppm 7.38 - 7.49 (m, 2 H), 5.52 - 5.62 (m, 1 H), 5.35 - 5.46 (m, 3 H), 5.16 (t, J= 4.4 Hz, 1 H), 3.40 - 3.51 (m, 1 H), 2.99 - 3.13 (m, 1 H), 2.77 (s, 6 H), 2.48 - 2.57 (m, 2 H), 2.38 (d, J= 1.6 Hz, 3 H), 2.22 - 2.33 (m, 1 H), 2.06 - 2.20 (m, 1 H), 1.94 (q, J= 7.5 Hz, 2 H), 0.90 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, D 2O) δ ppm -111.53。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 25FN 3O 4 +計算之[MH] +：450.2，實驗值：450.0。
7-60之光譜： 1H NMR (400 MHz, D 2O) δ ppm 7.40 - 7.51 (m, 2 H), 5.44 - 5.60 (m, 2 H), 5.33 - 5.43 (m, 2 H), 5.09 - 5.14 (m, 1 H), 3.37 - 3.48 (m, 1 H), 3.01 - 3.14 (m, 1 H), 2.77 (s, 3 H), 2.43 - 2.54 (m, 1 H), 2.39 (s, 3 H), 2.27 - 2.35 (m, 1 H), 2.06 - 2.23 (m, 2 H), 1.95 (q, J= 7.6 Hz, 2 H), 0.92 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, D 2O) δ ppm -109.21。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 25FN 3O 4 +計算之[MH] +：450.2，實驗值：450.0。 實例8 (1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
基[1,2- b]喹啉-10,13(1H,9H)-二酮鹽酸鹽( 8-71)及(1R,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]-喹啉-10,13(1H,9H)-二酮鹽酸鹽( 8-72)（ 圖 19）
Figure 02_image186
4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)-2-甲基丁-3-烯酸( 8-61)：
在氮氣下，向 N-(3-溴-5-氟-4-甲基-苯基)乙醯胺 (1-4)（10.0 g，40.6 mmol，1.0當量）及2-甲基丁基-3-烯酸（13.0 g，130 mmol，3.2當量）於四氫呋喃(40 mL)及水(10 mL)中之混合物中加入 N-乙基- N, N-二異丙基胺（38.2 mL，219 mmol，5.4當量）、參鄰甲苯基磷烷（2.47 g，8.13 mmol，0.2當量）以及二乙氧基鈀（912 mg，4.06 mmol，0.1當量），並將混合物在75℃下攪拌5 h，用水(50 mL)淬熄，並且藉由在0℃下加入3N鹽酸將pH調節至約3。將其藉由矽藻土墊過濾，且將濾液用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取，將有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，且將殘餘物藉由以50%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)-2-甲基丁-3-烯酸( 8-61)（6.00 g，產率係56%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 12.38 (s, 1 H), 10.02 (d, J= 4.0 Hz, 1 H), 7.46 - 7.52 (m, 1 H), 6.99 - 7.38 (m, 1 H), 6.65 - 6.69 (m, 1 H), 6.17 (dd, J= 15.6, 8.0 Hz, 1 H), 3.49 (d, J= 7.2 Hz, 1 H), 2.11 (dd, J= 13.2, 1.6 Hz, 3 H), 2.02 (d, J= 4.8 Hz, 3 H), 1.24 - 1.88 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -115.68。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 17FNO 3 +計算之[MH] +：266.1，實驗值：266.1。 4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)-2-甲基丁酸( 8-62)：
在氮氣下，向4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)-2-甲基丁-3-烯酸( 1)（5.00 g，18.8 mmol，1.0當量）於甲醇(20 mL)中之混合物中加入Pd/C (10 wt%)（2.40 g，0.12當量），將懸浮液在真空下除氣，且用H 2吹掃三次，並且在25℃下在H 2(15 psi)下攪拌10h。在H 2氣氛用氬氣置換之後，將其藉由矽藻土墊過濾並且將濾餅用甲醇(300 mL)洗滌。將合併之濾液在減壓下濃縮，得到4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)-2-甲基丁酸( 8-62)（4.4 g，產率係87%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 10.0 (s, 1 H), 7.42 (dd, J= 12.4, 1.6 Hz, 1 H), 7.04 (s, 1 H), 2.52 - 2.58 (m, 2 H), 2.24 (t, J= 6.8 Hz, 2 H), 2.08 (d, J= 1.6 Hz, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.40 - 1.65 (m, 4 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -125.77。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 19FNO 3 +計算之[MH] +：268.1，實驗值：268.1。 N-(7-氟-3,8-二甲基-4-側氧基四氫萘-5-基)乙醯胺( 8-63)：
在0℃下，向4-(5-乙醯胺基-3-氟-2-甲基苯基)-2-甲基丁酸( 8-62)（5.00 g，18.7 mmol，1.0當量）於三氟乙酸(10 mL)中之混合物中加入三氟乙酸酐（5.20 mL，37.4 mmol，2.0當量），將混合物在0℃下攪拌2 h，用冰水(100 mL)淬熄，且藉由在0℃下加入25%的水性NaOH將pH調節至約7。將其用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取，將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，並且將殘餘物藉由以8%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-(7-氟-3,8-二甲基-4-側氧基四氫萘-5-基)乙醯胺( 8-63)（3.50 g，產率係75%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 12.13 (s, 1 H), 8.28 (d, J= 13.2 Hz, 1 H), 2.93 - 3.04 (m, 1 H), 2.81 - 2.92 (m, 1 H), 2.63 - 2.75 (m, 1 H), 2.07 - 2.18 (m, 7 H), 1.74 (qd, J= 12.0, 4.8 Hz, 1 H), 1.15 (d, J= 6.4 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -104.64。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 17FNO 2 +計算之[MH] +：250.1，實驗值：250.1。 1-(8-乙醯胺基-6-氟-2,5-二甲基-1-側氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)肼-1,2-二羧酸二-三級丁酯( 8-64)：
在0℃下在氮氣下，向 N-(7-氟-3,8-二甲基-4-側氧基四氫萘-5-基)乙醯胺( 8-63)（35.1 g，140 mmol，1.0當量）於甲苯(700 mL)中之混合物中逐滴加入雙(三甲基矽基)醯胺鈉（309 mL，1 M，2.2當量），將混合物冷卻至-40℃，逐滴加入二氮烯-1,2-二羧酸二-三級丁酯（42.1 g，183 mmol，1.3當量）於甲苯(350 mL)中之溶液。將反應混合物升溫至25℃，在25℃下攪拌4h，冷卻至0℃，用水(1 L)稀釋且用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以20%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到1-(8-乙醯胺基-6-氟-2,5-二甲基-1-側氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)肼-1,2-二羧酸二-三級丁酯( 8-64)（41.0 g，產率係60%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 11.61 - 11.84 (m, 1 H), 8.26 (d, J= 12.8 Hz, 1 H), 7.96 - 8.15 (m, 1 H), 2.96 - 3.16 (m, 2 H), 2.68 - 2.84 (m, 1 H), 2.12 (s, 4 H), 2.08 (s, 3 H), 1.35 - 1.46 (m, 21 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -105.29。LCMS (ESI+) m/z：針對C 24H 35FN 3O 6 +計算之[MH] +：480.2，實驗值：502 (MS+Na)。 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-7-(2-(丙-2-亞基)肼基)-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-66)：
在25℃下向1-(8-乙醯胺基-6-氟-2,5-二甲基-1-側氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)肼-1,2-二羧酸二-三級丁酯( 8-64)（41.0 g，85.5 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(820 mL)中之溶液中加入三氟乙酸(410 mL)，將混合物在25℃下攪拌1h，加入丙酮(480 mL)且將混合物在25℃下攪拌另一0.5h。將其濃縮，得到 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-7-(2-(丙-2-亞基)肼基)-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-66)（18.1 g，產率係66%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 11.90 (s, 1 H), 8.31 (d, J= 12.8 Hz, 1 H), 3.05 - 3.14 (m, 1 H), 2.90 - 3.02 (m, 1 H), 2.11 - 2.19 (m, 7 H), 2.05 - 2.08 (m, 2 H), 1.98 (d, J= 2.0 Hz, 6 H), 1.34 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -75.04。LCMS (ESI+) m/z：針對C 17H 23FN 3O 2 +計算之[MH] +：320.1，實驗值：320.1。 N-(7-胺基-3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-67)：
向 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-7-(2-(丙-2-亞基)肼基)-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-66)（15.1 g，47.3 mmol，1.0當量）於乙酸(302 mL)中之混合物中分批加入鋅粉末（40.8 g，624 mmol，13.2當量），將混合物在20℃下攪拌2h，過濾，且將濾液在減壓下濃縮，得到 N-(7-胺基-3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-67)（23.8 g，粗製品），其直接用於下一步驟而不進一步純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 11.56 (s, 1 H), 8.26 - 8.30 (m, 1 H), 3.01 - 3.09 (m, 2 H), 2.12 - 2.19 (m, 10 H), 1.43 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -73.57。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 18FN 2O 2 +計算之[MH] +：265.1，實驗值：265.1。 N,N'-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1,7-二基)二乙醯胺( 8-68)：
向 N-(7-胺基-3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-67)（23.8 g，73.3 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(414 mL)中之混合物中加入乙酸酐（8.28 mL，88.0 mmol，1.2當量）及三乙胺（30.6 mL，220 mmol，3.0當量），將混合物在25℃下攪拌12h，用水(500 mL)淬熄，且用二氯甲烷(3 × 200 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以70%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N, N'-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1,7-二基)二乙醯胺( 8-68)（7.5 g，產率係51%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 11.81 (s, 1 H), 8.20 - 8.37 (m, 2 H), 2.94 - 3.03 (m, 1 H), 2.77 - 2.88 (m, 1 H), 2.65 (m, 1 H), 2.06 - 2.18 (m, 6 H), 1.85 (m, 1 H), 1.79 (s, 3 H), 1.32 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -105.03。 N-(8-胺基-6-氟-2,5-二甲基-1-側氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)乙醯胺( 8-69)：
向 N, N'-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1,7-二基)二乙醯胺( 8-68)（7.50 g，24.4 mmol，1.0當量）於甲醇(105 mL)中之混合物中加入HCl/MeOH（105 mL，4M），將混合物在25℃下攪拌2h，在減壓下濃縮，將殘餘物用二氯甲烷(300 mL)稀釋並用飽和水性NaHCO 3(2 × 200 mL)萃取。將有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到 N-(8-胺基-6-氟-2,5-二甲基-1-側氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)乙醯胺( 8-69)（5.50 g，產率係89%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.91 (s, 1 H), 7.39 (s, 2 H), 6.36 (d, J= 12.4 Hz, 1 H), 2.78 - 2.89 (m, 1 H), 2.67 - 2.75 (m, 2 H), 1.97 (d, J= 1.20 Hz, 3 H), 1.83 - 1.88 (m, 1 H), 1.80 (s, 3 H), 1.27 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -108.38。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 18FN 2O 2 +計算之[MH] +：265.1，實驗值：265.1。 N-((9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 8-70)：
在氬氣下在120℃下，向 N-(8-胺基-6-氟-2,5-二甲基-1-側氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)乙醯胺（500 mg，1.89 mmol，1.0當量）( 8-69)及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-哌喃并[3,4- f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮( 1-13)（547 mg，2.08 mmol，1.1當量）於甲苯(25 mL)中之混合物中加入吡啶4-甲基苯磺酸（71.3 mg，0.283 mmol，0.15當量）及鄰甲酚（1.44 mg，13.8 mmol，7.3當量），並且將混合物在130℃下用Dean-Stark分水器攪拌13 h以去除所形成的水。將其在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以7%的二氯甲烷中之甲醇洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-((9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 8-70)（362 mg，產率係39%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.78 (d, J= 11.2 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.53 (d, J= 10.0 Hz, 1 H), 5.25 - 5.54 (m, 4 H), 4.81 - 4.90 (m, 1 H), 3.24 - 3.29 (m, 1 H), 2.86 - 3.11 (m, 3 H), 2.39 (s, 3 H), 1.95 (d, J= 3.6 Hz, 3 H), 1.84 - 1.89 (m, 2 H), 1.50 (d, J= 4.8 Hz, 3 H), 0.87 (d, J= 5.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.94。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 27FN 3O 5 +計算之[MH] +：492.1，實驗值：492.2 (1S,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 8-71)及(1 R,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 8-72)：
將 N-((9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10, 12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)乙醯胺( 8-70)（600 mg，1.22 mmol，1.0當量）於二
Figure 02_image162
烷(6 mL)及濃縮的鹽酸（6 mL，12M）中之混合物在100℃在密封管中在氬氣下攪拌24h。將其在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到(1 S,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 8-71)（61.0 mg，產率係10%）及(1 R,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 8-72)（85.0 mg，產率係14%）。備註：立體化學係任意指派的。 製備型HPLC條件：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：HCl/H2O=0.040% v/v；B：ACN 管柱：Phenomenex Luna 80*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     5 8.0     30 8.1     30 8.2     100 10.2    100 10.3    5 11.5    5
8-71之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.97 (s, 3 H), 7.89 (d, J= 10.8 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 5.73 - 5.81 (m, 1 H), 5.56 - 5.65 (m, 1 H), 5.41 - 5.49 (m, 2 H), 3.22 (d, J= 4.4 Hz, 2 H), 2.34 - 2.44 (m, 5 H), 1.82 - 1.94 (m, 5 H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.24。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 25FN 3O 4 +計算之[MH] +：450.1，實驗值：450.1
8-72之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.98 (s, 3 H), 7.89 (d, J= 10.8 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 5.71 - 5.79 (m, 1 H), 5.57 - 5.64 (m, 1 H), 5.46 (s, 2 H), 3.18 - 3.26 (m, 2 H), 2.36 - 2.44 (m, 5 H), 1.81 - 1.94 (m, 5 H), 0.87 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.22。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 25FN 3O 4 +計算之[MH] +：450.1，實驗值：450.1 實例9 N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-2-羥基乙醯胺( 9-74)（ 圖 20）
Figure 02_image190
2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙酸乙酯( 9-73)：
將(1 S,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 8-71)（40.0 mg，0.089 mmol，1.0當量）、 N-乙基- N-異丙基丙-2-胺（46.5 L，0.266 mmol，3.0當量）於 N, N-二甲基甲醯胺(2 mL)中之混合物在25℃下攪拌0.5h，冷卻至0℃，歷經5 min逐滴加入2-氯-2-側氧基乙酸乙酯（14.6 mg，11.5 L，0.106 mmol，1.2當量）。將其升溫至25℃並在25℃下攪拌3h，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以氯仿/甲醇/水=7/3/1洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙酸乙酯( 9-73)（30.0 mg，產率係61%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.84 (s, 1 H), 7.78 (d, J= 10.85 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 5.35 - 5.49 (m, 3 H), 5.13 (d, J= 19.07 Hz, 1 H), 4.66 (d, J= 14.66 Hz, 1 H), 4.50 (d, J= 14.66 Hz, 1 H), 2.93 - 3.09 (m, 3 H), 2.39 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.83 - 1.95 (m, 3 H), 1.55 (s, 3 H), 0.88 (t, J= 7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.87。LCMS (ESI+) m/z：針對C 29H 29FN 3O 7 +計算之[MH] +：550.2，實驗值：550.2。 N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-2-羥基乙醯胺( 9-74)：
在氬氣下在25℃下向2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙酸乙酯( 9-73)（30.0 mg，0.055 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(1 mL)中之混合物中加入1N水性NaOH（0.235 mL，4.3當量）。將混合物在25℃下攪拌2h，用1N水性鹽酸（0.273 mL，5.0當量）淬熄，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以氯仿/甲醇/水=7/3/1)洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-2-羥基乙醯胺( 9-74)（13.5 mg，產率係50%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.31 (s, 1 H), 7.77 (d, J= 10.85 Hz, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.34 - 5.54 (m, 4 H), 4.91 (d, J= 19.07 Hz, 1 H), 3.77 - 4.01 (m, 2 H), 3.22 - 3.31 (m, 1 H), 2.87 - 3.13 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 1.77 - 2.01 (m, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 0.87 (t, J= 7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.92。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 27FN 3O 6 +計算之[MH] +：508.2，實驗值：508.1。 實例10 N-((1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-2-羥基乙醯胺( 10-75)
Figure 02_image193
以與實例9類似之方式使用 8-72取代 8-71製作實例10 ( 10-75)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.31 (s, 1 H), 7.77 (d, J= 10.85 Hz, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.34 - 5.54 (m, 4 H), 4.91 (d, J= 19.07 Hz, 1 H), 3.77 - 4.01 (m, 2 H), 3.22 - 3.31 (m, 1 H), 2.87 - 3.13 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 1.77 - 2.01 (m, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 0.87 (t, J= 7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.88。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 27FN 3O 6 +計算之[MH] +：508.2，實驗值：508.1。 實例11 N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-4-羥基丁醯胺鹽酸鹽( 11-80)（ 圖 21）
Figure 02_image195
4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)丁酸( 11-77)：
在氬氣下，向4-羥丁酸鈉( 11-76)（2.10 g，16.6 mmol，1.0當量）及咪唑（1.70 g，25.0 mmol，1.5當量）於 N,N-二甲基甲醯胺(31.5 mL)中之混合物中加入三級丁基氯二苯基矽烷（5.49 g，19.9 mmol，1.2當量），將混合物在25℃下攪拌1h，倒入冰水(60 mL)中且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以30%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)丁酸( 11-77)（2.60 g，產率係41%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.61 - 7.63 (m, 6 H), 7.46 (dd, J= 7.2, 4.4 Hz, 4 H), 3.72 (t, J= 6.4 Hz, 2 H), 2.65 (t, J= 7.2 Hz, 2 H), 1.87 (t, J= 6.8 Hz, 2 H), 1.00 (s, 9 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 20H 25O 3Si -計算之[MH] -：341.2，實驗值：341.2。 4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)丁醯氯( 11-78)：
在氮氣下在0℃下，向4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)丁酸( 11-77)（1.50 g，4.10 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(75 mL)中之混合物中加入草醯氯（1.05 g，8.24 mmol，2.0當量）及 N,N-二甲基甲醯胺（9.02 mg，0.03當量），將混合物升溫至25℃，在25℃下攪拌2h，且在減壓下濃縮，得到4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)丁醯氯( 11-78)（1.50 g，粗製品），其直接用於下一步驟而不進行純化。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 7.63 - 7.71 (m, 6 H), 7.42 - 7.48 (m, 4 H), 3.72 (dt, J= 11.6, 6.0 Hz, 2 H), 2.96 - 3.13 (m, 1 H), 2.63 (t, J= 7.6 Hz, 1 H), 1.91 - 2.01 (m, 2 H), 1.07 (s, 9 H)。 4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)- N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基]丁醯胺( 11-79)：
向(1 S,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四羥基苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 8-71)（100 mg，0.206 mmol，1.0當量）及三甲胺（166 mg，229 mL，1.65 mmol，8.0當量）於二氯甲烷(5 mL)中之混合物中加入4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)丁醯氯( 11-78)（303 mg，0.839 mmol，2.4當量），將混合物在25℃下攪拌1 h，過濾，將濾液濃縮並且將殘餘物藉由以60%的乙酸乙酯中之二氯甲烷洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)- N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基]丁醯胺( 11-79)（30.0 mg，產率係17%）。LCMS (ESI+) m/z：針對C 45H 49FN 3O 6Si +計算之[MH] +：774.3，實驗值：774.2。 N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-4-羥基丁醯胺鹽酸鹽( 11-80)：
在25℃下在氮氣下，向4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)- N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基]丁醯胺( 11-79)（30.0 mg，0.039 mmol，1.0當量）於二
Figure 02_image162
烷(0.15 mL)中之攪拌混合物中逐滴加入HCl/二
Figure 02_image162
烷(0.5 mL, 8 M)，將混合物在25℃下攪拌1 h，過濾，且將濾餅收集。將材料用甲基三級丁醚(2 mL)在25℃下研製30 min，藉由過濾收集，且在真空下乾燥，得到 N-((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-4-羥基丁醯胺鹽酸鹽( 11-80)（10.2 mg，產率係46%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.61 (s, 1 H), 7.78 (d, J= 10.8 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 5.35 - 5.48 (m, 3 H), 4.87 (d, J= 18.8 Hz, 1 H), 3.37 (t, J= 6.4 Hz, 3 H), 3.22 - 3.32 (m, 1 H), 2.86 - 3.11 (m, 3 H), 2.39 (s, 3 H), 2.25 - 2.33 (m, 2 H), 1.79 - 1.95 (m, 3 H), 1.56 - 1.66 (m, 2 H), 1.51 (s, 3 H), 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.98。LCMS (ESI+) m/z：針對C 29H 31FN 3O 6 +計算之[MH] +：536.2，實驗值：536.2。 實例12 N-((1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3 ',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)-4-羥基丁醯胺鹽酸鹽( 12-81)
Figure 02_image198
以與實例11類似之方式使用 8-72取代 8-71製作實例12 ( 12-81)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 8.60 (s, 1 H), 7.78 (d, J = 10.8 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 5.31 - 5.50 (m, 3 H), 4.86 (d, J = 18.8 Hz, 1 H), 3.36 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 3.23 - 3.31 (m, 1 H), 2.78 - 3.15 (m, 3 H), 2.39 (s, 3 H), 2.26 - 2.34 (m, 2 H), 1.75 - 1.99 (m, 3 H), 1.60 (quin, J = 6.8 Hz, 2 H), 1.50 (s, 3 H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D6) δ ppm -111.95。LCMS (ESI+) m/z：針對C29H31FN3O6+計算之[MH]+：536.2，實驗值：536.1。 實例13 (1 S, 9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4': 6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 13-84)及(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4': 6,7]吲
Figure 02_image158
並[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 13-85)（ 圖 22）
Figure 02_image200
N-(3-氟-7-羥基-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 13-82)：
在25℃下，向 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 8-63)（1.00 g，4.01 mmol，1.0當量）及碳酸銫（261 mg，0.802 mmol，0.2當量）於二甲基亞碸(16 mL)中之混合物中加入亞磷酸三乙酯（1.33 g，8.02 mmol，1.38 mL，2.0當量），將反應混合物抽真空，且用O 2填充三次並在25℃下在O 2(15 psi)下攪拌24h。在將氧氣氣氛用氮氣置換之後，將混合物用水(80 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(2 × 40 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以15%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-(3-氟-7-羥基-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 12-82)（620 mg，產率係58%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 11.97 (s, 1 H), 8.29 (d, J= 13.08 Hz, 1 H), 5.47 (s, 1 H), 2.94 - 3.04 (m, 1 H), 2.78 - 2.88 (m, 1 H), 2.17 (s, 3 H), 2.11 (d, J= 1.59 Hz, 3 H), 1.96 - 2.09 (m, 2 H), 1.28 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -104.38。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 17FNO 3 +計算之[MH] +：266.1，實驗值：266.0。 8-胺基-6-氟-2-羥基-2,5-二甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 12-83)：
在25℃下向 N-(3-氟-7-羥基-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 12-82)（300 mg，1.13 mmol，1.0當量）於甲醇(6 mL)中之混合物中逐滴加入HCl/MeOH（6 mL，4M），將混合物在25℃下攪拌1.5h，冷卻至0℃，並且藉由在0℃下加入飽和NaHCO 3將pH調節至7。將其以二氯甲烷(3 × 10 mL)萃取，將合併之有機層以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，得到8-胺基-6-氟-2-羥基-2,5-二甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 13-83)（250 mg，產率係99%），其直接用於下一步驟中而不進一步純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.41 (br s, 2 H), 6.37 (d, J= 12.59 Hz, 1 H), 5.10 (s, 1 H), 2.81 - 2.92 (m, 1 H), 2.63 - 2.75 (m, 1 H), 1.89 - 2.01 (m, 5 H), 1.22 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -108.05。 (1S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4': 6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 13-84)及(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4': 6,7]吲
Figure 02_image158
並[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 13-85)：
在120℃下在氬氣下，向8-胺基-6-氟-2-羥基-2,5-二甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 13-83)（54.0 mg，241 umol，1.0當量）及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1 H-哌喃并[3,4- f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮( 1-13)（95.5 mg，0.362 mmol，1.5當量）於二甲苯(5.4 mL)中之混合物中加入4-甲基苯磺酸（24.9 mg，0.145 mmol，0.6當量），將混合物在120℃下在密封管中攪拌24h。將其在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以60%的石油醚中之四氫呋喃洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到殘餘物，該殘餘物藉由製備型HPLC及凍乾進一步分離，得到(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 13-84)（70.1 mg，產率係13%）（化合物 13-84可以係所示者之相對鏡像異構物）及(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-1,9-二羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 13-85)（73.3 mg，產率係13%）（化合物 13-85可以係所示者之相反鏡像異構物）。備註：立體化學係任意指派的。 製備型HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H 2O；B：CH 3OH 管柱：Phenomenex Luna 80*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     40 8.0     70 8.1     70 8.2     100 10.2    100 10.3    40 11.5    40
13-84之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.76 (d, J= 10.88 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 5.79 (br s, 1 H), 5.43 (s, 4 H), 3.25 (br d, J= 2.57 Hz, 1 H), 2.96 - 3.09 (m, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 2.24 (br dd, J= 13.08, 3.06 Hz, 1 H), 2.11 (td, J= 13.24, 5.69 Hz, 1 H), 1.87 (m, 2 H), 1.45 (s, 3 H), 0.88 (t, J= 7.34 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -112.10。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 24FN 2O 5 +計算之[MH] +：451.1，實驗值：451.1。SFC：RT = 1.338 min。
13-85之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.77 (d, J= 11.00 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.80 (br s, 1 H), 5.44 (s, 4 H), 3.25 (br s, 1 H), 2.96 - 3.10 (m, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 2.24 (br dd, J= 12.65, 3.24 Hz, 1 H), 2.12 (td, J= 13.14, 5.38 Hz, 1 H), 1.78 - 1.93 (m, 2 H), 1.44 (s, 3 H), 0.87 (t, J= 7.27 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -112.07。LCMS (ESI+) m/z：針對C 25H 24FN 2O 5 +計算之[MH] +：451.1，實驗值：451.1。SFC：RT = 1.453 min。 實例14 (1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚-
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-91) 及(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-92)（ 圖 23）
Figure 02_image202
N-(7-(烯丙氧基)-3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-86)：
在20℃下在氬氣下，向 N-(3-氟-7-羥基-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 13-82)（500 mg，1.88 mmol，1.0當量）及Ag 2O（4.37 g，18.8 mmol，10當量）於乙腈(10 mL)中之混合物中加入3-碘丙-1-烯（6.33 g，3.44 mL，37.7 mmol，20當量），且將混合物在40℃下攪拌12h並冷卻至25℃。（如上所述設置三個額外的反應，並且將四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物藉由矽藻土墊過濾，且將濾餅用二氯甲烷(200 mL)洗滌，將合併之濾液濃縮，且將殘餘物藉由以5%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-(7-(烯丙氧基)-3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-86)（1.30 g，產率係54%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 11.82 (s, 1 H), 8.28 (d, J= 13.13 Hz, 1 H), 5.70-5.83 (m, 1 H), 5.14 (m, 1 H), 5.01 (m, 1 H), 3.99 (m, 1 H), 3.79 (m, 1 H), 3.00 (m, 1 H), 2.77 - 2.88 (m, 1 H), 2.36 (dt, J= 14.07, 5.22 Hz, 1 H), 2.17 (s, 3 H), 2.11 (d, J= 1.63 Hz, 3 H), 2.03 (m, 1 H), 1.30 - 1.38 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -104.04。LCMS (ESI+) m/z：針對C 17H 21FNO 3 +計算之[MH] +：306.1，實驗值：306.1。 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-7-(2-側氧基乙氧基)-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺 (14-87)：
在-78℃下，向 N-(7-(烯丙氧基)-3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-86)（1.30 g，4.17 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(26 mL)及甲醇(13 mL)中之攪拌混合物中鼓泡臭氧超過5 min，隨後加入二甲基硫烷（648 mg，0.766 mL，10.4 mmol，2.5當量），將反應混合物升溫至25℃，且在25℃下攪拌1h，用水(40 mL)淬熄，且用二氯甲烷(3 × 40 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，得到 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-7-(2-側氧基乙氧基)-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-87)（1.20 g，粗製品），其直接用於下一個反應而不進一步純化。 N-(3-氟-7-(2-羥基乙氧基)-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-88)：
在0℃下，向 N-(3-氟-4,7-二甲基-8-側氧基-7-(2-側氧基乙氧基)-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-87)（1.20 g，2.73 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(30 mL)及H 2O (15 mL)中之混合物中分批加入四氫硼化鈉（51.7 mg，1.37 mmol，0.5當量），將混合物在0℃下攪拌10 min，升溫至25℃，且在25℃下攪拌20 min，以水(30 mL)淬熄，且用二氯甲烷(3 × 40 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以40%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到 N-(3-氟-7-(2-羥基乙氧基)-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-88)（800 mg，產率係61%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 12.07 (br s, 1 H), 8.46 (d, J= 12.76 Hz, 1 H), 3.63 - 3.76 (m, 2 H), 3.53 - 3.61 (m, 1 H), 3.44 - 3.52 (m, 1 H), 3.03 - 3.23 (m, 1 H), 2.74 - 2.92 (m, 1 H), 2.35 - 2.46 (m, 1 H), 2.22 - 2.26 (m, 3 H), 2.12 (br s, 3 H), 2.03 - 2.11 (m, 1 H), 1.37 - 1.48 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CDCl 3) δ ppm -101.12。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 21FNO 4 +計算之[MH] +：310.1，實驗值：310.1。 8-胺基-6-氟-2-(2-羥基乙氧基)-2,5-二甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 14-89)：
在20℃下在氬氣下，向 N-(3-氟-7-(2-羥基乙氧基)-4,7-二甲基-8-側氧基-5,6,7,8-四氫萘-1-基)乙醯胺( 14-88)（200 mg，581 umol，1.0當量）於甲醇(8 mL)中之溶液中加入2N鹽酸(8 mL)，且將混合物在60℃下攪拌1h並冷卻至0℃。（如上所述設置三個額外的反應，並且將四種反應混合物合併）。將合併之反應混合物冷卻至0℃，藉由加入飽和NaHCO 3將pH調節至8，升溫至25℃，且用二氯甲烷(2 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌 ，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以40%的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到8-胺基-6-氟-2-(2-羥基乙氧基)-2,5-二甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 14-89)（310 mg，產率係45%）。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 6.30 (d, J= 12.26 Hz, 1 H), 3.49 - 3.61 (m, 3 H), 3.39 (m, 1 H), 3.01 - 3.10 (m, 1 H), 2.69 - 2.79 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.00 (d, J= 2.25 Hz, 4 H), 1.37 (s, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CD 3OD) δ ppm -108.91。LCMS (ESI+) m/z：針對C 14H 19FNO 3 +計算之[MH] +：268.1，實驗值：268.1。 (9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-90)：
在120℃下在氬氣下，向8-胺基-6-氟-2-(2-羥基乙氧基)-2,5-二甲基-3,4-二氫萘-1(2 H)-酮( 14-89）（150 mg，0.561 mmol，1.0當量）及( S)-4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1 H-哌喃并[3,4- f]吲
Figure 02_image158
-3,6,10(4 H)-三酮( 1-13）（162 mg，0.617 mmol，1.1當量）於甲苯(7 mL)中之混合物中加入鄰甲酚（443 mg，0.426 mL，4.10 mmol，7.3當量）及吡啶-4-甲基苯磺酸鹽（21.1 mg，0.084 mmol，0.15當量），將混合物在120℃下在密封管中攪拌32h並冷卻至25℃。（如上所述設置一個額外的反應，並且將兩種反應混合物合併）。將合併之反應混合物在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由以乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到(9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-90）（210 mg，產率係22%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.76 (dd, J= 10.85, 3.46 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.51 (d, J= 2.15 Hz, 1 H), 5.32 - 5.62 (m, 4 H), 4.74 (q, J= 5.21 Hz, 1 H), 3.58 - 3.71 (m, 3 H), 2.92 - 3.06 (m, 1 H), 2.14 - 2.42 (m, 6 H), 1.81 - 1.91 (m, 2 H), 1.53 (br d, J= 6.79 Hz, 3 H), 0.81 - 0.94 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.89。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 28FN 2O 6 +計算之[MH] +：495.2，實驗值：495.2。 (1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-91)及(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-92)：
將(9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四羥基苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]-喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-90）（210 mg，0.424 mmol）溶解于甲醇中，且藉由掌性SFC（儀器：Waters SFC150製備型SFC。管柱：DAICEL CHIRALPAK AD(250 mm*30 mm,10 um)；流動相：A用於CO 2且B用於乙醇；梯度：B%=50%等度洗提模式：流速：70 g/min；波長：220 nm；管柱溫度：40℃；系統背壓：120巴）分離，得到(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-91）（65.1 mg，產率係31%）（化合物 14-91可以係所示者之相對鏡像異構物）及(1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 14-92）（62.5 mg，產率係30%）（化合物 14-92可以係所示者之相對鏡像異構物）。備註：立體化學係任意指派的。
14-91之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.77 (br d, J= 10.88 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 5.30 - 5.63 (m, 4 H), 3.64 (br s, 3 H), 3.28 - 3.31, (m, 2 H), 2.99 (br s, 1 H), 2.38 (br s, 3 H), 2.33 (br s, 1 H), 2.20 (br s, 1 H), 1.76 - 1.93 (m, 2 H), 1.53 (br s, 3 H), 0.81 - 0.92 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.87。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 28FN 2O 6 +計算之[MH] +：495.2，實驗值：495.1。掌性SFC：RT = 1.715 min。
14-92之光譜： 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 7.77 (br d, J= 10.88 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 5.33 - 5.57 (m, 4 H), 3.65 (br s, 3 H), 3.28 - 3.30, (m, 2 H), 2.95 (br s, 1 H), 2.38 (br s, 3 H), 2.33 (br s, 1 H), 2.17 (br s, 1 H), 1.76 - 1.93 (m, 2 H), 1.53 (br s, 3 H), 0.84 - 0.92 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-D 6) δ ppm -111.90。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 28FN 2O 6 +計算之[MH] +：495.2，實驗值：495.3。掌性SFC：RT = 1.948 min。 實例15 (1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-((2-羥基乙基)胺基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 15-94)（ 圖 24）
Figure 02_image205
(1S,9 S)-1-((2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)胺基)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 15-93)：
將(1 S,9 S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮甲磺酸鹽 （依喜替康）（100 mg，0.188 mmol，1.0當量）及三乙胺（19.0 mg，0.188 mmol，1.0當量）於甲醇(2 mL)中之混合物在25℃下攪拌0.5 h，然後加入2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙醛（32.8 mg，0.188 mmol，1.0當量）。在將反應混合物在25℃下攪拌1h之後，加入氰基硼氫化钠（17.7 mg，0.282 mmol，1.5當量），並在25℃下攪拌2h。將其藉由加入水(0.2 mL)淬熄，用二氯甲烷(5 mL)稀釋，以Na 2SO 4乾燥，過濾，在減壓下濃縮，且將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到(1S,9 S)-1-((2-((三級丁基二甲基-矽基)氧基)乙基)胺基)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 15-93)（25.0 mg，產率係22%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- D 6) δ ppm 7.74 (d, J= 11.13 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 5.34 - 5.47 (m, 4 H), 4.30 (br s, 1 H), 3.69 (t, J= 5.93 Hz, 2 H), 3.15 - 3.24 (m, 1 H), 2.96 - 3.07 (m, 1 H), 2.87 (br d, J= 5.14 Hz, 1 H), 2.73 - 2.82 (m, 1 H), 2.37 (s, 3 H), 2.22 (dd, J= 13.57, 4.89 Hz, 1 H), 1.99 - 2.14 (m, 2 H), 1.87 (dt, J= 17.36, 7.09 Hz, 2 H), 0.87 (t, J= 7.34 Hz, 3 H), 0.82 (s, 9 H), 0.03 (d, J= 3.18 Hz, 6 H)。 19F NMR (400 MHz, DMSO- D 6) δ ppm -111.83。LCMS (ESI+) m/z：針對C 32H 41FN 3O 5Si +計算之[MH] +：594.2，實驗值：594.2。 HPLC方法：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：10 mM NH 4HCO 3於H 2O中；B: CH 3CN 管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30 mm*10um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     65 10.0    95 10.1    95 10.2    100 12.2    100 12.3    65 13.5    65 (1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-((2-羥乙基)胺基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 15-94)：
在25℃下在氮氣下，向(1 S,9 S)-1-((2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)胺基)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 15-93)（25 mg，0.042 mmol，1.0當量）於甲醇(0.5 mL)中之混合物中逐滴加入HCl/MeOH（2.5 mL，4M），將混合物在25℃攪拌1h，過濾，收集並在真空下乾燥，得到(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-((2-羥基乙基)胺基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 15-94)（18.0 mg，產率係87%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.81 - 9.14 (m, 2 H), 7.89 (d, J= 10.85 Hz, 1 H), 7.35 (s, 1 H), 6.56 (s, 1 H), 5.54 - 5.67 (m, 1 H), 5.37 - 5.50 (m, 3 H), 5.28 (br d, J= 0.95 Hz, 1 H), 5.10 (br s, 1 H), 3.71 (br s, 2 H), 3.09 - 3.26 (m, 3 H), 2.79 (br d, J= 13.95 Hz, 1 H), 2.41 (s, 3 H), 2.09 - 2.25 (m, 1 H), 1.77 - 1.96 (m, 2 H), 0.88 (t, J= 7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO- D 6) δ ppm -110.92。LCMS (ESI+) m/z：針對C 26H 27FN 3O 5 +計算之[MH] +：480.2，實驗值：480.2。 實例16 (1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-((2-羥乙基)胺基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4'6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 16-95)
Figure 02_image207
以與實例15類似之方式使用 8-71取代依喜替康製作實例16 ( 16-95)。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7.82 (d, J= 10.49 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 5.71 - 5.78 (m, 1 H), 5.57 - 5.65 (m, 2 H), 5.41 (d, J= 16.33 Hz, 1 H), 3.74 - 3.84 (m, 2 H), 3.35 (br s, 2 H), 3.20 - 3.28 (m, 2 H), 2.74 (dt, J= 14.16, 5.80 Hz, 1 H), 2.39 - 2.53 (m, 4 H), 2.09 (s, 3 H), 1.98 (qd, J= 7.17, 3.99 Hz, 2 H), 1.02 (t, J= 7.33 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CD 3OD) δ ppm -111.87。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 29FN 3O 5 +計算之[MH] +：494.2，實驗值：494.1。 實例17 (1 R,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-((2-羥基乙基)胺基)-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 17-96)
Figure 02_image209
以與實例15類似之方式使用 8-72取代依喜替康製作實例17 ( 17-96)。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ ppm 7.82 (d, J= 10.39 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 5.73 - 5.81 (m, 1 H), 5.63 (d, J= 3.30 Hz, 1 H), 5.58 (s, 1 H), 5.42 (d, J= 16.26 Hz, 1 H), 3.74 - 3.87 (m, 2 H), 3.34 (br s, 2 H), 3.22 - 3.28 (m, 2 H), 2.70 - 2.82 (m, 1 H), 2.36 - 2.56 (m, 4 H), 2.10 (s, 3 H), 1.89 - 2.04 (m, 2 H), 1.01 (t, J= 7.34 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, CD 3OD) δ ppm -111.90。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 29FN 3O 5 +計算之[MH] +：494.2，實驗值：494.1。 實例18 ( S)-2-(2-(2-(3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)- N-(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)-3-苯基丙醯胺( 18-112）（ 圖 25）
Figure 02_image211
2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-2-(2-(((芐氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)乙酸酯( 18-98)：
向2-[[2-(芐氧基羰基胺基)乙醯基]胺基]乙酸( 18-97)（55.0 g，206 mmol，1.0當量）於乙腈(550 mL)中之混合物中加入1-羥基吡咯啶-2,5-二酮（26.1 g，227 mmol，1.1當量）及 N 1-((乙基亞胺基)亞甲基)- N 3, N 3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽（47.5 g，247 mmol，1.2當量），將混合物在25℃下攪拌4h，冷卻至-10℃且形成了白色材料。將懸浮液用水(50 mL)稀釋，攪拌，過濾，且將濾餅在真空下乾燥，得到2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-2-(2-(((芐氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)乙酸酯( 18-98)（85.0 g，175 mmol，產率係85%），其直接用於下一步驟而不進行純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 2.81 (s, 4 H), 2.93 - 3.12 (m, 2 H), 3.69 (d, J=6.11 Hz, 2 H), 4.27 (d, J=5.87 Hz, 2 H), 5.04 (s, 2 H), 7.24 - 7.45 (m, 5 H), 7.57 (t, J=6.11 Hz, 1 H), 8.58 (t, J=5.87 Hz, 1 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 16H 18N 3O 7 +計算之[MH] +：364.1，實驗值：364.1。 (S)-11-苄基-3,6,9-三側氧基-1-苯基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十二烷-12-酸( 18-99)：
向2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-2-(2-(((芐氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)乙酸酯( 18-98）（85.0 g，175 mmol，1.0當量）於乙腈(425 mL)及H 2O (425 mL)中之混合物中加入(2 S)-2-胺基-3-苯基丙酸（34.7 g，210 mmol，1.2當量）及三甲胺（26.8 mL，193 mmol，1.1當量），將混合物在25℃下攪拌2h，冷卻至0℃，加入鹽酸（12M，16.2 mL，1.1當量）且在0℃攪拌6h。將所得懸浮液升溫至25℃，過濾且將濾餅在真空下乾燥，得到 (S)-11-苄基-3,6,9-三側氧基-1-苯基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十二烷-12-酸( 18-99)（50.0 g，108 mmol，產率係62%），其直接用於下一步驟中而不進一步純化。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 2.59 (s, 1 H), 2.88 (dd, J=13.77, 9.00 Hz, 1 H), 3.04 - 3.11 (m, 1 H), 3.60 - 3.79 (m, 4 H), 4.43 (td, J=8.43, 5.19 Hz, 1 H), 5.03 (s, 2 H), 7.15 - 7.40 (m, 10 H), 7.50 (t, J=6.02 Hz, 1 H), 8.04 (br t, J=5.60 Hz, 1 H), 8.16 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 12.72 (br d, J=5.01 Hz, 1 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 21H 24N 3O 6 +計算之[MH] +：414.2，實驗值：414.2。 (2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)乙酸甲酯( 18-101)：
向2-[[2-(9 H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙醯基]胺基]乙酸( 18-100)（100 g，282 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(1.5 L)及乙酸(300 mL)中之混合物中加入四乙酸鉛（150 g，338 mmol，1.2當量），將混合物在50℃下攪拌36h，冷卻至25℃，且過濾。將濾液用檸檬酸三鈉二水合物水溶液（2.5 L，20 wt%）洗滌兩次，將有機相濃縮至約2.0 L，加入水(2.5 L)，且將混合物在5℃下攪拌2h。將形成的沉澱物過濾，用冷(5℃)四氫呋喃及水(3:10, 1.2 L)的混合物洗滌，並在真空下乾燥得到(2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)乙酸甲酯( 18-101)（100 g，產率係86%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 2.09 (s, 3 H), 3.90 (d, J=5.01 Hz, 2 H), 4.19 - 4.28 (m, 1 H), 4.41 - 4.52 (m, 2 H), 5.25 (d, J=6.97 Hz, 2 H), 5.41 - 5.60 (m, 1 H), 7.17 - 7.27 (m, 1 H), 7.29 - 7.36 (m, 2 H), 7.41 (t, J=7.40 Hz, 2 H), 7.55 - 7.64 (m, 2 H), 7.77 (d, J=7.58 Hz, 2 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 20H 20N 2O 5Na +計算之[MNa] +：391.1，實驗值：391.1。 1-(9 H-茀-9-基)-3,6-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-11-酸苄酯( 18-102)：
向(2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)乙酸甲酯( 18-101)（80.0 g，173 mmol，1.0當量）於1,2 -二甲氧基乙烷(1.5 L)中之混合物中加入2-羥基乙酸苄酯（57.7 g，49.3 mL，347 mmol，2.0當量），冷卻至0℃，加入乙酸（5.22 g，86.8 mmol，4.97 mL，0.5當量）。將混合物在0℃下攪拌1h，逐滴加入氫氧化鈉（10 N，17.3 mL，1.0當量）且在0℃下攪拌1h，加入水(1.2 L)且在0℃下攪拌2h。將形成之白色沉澱物過濾，用冷（5℃）1,2-二甲氧基乙烷:水（1:2，500 mL）及甲基三級丁酯(500 mL)洗滌，且在40℃下在真空下乾燥，得到1-(9H-茀-9-基)-3,6-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-11-酸苄酯( 18-102)（60.0 g，產率係69%）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ ppm 3.82 (d, J=5.26 Hz, 2 H), 4.16 - 4.29 (m, 3 H), 4.45 (d, J=6.80 Hz, 2 H), 4.83 (d, J=7.02 Hz, 2 H), 5.16 (s, 2 H), 5.45 (t, J=5.59 Hz, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 7.28 - 7.48 (m, 9 H), 7.59 (d, J=7.23 Hz, 2 H), 7.77 (d, J=7.45 Hz, 2 H)。LCMS (ESI+) m/z：針對C 27H 26N 2O 6Na +計算之[MNa] +：497.2，實驗值：497.1。 2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)乙酸芐酯●HOBT鹽( 18-103)：
在0℃下，向1-(9H-茀-9-基)-3,6-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-11-酸苄酯( 18-102)（60.0 g，126 mmol，1.0當量）於乙腈(1.08 L)中之混合物中加入DBU（9.53 mL，63.2 mmol，0.5當量）。將混合物在25℃下攪拌4h，冷卻至0℃，加入HOBt（34.1 g，252 mmol，2.0當量）且在0℃下攪拌1.5h。將其升溫至25℃，過濾，將濾餅用冷（5℃）乙腈(200 mL)洗滌，且在真空下乾燥，得到2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)乙酸芐酯●HOBt ( 18-103)（46.0 g，產率係84%）。 1H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 3.68 (s, 2 H), 4.21 (s, 2 H), 4.79 (s, 2 H), 5.18 (s, 2 H), 7.22 - 7.42 (m, 7 H), 7.62 - 7.74 (m, 2 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 18H 33N 5O 6 -計算之[MH] -：269.1，實驗值：269.0。 ( S)-苄基11-苄基-3,6,9,12,15-五側氧基-1-苯基-2,18-二氧雜-4,7,10,13,16-五氮雜二十烷-20-酸酯( 18-105)：
在0℃下，向2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)乙酸苄酯●HOBt ( 18-103)（46.0 g，118 mmol，1.0當量）於乙腈(500 mL)中之混合物中加入( S)-11-苄基-3,6,9-三側氧基-1-苯基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十二烷-12-酸( 18-104)（45.0 g，108 mmol，0.9當量）及 N 1-((乙基亞胺基)亞甲基)- N 3, N 3-二甲基丙烷-1,3-二胺鹽酸鹽（25.5 g，133 mmol，1.1當量）。將混合物在0℃下攪拌3.5h，加入水(200 mL)，並在0℃下攪拌2h。將所形成的沉澱物過濾，用冷（5℃）乙腈:水（1:2，201 mL）洗滌，並在真空下乾燥，得到( S)-苄基11-苄基-3,6,9,12,15-五側氧基-1-苯基-2,18-二氧雜-4,7,10,13,16-五氮雜二十烷-20-酸酯( 18-105)（30.0 g，產率係34%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 2.79 (dd, J=13.67, 9.92 Hz, 1 H), 3.06 (dd, J=13.67, 4.41 Hz, 1 H), 3.56 - 3.66 (m, 3 H), 3.69 - 3.81 (m, 3 H), 4.15 (s, 2 H), 4.51 (td, J=8.76, 4.52 Hz, 1 H), 4.63 (d, J=6.62 Hz, 2 H), 5.03 (s, 2 H) 5.13 - 5.17 (m, 2 H), 7.03 - 7.46 (m, 15 H), 7.49 - 7.55 (m, 1 H), 8.00 - 8.10 (m, 1 H), 8.18 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 8.36 (t, J=5.62 Hz, 1 H), 8.62 (t, J=6.73 Hz, 1 H)。 ( S)-16-胺基-10-苄基-6,9,12,15-四側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-1-酸( 18-106)：
在25℃下在氬氣下，向( S)-苄基11-苄基-3,6,9,12,15-五側氧基-1-苯基-2,18-二氧雜-4,7,10,13,16-五氮雜二十烷-20-酸酯( 18-105)（10.0 g，15.4 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(210 mL)及H 2O (140 mL)之混合物中加入Pd/C (10 wt%)（4.40 g，1.2當量），將懸浮液抽真空且用H 2填充三次，並且在H 2(15 psi)下在25℃下攪拌2.5h。在將H 2氣氛用氬氣置換之後，將其藉由矽藻土墊過濾，並且將濾餅用水(80 mL)及乙醇(150 mL)洗滌。將濾液濃縮至約30 mL，加入乙醇(120 mL)，並且將混合物在0℃下攪拌2h。將形成的沉澱物藉由過濾收集，用乙醇(30 mL)洗滌，並且在真空下乾燥，得到( S)-16-胺基-10-苄基-6,9,12,15-四側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-1-酸( 18-106)（4.00 g，產率係58%）。 1H NMR (400 MHz, D 2O) δ ppm 2.88 - 3.26 (m, 2 H), 3.64 - 4.16 (m, 8 H), 4.55 - 4.71 (m, 3 H), 7.11 - 7.50 (m, 5 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 18H 24N 5O 7 -計算之[MH] -：422.2，實驗值：422.1。 ( E)-4-((4-(2-羧乙基)苯基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸( 18-108)：
在25℃下，向呋喃-2,5-二酮（4.16 g，42.3 mmol，1.0當量）於醚(42 mL)中之混合物中加入3-(4-胺基苯基)丙酸( 18-107)（7.00 g，42.3 mmol，1.0當量）及2,6-二甲基吡啶（4.58 g，4.98 mL，4.23 mmol，1.0當量）於四氫呋喃(70 mL)中之溶液。將反應混合物在65℃下攪拌0.5h，冷卻至25℃，過濾，且將濾餅用甲基三級丁醚(150 mL)洗滌，並在真空下乾燥，得到( E)-4-((4-(2-羧乙基)苯基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸( 18-108)（11.0 g，產率係98%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.12 – 13.09 (m, 2 H), 10.37 (s, 1 H), 7.52 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 7.18 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 6.46 (d, J= 12.0 Hz, 1 H), 6.30 (d, J= 12.0 Hz, 1 H), 2.78 (t, J= 7.6 Hz, 2 H), 2.52 (s, 2 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 13H 12NO 5 -計算之[M-H] -：262.0，實驗值：261.9。 3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸( 18-109)：
在氮氣下，向( E)-4-((4-(2-羧乙基)苯基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸( 18-108)（11.0 g，41.7 mmol，1.0當量）於乙酸酐(100 mL)中之混合物中加入乙酸鉀（2.26 g，22.9 mmol，0.55當量）。將懸浮液抽真空且用氮氣填充三次，在145℃下攪拌0.5h，冷卻至20℃且在減壓下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(300 mL)稀釋，用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，並且將殘餘物藉由以33%-100%的含有20%四氫呋喃的石油醚中之乙酸乙酯洗提的矽膠快速管柱層析法純化，得到3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸( 18-109)（3.60 g，產率係29%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.16 (s, 1 H), 7.33 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 7.20 - 7.24 (m, 2 H), 7.16 (s, 2 H), 2.86 (t, J= 7.6 Hz, 2 H), 2.57 (t, J= 7.6 Hz, 2 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 13H 10NO 4 -計算之[M-H] -：244.0，實驗值：243.9。 2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸鹽( 18-110)：
向3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸( 18-109)（3.60 g，14.6 mmol，1.0當量）於乙腈(72 mL)中之混合物中加入1-羥基吡咯啶-2,5-二酮（1.77 g，15.4 mmol，1.05當量）及 N, N'-甲烷二亞基二環己胺（3.18 g，15.4 mmol，1.05當量）。將反應混合物在25℃下攪拌3h，過濾，含有2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸鹽( 18-110)之濾液直接用於下一步驟中而不進行處理及純化。LCMS (ESI+) m/z：針對C 17H 15N 2O 6 +計算之[MH] +：343.1，實驗值：343.1。 ( S)-10-苄基-20-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)-6,9,12,15,18-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十烷-1-酸( 18-111)：
在25℃下，向2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸酯( 18-110)（1.62 g，4.72 mmol，1.0當量）於乙腈(80 mL)中之混合物中加入( S)-16-胺基-10-苄基-6,9,12,15-四側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-1-酸( 18-106)（2.00 g，4.72 mmol，1.0當量）及 N-乙基- N-異丙基丙-2-胺（0.658 mL，3.78 mmol，0.8當量）於H 2O (20 mL)中之溶液。將反應混合物在25℃攪拌12h，過濾，濃縮，並且將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到( S)-10-苄基-20-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)-6,9,12,15,18-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十烷-1-酸( 18-111)（0.78 g，產率係24%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.53 - 8.64 (m, 1 H), 8.31 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.23 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.16 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.08 (t, J= 5.2 Hz, 1 H), 7.14 - 7.38 (m, 11 H), 4.61 (d, J= 6.8 Hz, 2 H), 4.44 - 4.55 (m, 1 H), 3.97 (s, 2 H), 3.64 - 3.80 (m, 5 H), 3.63 (d, J= 5.6 Hz, 1 H), 3.06 (dd, J= 13.6, 4.4 Hz, 1 H), 2.78 - 2.89 (m, 3 H), 2.53 - 2.60 (m, 1 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 31H 33N 6O 10 -計算之[MH] -：649.2，實驗值：649.3。 製備型HPLC條件：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H 2O；B：ACN 管柱：Agela DuraShell C18 250*70 mm*10um 流速：130 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     10 20.0    40 20.1    40 20.2    100 26.2    100 26.3    10 27.5    10 (( S)-2-(2-(2-(3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)- N-(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)-3-苯基丙醯胺( 18-112)：
將( S)-10-苄基-20-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)-6,9,12,15,18-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十烷-1-酸( 18-111)（246 mg，0.378 mmol，1.0當量）、(1 S,9 S))-1-胺基-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-2,3,12,15-四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮鹽酸鹽( 8-71)（170 mg，0.378 mmol，1.0當量）、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉-4-鎓四氟硼酸鹽（124 mg，0.378 mmol，1.0當量）及4-甲基嗎啉（0.166 mL，1.51 mmol，4.0當量）於 N, N-二甲基甲醯胺(5 mL)中之混合物在25℃下攪拌1h。將混合物過濾，且將濾液藉由製備型HPLC純化，得到(( S)-2-(2-(2-(3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)- N-(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)-3-苯基丙醯胺( 18-112）（130 mg，產率係30%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.39 (s, 1 H), 8.32 - 8.37 (m, 1 H), 8.12 - 8.22 (m, 2 H), 8.04 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 7.78 (d, J= 10.8 Hz, 1 H), 7.26 - 7.34 (m, 3 H), 7.18 - 7.26 (m, 6 H), 7.16 (s, 2 H), 6.51 (s, 1 H), 5.28 - 5.50 (m, 3 H), 4.92 (d, J= 18.8 Hz, 1 H), 4.67 (d, J= 6.8 Hz, 2 H), 4.51 (d, J= 4.0 Hz, 1 H), 3.90 - 4.05 (m, 2 H), 3.64 - 3.83 (m, 5 H), 3.62 (d, J= 5.6 Hz, 1 H), 3.21 - 3.27 (m, 1 H), 3.00 - 3.13 (m, 2 H), 2.89 - 2.99 (m, 1 H), 2.76 - 2.87 (m, 3 H), 2.46 (s, 3 H), 2.38 (s, 3 H), 1.75 - 2.01 (m, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 0.87 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.87。LCMS (ESI+) m/z：針對C 56H 57FN 9O 13 +計算之[MH] +：1082.4，實驗值：1082.3。 製備型HPLC條件：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H 2O；B：ACN 管柱：Phenomenex C18 75*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     20 8.0     50 8.1     50 8.2     100 10.2    100 10.3    20 11.5    20 實例19 N-(( S)-10-苄基-1-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)芐醯胺( 19-113)
Figure 02_image213
以與實例18 ( 18-112)類似之方式製作實例19 ( 19-113)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.87 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.69 (t, J=6.4 Hz, 1 H), 8.32 - 8.41 (m, 2 H), 8.10 - 8.19 (m, 2 H), 7.90 (d, J= 7.6 Hz, 1 H), 7.83 - 7.86 (m, 1 H), 7.78 (d, J= 10.8 Hz, 1 H), 7.55 - 7.61 (m, 1 H), 7.48 - 7.53 (m, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 7.18 - 7.26 (m, 6 H), 7.13 - 7.18 (m, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 5.30 - 5.47 (m, 3 H), 4.92 (d, J= 18.8 Hz, 1 H), 4.67 (d, J= 7.2 Hz, 2 H), 4.51 (dd, J= 8.0, 4.4 Hz, 1 H), 3.84 - 4.04 (m, 4 H), 3.71 - 3.83 (m, 3 H), 3.54 - 3.68 (m, 1 H), 3.25 (s, 1 H), 2.88 - 3.15 (m, 3 H), 2.82 (dd, J= 13.6, 9.6 Hz, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 1.73 - 2.04 (m, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 0.87 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.87。LCMS (ESI+) m/z：針對C 54H 53FN 9O 13 +計算之[MH] +：1054.3，實驗值：1054.3。 實例20 N-(( S)-10-苄基-1-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1,4-二甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)己醯胺( 20-114)
Figure 02_image215
以與實例18 ( 18-112)類似之方式製作實例20 ( 20-114)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.69 (t, J= 6.4 Hz, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.34 (, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.14 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.04 (t, J= 5.6 Hz, 1 H),7.99 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 7.78 (d, J= 10.8 Hz, 1 H), 7.31 (s, 1 H), 7.20 - 7.28 (m, 4 H), 7.14 - 7.20 (m, 1 H), 6.98 (s, 2 H), 6.51 (s, 1 H), 5.35 - 5.48 (m, 3 H), 4.92 (d, J= 18.8 Hz, 1 H), 4.67 (d, J= 6.8 Hz, 2 H), 4.46 - 4.54 (m, 1 H), 3.90 - 4.04 (m, 2 H), 3.70 - 3.85 (m, 3 H), 3.55 - 3.67 (m, 3 H), 3.33 - 3.38 (m, 2 H), 3.26 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 2.87 - 3.11 (m, 3 H), 2.81 (dd, J= 13.6, 9.6 Hz, 1 H), 2.39 (s, 3 H), 2.08 (t, J= 7.6 Hz, 2 H), 1.76 - 2.01 (m, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 1.40 - 1.51 (m, 4 H), 1.12 - 1.23 (m, 2 H), 0.87 (t, J= 7. 2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.88。LCMS (ESI+) m/z：針對C 53H 59FN 9O 13 +計算之[MH] +：1048.4，實驗值：1048.5。 實例21 ( S)-2-(2-(2-(3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)- N-(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)-3-苯基丙醯胺( 21-120)（ 圖 26）
Figure 02_image218
(2S)-2-[[2-[[2-[3-[4-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)苯基]丙醯胺基]乙醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-苯基丙酸( 21-116)：
將( S)-2-(2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基)-3-苯基丙酸( 21-115)（5.03 g，14.6 mmol，1.0當量）及 N-乙基- N, N-二異丙胺（1.52 g，11.7 mmol，2.05 mL，0.8當量）於H 2O (25 mL)中之混合物逐滴加入2,5-二側氧基吡咯啶-1-基-3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙酸鹽( 18-110)（4.10 g，14.6 mmol，1.0）在乙腈(75 mL)中之混合物中。將反應混合物在25℃下攪拌5h，過濾且將濾液藉由製備型HPLC純化，得到 (2S)-2-[[2-[[2-[3-[4-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)苯基]丙醯胺基]乙醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-苯基丙酸( 21-116)（3.32 g，產率係40%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.21 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.07 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 7.87 (d, J= 7.6 Hz, 1 H), 7.32 (d, J= 8.4 Hz, 2 H), 7.06 - 7.27 (m, 9 H), 4.29 (d, J= 5.2 Hz, 1 H), 3.61 - 3.77 (m, 4 H), 3.19 (s, 1 H), 3.03 (d, J= 4.8 Hz, 1 H), 2.86 (t, J= 8.0 Hz, 3 H), 2.67 (s, 1 H)。LCMS (ESI-) m/z：針對C 26H 25N 4O 7 -計算之[MH] +：505.1，實驗值：505.2。 製備型HPLC條件：
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H2O；B：ACN 管柱：Phenomenex C18 250*100 mm 10u 流速：260 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     1 20.0    40 20.1    40 20.2    100 25.2    100 25.3    1 26.5    1 (9 H-茀-9-基)甲基(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸酯( 21-118)：
在25℃下，向(1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-1-(2-羥基乙氧基)-4-甲基-2,3,12,15-四氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-10,13(1 H,9 H)-二酮( 5-48)（1.25 g，2.60 mmol，1.0當量）於二氯甲烷(37 mL)中之混合物中，歷經1.5h分三批加入三氟甲磺酸鈧(III)（50.5 mg，0.260 mmol，0.1當量）及[[2-(9 H-茀-9-基甲氧羰基胺基)乙醯基]胺基]乙酸甲酯( 21-117)（1.44 g，3.90 mmol，1.5當量）。將反應混合物在30℃下攪拌36h，用水(100 mL)淬熄，並用二氯甲烷(3 × 100 mL)萃取。將合併之有機相用鹽水洗滌，以Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮，且將殘餘物藉由以10%至100%的乙酸乙酯中之二氯甲烷洗提之矽膠快速管柱層析法純化，得到(9 H-茀-9-基)甲基(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸酯( 21-118)（1.00 g，產率係45%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.90 (br t, J= 6.60 Hz, 1 H), 7.80 - 7.91 (m, 2 H), 7.73 (d, J= 11.13 Hz, 1 H), 7.56 - 7.63 (m, 2 H), 7.23 - 7.44 (m, 6 H), 6.53 (s, 1 H), 5.32 - 5.53 (m, 3 H), 4.96 (br dd, J= 9.60, 4.10 Hz, 1 H), 4.62 - 4.83 (m, 2 H), 4.44 - 4.59 (m, 1 H), 4.20 - 4.32 (m, 1 H), 4.05 - 4.19 (m, 3 H), 3.91 - 4.00 (m, 1 H), 3.57 - 3.78 (m, 5 H), 3.14 - 3.28 (m, 1 H), 2.86 - 3.08 (m, 1 H), 2.34 (s, 3 H), 1.85 (br dd, J= 7.03, 4.46 Hz, 3 H), 0.78 - 0.94 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.56。LCMS (ESI+) m/z：針對C 44H 42FN 4O 9 +計算之[MH] +：789.3，實驗值：789.3。 2-胺基-N-((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)乙醯胺( 21-119)：
向(9 H-茀-9-基)甲基(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸酯( 21-118)（1.00 g，1.27 mmol，1.0當量）於 N, N-二甲基甲醯胺(20 mL)中之混合物中加入哌啶（0.125 mL，1.27 mmol，1.0當量）。將反應混合物在0℃下攪拌1h，過濾且將濾液藉由製備型HPLC純化，得到2-胺基- N-((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)乙醯胺( 21-119)（360 mg，產率係45%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.78 (t, J= 6.8 Hz, 1 H), 7.66 - 7.81 (m, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 6.52 (s, 1 H), 5.35 - 5.46 (m, 3 H), 5.01 (dd, J= 9.2, 3.6 Hz, 1 H), 4.59 - 4.83 (m, 2 H), 3.92 - 4.03 (m, 1 H), 3.77 (m, 1 H), 3.59 - 3.71 (m, 2 H), 3.20 - 3.29 (m, 2 H), 3.16 (s, 2 H), 2.92 - 3.05 (m, 1 H), 2.59 - 2.84 (m, 1 H), 2.29 - 2.41 (m, 3 H), 1.72 - 2.09 (m, 3 H), 0.78 - 0.97 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.54。LCMS (ESI+) m/z：針對C 29H 32FN 4O 7 +計算之[MH] +：567.2，實驗值：567.3。 製備型HPLC條件
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：10 mm NH 4HCO 3於H 2O中；B: ACN 管柱：Phenomenex C18 75*30 mm*3um 流速：25 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     10 8.0     40 8.1     40 8.2     100 10.2    100 10.3    10 11.5    10 ( S)-2-(2-(2-(3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)- N-(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)-3-苯基丙醯胺( 21-120)：
將 (2S)-2-[[2-[[2-[3-[4-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)苯基]丙醯胺基]乙醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-苯基丙酸( 21-116)（160 mg，0.317 mmol，1.0當量）、2-胺基- N-((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)乙醯胺( 21-119)（180 mg，317 umol，1.0當量）、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉-4-鎓四氟硼酸鹽（104 mg，0.317 mmol，1.0當量）及4-甲基嗎啉（0.139 mL，1.27 mmol，4.0當量）於 N, N-二甲基甲醯胺(3.6 mL)中之混合物在25℃下攪拌1h，過濾，且將濾液藉由製備型HPLC純化，得到( S)-2-(2-(2-(3-(4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)苯基)丙醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)- N-(2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)-3-苯基丙醯胺( 21-120)（80.0 mg，產率係23%）。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.69 (t, J= 6.8 Hz, 1 H), 8.28 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.19 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 8.10 (d, J= 8.0 Hz, 1 H), 8.03 (t, J= 5.6 Hz, 1 H), 7.76 (d, J= 11.2 Hz, 1 H), 7.26 - 7.35 (m, 3 H), 7.13 - 7.25 (m, 8 H), 6.52 (s, 1 H), 5.34 - 5.53 (m, 4 H), 5.03 (dd, J= 8.8, 4.00 Hz, 1 H), 4.63 - 4.81 (m, 2 H), 4.41 - 4.57 (m, 1 H), 3.90 - 4.03 (m, 1 H), 3.74 - 3.84 (m, 3 H), 3.54 - 3.74 (m, 6 H), 3.16 - 3.30 (m, 2 H), 2.93 - 3.07 (m, 2 H), 2.73 - 2.88 (m, 3 H), 2.42 - 2.48 (m, 3 H), 2.37 (s, 3 H), 1.80 - 2.03 (m, 3 H), 0.87 (t, J= 7.2 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.53。LCMS (ESI+) m/z：針對C 55H 56FN 8O 13 +計算之[MH] +：1055.4，實驗值：1055.3。 製備型HPLC條件
儀器：Gilson 281半製備型HPLC系统 流動相：A：H 2O；B：ACN 管柱：Phenomenex C18 75*30 mm*3um 流速：60 mL/min 監測器波長：220&254 nm 時間   B% 0.0     25 8.0     55 8.1     55 8.2     100 10.2    100 10.3    25 11.5    25 實例22 N-(( S)-10-苄基-1-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)-6,9,12,15-四側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)芐醯胺( 22-121)
Figure 02_image220
以與實例21 ( 21-120)類似之方式製作實例22 ( 22-121)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.86 (t, J= 5.60 Hz, 1 H), 8.67 (br t, J= 6.56 Hz, 1 H), 8.29 (br t, J= 5.66 Hz, 1 H), 8.05 - 8.17 (m, 2 H), 7.89 (d, J= 7.99 Hz, 1 H), 7.83 (s, 1 H), 7.75 (d, J= 10.97 Hz, 1 H), 7.54 - 7.61 (m, 1 H), 7.47 - 7.53 (m, 1 H), 7.33 (s, 1 H), 7.11 - 7.25 (m, 7 H), 6.52 (s, 1 H), 5.34 - 5.48 (m, 4 H), 5.03 (br dd, J= 8.82, 3.58 Hz, 1 H), 4.63 - 4.79 (m, 2 H), 4.44 - 4.54 (m, 1 H), 3.96 (br dd, J= 7.03, 4.17 Hz, 1 H), 3.88 (br d, J= 5.72 Hz, 2 H), 3.57 - 3.81 (m, 7 H), 3.19 - 3.27 (m, 1 H), 2.93 - 3.08 (m, 2 H), 2.78 (br dd, J= 13.65, 9.83 Hz, 1 H), 2.45 (br s, 1 H), 2.36 (s, 3 H), 1.81 - 2.02 (m, 3 H), 0.83 - 0.91 (m, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm -111.54。LCMS (ESI+) m/z：針對C 53H 52FN 8O 13 +計算之[MH] +：1027.3，實驗值：1027.3。 實例23 N-(( S)-10-苄基-1-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-1,2,3,9,10,12,13,15-八氫苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲
Figure 02_image158
并[1,2- b]喹啉-1-基)氧基)-6,9,12,15-四側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)己醯胺( 23-122)
Figure 02_image222
以與實例21 ( 21-120)類似之方式製作實例23 ( 23-122)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D 6) δ ppm 8.63 - 8.74 (m, 1 H), 8.28 (t, J= 5.63 Hz, 1 H), 8.09 (d, J= 8.13 Hz, 1 H), 8.04 (t, J= 5.63 Hz, 1 H), 7.98 (t, J= 5.63 Hz, 1 H), 7.77 (d, J= 11.01 Hz, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 7.11 - 7.26 (m, 5 H), 6.98 (s, 2 H), 6.52 (s, 1 H), 5.31 - 5.58 (m, 4 H), 5.05 (br dd, J= 9.13, 4.00 Hz, 1 H), 4.61 - 4.82 (m, 2 H), 4.40 - 4.55 (m, 1 H), 3.90 - 4.04 (m, 1 H), 3.73 - 3.84 (m, 3 H), 3.60 - 3.73 (m, 5 H), 3.53 - 3.60 (m, 1 H), 3.33 - 3.37 (m, 2 H), 3.21 - 3.27 (m, 1 H), 2.94 - 3.08 (m, 2 H), 2.77 (dd, J= 13.70, 9.82 Hz, 1 H), 2.46 - 2.48 (m, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 2.05 - 2.12 (m, 2 H), 1.82 - 2.01 (m, 3 H), 1.45 (dq, J= 14.13, 7.00 Hz, 4 H), 1.10 - 1.22 (m, 2 H), 0.87 (t, J= 7.32 Hz, 3 H)。 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ ppm-111.54。LCMS (ESI+) m/z：針對C 52H 58FN 8O 13 +計算之[MH] +：1021.4，實驗值：1021.4。 實例24 CTG檢定（Jeko-1及MDA-MB-468）
CTG檢定係基於存在的ATP，代謝活性細胞指標之定量判定培養物中之活細胞數目之方法。細胞檢定需要加入單一試劑，Cell Titer Glo，其中使細胞裂解且產生發光訊號。發光訊號與存在之ATP之量成比例。ATP之量與培養物存在之細胞數目成正比。對於我們的檢定，確保Jeko-1或MDA-MB-468之細胞處於對數期。將細胞轉移至96孔且用從1 mM至0.0000508 mM（10點稀釋）的三倍連續稀釋的化合物處理72h。按照製造商的說明用CellTiter-Glo ®發光細胞存活力檢定法(Promega)分析細胞存活力。藉由用媒劑對照的發光進行標準化來判定每種化合物濃度的活細胞百分比，並藉由在GraphPad Prism軟體中的非線性擬合繪製成存活力百分比對劑量反應曲線。化合物IC 50被計算為殺滅50%的細胞的化合物濃度。代表性的檢定結果總結在表1中。 實例25 人肝細胞清除(HHEP CL)
將人肝細胞（來自10名混合性別的人供體，最終濃度0.5 × 10 6個細胞/mL）在Williams’ E介質中的懸浮液與測試化合物（0.90%的乙腈及0.10%的DMSO，最終濃度係1 mm）及陽性對照（7-乙氧基香豆素、7-羥基香豆素、0.90%的乙腈及0.10%的DMSO，最終濃度係3 mm）一起培養90 min，在37℃下在5% CO 2及95%濕度的培養箱中以約600 rpm的速度持續搖動。培養總體積係200 µl。在T0、15、30、60及90 min時取出樣本(25 mL)，將其中間加入冰冷的終止溶液（帶有200 ng/mL甲苯磺丁脲及拉貝洛爾(labetalol)作為內標的乙腈）(125 µl)，並在500 rpm下漩渦震盪10 min，在4℃下以3220 × g離心20 min。將分析板密封並在4℃下儲存，直至進行LCMS分析。在預培養時，肝細胞的存活力被確定係84.5%。代表性的檢定結果總結在表1中。 實例26 人肝微粒體清除(HLM CL)
藉由向495 µL乙腈(ACN)（中間溶液濃度：100 µM，99% CAN及1% DMSO）中加入5 µL化合物及對照儲備溶液（10 mm在二甲基亞碸，DMSO中）來製備工作溶液。在100 mm磷酸鉀緩衝液中製備適當濃度的微粒體工作溶液。將含有化合物及微粒體混合物的反應板在37℃預培養10 min後，加入98 mL的2 mm NADPH及2 mm MgCl 2溶液以開始反應。培養介質的最終濃度如下：微粒體–0.5 mg蛋白質/mL，測試化合物/對照化合物–1 mm，NADPH–1 mm，MgCl 2–1 mm，乙腈0.99%，DMSO 0.01%。在37℃下培養60 min。在T0、T5、T15、T30、T45及T60時取出樣本，將其中間加入冰冷的終止溶液（帶有200 ng/mL的甲苯磺丁脲及拉貝洛爾作為內標的乙腈）(125 µl)，搖動10 min，在4℃下以4000 rpm離心20 min。藉由LCMS分析分析板。代表性的檢定結果總結在表1中。
人肝微粒體清除檢定藉由細胞色素P450系統（第I期酶）評估代謝。該等酶藉由將氧原子結合到烴中來氧化受質，從而導致羥基的引入，或受質的N- O-及S-脫烷基化，並形成更容易被清除之更具極性的產物。人肝細胞清除檢定更廣泛地測量測試化合物的整體細胞代謝（第I期及第II期酶通路）。第II期酶催化異生素代謝物及帶電物種，諸如麩胱甘肽、硫酸鹽、甘胺酸或葡萄糖醛酸的結合反應，以形成極性甚至更強的化合物以更容易清除。
由於其潛在的較低的全身血漿暴露，具有較高固有清除的酬載可以提供更好的治療指數。(Maderna, A.; Doroski, M; Subramanyam, C.; Porte, A.; Leverett, C. A.; Vetelino, B. C.; Chen, Z.; Risley, H.; Parris, K.; Pandit, J.; Varghese, A. H.; Shanker, S.; Song, C.; Sukuru, S. C. K.; Farley, K. A.; Wagenaar, M. M.; Shapiro, M. J.; Musto, S.; Lam, M-H.; Loganzo, F.; O’Donnell, C. J. 「Discovery of cytotoxic dolastatin 10 analogues with N‑terminal modifications」 Journal Medicinal Chemistry, 2014, 57, 10527 – 10543)。在表1中，具有較高固有清除的酬載可能具有改善的安全性概況，因為對健康細胞具有潛在毒性的酬載被迅速從血漿中去除，降低了其與健康細胞相互作用的機會。 實例27 PAMPA（平行人工膜滲透性檢定）
PAMPA係判定來自供體區室的物質經由脂質輸注之人工膜進入受體區室的滲透性的方法。參見 Ottaviani, G.; Martel, S.; Carrupt, P-A. "Parallel Artificial Membrane Permeability Assay: A New Membrane for the Fast Prediction of Passive Human Skin Permeability", Journal of Medicinal Chemistry, 2006, 49 (13), 3948–3954)。多孔微量滴定板用於供體，且膜/受體區室置於頂部上；整個總成通常被稱為「夾心」。在測試開始時，將藥物加入供體區室，且受體區室不含藥物。在可能包括攪拌的培養期間後，將夾心分離，並測量每個區室中的藥物量。質量平衡允許計算殘留在膜中之藥物。
PAMPA由Pion Inc在pH 5.0及pH 7.4的PRISMA緩衝液（含有0.05% DMSO）中使用GIT-0脂質及5 mM供體溶液來進行。更高的PAMPA資料與更佳的旁觀者殺滅相關。(Ogitani Y.; Hagihara K.; Oitate, M.; Naito, H.; Agatsuma T. 「Bystander killing effect of DS-8201a, a novel anti-human epidermal growth factor receptor 2 antibody-drug conjugate, in tumors with human epidermal growth factor receptor 2 heterogeneity」 Cancer Science, 2016, 107 (7), 1039 – 1046)。
代表性的檢定結果總結在表1中。更高的滲透性是重要的，因為其意味著更大的「旁觀者殺滅」的可能性。亦即，一旦酬載中和了腫瘤細胞，滲透性更強的酬載更有可能逃離中和的腫瘤細胞，然後嵌入鄰近的腫瘤細胞中。一旦到達彼處，其可以中和腫瘤細胞，逃逸，嵌入另一鄰近的腫瘤細胞，並重複該程序。
表1
化合物   PAMPA Pe (10 -6cm/s) pH 5.0/7.4 HHEP Cl (T 1/2) HLM Cl (T 1/2)    JeKo-1 IC 50(nM) MDA-MB-468 IC 50(nM)
Dxd 21.9/5.0 48.7 (79.0) 8.6 (＞145) 1.42 11.6
依喜替康 37.2/5.7 59.3 (65.0) 11.7 (106) 0.59 6.2
3-34 78.3/8.2 79.2 (48.7) 32.1 (38.8) 0.59 6.0
3-35 66.1/11.1 50.4 (76.5) 20.2 (61.8) 0.46 4.7
5-47 76/.1/11.6 53.7 (71.7) 17.3 (72.2) 1.5 6.3
5-48 69.0/9.0 75.5 (51.1) 17.4 (71.7) 0.68 8.3
7-59 ND 69.4 (55.5) 33.7 (37.0) 2.9 14.8
7-60 ND 64.5 (59.7) 40.8 (30.6) 2.1 14.9
8-71 67.7/8.6 81.7 (47) 41.9 (30) 0.44 6.1
8-72 80.8/8.4 79.1 (49) 35.9 (35) 1.5 7.7
9-74 36.1/4.4 57.5 (67.0) 22.7 (54.9) 4.1 57.7
10-75 46.8/3.9 40.8 (94.4) 27.2 (45.9) 58.1 467
13-84 64.4/7.6 111.9 (34) 58.9 (21) 0.61 5.9
13-85 69.7/6.0 75.7 (51) 58.3 (21) 2.6 36.2
14-91 67.8/5.6 63.4 (60.8) 46.5 (26.8) 1.4 17.6
14-92 69.1/4.5 51.3 (75.1) 19.2 (65.0) 1.2 14.2
16-95 63.1/5.5 29.6 (130) 25.4 (49.1) 1.3 13.7
17-96 62.6/4.3 47.1 (82) 71.3 (17.5) 2.1 22
Dxd：德魯替康；HHEP Cl：人肝細胞固有清除，mL/min/Kg；HHEP t 1/2，min。HLM：人肝微粒體清除，mL/min/Kg。ND：未判定。 實例28
藉由採用使用以下三種策略的抗體開發活動，開發新穎及多樣化的抗ROR-1特異性單株抗體，以結合至ROR-1胞外域(ECD)的多個區域：(1)使用全長ROR-1 ECD對群組1之小鼠進行免疫；(2)用ROR-1 IgG樣域對群組2及3之小鼠進行免疫；及(3)用ROR-1的人IgG樣序列的短區域對群組4之小鼠進行免疫。在免疫小鼠後，使用習知方法產生單株抗體。簡言之，將來自融合瘤及噬菌體展示活動的獨特可變重鏈及輕鏈對選殖至載體中，該等載體被設計成在CMV啟動子的控制下在HEK293細胞中以IgG形式表現全長抗體。將抗體表現載體與聚乙烯亞胺複合且轉染至HEK293培養物中。在293細胞培養基中在37℃下搖動5天之後，抗體被捕捉在基於瓊脂糖的蛋白A樹脂上。數次嚴格洗滌後，將抗體在甘胺酸溶液(pH 3)中洗提，用Hepes (pH 9)中和，且將緩衝液交換成PBS。
使用該等方法開發了數種單株抗體，並且對產生的抗體進行額外的篩選以評估抗體的特異性特征。為完全評估新穎抗體之特徵，進行了若干次檢定。首先，以生物化學方式以及ROR-1陽性細胞系確認了抗體與ROR-1表位的結合。藉由篩選與人ROR-2蛋白、齧齒動物ROR-1蛋白的結合，以及在基於細胞的檢定中，以生物化學方式評估結合的特異性。進一步的篩選參數包括分析抗體內化、針對已知抗ROR-1抗體（UC961及4a5）的表位分級、與人ROR-1 Ig樣域的結合、熱移位、以及用親和力-捕捉自我交互作用奈米粒子光譜法(AC-SINS)評估自我交互作用。 實例29
開發了細胞結合飽和檢定以評估實例28中開發的抗ROR-1抗體與細胞系上內源表現的細胞外ROR-1蛋白結合的程度。更具體而言，在細胞結合檢定中分析了實例E中開發的抗ROR-1單株抗體，例如ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890。簡言之，將兩個ROR-1陽性細胞系，JeKo-1及MDA-MB-468，在滴定系列濃度的各抗體構築體中培養。然後洗滌細胞並進行二級抗體染色及流動式細胞測量術偵測。藉由細胞儀軟體分析判定平均螢光(MFI)。將ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的結合與單株抗ROR-1抗體UC961的細胞結合飽和資料進行比較。（ 參見圖 27）。如 圖 27所示，抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的細胞結合飽和度可與UC961的細胞結合飽和度相當，然而與UC961相比，需要更高濃度的ATX-P-875來達到飽和。在達到結合飽和度所需的濃度方面，ATX-P-890及ATX-P-885分別與UC-961一樣好或得到改善。與UC961相當的飽和度表明，抗ROR-1抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890與臨床批准的抗體UC-961一樣，對人ROR-1標靶具有相似的親和力。 實例30
在結合檢定中判定飽和濃度(74 nm)後，評估本文開發的抗ROR-1抗體（ATX-P-875、P-885、P-890）內化人ROR-1陽性細胞（JeKo-1及MDA-MB-468）上ROR-1受體的能力。簡言之，ROR陽性細胞系在過飽和條件下與抗體一起培養，以便結合所有可用的ROR-1受體。洗去多餘的抗體，且將細胞在37℃下培養指定的時間，歷經四小時的製程。在每一時間點結束時，藉由將細胞等分試樣置放於冰上來停止內化。使用經標記之二級抗體及流動式細胞測量術偵測表面上剩餘之抗體。基於時間零點計算內化百分比，且時間零點假設100%的可用受體位於細胞表面上。 圖 28中的結果表明，所有抗體歷經4小時將JeKo-1及MDA-MB-468細胞上的ROR-1受體內化至少75%。出乎意料的是，在MDA-MB-468中，兩種抗ROR-1抗體（ATX-P-875及ATX-P-890）的內化相對於臨床使用的UC961抗ROR-1抗體得到改善，從而提供了ATX-P-875及ATX-P-890抗體具有改善的內化來自實性瘤表面的ROR-1受體的能力的證據。 實例31
亦使用細胞分級來判定單株抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890是否與習知已知的抗ROR-1結合單株抗體UC961及4A5（對照）結合至相同的表位。在細胞分級實驗之步驟1中，將ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890單株抗體分別與不同量的ROR-1表現細胞(MDA-MB-468)一起培養。在步驟2中，將識別新穎抗體的螢光標記的二級抗體與樣本一起培養。最後在步驟3中，將用ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890包被的ROR-1表現細胞與飽和劑量的標記的UC961 (Dy650-UC 961)或4A5抗體(PE 4A5)一起培養，并藉由流動式細胞測量術進行分析。然後將UC961及4A5染色訊號與新穎抗體染色訊號進行比較，以判定ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890抗體是否與已知的ROR-1結合抗體UC961及4A5結合相同的表位。下面的 圖 29A顯示了ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890抗體與UC961及4A5抗體結合相同的表位時預期的染色概況。 圖 29B顯示了ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890抗體在ROR-1上結合不同於UC961或4A5抗體的表位時的預期概況。簡言之，若結合相同的表位，增加的新穎抗體濃度將阻斷預先標記的競爭抗體的結合，從而降低較高濃度下競爭抗體的訊號。在抗體結合不同表位的情況下，每種抗體，新穎的及競爭的，將隨著劑量的增加而增加染色，因為無與受體結合的競爭。在MDA-MB-468細胞中獲得的細胞分級資料表明，ATX-P-885明顯與UC961結合相同的表位，且ATX-P-875及ATX-P-890兩者明顯與4A5結合相同的表位。（參見 圖 29C 、圖29D及 圖 30）。本文開發的抗體結合不同ROR-1表位的能力提供了以多種方式調節標靶的機會。 實例32
與對照抗ROR-1抗體UC961及4a5相比，還針對抗ROR1抗體（ATX-P-875、P-885、P-890）評估了藉由SPR進行的生化分級。在該等實驗中，將10ug/ml純化的Hu/Cy/Rh ROR1-His殖株蛋白與HC30M晶片共價耦合。將10 µg/mL的每種抗體的個別稀釋液注射至晶片上，並且藉由Carterra SPR評估結合。出乎意料的是，資料證明在ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890之間存在3個不同的結合表位，其中ATX-885係唯一給予UC961抗體部分阻斷的抗體（參見 圖 31）。細胞分級僅評估了抗體阻斷UC961或4a5（兩種臨床使用的ROR-1抗體）的能力。生化SPR評價亦測試了抗體相互阻斷的能力，且發現ATX-P-875能夠阻斷4a5以及ATX-P-885的結合，但仍然不能阻斷UC961。 實例33
與UC961相比，ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的抗體表征總結於 圖 30及表2至表7中。藉由AC-SINS進行抗體可開發性的初步評估，以評估自我交互作用的可能性（ 圖 30）。對照抗體阿達木單抗及利妥昔單抗顯示預期的低移位，且英夫利昔單抗顯示預期的高移位。本文開發的抗ROR-1抗體，ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890，與對照抗體一致，該等對照抗體不顯示顯著的自我交互作用，並且不可能造成顯著的可開發性風險。此外，在額外的實驗中，將單株抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的結合特性與UC961的結合特性進行了比較。表2至表5提供了與已知ROR-1結合抗體UC961比較的抗體表徵資料，包括與純化蛋白的生化結合及藉由SPR測量的表列結果（表2至表5），與ROR-1陽性細胞系JeKo-1及MDA-MB-468的細胞結合(EC50)（表6），及細胞內化（%內化）（表7）。特別值得注意的是，據信與UC961及其他抗ROR-1抗體（ATX-P-875及ATX-P-890）相比，ATX-P-885（KD：1.09E-08）的親和力降低可以提供意想不到的治療益處。預期藉由不太緊密地結合至ROR-1表位，ATX-P-885抗體可以進一步刺透至腫瘤中，到達更遠處的表現ROR-1標靶的細胞。
表2：人/食蟹獼猴(CYNO)/恆河獼猴(Rhesus) ROR-1結合
Hu/Cy/Rh ROR1 - His
名稱 k a(M-1 s-1) k d(s-1) K D(M) Rmax (RU) Res SD % Rmax
ATX-P-453 (UC961) 1.26E+06 5.91E-03 4.69E-09 529.0 25.6 4.85%
ATX-P-875 4.93E+05 3.16E-03 6.45E-09 593.6 22.3 3.76%
ATX-P-885 2.70E+05 2.95E-03 1.09E-08 341.6 10.2 2.99%
ATX-P-890 3.92E+05 3.14E-03 8.40E-09 504.2 15.0 2.97%
小鼠ROR1 - His
名稱 k a(M-1 s-1) k d(s-1) K D(M) Rmax (RU) Res SD % Rmax
ATX-P-453 (UC961) N/A N/A N/A N/A N/A N/A
ATX-P-875 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
ATX-P-885 2.92E+04 1.32E-03 4.53E-08 73.5 8.9 12.14%
ATX-P-890 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
表3：小鼠ROR-1結合
表4：大鼠ROR-1結合
大鼠ROR1 - His
k a(M-1 s-1) k a(M-1 s-1) k d(s-1) K D(M) Rmax (RU) Res SD % Rmax
N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
表5：人ROR-2結合
人ROR2/NTRKR2-His
名稱 k a(M-1 s-1) k d(s-1) K D(M) Rmax (RU) Res SD % Rmax
ATX-P-453 (UC961) N/A N/A N/A N/A N/A N/A
ATX-P-875 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
ATX-P-885 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
ATX-P-890 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
表6：細胞結合概述
細胞結合概述
名稱 JeKo-1 （平均EC50 ） MDA-MB-468 （平均EC50 ）
ATX-P-453 (UC961) 0.073 0.176
ATX-P-875 0.145 0.708
ATX-P-885 1.075 2.508
ATX-P-890 0.174 1.016
表7：細胞結合概述
細胞內化概述
名稱 JeKo-1 （平均EC50 ） MDA-MB-468 （平均EC50 ）
ATX-P-453 (UC961) 0.073 0.176
ATX-P-875 0.145 0.708
ATX-P-885 1.075 2.508
ATX-P-890 0.174 1.016
實例34
如本實例所述完成免疫接合物的合成。如實例28中所述產生抗體，并懸浮於pH 7.2的PBS中，蛋白質濃度如下：12.44 mg/ml的mAb A，13.29 mg/ml的mAb B，14.90 mg/ml的mAb C。對於還原及結合計算，所有抗體的分子量皆係150000Da。
藉由加入5% v/v的500 mm Tris、25 mm EDTA，pH 8.5，隨後加入TCEP（6當量，10 mm的水中的TCEP儲備溶液）來製備用於還原的每種抗體，且將混合物在20℃保持2h。
在加入DMA并與上述還原的蛋白質溶液溫和混合以在接合期間達到最終10% v/v後，加入毒素-連接子儲備溶液（12當量，50 mm在DMA中）並且溫和混合。使生物接合在20℃過夜進行約16至20h；該反應在2h內完成，延長了使馬來醯亞胺開環的時間。
使用重力進料NAP 25（小規模）或流式HiPrep G25（大規模）將粗接合物緩衝液交換至PBS pH 7.4，其中根據製造商(Cytivia)的說明製備及操作管柱。為了去除殘留的毒素，製備100 mg/ml活性炭(Sigma/C9157)在PBS pH 7.4中的漿液，並且加入以達到1 mg碳對1 mg起始抗體質量。將其溫和混合2h，足以將碳維持在懸浮液中。接著，藉由在4000 g下離心去除碳。從在PBS pH7.4中的10% w/v儲備溶液中加入聚山梨醇酯20 (PS20)，以在產品中實現最終0.02% PS20 w/v。將ADC最終在A級層流下藉由合適尺寸的0.2 µm PES過濾器（直接層析法/FIL-S-PES-022-13-100-S）過濾。最終產物如下分析：單體及[ADC] mg/ml係藉由SEC HPLC，平均DAR係藉由PLRP，殘餘毒素係藉由RP-HPLC，且內毒素係藉由Endosafe動力學顯色。
分析程序在HPLC儀器Agilent 1100或1260上使用下文及表8及表9中列出的協定進行。 SEC-HPLC-單體含量及ADC濃度(mg/mL)
管柱：TOSOH TSKgel G3000SWXL 7.8 mm x 30 cm 5 µm粒子(MERCK808541)與帶有GFC3000 4x3 mm盒(Phenomenex)的安全保護管柱(MERCK 822858)相結合 緩衝液：0.2M磷酸鹽0.25M KCl 10% IPA pH 6.95 ± 0.1 梯度：等度，以0.5 mL/min在25℃下 樣本裝載量係約10 µg，其中單體及濃度由214 nm訊號判定。基於峰積分報告單體以及基於抗體的校準曲線報告[ADC] mg/mL。 PLRP-HPLC-DAR判定
管柱：PLRP-S 2.1 mmx5 cm, 5 µm (Agilent PL912-1502) 流動相A：0.1%v/v TFA於水中 流動相B：0.1%v/v TFA於ACN中。 梯度：在50℃下以1 mL/min 樣本裝載量係2 µg且在214 nm下分析。
表8
時間 %B
0.00 30
2.00 30
10.00 41
11.50 90
15.50 90
16.50 30
20.00 30
殘餘毒素
管柱Kinetex ®2.6 µm C8 100 Å、LC管柱50 x 4.6 mm (Phenomex 00B-4497-E0) 流動相A 0.05% TFA於水中 流動相B 0.05% TFA於ACN中 梯度：在60℃下以2 mL/min
表9
時間 %B
0.00 5
8.00 95
8.10 100
9.00 100
9.10 5
10.00 5
分析樣本製備：將樣本（50 µl，ADC或PBS/PS20基質）用2 µl 5M NaCl、150 µl冷MeOH（來自-20℃冰箱）稀釋，在-20℃下培養30 min，並且在4℃下以21,000 g離心30 min。然後，萃取上清液(125 µl)並與125 µl WFI混合，將其中的100 µl注射至Kinetex管柱上。在214 nm下分析資料，並且從相關毒素連接子的外部校準曲線估計樣本中的殘留毒素。使用ADC濃度及計算的DAR將結果表示為遊離相對於遊離及結合的百分比，以判定結合毒素的量。 實例35
藉由CTG檢定以與實例24中描述的用於篩選酬載的類似方式評估新穎ROR-1抗體藥物接合物(ADC)。將總共3種獨特的抗體（mAb A = 875，mAb B = 885，mAb C = 890）與6種不同的新穎連接子/酬載（18-112、19-113、20-114、21-120、22-121及23-122）接合（ 圖 32 ）。簡言之，將ROR+ (JeKo-1/MDA-MB-468)或ROR- (Ramos)細胞轉移至96孔且用從1 mm至0.0000508 mm（10點稀釋）的三倍連續稀釋的ADC處理72h。按照製造商的說明用CellTiter-Glo ®發光細胞存活力檢定法(Promega)分析細胞存活力 （圖 33 ）。藉由用媒劑對照的發光進行標準化來判定每種ADC濃度的活細胞百分比，并藉由在GraphPad Prism軟體中的非線性擬合繪製成存活力百分比對劑量反應曲線。每一ADC的IC50被計算為殺滅50%的細胞的化合物濃度。代表性的檢定結果總結在表10中。在ROR+細胞系中，與VLS-101相比，含有22-121、21-120及23-122的ADC的效力增加了約4倍。體外資料還證明，單株mAb A (ATX-P-875)比其他2種ROR-1靶向抗體B及C（分別係ATX-P-885及ATX-P-895）略強。
表10：
ADC#/毒素 mAb       毒素連接子 Jeko-1 P3 (RUN1) IC50 nM Jeko-1 P4 (RUN2) IC50 nM 平均IC50 nM
1 A       18-122 87.1 113.2 100.1
2 A       21-120 14.8 19.0 16.9
3 B       18-122 128.0 183.9 156.0
4 B       21-120 23.4 37.3 30.3
5 C       18-112 146.1 197.3 171.7
6 C       21-120 22.6 29.4 26.0
7 UC-961       18-112 181.2 218.2 199.7
8 UC-961       21-120 28.3 40.5 34.4
9 A       19-113 146.3 164.4 155.4
10 A       22-121 11.2 12.7 11.9
11 B       19-113 172.1 197.2 184.7
12 B       22-121 17.1 18.3 17.7
13 C       19-113 177.0 212.4 194.7
14 C       22-121 19.7 19.1 19.4
15 A       20-114 115.4 120.8 118.1
16 A       23-122 13.6 16.3 14.9
17 B       20-114 112.2 106.2 109.2
18 B       23-122 23.4 24.9 24.1
19 C       20-114 119.1 126.5 122.8
20 C       23-122 22.2 29.8 26.0
21 UC-691       23-122 25.1 31.0 28.1
VLS-101    mc-vc-PAB MMAE    63.4 56.8 60.1
MMAE       0.2 0.2 0.2
Dxd       0.9 0.9
5-48       0.5 0.5 0.5
9-74       2.4 3.7 3.1
此外，雖然前述已藉由說明和示例之方式稍微詳細地描述以達清晰及理解之目的，所屬技術領域中具有通常知識者將理解可進行各式各樣的改良而不背離本揭露之精神。因此，應清楚理解在本文中揭示之形式僅用以說明，且並非意欲限制本揭露之範疇，而是亦涵蓋伴隨本揭露之真實範疇及精神而來的所有修改及替代方案。
序列表 SEQ ID NO: 1 ATX-P-875 VH CDR1 (Kabat) GFTFSNAW SEQ ID NO: 2 ATX-P-875 VH CDR2 (Kabat) IKSKTDGGTT SEQ ID NO: 3 ATX-P-875 VH CDR3 (Kabat) TTGPDDLDY SEQ ID NO: 4 ATX-P-875 VH nt GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAAGCAAAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAAACACGCTCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACCACAGGCCCTGACGATCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCCGGTCACCGTCTCCTCA SEQ ID NO: 5 ATX-P-875 VH AA EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTGPDDLDYWGQGTPVTVSS SEQ ID NO: 6 ATX-P-875 HC IgG1-Fc nt GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAAGCAAAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAAACACGCTCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACCACAGGCCCTGACGATCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCCGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACTAAAGGGCCTTCTGTATTTCCCTTGGCCCCGTCCAGCAAATCGACCTCGGGAGGGACAGCCGCCCTGGGTTGCCTTGTGAAAGATTATTTCCCTGAGCCAGTTACCGTAAGTTGGAACAGTGGGGCGCTGACAAGTGGTGTGCACACGTTTCCTGCCGTCCTGCAATCATCGGGCTTGTATAGCCTCAGCTCTGTGGTCACTGTCCCAAGTTCATCGCTGGGCACTCAGACGTATATTTGCAATGTGAACCACAAACCTTCAAATACAAAAGTGGATAAACGCGTAGAACCGAAATCGTGTGATAAAACTCACACATGCCCGCCATGCCCGGCACCTGAACTGCTTGGTGGTCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCGCCGAAGCCTAAAGATACTCTAATGATCAGCCGTACGCCAGAGGTGACATGTGTCGTGGTTGACGTGTCCCACGAAGATCCCGAAGTTAAGTTCAATTGGTATGTTGATGGTGTAGAGGTACACAATGCTAAGACTAAACCTCGCGAGGAGCAGTACAATTCGACCTATCGTGTCGTGAGCGTTCTGACCGTCCTTCACCAAGATTGGCTTAACGGCAAAGAATATAAGTGCAAGGTAAGCAATAAAGCACTTCCGGCCCCAATCGAGAAAACCATTTCCAAGGCCAAAGGTCAACCAAGAGAACCCCAGGTGTATACTCTTCCGCCTTCTCGTGAGGAAATGACTAAAAATCAAGTATCCCTTACGTGTCTGGTTAAAGGTTTTTATCCTAGCGATATTGCTGTTGAATGGGAATCGAACGGTCAGCCGGAGAATAATTATAAAACAACGCCACCCGTCCTGGATAGCGACGGCTCATTTTTTCTGTATAGCAAACTGACTGTAGATAAATCACGGTGGCAGCAGGGCAATGTATTCAGTTGCTCCGTTATGCATGAAGCGTTACATAATCACTACACGCAGAAATCTCTTAGTCTTTCACCCGGT 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CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGAGGGTGTCTACGAGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACTAAAGGGCCTTCTGTATTTCCCTTGGCCCCGTCCAGCAAATCGACCTCGGGAGGGACAGCCGCCCTGGGTTGCCTTGTGAAAGATTATTTCCCTGAGCCAGTTACCGTAAGTTGGAACAGTGGGGCGCTGACAAGTGGTGTGCACACGTTTCCTGCCGTCCTGCAATCATCGGGCTTGTATAGCCTCAGCTCTGTGGTCACTGTCCCAAGTTCATCGCTGGGCACTCAGACGTATATTTGCAATGTGAACCACAAACCTTCAAATACAAAAGTGGATAAACGCGTAGAACCGAAATCGTGTGATAAAACTCACACATGCCCGCCATGCCCGGCACCTGAACTGCTTGGTGGTCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCGCCGAAGCCTAAAGATACTCTAATGATCAGCCGTACGCCAGAGGTGACATGTGTCGTGGTTGACGTGTCCCACGAAGATCCCGAAGTTAAGTTCAATTGGTATGTTGATGGTGTAGAGGTACACAATGCTAAGACTAAACCTCGCGAGGAGCAGTACAATTCGACCTATCGTGTCGTGAGCGTTCTGACCGTCCTTCACCAAGATTGGCTTAACGGCAAAGAATATAAGTGCAAGGTAAGCAATAAAGCACTTCCGGCCCCAATCGAGAAAACCATTTCCAAGGCCAAAGGTCAACCAAGAGAACCCCAGGTGTATACTCTTCCGCCTTCTCGTGAGGAAATGACTAAAAATCAAGTATCCCTTACGTGTCTGGTTAAAGGTTTTTATCCTAGCGATATTGCTGTTGAATGGGAATCGAACGGTCAGCCGGAGAATAATTATAAAACAACGCCACCCGTCCTGGATAGCGACGGCTCATTTTTTCT 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DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPPTFGPGTKVEIK SEQ ID NO: 41 ATX-P-890 κ LC nt GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATCTCCCTCCCACTTTCGGCCCTGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCTGCCCCTTCAGTTTTTATCTTTCCGCCGTCTGACGAGCAGTTAAAATCCGGGACCGCTTCTGTAGTTTGCCTGCTGAATAATTTTTATCCGCGTGAGGCTAAAGTACAATGGAAAGTCGACAATGCTTTGCAGTCGGGAAATTCACAGGAAAGTGTTACGGAGCAGGATTCTAAAGATTCCACATATTCACTCAGCTCCACCCTTACACTGAGCAAAGCCGACTATGAAAAACATAAAGTTTACGCATGTGAGGTGACGCACCAAGGATTATCCAGTCCGGTCACAAAATCGTTTAACCGCGGTGAGTGT SEQ ID NO: 42 ATX-P-890 κ LC AA DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPPTFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
［ 圖 1］繪示了曲妥珠單抗德魯替康抗體藥物接合物。 ［ 圖 2］繪示了用於製作式(IV)之化合物之反應方案。在酸性或鹼性水解條件下，由IV-1形成IV-2。IV-2與IV-3之弗裡德蘭德(Friedlander)反應得到IV-4。移除IV-4中之保護基(Pg)，得到IV-5。IV-5歷經烷化、酯化或醯胺化以得到IV。 ［ 圖 3］繪示了用於製作式(IV-1a)之化合物之反應方案。IV-6與IV-7之間的赫克(Heck)反應得到IV-8。IV-8歷經氫化以得到IV-9，其經水解得到IV-10。IV-10之分子內傅-克(Friedel-Crafts)反應形成IV-11a。IV-11a歷經α烷化得到IV-12，其用α-羥基化或α-胺化條件處理得到IV-1a（當n 5= 0時）。 ［ 圖 4］繪示了用於製作式(IV-1b)之化合物之反應方案。IV-11b之去氫化得到IV-13。IV-13歷經邁克爾(Michael)反應然後進行去氫化，得到IV-14。IV-14使用含氧或氮的親核劑歷經邁克爾反應，得到IV-1b（當n 5= 1時）。 ［ 圖 5］繪示了用於製作式(III)之接合物的反應方案，其包含將鍵聯部份附接至式(IV)之化合物。IIIA-1與IIIA-2在加熱條件下反應得到IIIA-3。IIIA-3與N-羥基琥珀醯亞胺反應得到IIIA-4。IIIA-4與IIIA-5之反應得到IIIA-6。IIIA-6與IIIA-7在醯胺耦合條件下反應，得到IIIA-8。 ［ 圖 6］繪示了用於製作IIIA-13之反應方案。IIIA-9與N-羥基琥珀醯亞胺(IIIA-10)反應得到IIIA-11，其與IIIA-12反應得到IIIA-13。 ［ 圖 7］繪示了用於製作IIIA-5之反應方案。IIIA-14與Pb(OAc) 4反應得到IIIA-15。在NaOH存在下處理IIIA-15及IIIA-16得到IIIA-17。將IIIA-17用DBU處理得到IIIA-18，其與IIIA-19耦合得到IIIA-20。IIIA-20之氫化得到IIIA-5。 ［ 圖 8］繪示了用於製作IIIB-4之反應方案。IIIA-4與IIIB-1在鹼基存在下反應得到IIIB-2，其與4-胺基芐醇及EEDQ反應以產生IIIB-3。用4-硝基苯基氯甲酸處理IIIB-3得到IIIB-4。 ［ 圖 9］繪示了用於製作IIIB-13之反應方案。IIIB-5與DHP反應產生IIIB-6。IIIB-6與草醯氯及催化性DMF反應產生IIIB-7。IIIB-7與IIIA-7之反應得到IIIB-8，其與4-硝基苯基氯甲酸反應得到IIIB-9。IIIB-9與IIIB-10在鹼基存在下反應得到IIIB-11。將IIIB-11用TFA處理得到IIIB-12。IIIB-12與IIIB-4之在鹼基存在下組合得到IIIB-13。 ［ 圖 10］繪示了用於製作IIIC-7之反應方案。IIIC-1與Pb(OAc) 4反應產生IIIC-2，其在ZnCl 2存在下與IIIC-3反應得到IIIC-4。將IIIC-4用DBU處理得到IIIC-5。IIIC-5與IIIA-3之醯胺耦合得到IIIC-6，其與HF·吡啶反應得到IIIC-7。 ［ 圖 11］繪示了用於製作式(I)之免疫接合物的反應方案，其包含將Ab附接至式(III)之接合物。來自抗體之半胱胺酸的硫醇基與式III中的馬來醯亞胺的邁克爾反應產生式I。 ［ 圖 12］繪示了用於製作化合物 1-14之反應方案。 ［ 圖 13］繪示了用於製作化合物 2-30之反應方案。 ［ 圖 14］繪示了用於製作化合物 3-34及 3-35之反應方案。 ［ 圖 15］繪示了用於製作化合物 4-36及 4-37之反應方案。 ［ 圖 16］繪示了用於製作化合物 5-47及 5-48之反應方案。 ［ 圖 17］繪示了用於製作化合物 3-34及 3-35之反應方案。 ［ 圖 18］繪示了用於製作化合物 7-59及 7-60之反應方案。 ［ 圖 19］繪示了用於製作化合物 8-71及 8-72之反應方案。 ［ 圖 20］繪示了用於製作化合物 9-74之反應方案。 ［ 圖 21］繪示了用於製作化合物 11-80之反應方案。 ［ 圖 22］繪示了用於製作化合物 13-84及 13-85之反應方案。 ［ 圖 23］繪示了用於製作化合物 14-91及 14-92之反應方案。 ［ 圖 24］繪示了用於製作化合物 15-94之反應方案。 ［ 圖 25］繪示了用於製作化合物 18-112之反應方案。 ［ 圖 26］繪示了用於製作化合物 21-120之反應方案。 ［ 圖 27］繪示了藉由本文所述方法產生的抗ROR-1抗體的細胞結合飽和度資料的測量。將ROR-1陽性細胞系JeKo-1在滴定系列中與抗ROR-1抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890一起培養，與陽性對照抗體UC961進行比較。洗滌細胞，用二級抗體染色，藉由流動式細胞測量術偵測細胞結合飽和度，並被以平均螢光強度(MFI)記述。 ［ 圖 28］繪示了抗ROR-1抗體ATX-875、ATX-P -885、ATX-P -890的ROR-1受體內化資料。將ROR-1陽性細胞系JeKo-1及MDA-MB-468與抗ROR-1抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890以及陽性對照抗體UC961在超飽和條件下培養，以便結合所有可用的ROR-1受體。將細胞洗滌且在37℃下在4個不同的時間點（30 min、1小時、2小時及4小時）培養，然後藉由將細胞置於冰中停止內化。受體內化藉由流動式細胞測量術判定，且被以相對於零小時的受體內化百分比記述。 ［ 圖 29A］ 至［ 圖 29D］繪示了抗ROR-1抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的細胞分級資料。進行細胞分級檢定以評估ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890是否與對照抗體UC961及4A5結合ROR-1受體上的相同表位。(29A)描繪了結合相同表位之抗體之染色概況。(29B)描繪了結合不同表位之抗體之染色概況。將ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890分別與不同量的ROR-1_+ MDA-MB-468一起培養。接下來，用二級抗體螢光標記抗ROR-1抗體。最後，將用抗ROR-1抗體包被的MDA-MB-468細胞與飽和劑量的螢光標記的UC961 (29C)或4A5 (29D)一起培養，並且藉由流動式細胞測量術進行分析，且將ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890抗體訊號與UC961或4A5訊號進行比較。 ［ 圖 30］繪示了抗ROR-1抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的AC-SINS資料。藉由執行AC-SINS檢定並評價自我交互作用之可能性來評估抗體可開發性。使用利妥昔單抗及英夫利昔單抗作為對照來分別證明低移位及高移位。ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的檢定結果在藉由對照抗體所判定之範圍內。 ［ 圖 31］繪示了藉由針對抗ROR1抗體ATX-P-875、ATX-P-885、ATX-P-890與對照抗ROR-1抗體UC961（ATX-P-453）及4a5相比之SPR得到的生化分級資料。 ［ 圖 32］繪示了與3種獨特抗體（mAb A = ATX-P-875，mAb B = ATX-P-885，mAb C = ATX-P-890）接合的連接子及酬載組合。抗體，mAb A (ATX-P-875)、mAb B (ATX-P-885)及mAb C (ATX-P-890)與6個不同的新穎連接子/酬載（18-112、19-113、20-114、21-120、22-121、23-122）接合以建立抗體藥物接合物(ADC)。 ［ 圖 33］繪示了CTG檢定，其中ROR+ (JeKo-1)細胞與如 圖 32所述產生的ADC以連續三倍稀釋一起培養，並在72小時後評估細胞存活力。 ［ 圖34］繪示了抗ROR-1抗體ATX-P-875、ATX-P-885及ATX-P-890的核苷酸及胺基酸序列。
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Figure 111126719-A0304-11-0002-1

Claims (113)

  1. 一種免疫接合物，其具有式(I)， Ab-[S-L 1- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D] n(I) 其中： Ab係抗體或抗原結合片段； L 1係
    Figure 03_image001
    ； L 2不存在、係
    Figure 03_image003
    或
    Figure 03_image005
    ； Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基； L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–或–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–； n 1獨立地係0至12之整數； L 4係四肽殘基； L 5不存在或係–[NH(CH 2)n 2]n 3–； n 2係0至6之整數； n 3係0至2之整數； L 6不存在、或係
    Figure 03_image007
    ； L 7不存在、係
    Figure 03_image228
    ； D係藥物部份；且 n係1至10之整數。
  2. 如請求項1之免疫接合物，其中L 2不存在。
  3. 如請求項1之免疫接合物，其中L 2係
    Figure 03_image003
    。
  4. 如請求項1之免疫接合物，其中L 2係
    Figure 03_image005
    。
  5. 如請求項1至4中任一項之免疫接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係氫。
  6. 如請求項1至4中任一項之免疫接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係鹵素。
  7. 如請求項1至4中任一項之免疫接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係NO 2。
  8. 如請求項1至4中任一項之免疫接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係–O–(C 1-C 6烷基)。
  9. 如請求項1至4中任一項之免疫接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係C 1-C 6烷基。
  10. 如請求項1至9中任一項之免疫接合物，其中L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–。
  11. 如請求項1至9中任一項之免疫接合物，其中L 3係–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–。
  12. 如請求項1至11中任一項之免疫接合物，其中L 4係gly-gly-phe-gly (GGFG)。
  13. 如請求項1至11中任一項之免疫接合物，其中L 5不存在。
  14. 如請求項1至11中任一項之免疫接合物，其中L 5係–[NH(CH 2)n 2]n 3–。
  15. 如請求項1至14中任一項之免疫接合物，其中L 6不存在。
  16. 如請求項1至14中任一項之免疫接合物，其中L 6係
    Figure 03_image007
    。
  17. 如請求項1至16中任一項之免疫接合物，其中L 7不存在。
  18. 如請求項1至16中任一項之免疫接合物，其中L 7係
    Figure 03_image064
    。
  19. 如請求項1至16中任一項之免疫接合物，其中L 7係
    Figure 03_image066
    。
  20. 如請求項1至16中任一項之免疫接合物，其中L 7係
    Figure 03_image068
    。
  21. 如請求項1至20中任一項之免疫接合物，其中D係式(II)之藥物部份，其具有以下結構：
    Figure 03_image011
    (II) 其中： R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環； R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、或經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2； X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–； X 2係–OR 9、-SR 9、或-NHR 9； R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； m係1或2； n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0； n 6係0、1或2； 各Y獨立地係H或鹵素； 各p獨立地係1、2、3、4、5、或6； 各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6； 各t獨立地係1、2、3、4、5、或6； R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7； R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3； R 9係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7，其限制條件係R 7及R 9中僅一者係L 4、L 5、L 6、或L 7；且 各X 3獨立地係–H、–OH、–SH、或–NH 2。
  22. 如請求項21之免疫接合物，其中該藥物部份係依喜替康。
  23. 如請求項1至22中任一項之免疫接合物，其中Ab特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)。
  24. 如請求項1至23中任一項之免疫接合物，其中Ab結合至癌細胞表面。
  25. 如請求項1之免疫接合物，其中式(I)選自
    Figure 03_image126
    、
    Figure 03_image128
    、
    Figure 03_image130
    、
    Figure 03_image132
    、
    Figure 03_image134
    、
    Figure 03_image136
    、
    Figure 03_image243
    、
    Figure 03_image245
    Figure 03_image247
    Figure 03_image249
    Figure 03_image251
    Figure 03_image253
    、
    Figure 03_image255
    Figure 03_image257
    Figure 03_image259
    、及
    Figure 03_image156
    ； 其中Z 1及Z 2各自獨立地選自氫、氟基、氯基、–NO 2、及–OCH 3。
  26. 一種式(IV)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，該化合物具有以下結構：
    Figure 03_image011
    (IV) 其中： R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環； R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、或經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2； X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–； X 2係–OH、–SH、或–NR 5R 6； R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 7係H、–COR 8、–CO 2R 8、或–(CO)-NHR 8； R 8係經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； m係1或2； n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0； n 6係0、1或2；且 各Y獨立地係H或鹵素； 各p獨立地係1、2、3、4、5、或6； 各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6；且 各t獨立地係1、2、3、4、5、或6； 其限制條件係式(IV)不表示德魯替康或依喜替康。
  27. 如請求項26之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2中之至少一者係氫。
  28. 如請求項26或27之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2中之至少一者係鹵素。
  29. 如請求項26至28中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。
  30. 如請求項26至29中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基。
  31. 如請求項26至30中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2中之至少一者係經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)。
  32. 如請求項26至31中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2係經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。
  33. 如請求項26之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氟基、甲氧基、甲基、二氟甲基、及–O-(CH 2)–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環。
  34. 如請求項26至33中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係氫。
  35. 如請求項26至33中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係經取代或未經取代C 1-C 6烷基。
  36. 如請求項35之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 3係甲基。
  37. 如請求項26至36中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 4係氫。
  38. 如請求項26至36中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 4係經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2。
  39. 如請求項38之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中該–(C 1-C 6烷基)-X 2係支鏈的。
  40. 如請求項38或39之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R 4係未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2。
  41. 如請求項26至40中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中X 1係–O–。
  42. 如請求項26至40中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中X 1係–NH–。
  43. 如請求項26至40中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中X 1係–NH-(C=O)–。
  44. 如請求項26至43中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中X 2係–OH。
  45. 如請求項26至44中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中式(IV)之該化合物由式(IVa)表示：
    Figure 03_image263
    (IVa)。
  46. 如請求項26至44中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中式(IV)之該化合物由式(IVb)表示：
    Figure 03_image032
    (IVb)。
  47. 如請求項26至44中任一項之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中式(IV)之該化合物由式(IVc)表示：
    Figure 03_image034
    (IVc)。
  48. 如請求項26之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中式(IV)之該化合物係
    Figure 03_image267
    Figure 03_image269
    Figure 03_image271
    Figure 03_image273
    Figure 03_image275
    Figure 03_image277
    Figure 03_image279
    、
    Figure 03_image281
    、
    Figure 03_image283
    Figure 03_image285
    Figure 03_image287
    。
  49. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至25中任一項之免疫接合物、如請求項26至48中任一項之化合物、或其醫藥上之活性鹽、及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑、或其組合。
  50. 一種用於治療癌症或腫瘤之方法，其包含向患有該癌症或該腫瘤之對象投予有效量之如請求項1至25中任一項之免疫接合物、如請求項26至48中任一項之化合物、或其醫藥上之活性鹽、或如請求項49之醫藥組成物。
  51. 如請求項50之方法，其中該癌症或該腫瘤選自肺癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸間質瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀細胞癌、腹膜癌、肝癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、外陰癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
  52. 一種有效量之如請求項1至25中任一項之免疫接合物、如請求項26至48中任一項之化合物、或其醫藥上之活性鹽、或如請求項49之醫藥組成物在製造用於治療癌症或腫瘤之藥劑中的用途。
  53. 如請求項52之方法，其中該癌症或該腫瘤選自肺癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸間質瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀細胞癌、腹膜癌、肝癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、外陰癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
  54. 一種接合物，其具有式(III)， Mi- L 2- L 3- L 4- L 5- L 6- L 7-D (III) 其中： Mi係
    Figure 03_image014
    ； L 2不存在、係
    Figure 03_image003
    或
    Figure 03_image005
    ； Z 1及Z 2各自獨立地係氫、鹵素、NO 2、–O–(C 1-C 6烷基)、或C 1-C 6烷基； L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–或–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–； n 1獨立地係0至12之整數； L 4係四肽殘基； L 5不存在或係–[NH(CH 2)n 2]n 3–； n 2係0至6之整數； n 3係0至2之整數； L 6不存在、或係
    Figure 03_image007
    ； L 7不存在、係
    Figure 03_image293
    ；且 D係藥物部份。
  55. 如請求項54之接合物，其中L 2不存在。
  56. 如請求項54之接合物，其中L 2係
    Figure 03_image003
    。
  57. 如請求項54之接合物，其中L 2係
    Figure 03_image005
    。
  58. 如請求項54至57中任一項之接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係氫。
  59. 如請求項54至57中任一項之接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係鹵素。
  60. 如請求項54至57中任一項之接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係NO 2。
  61. 如請求項54至57中任一項之接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係–O–(C 1-C 6烷基)。
  62. 如請求項54至57中任一項之接合物，其中Z 1及Z 2中之至少一者係C 1-C 6烷基。
  63. 如請求項54至62中任一項之接合物，其中L 3係–(CH 2)n 1-C(=O)–。
  64. 如請求項54至62中任一項之接合物，其中L 3係–(CH 2CH 2O)n 1-(CH 2)n 1C(=O)–。
  65. 如請求項54至64中任一項之接合物，其中L 4係gly-gly-phe-gly (GGFG)。
  66. 如請求項54至65中任一項之接合物，其中L 5不存在。
  67. 如請求項54至65中任一項之接合物，其中L 5係–[NH(CH 2)n 2]n 3–。
  68. 如請求項54至67中任一項之接合物，其中L 6不存在。
  69. 如請求項54至67中任一項之接合物，其中L 6係
    Figure 03_image007
    。
  70. 如請求項54至69中任一項之接合物，其中L 7不存在。
  71. 如請求項54至69中任一項之接合物，其中L 7係
    Figure 03_image064
    。
  72. 如請求項54至69中任一項之接合物，其中L 7係
    Figure 03_image066
    。
  73. 如請求項54至69中任一項之接合物，其中L 7係
    Figure 03_image068
    。
  74. 如請求項54至73中任一項之接合物，其中D係式(II)之化合物，其具有以下結構：
    Figure 03_image011
    (II) 其中： R 1及R 2各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、鹵素、–CN、–OR 5、–NR 5R 6、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6烷基)、經取代或未經取代–O–(C 1-C 6鹵烷基)、–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3、或經取代或未經取代–O-(CR 5R 6) m–O–，使得R 1及R 2合在一起形成環； R 3係氫或經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； R 4係氫、經取代或未經取代–(C 1-C 6烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烷基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵烯基)-X 2、經取代或未經取代–(C 1-C 6炔基)-X 2、或經取代或未經取代–(C 1-C 6鹵炔基)-X 2； X 1係–O–、–S(O n6)–、–NH–、–O-(C=O)–、–NH-(C=O)–、–NH-(C=O)-O–、–NH-(C=O)-NH–、或–NH-S(O n6)–； X 2係–OR 9、-SR 9、或-NHR 9； R 5及R 6各自獨立地係氫、鹵素、經取代或未經取代C 1-C 6烷基、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 3； m係1或2； n 4及n 5各自獨立地係0、1或2，其限制條件係n 4及n 5不都係0； n 6係0、1或2 各Y獨立地係H或鹵素； 各p獨立地係1、2、3、4、5、或6； 各q獨立地係0、1、2、3、4、5、或6； 各t獨立地係1、2、3、4、5、或6； R 7係H、-COR 8、-CO 2R 8、-(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7； 各R 8獨立地係經取代或未經取代C 1-C 6烷基-X 3、經取代或未經取代C 1-C 6鹵烷基-X 3、或–[(CY 2) pO(CY 2) q] tCY 2-X 3； R 9係H、–COR 8、–CO 2R 8、–(CO)-NHR 8、L 4、L 5、L 6、或L 7，其限制條件係R 7及R 9中僅一者係L 4、L 5、L 6、或L 7；且 各X 3獨立地係–H、–OH、–SH、或–NH 2。
  75. 如請求項54至74中任一項之接合物，其中式(III)選自
    Figure 03_image070
    、
    Figure 03_image072
    、
    Figure 03_image074
    、
    Figure 03_image076
    、
    Figure 03_image078
    、
    Figure 03_image080
    、
    Figure 03_image308
    、
    Figure 03_image084
    、
    Figure 03_image311
    、
    Figure 03_image313
    Figure 03_image315
    Figure 03_image317
    Figure 03_image319
    Figure 03_image321
    Figure 03_image323
    Figure 03_image325
    Figure 03_image102
    Figure 03_image104
    Figure 03_image106
    Figure 03_image108
    Figure 03_image110
    、及
    Figure 03_image112
    ； 其中Z 1及Z 2各自獨立地選自氫、氟基、氯基、–NO 2、及–OCH 3。
  76. 一種生產免疫接合物之程序，其包含：使有效量的硫醇官能化抗體或抗原結合片段與如請求項54至75中任一項之接合物在有效形成如請求項1至25中任一項之免疫接合物的反應條件下反應。
  77. 如請求項76之程序，其進一步包含在有效形成該硫醇官能化抗體或抗原結合片段之還原條件下還原抗體或抗原結合片段。
  78. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含： a)  重鏈，其包含： VHCDR 1，其包含與SEQ ID NO:1之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VHCDR 2，其包含與SEQ ID NO:2之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VHCDR 3，其包含與SEQ ID NO:3之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；以及 b)  輕鏈，其包含： VLCDR 1，其包含與SEQ ID NO:8之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VLCDR 2，其包含與AAS之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VLCDR 3，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； 其中該抗體或其抗原結合片段特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)之細胞外域。
  79. 如請求項78之抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 5、7、12、或14中任一者之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
  80. 一或多種核酸，其編碼如請求項78或79中任一項之抗體或其抗原結合片段，諸如由一或多種核酸編碼之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 4、6、11、或13中任一者所述之核酸序列具有至少95%序列同一性之序列。
  81. 一種宿主細胞，其包含如請求項80之一或多種核酸。
  82. 如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中Ab係如請求項78或79之抗體或抗原結合片段。
  83. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含： a)  重鏈，其包含： VHCDR 1，其包含與SEQ ID NO:15之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VHCDR 2，其包含與SEQ ID NO:16之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VHCDR 3，其包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 b)  輕鏈，其包含： VLCDR 1，其包含與SEQ ID NO:22之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VLCDR 2，其包含與DAY之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VLCDR 3，其包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； 其中該抗體或其抗原結合片段特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)之細胞外域。
  84. 如請求項83之抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 19、21、26或28中任一者之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
  85. 一或多種核酸，其編碼如請求項83或84中任一項之抗體或其抗原結合片段，諸如由一或多種核酸編碼之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 18、20、25、或27中任一者所述之核酸序列具有至少95%序列同一性之序列。
  86. 一種宿主細胞，其包含如請求項85之一或多種核酸。
  87. 如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中Ab係如請求項83或84之抗體或抗原結合片段。
  88. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含： a)  重鏈，其包含： VHCDR 1，其包含與SEQ ID NO:29之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VHCDR 2，其包含與SEQ ID NO:30之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VHCDR 3，其包含與SEQ ID NO:31之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 b)  輕鏈，其包含： VLCDR 1，其包含與SEQ ID NO:36之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； VLCDR 2，其包含與DAS之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；及 VLCDR 3，其包含與SEQ ID NO:38之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列； 其中該抗體或抗原結合片段特異性地結合至人類受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1 (ROR1)之細胞外域。
  89. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 33、35、40或42中任一者之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
  90. 一或多種核酸，其編碼如請求項88或89中任一項之抗體或其抗原結合片段，諸如由一或多種核酸編碼之抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 32、34、39、或41中任一者所述之核酸序列具有至少95%序列同一性之序列。
  91. 一種宿主細胞，其包含如請求項90之一或多種核酸。
  92. 如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中Ab係如請求項88或89之抗體或抗原結合片段。
  93. 一種抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中重鏈由SEQ ID NO: 6所述之核酸序列編碼，且輕鏈由SEQ ID NO: 13所述之核酸序列編碼。
  94. 如請求項93之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體之該重鏈包含SEQ ID NO:7之多肽序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 14之多肽序列。
  95. 如請求項93或94中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體或其結合片段與分子接合。
  96. 如請求項95之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該分子係藥物、毒素、或細胞介素。
  97. 如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中該抗體或其結合片段係如請求項93或94中任一項之抗體或其結合片段。
  98. 一種使用如請求項108至111中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如請求項97之免疫接合物用於抑制或治療疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之對象投予如請求項93至96中任一項之抗體或其結合片段或該組成物，可選地選擇對象以接受用於該疾病，諸如癌症之療法，及/或可選地判定在投予該抗體或其結合片段之後對該疾病，諸如癌症之該抑制。
  99. 如請求項93至96中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如請求項97之免疫接合物，其用作藥劑，諸如用於抑制或治療疾病，諸如癌症之目的。
  100. 一種抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中重鏈由SEQ ID NO: 20所述之核酸序列編碼，且輕鏈由SEQ ID NO: 27所述之核酸序列編碼。
  101. 如請求項100之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體之該重鏈包含SEQ ID NO:21之多肽序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 28之多肽序列。
  102. 如請求項100或101中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體或其結合片段與分子接合。
  103. 如請求項102之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該分子係藥物、毒素、或細胞介素。
  104. 如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中該抗體或其結合片段係如請求項100或101中任一項之抗體或其結合片段。
  105. 一種使用如請求項100至103中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如請求項104之免疫接合物用於抑制或治療疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之對象投予如請求項100至103中任一項之抗體或其結合片段或該組成物，可選地選擇對象以接受用於該疾病，諸如癌症之療法，及/或可選地判定在投予該抗體或其結合片段之後對該疾病，諸如癌症之該抑制。
  106. 如請求項100至103中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如請求項104之免疫接合物，其用作藥劑，諸如用於抑制或治療疾病，諸如癌症之目的。
  107. 一種抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中重鏈由SEQ ID NO: 34所述之核酸序列編碼，且輕鏈由SEQ ID NO: 41所述之核酸序列編碼。
  108. 如請求項107之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體之該重鏈包含SEQ ID NO:35之多肽序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 42之多肽序列。
  109. 如請求項107或108中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該抗體或其結合片段與分子接合。
  110. 如請求項109之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，其中該分子係藥物、毒素、或細胞介素。
  111. 如請求項1至25中任一項之免疫接合物，其中該抗體或其結合片段係如請求項107或108中任一項之抗體或其結合片段。
  112. 一種使用如請求項107至110中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如請求項111之免疫接合物用於抑制或治療疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之對象投予如請求項107至110中任一項之抗體或其結合片段或該組成物，可選地選擇對象以接受用於該疾病，諸如癌症之療法，及/或可選地判定在投予該抗體或其結合片段之後對該疾病，諸如癌症之該抑制。
  113. 如請求項107至110中任一項之抗體或其結合片段或包含該抗體或其結合片段之組成物，諸如如請求項111之免疫接合物，其用作藥劑，諸如用於抑制或治療疾病，諸如癌症之目的。
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