CN109331794A - 一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球及其制备方法和应用 - Google Patents

一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球及其制备方法和应用。该方法包括：采用水热法合成羧基功能化的磁性纳米球；羧基功能化的磁性纳米球与两种肾上腺素代谢物以一定比例加入到磷酸缓冲液中，得到双模板‑载体复合物；分离后与功能单体超支化聚乙烯亚胺、交联剂戊二醛在磷酸缓冲液中搅拌进行聚合，得到聚合物；通过外加磁场，将固态聚合物分离出来；最后回流洗脱固态聚合物，真空干燥后，即得到多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。本发明制备方法简单、条件温和，制得的分子印迹磁性纳米球粒径均一、稳定性强且水溶性好，可同时快速实现对人体体液复杂基质中多巴胺和3,4‑二羟基苯乙酸的选择性富集和检测。

Description

一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及分子识别、磁性分离、纳米材料和神经科学等技术领域，具体涉及一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球及其制备方法和应用。
背景技术
多巴胺(Dopamine，DA)是中枢神经系统内一种关键的单胺类神经递质，与多种神经退行性及情感障碍性疾病的发生发展密切相关。在帕金森病(Parkinson’s disease，PD)中，DA及其代谢物3,4-二羟基苯乙酸(3,4-dihydroxy-phenyl acetic acid，DOPAC)的水平变化可以作为PD早期诊断的敏感指标。同时，临床上广泛采用左旋多巴(DA前体物质)作为PD患者的主要治疗药物之一，但是随着左旋多巴长期使用，PD患者常出现异动症等治疗副作用，且异动症的严重程度与DA及DOPAC水平相关。因此，检测PD患者组织或血液中DA及DOPAC的水平能够客观衡量和评价PD病程及治疗过程中的药物反应，为PD的早期诊断和治疗方案的制定提供重要依据。
目前，在生物样品中检测DA常用的方法主要包括毛细管电泳法、高效液相色谱法、荧光法、电化学法等。但这些分析方法无法避免复杂的样品前处理过程，且目前未见同时准确检测生物样品中DA和DOPAC方法的报道。
分子印迹技术是选用目标分子(有机小分子、生物大分子)制备一种有固定空穴和形状，对目标分子具有特异性结合位点的交联聚合物的技术。其所制备的分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymers,MIPs)是对目标分子具有高度亲和性、以特异选择性吸附为主的一种高效分离材料。绝大部分MIPs虽具有较好的选择性，但在分离上需要通过离心、过滤等操作，耗时较长，分析速度较慢。磁性纳米技术是一种制备具有表面效应、超顺磁性等特性的磁性纳米材料的技术。利用该技术制得的磁性纳米材料，具有易于分离的特性。仅需一外加磁场，数秒内即可实现磁性吸附材料和吸附液的分离。基于该技术开发的新产品、新工艺可解决常规技术无法解决的难题。目前，在生物和医学领域，磁性分离已在细胞分离、免疫检测、靶向药物、固定化酶及亲和分离等诸多方面展现出良好的应用前景。将MIPs的特异识别性和磁性纳米材料的易于分离性相结合制得的分子印迹磁性纳米材料具有廉价易得、结构可控、选择性高、机械性能好、使用寿命长、无毒性等诸多优点。
国内外已有数篇以DA为模板分子制备MIPs的报道，而以DOPAC为模板分子制备MIPs的工作鲜见报道。以DA为模板分子制得的MIPs一般只对DA有良好的选择性，而PD患者前驱期尿液中同时存在DA和DOPAC，若能同时识别并准确检测两种分子，可以实现多指标同时检测，有利于提高PD前期诊断的准确度。目前，还没有以DA和DOPAC为模板分子制备MIPs的相关报道。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球及其制备方法和应用。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明公开了一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，包括以下步骤：
1)将氯化铁、乙酸钠和聚丙烯酸钠混合后，加入二甘醇溶液和乙二醇溶液，在温度为160～200℃下反应5～10h，反应结束后，将反应产物洗涤、干燥，制得羧基功能化的磁性纳米球；
2)将两种肾上腺素代谢物及步骤1)制得的羧基功能化的磁性纳米球加入到磷酸缓冲液中，充分混匀，得到双模板-载体复合物体系，经磁性分离，制得双模板-载体复合物；
其中，所述两种肾上腺素代谢物为多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸；
3)将功能单体、交联剂及步骤2)制得的双模板-载体复合物加入到磷酸缓冲液中，进行聚合反应，聚合反应结束后，通过外加磁场分离出反应液中的固态聚合物；
其中，功能单体、交联剂及双模板-载体复合物的用量比为(5～10)：(0.02～0.03)：(0.15～0.2)；
4)回流洗脱步骤3)制得的固态聚合物，并经过真空干燥，制得多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。
优选地，步骤1)中，氯化铁、乙酸钠、聚丙烯酸钠、二甘醇溶液和乙二醇溶液的用量比为(0.3～0.5)g：(1～2.5)g：(0.04～0.08)mg：(10～20)mL：(5～10)mL。
优选地，步骤2)中，多巴胺、3,4-二羟基苯乙酸、羧基功能化的磁性纳米球及磷酸缓冲液的用量比为(20～30)mg：(20～30)mg：(150～300)mg：(30～50)mL。
优选地，步骤1)中，将反应产物洗涤、干燥具体为：用超纯水将反应产物洗至中性，在干燥温度为40～60℃，压强为0.04～0.08MPa的压力下干燥4～7h。
优选地，步骤2)和步骤3)中，磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.05～0.1mol/L，pH值为7.0～7.4。
优选地，步骤3)中，功能单体为超支化聚乙烯亚胺，浓度为4～8mg/mL；交联剂为戊二醛。
优选地，步骤3)中，聚合反应的温度为20～30℃，反应时间为4～8h。
优选地，步骤4)中，回流洗脱的温度为50～80℃，洗脱所用洗脱液是乙醇与乙酸的混合液，混合液中乙醇与乙酸的体积比为92:8～99:1；真空干燥温度为40～60℃，压强为0.04～0.08MPa，干燥时间为4～8h。
本发明还公开了采用上述的制备方法制得的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球，其特征在于，该多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的粒径为20～25nm。
10、权利要求9所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球作为多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸吸附剂的应用，其特征在于，该多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球能够从体液中分离并富集多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸；
对多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸的吸附量分别为5.38～11.07mg/g和7.04～12.72mg/g。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明公开的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，简便高效，方法简单、条件温和，首先采用水热法合成羧基功能化的磁性纳米球，羧基功能化的磁性纳米球与两种肾上腺素代谢物以一定比例加入到磷酸缓冲液中，得到双模板-载体复合物；将双模板-载体复合物磁性分离后再与功能单体超支化聚乙烯亚胺及交联剂戊二醛在磷酸缓冲液中搅拌进行聚合，得到聚合物；通过外加磁场，将固态聚合物分离出来；最后回流洗脱固态聚合物，真空干燥后，得到多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。本发明方法采用羧基功能化的磁性纳米球为载体，既可实现在外加磁场下固液的快速分离，其表面的羧基又有利于固定两种肾上腺素代谢物，且制备方法简单、条件温和。
进一步地，采用富含氨基的超支化聚乙烯亚胺作为功能单体，有利于与DA和DOPAC形成更多的作用位点，从而提高所得分子印迹纳米材料的选择性识别能力。
经本发明方法制得的分子印迹磁性纳米球粒径均一、稳定性强、水溶性好，能够对DA和DOPAC吸附能力强，能够同时印迹。
本发明所制得的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球可用于快速实现对人体血液中DA和DOPAC的快速高选择性分离和富集，对多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸的吸附量分别为5.38～11.07mg/g和7.04～12.72mg/g。因此，与临床现有PD诊断及病程评估策略相结合，对PD的早期诊断及治疗方案的及时调整具有重要价值。
附图说明
图1为实施例1合成的羧基功能化的磁性纳米球的透射电镜图；
图2为实施例1合成的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的透射电镜图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
实施例1
一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，包括以下步骤：
1)将0.30g氯化铁、1.00g乙酸钠、40mg聚丙烯酸钠、10mL二甘醇和5mL乙二醇置于反应釜中，160℃反应5h，反应结束后，使用超纯水将反应产物洗至中性，真空干燥，即得羧基功能化的磁性纳米球；
所述真空干燥温度为40℃，压强为0.04MPa，干燥时间为4h。
2)取步骤1)所得的羧基功能化的磁性纳米球150mg和两种肾上腺素代谢物加入到30mL磷酸缓冲液中，得到双模板-载体复合物；
所述两种肾上腺素代谢物为DA和DOPAC，DA用量为20mg，DOPAC用量为30mg；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合溶液，混合溶液浓度为0.05mol/L，pH值为7.0。
3)将上述双模板-载体复合物磁性分离；
4)将功能单体超支化聚乙烯亚胺、交联剂戊二醛及步骤3)分离得到的双模板-载体复合物加入到磷酸缓冲液中，进行聚合；
所述超支化聚乙烯亚胺用量为5mL，浓度为4mg/mL；戊二醛体积为20μL；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合溶液，浓度为0.05mol/L，pH值为7.0；双模板-载体复合物的质量为150mg；聚合温度为20℃；聚合时间为4h。
5)聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤4)反应液中的固态聚合物分离出来；
6)回流洗脱步骤5)中的固态聚合物，真空干燥后，即得多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。
所述的洗脱液是体积比为92:8的乙醇与乙酸混合液，洗脱液体积为20mL；回流温度为50℃；干燥温度为40℃，压强为0.04MPa，干燥时间为4h。
对本实施例制得的分子印迹磁性纳米球进行吸附性能检测，检测步骤具体如下：
(1)取多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球20mg加入到20mL DA和DOPAC的混合水溶液中，室温下震荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；所述水溶液中DA和DOPAC浓度均为40μg/mL；
(2)用高效液相色谱测定(1)中所得上清液中DA和DOPAC的浓度，再计算出多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量；
所测得的上清液中DA的浓度为33.63μg/mL，DOPAC的浓度为29.37μg/mL；
所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量的计算公式为：
式中Ce为上述上清液中DA或DOPAC的浓度；
通过计算，多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量分别为：6.37mg/g和10.63mg/g。
本实施例采用水热法合成的羧基功能化的磁性纳米球的透射电镜图如图1所示，最终合成的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的透射电镜图如图2所示，从图中可以看出，该多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的粒径为20～25nm。
实施例2
一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，包括以下步骤：
1)将0.40g氯化铁、1.50g乙酸钠、50mg聚丙烯酸钠、12mL二甘醇和6mL乙二醇置于反应釜中，在180℃下反应6h，反应结束后，使用超纯水将反应产物洗至中性，真空干燥，即得羧基功能化的磁性纳米球；所述真空干燥温度为47℃，压强为0.06MPa，干燥时间为5h。
2)取步骤1)所得的羧基功能化的磁性纳米球300mg和两种肾上腺素代谢物加入到50mL磷酸缓冲液中，得到双模板-载体复合物；
所述两种肾上腺素代谢物为DA和DOPAC，二者用量分别为30mg和20mg；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.1mol/L，pH值为7.4。
3)将上述双模板-载体复合物磁性分离；
4)将功能单体超支化聚乙烯亚胺、交联剂戊二醛，步骤3)分离得到的双模板-载体复合物加入到磷酸缓冲液中，进行聚合；
所述超支化聚乙烯亚胺用量为10mL，浓度为8mg/mL；戊二醛体积为30μL；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.1mol/L，pH值为7.4；双模板-载体复合物的质量为200mg；聚合温度为30℃；聚合时间为8h。
5)聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤4)反应液中的固态聚合物分离出来；
6)回流洗脱步骤5)中的固态聚合物，真空干燥后，即得多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。
所述的洗脱液是体积比为99:1的乙醇与乙酸混合液，体积为40mL；回流温度为80℃；干燥温度为60℃，压强为0.08MPa，干燥时间为8h。
对本实施例所得的分子印迹磁性纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
(1)取多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球20mg加入到20mLDA和DOPAC的混合水溶液中，室温下震荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；所述混合水溶液中DA和DOPAC浓度均为40μg/mL；
(2)用高效液相色谱测定(1)中所得上清液中DA和DOPAC的浓度，再计算出多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量；
所测得的上清液中DA的浓度为28.93μg/mL，DOPAC的浓度为27.28μg/mL；
所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量的计算公式为：
式中Ce为上述上清液中DA或DOPAC的浓度；
通过计算，多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量分别为：11.07mg/g和12.72mg/g。
实施例3
一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，包括以下步骤：
1)将0.50g氯化铁、2.50g乙酸钠、80mg聚丙烯酸钠、20mL二甘醇和10mL乙二醇置于反应釜中，在200℃下反应10h，反应结束后，使用超纯水将反应产物洗至中性，真空干燥，即得羧基功能化的磁性纳米球；所述真空干燥温度为60℃，压强为0.08MPa，干燥时间为7h。
2)取步骤1)所得的羧基功能化的磁性纳米球200mg和两种肾上腺素代谢物加入到40mL磷酸缓冲液中，得到双模板-载体复合物；
所述两种肾上腺素代谢物为DA和DOPAC，二者用量均为30mg；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的混合溶液，浓度为0.08mol/L，pH值为7.2。
3)将上述双模板-载体复合物磁性分离；
4)将功能单体超支化聚乙烯亚胺、交联剂戊二醛及步骤3)得到的双模板-载体复合物加入到磷酸缓冲液中，进行聚合；
所述的超支化聚乙烯亚胺用量为7mL，浓度为5mg/mL；戊二醛体积为25μL；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.08mol/L，pH值为7.2；双模板-载体复合物的质量为165mg；聚合温度为25℃；聚合时间为6h。
5)聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤4)反应液中的固态聚合物分离出来；
6)回流洗脱步骤5)中的固态聚合物，真空干燥后，即得多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。
所述的洗脱液是体积比为98:2的乙醇与乙酸混合液，体积为30mL；回流温度为60℃；干燥温度为45℃，压强为0.06MPa，干燥时间为5h。
对本实施例所得的分子印迹磁性纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
(1)取多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球20mg加入到20mLDA和DOPAC的混合水溶液中，室温下震荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；所述水溶液的DA和DOPAC浓度均为40μg/mL；
(2)用高效液相色谱测定(1)中所得上清液中DA和DOPAC的浓度，再计算出多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量；
所测得的上清液中DA的浓度为31.48μg/mL，DOPAC的浓度为27.94μg/mL；
所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量的计算公式为：
式中Ce为上述上清液中DA或DOPAC的浓度；
通过计算，多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量分别为：8.52mg/g和12.06mg/g。
实施例4
一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，包括以下步骤：
1)将0.46g氯化铁、2.00g乙酸钠、60mg聚丙烯酸钠、18mL二甘醇和9mL乙二醇置于反应釜中，在170℃下反应8h，反应结束后，使用超纯水将反应产物洗至中性，真空干燥，即得羧基功能化的磁性纳米球；所述真空干燥温度为55℃，压强为0.05MPa，干燥时间为5h。
2)取步骤1)所得的羧基功能化的磁性纳米球260mg和两种肾上腺素代谢物加入到38mL磷酸缓冲液中，得到双模板-载体复合物；
所述两种肾上腺素代谢物为DA和DOPAC，二者用量均为20mg；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.06mol/L，pH值为7.1。
3)将上述双模板-载体复合物磁性分离；
4)将功能单体超支化聚乙烯亚胺、交联剂戊二醛及步骤三得到的双模板-载体复合物加入到磷酸缓冲液中，进行聚合；
所述的超支化聚乙烯亚胺用量为6mL，浓度为5mg/mL；戊二醛体积为28μL；磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.07mol/L，pH值为7.1；双模板-载体复合物的质量为180mg；聚合温度为22℃；聚合时间为6h。
5)聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤4)反应液中的固态聚合物分离出来；
6)回流洗脱步骤5)中的固态聚合物，真空干燥后，即得到多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。
所述的洗脱液是体积比为93:7的乙醇与乙酸混合液，体积为25mL；回流温度为75℃；干燥温度为55℃，压强为0.07MPa，干燥时间为6h。
对本实施例所得的分子印迹磁性纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
(1)取多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球20mg加入到20mLDA和DOPAC的混合水溶液中，室温下震荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
所述水溶液的DA和DOPAC浓度均为40μg/mL；
(2)用高效液相色谱测定(1)中所得上清液中DA和DOPAC的浓度，再计算出多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量；
所测得的上清液中DA的浓度为34.62μg/mL，DOPAC的浓度为32.96μg/mL；
所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量的计算公式为：
式中Ce为上述上清液中DA或DOPAC的浓度；
通过计算，多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量分别为：5.38mg/g和7.04mg/g。
总结实施例1～4的检测结果，得到：多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球对DA和DOPAC的吸附量分别为5.38～11.07mg/g和7.04～12.72mg/g。
综上所述，本制备方法以表面带有羧基功能基团的磁性纳米粒子为载体，以DA和DOPAC同时为模板分子，超支化聚乙烯亚胺为功能单体，制备同时对DA和DOPAC具有选择性吸附能力的磁性分子印迹纳米球，其粒径为20～25nm。可用于对人体体液中DA和DOPAC的富集、检测、分离及去除。将本发明制备的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球与临床现有PD诊断及病程评估策略相结合，对PD的早期诊断及治疗方案的及时调整具有重要价值。
以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将氯化铁、乙酸钠和聚丙烯酸钠混合后，加入二甘醇溶液和乙二醇溶液，在温度为160～200℃下反应5～10h，反应结束后，将反应产物洗涤、干燥，制得羧基功能化的磁性纳米球；
2)将两种肾上腺素代谢物及步骤1)制得的羧基功能化的磁性纳米球加入到磷酸缓冲液中，充分混匀，得到双模板-载体复合物体系，经磁性分离，制得双模板-载体复合物；
其中，所述两种肾上腺素代谢物为多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸；
3)将功能单体、交联剂及步骤2)制得的双模板-载体复合物加入到磷酸缓冲液中，进行聚合反应，聚合反应结束后，通过外加磁场分离出反应液中的固态聚合物；
其中，功能单体、交联剂及双模板-载体复合物的用量比为(5～10)：(0.02～0.03)：(0.15～0.2)；
4)回流洗脱步骤3)制得的固态聚合物，并经过真空干燥，制得多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球。
2.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤1)中，氯化铁、乙酸钠、聚丙烯酸钠、二甘醇溶液和乙二醇溶液的用量比为(0.3～0.5)g：(1～2.5)g：(0.04～0.08)mg：(10～20)mL：(5～10)mL。
3.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤2)中，多巴胺、3,4-二羟基苯乙酸、羧基功能化的磁性纳米球及磷酸缓冲液的用量比为(20～30)mg：(20～30)mg：(150～300)mg：(30～50)mL。
4.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤1)中，将反应产物洗涤、干燥具体为：用超纯水将反应产物洗至中性，在干燥温度为40～60℃，压强为0.04～0.08MPa的压力下干燥4～7h。
5.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤2)和步骤3)中，磷酸缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液，浓度为0.05～0.1mol/L，pH值为7.0～7.4。
6.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤3)中，功能单体为超支化聚乙烯亚胺，浓度为4～8mg/mL；交联剂为戊二醛。
7.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤3)中，聚合反应的温度为20～30℃，反应时间为4～8h。
8.根据权利要求1所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的制备方法，其特征在于，步骤4)中，回流洗脱的温度为50～80℃，洗脱所用洗脱液是乙醇与乙酸的混合液，混合液中乙醇与乙酸的体积比为92:8～99:1；真空干燥温度为40～60℃，压强为0.04～0.08MPa，干燥时间为4～8h。
9.采用权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球，其特征在于，该多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球的粒径为20～25nm。
10.权利要求9所述的多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球作为多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸吸附剂的应用，其特征在于，该多巴胺及其代谢物分子印迹磁性纳米球能够从体液中分离并富集多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸；
对多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸的吸附量分别为5.38～11.07mg/g和7.04～12.72mg/g。
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