CN109321629A - 一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法 - Google Patents

一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109321629A
CN109321629A CN201811060901.4A CN201811060901A CN109321629A CN 109321629 A CN109321629 A CN 109321629A CN 201811060901 A CN201811060901 A CN 201811060901A CN 109321629 A CN109321629 A CN 109321629A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cornea
evaluation
index
light injury
measurement
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201811060901.4A
Other languages
English (en)
Inventor
黄健聪
程树军
陈志杰
陈义珠
冯鉴鸿
罗婷婷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Huadai Biological Technology Co Ltd
Original Assignee
Guangzhou Huadai Biological Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Huadai Biological Technology Co Ltd filed Critical Guangzhou Huadai Biological Technology Co Ltd
Priority to CN201811060901.4A priority Critical patent/CN109321629A/zh
Publication of CN109321629A publication Critical patent/CN109321629A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5076—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving cell organelles, e.g. Golgi complex, endoplasmic reticulum

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是包括以下步骤：(1)离体角膜的制备和维持：无菌环境下分离动物离体眼球完整角膜，并固定于专用的生物膜夹持器中，生物膜夹持器填充相应的培养液，置于培养箱中孵育；(2)光损伤模型的制备：卸下生物膜夹持器前室玻璃片，暴露角膜上皮；(3)药物干预：选择受试物干预的模式和时间；(4)评价指标的测量：测量角膜厚度、角膜浑浊度、角膜上皮渗透性、氧化应激或炎症相关指标，还包括对角膜进行组织学分析；(5)结果分析：对所选指标进行处理，并做数据分析。本方法具有成本低、通量高、可重复、不额外牺牲动物等优点，可以对多种受试物进行快速评价。

Description

一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法
技术领域
本发明涉及一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法。
背景技术
日常生活中，人类的眼睛暴露于紫外光后可诱发光对角膜的损伤作用，尤其是长时间暴露在阳光下(接触高剂量紫外线)会造成眼睛损伤，损伤包括白内障、黄斑变性、结膜黄斑、翼状胬肉和角膜炎。
UVA更接近可见光，能量比UVB和UVC低。但是UVA射线可以通过角膜到达眼睛内的晶状体和视网膜。过度暴露于UVA辐射与某些类型的白内障的发展有关，UVA射线可能在黄斑变性的发展中起作用。角膜几乎吸收了90％以上的UVB，在高短期剂量下，UVB射线也会引起光角膜炎，或称光角膜晒伤，是一种角膜疼痛的炎症反应。
在高海拔地区，长时间在海滩或滑雪时，可能导致严重的光角膜炎，称为“雪盲症”，通常持续24-48小时可以导致暂时性视力丧失，并伴有疼痛。而工人(如电焊工)职业暴露于工业高强度UV，容易造成角膜炎或结膜炎等损伤。
光毒性物质由于吸收光子，被激活后释放能量或者刺激机体产生自由基，从而引起机体局部损伤效应。角膜直接暴露于光线下，环境中的水溶性或脂溶性外源化学物接触于眼睛后，可能诱发眼光毒性效应，对角膜和眼球产生有害相应。
目前眼科研究通常采用动物模型(兔子)进行，且缺乏公认一致的毒理学评价方法。传统动物实验的缺点包括：主观性/重复性差、物种差异、周期长、成本高、通量低、使用活体动物造成动物痛苦死亡等。
目前，以体外技术为核心的试验方法，逐渐被许多国家和地区的监管部门所接收和认可。美国替代方法研究评价中心(ICCVAM)提出了一系列非动物测试方法。全球范围内多个地区和国家通过法规禁止/部分禁止或限制动物试验的进行。目前开发了多种眼刺激体外方法，用于取代原有的兔子眼刺激/腐蚀性测试，但是尚无眼光毒性/光损伤的体外评价方法。
体外方法是根据体内眼光损伤发生的机理开发的，角膜直接暴露于UV，可直接导致角膜基质粘多糖裂开，并且改变其生理功能。离体角膜来源于废弃的动物眼球组织，不需要额外牺牲动物，天然角膜与人体角膜接近，离体角膜在短期内可以维持正常生理活性，可以模拟角膜光暴露，且成本低、结果稳定。牛角膜浑浊度渗透性试验是OECD认可的替代方法之一，用于取代传统兔眼试验，用于眼损伤的分类和标示，其应用广泛，数据被多方所接受。
实际生活中，眼球可能接触到多种外源化学物和紫外线，角膜作为眼球最外层直接接触紫外线，紫外线可直接或间接(激活光毒物)造成光损伤，而评估光损伤的保护和修复作用的模型目前尚未成型，也缺乏评价眼光毒物的方法。目前基于离体角膜眼光损伤模型未见相关专利和文献报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，就是提供一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，利用离体动物角膜的光损伤模型，评价受试物质对光损伤角膜的保护和修复作用，或者用于眼光毒性的评价，本方法具有成本低、通量高、可重复、不额外牺牲动物等优点，可以对多种受试物进行快速评价。
解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案来实现的：
一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是包括以下步骤：
(1)离体角膜的制备和维持
无菌环境下分离动物离体眼球完整角膜，并固定于专用的生物膜夹持器中，生物膜夹持器填充相应的培养液，置于培养箱中孵育；
(2)光损伤模型的制备
卸下生物膜夹持器前室玻璃片，暴露角膜上皮；
(3)药物干预
根据研究目的和药物作用，选择受试物干预的模式和时间；
(4)评价指标的测量
根据研究目的和药物作用，选择指标包括测量角膜厚度、角膜浑浊度、角膜上皮渗透性、氧化应激或炎症相关指标，还包括对角膜进行组织学分析；
(5)结果分析
根据暴露模式，对所选指标进行处理，并做数据分析。
所述的步骤(1)中的动物离体眼球组织为牛眼球、猪眼球或羊眼球之类畜牧业或养殖业中废弃的动物眼球组织，动物的年龄范围在12个月至60个月内，在动物死亡2h内进行眼球摘取，短暂保存于4℃、含抗生素的无菌HBSS缓冲液中，6h内运输回实验室进行试验；专用生物膜夹持器指的是申请人公司开发的生物膜夹持器(专利号：ZL 2006 20019463.7)，培养箱温度32±1℃，湿度40-70％，孵育1-2h，培养液为含1％小牛血清的MEM培养基。
所述的步骤(2)具体为：采用太阳光模拟仪或紫外辐照仪，优先选择紫外光(UV)进行暴露，同时监测UVA、UVB的强度，暴露时间30分钟到240分钟；暴露环境温度32±1℃，湿度40-70％。
所述的步骤(3)受试物应在原始状态下进行测试，或者采用应用液或浓缩液进行，或根据实际要求选择合适的测试浓度(＞0，≤100％)；前提是需要保证受试物并不直接对角膜产生有害作用；如需要用到相应的溶剂，应选为无菌水/生理盐水、培养液或其他可以证明对角膜无损伤的溶剂，受试物加样体积为0.5-2mL。
所述的步骤(3)根据研究目的和药物作用差异，受试物暴露模式有3种：光损伤前，光损伤中和光损伤后；暴露时间10分钟至240分钟，优选进行1-5个浓度的暴露，每次评价至少进行3次独立测试。
所述的步骤(4)评价指标的测量，角膜厚度优选采用A型超声测量，角膜基质优选浊度仪测量，角膜上皮渗透性优选荧光素漏出法测量(荧光素钠浓度0.5-5％)，作为光刺激性评价指标。
所述的步骤(4)评价指标的测量，氧化应激指标选择SOD、MDA、ROS、GSH-Px、或过氧化氢酶，炎症指选择IL-1α、IL-1β或TNF-α炎症因子或促炎症因子；收集生物膜夹持器后室液体或者角膜组织匀浆液，根据商品化的检测试剂盒说明书进行相应指标的分析。
所述的步骤(5)最终数据采用均数±标准差表示，试验组与空白组/对照组进行比较，差异在2倍或以上，或者经统计学单因素方差分析差异具有统计学意义者，判定为指标阳性结果；每个类型的指标出现2种或以上阳性结果时，具有阳性作用效应，如抗氧化、抗炎、抗光刺激等，参考化学物或类似化学物的理化信息等已知信息，权重评价指标，以获得更加可靠的预测。
本发明具有如下有益效果：
(1)本发明使用离体动物角膜组织，其结构接近人体天然角膜，结果可信度高、重复性好，且角膜来源于无需额外牺牲活体动物，符合3Rs原则；
(2)本发明通过UV暴露制备光损伤模型，符合实际暴露情况，具有科学性；
(3)本发明采用多方面指标，可作为毒性筛查或者药理研究；
(4)本发明建立的方法可以代替活体动物试验，直接用于评价化学品、日化品、药品、医疗器械等眼光损伤的研究；
具体实施方式
实施例1基于离体牛角膜的光损伤模型的建立
1、实验材料的准备
1.1溶液的配制
1.1.1HBSS溶液：商品化购买(购自Sigma)，使用前加入青霉素(100IU/mL)和链霉素(100IU/mL)。
1.1.2MEM培养基：商品化购买(购自Sigma)，使用前加入1％胎牛血清(购自Gibco)。
1.1.3荧光素钠溶液：准确称取荧光素钠(购自Sigma)0.125g，加入25mL DPBS溶液，配制成0.5％荧光素钠溶液，4℃避光保存8周。
1.2试验器械的准备：所有取牛眼球的器械和分离角膜的器械都需要经过无菌或消毒处理。
1.3受试物准备：生理盐水。
1.4培养条件：温度32±1℃，湿度40-70％
1.5离体牛眼球的获取：由屠宰场经培训的工作人员摘取，并立即放入冰冷HBSS中，完成后运输回实验室。
2试验过程
2.1离体角膜的制备和维持
2.1.1检查眼球，弃去任何肉眼可见损伤或病变的眼球。以手术刀在角膜外2-3mm孔膜处做一小切口，剪刀环切下角膜，外周保留2-3mm巩膜，夹住巩膜，以镊子轻轻剥离玻璃体和虹膜，完整分离角膜。
2.1.2将角膜上皮朝上置于生物膜夹持器后室，放上并固定前室。随后加入MEM培养基，排空气泡。再次检查角膜有无异常，弃去任何异常角膜。将生物膜夹持器水平放置于培养箱中孵育1.5h。
2.2角膜浑浊度测量：取出含角膜的生物膜夹持器，更换新鲜培养液。采用德国BASF角膜浊度仪，记录每个角膜照度值，并随机分为3组，每组10个角膜。
2.3光暴露：去除前室液体，卸下玻璃片，加入生理盐水0.5mL，将夹持器竖直放置于紫外光下，调整距离和暴露时间，使之达到所需剂量。相应的对照组采用相同的暴露时间，但不进行紫外光照。
2.4冲洗：暴露结束后用培养液冲洗角膜3次，重新填充前室培养液，再次测量角膜浑浊度。
2.5荧光素漏出：吸弃前室液体，加入1mL 0.5％荧光素钠溶液，竖直放置，在培养箱中孵育90min。收集后室液体，充分混匀，取200μL后室液体，在490nm波长读取吸光度值(OD490)。
3数据分析
3.1计算
浊度变化值ΔOP＝OP暴露后-OP暴露前
荧光素渗透值OD490＝受试物OD490-平均阴性对照OD490
3.2角膜基质和上皮功能评价
在本次试验条件下，随着暴露时间的延长，对照组OP和OD490并未出现明显变化，而模型组在UVA暴露下，OP有明显的增加，且呈现剂量依赖性，但OD490并无明显增加。显示不同剂量的紫外光会对角膜产生损伤。
实施例2基于离体牛角膜的光损伤模型评价光毒性物质
1、实验材料的准备
1.1溶液的配制
1.1.1HBSS溶液：商品化购买(购自Sigma)，使用前加入青霉素(100IU/mL)和链霉素(100IU/mL)。
1.1.2MEM培养基：商品化购买(购自Sigma)，使用前加入1％胎牛血清(购自Gibco)。
1.1.3荧光素钠溶液：准确称取荧光素钠(购自Sigma)0.125g，加入25mL DPBS溶液，配制成0.5％荧光素钠溶液，4℃避光保存8周。
1.1.4组织匀浆液：含0.01mol/L Tris，0.001mol/L EDTA-Na2，0.01mol/L蔗糖，8g/L NaCl，调节pH至7.4。
1.2试验器械的准备：所有取牛眼球的器械和分离角膜的器械都需要经过无菌或消毒处理。
1.3受试物准备：样品、生理盐水。
1.4培养条件：温度32±1℃，湿度40-70％
1.5离体牛眼球的获取：由屠宰场经培训的工作人员摘取，并立即放入冰冷HBSS中，完成后运输回实验室。
2试验过程
2.1离体角膜的制备和维持
2.1.1检查眼球，弃去任何肉眼可见损伤或病变的眼球。以手术刀在角膜外2-3mm孔膜处做一小切口，剪刀环切下角膜，外周保留2-3mm巩膜，夹住巩膜，以镊子轻轻剥离玻璃体和虹膜，完整分离角膜。
2.1.2将角膜上皮朝上置于生物膜夹持器后室，放上并固定前室。随后加入MEM培养基，排空气泡。再次检查角膜有无异常，弃去任何异常角膜。将生物膜夹持器水平放置于培养箱中孵育1.5h。
2.2角膜浑浊度测量：取出含角膜的生物膜夹持器，更换新鲜培养液。采用德国BASF角膜浊度仪，记录每个角膜照度值，并随机分为3组，每组10个角膜。
2.3光暴露：去除前室液体，卸下玻璃片，加入不同浓度受试物0.5mL，将夹持器竖直放置于紫外光下，调整距离和暴露时间。
2.4冲洗：暴露结束后用培养液冲洗角膜3次，重新填充前室培养液，再次测量角膜浑浊度。
2.5荧光素漏出：吸弃前室液体，加入1mL 0.5％荧光素钠溶液，竖直放置，在培养箱中孵育90min。收集后室液体，充分混匀，取200μL后室液体，在490nm波长读取吸光度值(OD490)。
2.6SOD测定：将角膜剪碎后置于离心管中加入19倍体积的组织匀浆液，冰箱研磨匀浆，制备5％角膜组织匀浆，4℃低温离心10min(3000r/min)，取上清液备用。考马斯亮蓝法做蛋白定量，用SOD试剂盒测定SOD含量。
3数据分析
3.1计算
根据仪器说明书，计算浊度值，浊度变化值ΔOP＝OP暴露后-OP暴露前
荧光素渗透值OD490＝受试物OD490-平均阴性对照OD490
SOD相对含量(％)：各组SOD含量/空白对照组SOD含量×100
3.2结果分析
在本次试验条件下，模型组与空白对照组相比，OP值、OD值和SOD相对含量均未变现出明显变化。样品对照组在不同浓度下，OP值和OD值变化不明显，但SOD相对含量随样品浓度升高而降低。在样品组中，角膜膜OP值和OD值均出现了不同程度的升高，而SOD相对含量显著降低。从数据可以看出，角膜在受试物和紫外线同时暴露下，角膜的基质和上皮组织均出现了较明显的损伤，表现为OP值和OD值升高，而SOD相对含量明显下降也显示出了角膜受到明显的氧化损伤。对比样品组和样品对照组可以发现，受试物在接受紫外辐照后对角膜产生了明显的损伤作用，可能由于紫外光的照射使受试物转变为激发态，而产生的光毒性效应。
4结论：该模型可以用于眼光毒性物质的快速筛查。
实施例3基于离体牛角膜的光损伤模型评价海藻糖的保护作用
1、实验材料的准备
1.1溶液的配制
1.1.1HBSS溶液：商品化购买(购自Sigma)，使用前加入青霉素(100IU/mL)和链霉素(100IU/mL)。
1.1.2MEM培养基：商品化购买(购自Sigma)，使用前加入1％胎牛血清(购自Gibco)。
1.1.3组织匀浆液：含0.01mol/L Tris，0.001mol/L EDTA-Na2，0.01mol/L蔗糖，8g/L NaCl，调节pH至7.4。
1.2试验器械的准备：所有取牛眼球的器械和分离角膜的器械都需要经过无菌或消毒处理。
1.3受试物准备：生理盐水(NS)、维生素C溶液(VitC)不同浓度的海藻糖溶液。
1.4培养条件：温度32±1℃，湿度40-70％
1.5离体牛眼球的获取：由屠宰场经培训的工作人员摘取，并立即放入冰冷HBSS中，完成后运输回实验室。
2试验过程
2.1离体角膜的制备和维持
2.1.1检查眼球，弃去任何肉眼可见损伤或病变的眼球。以手术刀在角膜外2-3mm孔膜处做一小切口，剪刀环切下角膜，外周保留2-3mm巩膜，夹住巩膜，以镊子轻轻剥离玻璃体和虹膜，完整分离角膜。
2.1.2将角膜上皮朝上置于生物膜夹持器后室，放上并固定前室。随后加入MEM培养基，排空气泡。再次检查角膜有无异常，弃去任何异常角膜。将生物膜夹持器水平放置于培养箱中孵育1.5h。
2.2角膜浑浊度测量：取出含角膜的生物膜夹持器，更换新鲜培养液。采用OP-KIT角膜浊度仪，记录每个角膜浊度值，并随机分为6组，每组10个角膜。
2.3光暴露：去除前室液体，卸下玻璃片，加入不同浓度受试物0.5mL，空白对照组加入NS，阳性对照组加入VitC，将夹持器竖直放置于紫外光下，调整距离和暴露时间，阴性对照组加入NS但不进行光辐照。
2.4冲洗：暴露结束后用培养液冲洗角膜3次，重新填充前室培养液，再次测量角膜浑浊度。
2.5SOD测定：将角膜剪碎后置于离心管中加入19倍体积的组织匀浆液，冰箱研磨匀浆，制备5％角膜组织匀浆，4℃低温离心10min(3000r/min)，取上清液备用。考马斯亮蓝法做蛋白定量，用SOD试剂盒测定SOD含量。
3数据分析
3.1计算
浊度变化值ΔOP＝OP暴露后-OP暴露前
SOD相对含量(％)：各组SOD含量/空白对照组SOD含量×100
3.2结果分析
在本次试验条件下，空白对照组OP值显著高于阴性对照组，同时其SOD相对含量显著低于其阴性对照组，表明空白对照组角膜损伤较严重，光损伤模型造模有效。样品组中，随浓度的升高，角膜浊度值减小，而SOD相对含量升高，结果与阳性对照组维生素C相似。有研究表明海藻糖具有保护蛋白质和稳定SOD的作用，与本研究通过分析海藻糖在紫外暴露下角膜的浑浊度和SOD含量，结果表明，海藻糖对光损伤后的角膜具有一定的保护作用。

Claims (8)

1.一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是包括以下步骤：
(1)离体角膜的制备和维持
无菌环境下分离动物离体眼球完整角膜，并固定于生物膜夹持器中，生物膜夹持器填充相应的培养液，置于培养箱中孵育；
(2)光损伤模型的制备
卸下生物膜夹持器前室玻璃片，暴露角膜上皮；
(3)药物干预
根据研究目的和药物作用，选择受试物干预的模式和时间；
(4)评价指标的测量
根据研究目的和药物作用，选择指标包括测量角膜厚度、角膜浑浊度、角膜上皮渗透性、氧化应激或炎症相关指标，还包括对角膜进行组织学分析；
(5)结果分析
根据暴露模式，对所选指标进行处理，并做数据分析。
2.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(1)中的动物离体眼球组织为牛眼球、猪眼球或羊眼球之类畜牧业或养殖业中废弃的动物眼球组织，动物的年龄范围在12个月至60个月内，在动物死亡2h内进行眼球摘取，短暂保存于4℃、含抗生素的无菌HBSS缓冲液中，6h内运输回实验室进行试验；培养箱温度32±1℃，湿度40-70％，孵育1-2h，培养液为含1％小牛血清的MEM培养基。
3.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(2)具体为：采用太阳光模拟仪或紫外辐照仪，优先选择紫外光(UV)进行暴露，同时监测UVA、UVB的强度，暴露时间30分钟到240分钟；暴露环境温度32±1℃，湿度40-70％。
4.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(3)受试物应在原始状态下进行测试，或者采用应用液或浓缩液进行，或根据实际要求选择合适的测试浓度，要求浓度＞0，且≤100％；前提是需要保证受试物并不直接对角膜产生有害作用；如需要用到相应的溶剂，应选为无菌水/生理盐水、培养液或其他可以证明对角膜无损伤的溶剂，受试物加样体积为0.5-2mL。
5.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(3)中的受试物暴露模式有3种：光损伤前，光损伤中和光损伤后；暴露时间10分钟至240分钟，优选进行1-5个浓度的暴露，每次评价至少进行3次独立测试。
6.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(4)评价指标的测量，角膜厚度选用A型超声测量，角膜基质选用浊度仪测量，角膜上皮渗透性选用荧光素漏出法测量，其中荧光素钠浓度0.5-5％，作为光刺激性评价指标。
7.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(4)评价指标的测量，氧化应激指标选择SOD、MDA、ROS、GSH-Px或过氧化氢酶，炎症指选择IL-1α、IL-1β或TNF-α炎症因子或促炎症因子；收集生物膜夹持器后室液体或者角膜组织匀浆液，根据商品化的检测试剂盒说明书进行相应指标的分析。
8.根据权利要求1所述的采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法，其特征是：所述的步骤(5)最终数据采用均数±标准差表示，试验组与空白组/对照组进行比较，差异在2倍或以上，或者经统计学单因素方差分析差异具有统计学意义者，判定为指标阳性结果；每个类型的指标出现2种或以上阳性结果时，具有阳性作用效应，包括抗氧化、抗炎和抗光刺激，参考化学物或类似化学物的理化信息已知信息，权重评价指标，获得更加可靠的预测。
CN201811060901.4A 2018-09-12 2018-09-12 一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法 Withdrawn CN109321629A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811060901.4A CN109321629A (zh) 2018-09-12 2018-09-12 一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811060901.4A CN109321629A (zh) 2018-09-12 2018-09-12 一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109321629A true CN109321629A (zh) 2019-02-12

Family

ID=65264915

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811060901.4A Withdrawn CN109321629A (zh) 2018-09-12 2018-09-12 一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109321629A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021036146A1 (zh) * 2019-08-26 2021-03-04 广东博溪生物科技有限公司 基于重组皮肤模型的光毒性检测方法
CN117147419A (zh) * 2023-08-30 2023-12-01 衡阳凯新特种材料科技有限公司 一种基于多维度检测的陶瓷发热管质检系统

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102793911A (zh) * 2011-05-24 2012-11-28 李建远 重组人Prx-6蛋白在治疗角膜损伤方面的用途
CN107245509A (zh) * 2017-05-22 2017-10-13 程树军 一种利用离体动物角膜模型多参数检测眼刺激性的方法
CN107796674A (zh) * 2017-07-04 2018-03-13 程树军 一种利用动物离体角膜长期培养模型评价眼刺激性损伤及修复作用评估的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102793911A (zh) * 2011-05-24 2012-11-28 李建远 重组人Prx-6蛋白在治疗角膜损伤方面的用途
CN107245509A (zh) * 2017-05-22 2017-10-13 程树军 一种利用离体动物角膜模型多参数检测眼刺激性的方法
CN107796674A (zh) * 2017-07-04 2018-03-13 程树军 一种利用动物离体角膜长期培养模型评价眼刺激性损伤及修复作用评估的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHIA-FANG TSAI等: "Protective effects of Dunaliella salina - a carotenoids-rich alga - against ultraviolet B-induced corneal oxidative damage in mice", 《MOL VIS》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021036146A1 (zh) * 2019-08-26 2021-03-04 广东博溪生物科技有限公司 基于重组皮肤模型的光毒性检测方法
CN117147419A (zh) * 2023-08-30 2023-12-01 衡阳凯新特种材料科技有限公司 一种基于多维度检测的陶瓷发热管质检系统
CN117147419B (zh) * 2023-08-30 2024-03-15 衡阳凯新特种材料科技有限公司 一种基于多维度检测的陶瓷发热管质检系统

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jones et al. BCLA CLEAR–Contact lens technologies of the future
KR101551590B1 (ko) 신체 조직의 물리적 및/또는 화학적 성질에 영향을 주는 광화학적 요법
Zigman The role of sunlight in human cataract formation
JP2014503317A (ja) 円錐角膜治療のためのイオン導入によるリボフラビンの角膜送達装置及び方法
JP7046390B2 (ja) 細胞および組織に対する外来性分子のナノ強化型光学送達
HORSTEN et al. Development of the ERG in relation to histological differentiation of the retina in man and animals
Bertschinger et al. A review of in vivo animal studies in retinal prosthesis research
CN107249678B (zh) 使用离子电渗法进行生物活性分子的眼内递送
CN109321629A (zh) 一种采用离体角膜器官评价光损伤的体外方法
Nemet et al. Protective effect of free-radical scavengers on corneal endothelial damage in phacoemulsification
CN107796674A (zh) 一种利用动物离体角膜长期培养模型评价眼刺激性损伤及修复作用评估的方法
Abdouh et al. Filtering blue light mitigates the deleterious effects induced by the oxidative stress in human retinal pigment epithelial cells
Abe et al. Functional analysis after auto iris pigment epithelial cell transplantation in patients with age-related macular degeneration
Matsuo A simple method for screening photoelectric dyes towards their use for retinal prostheses.
CN105555363A (zh) 医药组成物及其用途
Raghuvanshi et al. Canine cataracts and its management: An overview
Mannis et al. The effect of fluorouracil on the corneal endothelium
Matsuo et al. Safety, efficacy, and quality control of a photoelectric dye-based retinal prosthesis (Okayama University-type retinal prosthesis) as a medical device
Grabner et al. Unscheduled DNA repair in human lens epithelium following ‘in vivo’and ‘in vitro’ultraviolet irradiation
CN112891326B (zh) 一种载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜及其制备方法
RU2333737C1 (ru) Способ лечения "сухой" формы возрастной макулярной дегенерации
US20200281963A1 (en) Hydrogen molecule-containing prophylactic or therapeutic agent for oxidative damage in intraocular surgeries
Kaul et al. An insight into ocular insert
Shinhmar Light as a biological modulator. A cross species study
Pietras-Baczewska et al. Antioxidants in the retina and vitreous—current state of knowledge

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20190212