CN109316377A - 一种含有融合蛋白的复方精华液及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含有融合蛋白的复方精华液，按照质量百分比由以下材料组成：透明质酸钠0.1‑5％，甘氨酸0.1‑5％，脯氨酸0.1‑5％，多元氨基酸1‑5％，融合蛋白0.001‑0.1％，去离子水80‑99％，以上各组分质量百分比之和为100％。本发明还公开了精华液的制备方法，在去离子水中，加入透明质酸钠，搅拌溶解后再加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸继续搅拌，用NaOH溶液调节pH值为7‑7.5；最后加入融合蛋白、搅拌、过滤除菌，即得到含有融合蛋白的精华液。其中的融合蛋白促进皮肤新的细胞的产生以加速替换衰老和死亡的细胞，同时可以减轻免疫系统的非特异性免疫应答反应。

Description

一种含有融合蛋白的复方精华液及制备方法
技术领域
本发明属于日用化妆品技术领域，具体涉及一种含有融合蛋白的复方精 华液，该精华液具有补水、营养及修复的多功能性美肤功能。还涉及精华液 的制备方法。
背景技术
1、透明质酸对皮肤具有良好保湿、除皱等功能
透明质酸本身是人体皮肤的构成之一，是人体内分布最广的一种酸性多 糖，存在于结缔组织的基质中，具有良好的保湿作用。它是一种高分子的聚 合物，是由单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖，在体内其 分子量从5000道尔顿(Dalton，Da)到2,000万Da不等。小分子透明质酸 (2000-10000Da)可以渗透到皮肤的真皮层，具有轻微扩张毛细血管，增加 血液循环、改善中间代谢、促进皮肤营养吸收作用，具有较强的消皱功能，可增加皮肤弹性，延缓皮肤衰老。中分子透明质酸(1-100万Da)可以渗透 到皮肤的基底层，也就是介于真皮与表皮之间，它可以紧致肌肤，长久保湿， 促进细胞新生，改善细胞环境，提高肌肤自身的抵抗力。大分子透明质酸(100 万Da以上)吸附在皮肤的表面，不易被吸收，可在皮肤表面形成一层透气 的薄膜，使皮肤光滑湿润，并可阻隔外来细菌、灰尘、紫外线的侵入，保护 皮肤免受侵害。它相当于封闭剂可以在皮肤表面形成一层薄膜，阻止水分蒸发。
常见的皮肤护理精华中，加入的透明质酸分子量单一，不能起到全面效 果，本技术中，透明质酸的组成由大小不同的分子组成(2000-10000、1-100 万、100万以上Da)，对皮肤起到一个全面的保护功能。
2、胶原蛋白是维持皮肤弹性的主要物质
胶原蛋白是人体的一个主要组成部分，主要存在于结缔组织中，占人体 蛋白质总量的30％，皮肤的弹性主要是胶原蛋白维持的。因此，越来越多的 人关注胶原蛋白的美容作用，这一点是值得肯定的。但是，市面上有产品宣 传加入了胶原蛋白，可以增加皮肤的弹性，这是错误的：其一外源的胶原蛋 白由于分子量巨大根本不能被皮肤吸收；其二，即便是吸收，也不可能整合 到皮肤的结缔组织中，更不必说会产生过敏反应了。
那如何有效增加胶原蛋白呢？首先我们要了解胶原蛋白的氨基酸组成， 其种类与数量非常有特色，与其他蛋白不同时的是，它富含甘氨酸和羟脯氨 酸。而大多数食用蛋白质只含极少量甘氨酸和羟脯氨酸，因此膳食中这两种 氨基酸相对不足，因此在人体合成胶原蛋白时，由于甘氨酸和脯氨酸相对缺 乏，导致胶原蛋白合成减少，从而影响皮肤组织胶原蛋白的更新。氨基酸分 子量较小(平均分子量为110Da)，能直接被皮肤吸收，因此在精华中添加 适量的甘氨酸和脯氨酸，并添加多元氨基酸提供胶原蛋白合成的其他氨基酸， 皮肤吸收后可以直接参与胶原蛋白的合成，从而增加皮肤的弹性和光洁而达 到美肤效果。
3、表皮生长因子是促进皮肤生长和修复的活性物质
表皮细胞生长因子(EGF)是人体内的一种活性物质，由53个氨基组 成的活性多肽，与表皮细胞生长因子受体(EGFR)结合，启动细胞内信号 途径，促进表皮细胞组织内多种细胞的生长分裂，使表皮细胞变得饱满、恢 复年轻状态，它还可以促使胶原蛋白生长能力，修复老化断裂的胶原弹性纤 维，所以被众多科学家誉为"美丽因子"。早在1992年，EGF就被添加到化 妆品中，开创运用EGF的生物美容新领域，标志着生物基因美容时代的到来。
EGF能促进人体皮肤快速更新，众所周知，年龄越小，肌肤越好，越白 皙娇嫩，其根原就是年龄越小，肌肤中EGF含量越高，肌肤更新速度就越 快，这样肌肤就娇嫩，但随着年龄的增大，肌肤中EGF的含量也逐步下降， 25岁以后，下降更快，这样肌肤就老化、粗糙、沉淀色斑，因此EGF的含 量，决定了皮肤是否娇嫩，所以人们也把EGF称做美丽因子。
传统的功能性化妆品很多会添加人表皮生长因子(hEGF)，但是天然 hEGF产量低，因而价格昂贵；并且该分子本身并不具备有效穿过表皮的能 力，而且还容易被皮肤内的免疫系统清除。因此，添加具有穿透皮肤且抗免 疫清除的hEGF融合蛋白十分必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种含有融合蛋白的复方精华液，能够促进皮肤新 的细胞的产生以加速替换衰老和死亡的细胞，从而实现为肌肤提供修复的功 效。该精华液具有补水、营养及修复的多功能性美肤功能。
本发明的目的还在于提供一种含有融合蛋白的复方精华液的制备方法。
本发明所采用的第一种技术方案是，一种含有融合蛋白的复方精华液， 按照质量百分比由以下材料组成：透明质酸钠0.1-5％，甘氨酸0.1-5％，脯 氨酸0.1-5％，多元氨基酸1-5％，融合蛋白0.001-0.1％，去离子水80-99％， 以上各组分质量百分比之和为100％。
本发明的特点还在于，
透明质酸钠由以下一种或几种成分组成：分子量为2000-10000Da的小 分子透明质酸钠、分子量为1-100万Da的中分子透明质酸钠、分子量大于 100万Da的大分子透明质酸钠。透明质酸钠按照质量百分比由以下成分组 成：分子量为2000-10000Da的小分子透明质酸钠10-40％、分子量为1-100 万Da的中分子透明质酸钠20-40％、分子量大于100万Da的大分子透明质 酸钠20-40％。
多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1-20％、缬氨酸 1-20％、苯丙氨酸1-20％、色氨酸1-20％、丝氨酸1-20％、酪氨酸1-20％、 谷氨酰胺1-20％、赖氨酸1-20％、精氨酸1-20％和组氨酸1-20％，以上各组 分质量百分比之和为100％。
一种含有融合蛋白的复方精华液的制备方法，具体操作步骤如下：
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：透明质酸钠0.1-5％，甘氨酸 0.1-5％，脯氨酸0.1-5％，多元氨基酸1-5％，融合蛋白0.001-0.1％，去离子 水80-99％，以上各组分质量百分比之和为100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7.0-7.5；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均 匀后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的复方精华液。
本发明的特点还在于，
透明质酸钠由以下一种或几种成分组成：分子量为2000-10000Da的小 分子透明质酸钠、分子量为1-100万Da的中分子透明质酸钠、分子量大于 100万Da的大分子透明质酸钠。
多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1-20％、缬氨酸 1-20％、苯丙氨酸1-20％、色氨酸1-20％、丝氨酸1-20％、酪氨酸1-20％、 谷氨酰胺1-20％、赖氨酸1-20％、精氨酸1-20％和组氨酸1-20％，以上各组 分质量百分比之和为100％。
本发明的有益效果是：本发明的一种含有融合蛋白的复方精华液利用人 工表达纯化的，具有低成本、高活性、作用时间久的优点，可以穿过皮肤作 用于细胞表面上的表皮生长因子受体(EGFR)，可以长效发挥EGF促进表 皮生长，促进皮肤新的细胞的产生以加速替换衰老和死亡的细胞，同时可以 减轻免疫系统的非特异性免疫应答反应。
本发明的一种含有融合蛋白的复方精华液，其中的氨基酸组成和比例是 参照天然胶原蛋白的氨基酸组成和比例，直接给皮肤补给合成胶原蛋白所需 的氨基酸，同时加入的透明质酸钠具有很好的保湿作用，从而实现为肌肤提 供水份、营养的功效。
具体实施方式
本发明提供的一种含有融合蛋白的复方精华液，按照质量百分比由以下 材料组成：透明质酸钠0.1-5％，甘氨酸0.1-5％，脯氨酸0.1-5％，多元氨基 酸1-5％，融合蛋白0.001-0.1％，去离子水80-99％，以上各组分质量百分比 之和为100％。
透明质酸钠由以下一种或几种成分组成：分子量为2000-10000Da的小 分子透明质酸钠、分子量为1-100万Da的中分子透明质酸钠、分子量大于 100万Da的大分子透明质酸钠。
多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1-20％、缬氨酸 1-20％、苯丙氨酸1-20％、色氨酸1-20％、丝氨酸1-20％、酪氨酸1-20％、 谷氨酰胺1-20％、赖氨酸1-20％、精氨酸1-20％和组氨酸1-20％，以上各组 分质量百分比之和为100％。
一种含有融合蛋白的复方精华液的制备方法，具体操作步骤如下：
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：透明质酸钠0.1-5％，甘氨酸 0.1-5％，脯氨酸0.1-5％，多元氨基酸1-5％，融合蛋白0.001-0.1％，去离子 水80-99％，以上各组分质量百分比之和为100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7-7.5；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀 后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的精华液。
透明质酸钠由以下一种或几种成分组成：分子量为2000-10000Da的小 分子透明质酸钠、分子量为1-100万Da的中分子透明质酸钠、分子量大于 100万Da的大分子透明质酸钠。
多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1-20％、缬氨酸 1-20％、苯丙氨酸1-20％、色氨酸1-20％、丝氨酸1-20％、酪氨酸1-20％、 谷氨酰胺1-20％、赖氨酸1-20％、精氨酸1-20％和组氨酸1-20％，以上各组 分质量百分比之和为100％。
将既具有蛋白转导功能又具有抗免疫清除能力的新的hEGF融合蛋白多 (专利名称“一种融合蛋白及构建方法与应用”，申请号2018108266745)加 入到精华液中。改良的表皮生长因子(mTAT-hEGF-CD47)可以促进皮肤新 的细胞的产生以加速替换衰老和死亡的细胞，从而实现为肌肤提供修复的功 效。
本发明采用mTAT-hEGF-CD47融合蛋白作为促进表皮细胞的生长液， 使表皮细胞变得饱满、恢复年轻状态，它还可以促使胶原蛋白生长能力，修 复老化断裂的胶原弹性纤维。并且传统的表皮生长因子(hEGF)价格昂贵， 本发明采用该融合蛋白可有效降低精华液的生产成本。
所述融合蛋白的蛋白质序列如下所示：
下面结合实施例对本发明进一步说明
实施例1
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：分子量为2000-10000Da的小分 子透明质酸钠5％，甘氨酸5％，脯氨酸5％，多元氨基酸4％，融合蛋白0.1％， 去离子水80.9％，以上各组分质量百分比之和为100％；
其中，多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸15％、缬氨 酸2％、苯丙氨酸4％、色氨酸14％、丝氨酸8％、酪氨酸12％、谷氨酰胺12％、 赖氨酸18％、精氨酸11％和组氨酸4％，以上各组分质量百分比之和为100％。
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀后， 用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的复方精华液。
实施例2
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：分子量为1-100万Da的中分子 透明质酸钠2％，甘氨酸2％，脯氨酸2％，多元氨基酸2％，融合蛋白0.001％， 去离子水91.999％，以上各组分质量百分比之和为100％；
其中，多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸10％、缬氨 酸10％、苯丙氨酸8％、色氨酸2％、丝氨酸20％、酪氨酸10％、谷氨酰胺 10％、赖氨酸10％、精氨酸10％和组氨酸10％，以上各组分质量百分比之和 为100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7.5；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀 后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的精华液。
实施例3
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：分子量大于100万Da的大分 子透明质酸钠2.3％，甘氨酸0.1％，脯氨酸0.1％，多元氨基酸1.5％，融合 蛋白0.05％，去离子水95.95％，以上各组分质量百分比之和为100％；
其中，多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸10％、缬氨 酸5％、苯丙氨酸5％、色氨酸5％、丝氨酸5％、酪氨酸20％、谷氨酰胺5％、 赖氨酸10％、精氨酸15％和组氨酸20％，以上各组分质量百分比之和为100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7.3；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀 后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的精华液。
实施例4
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：分子量大于100万Da的大分 子透明质酸钠0.1％，甘氨酸0.5％，脯氨酸0.3％，多元氨基酸0.1％，融合 蛋白0.1％，去离子水98.9％，以上各组分质量百分比之和为100％；
其中，多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸20％、缬氨 酸20％、苯丙氨酸20％、色氨酸20％、丝氨酸15％、酪氨酸1％、谷氨酰胺 1％、赖氨酸1％、精氨酸1％和组氨酸1％，以上各组分质量百分比之和为 100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7.3；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀 后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的精华液。
实施例5
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：分子量大于100万Da的大分 子透明质酸钠2％，甘氨酸1％，脯氨酸2％，多元氨基酸4％，融合蛋白0.1％， 去离子水89.9％，以上各组分质量百分比之和为100％；
其中，多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1％、缬氨 酸1％、苯丙氨酸1％、色氨酸1％、丝氨酸1％、酪氨酸15％、谷氨酰胺20％、 赖氨酸20％、精氨酸20％和组氨酸20％，以上各组分质量百分比之和为100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再 加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L 的NaOH溶液将pH值调节为7.3；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀 后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的精华液。
产品性能评价：
试验一：选取100例面部皮肤松弛、色素沉着多、眼部细纹多的试验者， 年龄介于35-65岁之间，清洁皮肤后，将实例1制得的“补水、营养及修复的 多功能性美肤精华液”取1-2ml，均匀涂抹于面部，10分钟后对短期效果评 价的具体结果如表1：
表1试验一统计比较：
结果判断标准：
有效：试验者自我感觉比较满意，面部皮肤更有弹性更加紧致滑润，眼 部细纹明显减少，面部皮肤明显变白。
显效：试验者自我感觉一般满意，面部皮肤弹性有增加，紧致滑润有增 加，眼部细纹有所减少，面部皮肤有所变白。
无效：试验者自我感觉不满意，面部皮肤弹性无增加，紧致滑润无增加， 眼部细纹无减少，面部皮肤无变白。
试验二：选取100例面部皮肤松弛、色素沉着多、眼部细纹多的试验者，年 龄介于35-65岁之间，清洁皮肤后，将实例1制得的“补水、营养及修复的多 功能性美肤精华液”取1-2ml，均匀涂抹于面部，连续使用15天后对效果评 价的具体结果如下：
表2试验二统计比较：
结果判断标准：
有效：试验者自我感觉比较满意，面部皮肤更有弹性更加紧致滑润，眼 部细纹明显减少，面部皮肤明显变白。
显效：试验者自我感觉一般满意，面部皮肤弹性有增加，紧致滑润有增 加，眼部细纹有所减少，面部皮肤有所变白。
无效：试验者自我感觉不满意，面部皮肤弹性无增加，紧致滑润无增加， 眼部细纹无减少，面部皮肤无变白。
受试者均为过敏或其他副反应。

Claims (6)

1.一种含有融合蛋白的复方精华液，其特征在于，按照质量百分比由以下材料组成：透明质酸钠0.1-5％，甘氨酸0.1-5％，脯氨酸0.1-5％，多元氨基酸1-5％，融合蛋白0.001-0.1％，去离子水80-99％，以上各组分质量百分比之和为100％。
2.根据权利要求1所述的一种含有融合蛋白的复方精华液，其特征在于，所述透明质酸钠由以下一种或几种成分组成：分子量为2000-10000Da的小分子透明质酸钠、分子量为1-100万Da的中分子透明质酸钠、分子量大于100万Da的大分子透明质酸钠。
3.根据权利要求1所述的一种含有融合蛋白的复方精华液，其特征在于，所述多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1-20％、缬氨酸1-20％、苯丙氨酸1-20％、色氨酸1-20％、丝氨酸1-20％、酪氨酸1-20％、谷氨酰胺1-20％、赖氨酸1-20％、精氨酸1-20％和组氨酸1-20％，以上各组分质量百分比之和为100％。
4.一种含有融合蛋白的复方精华液的制备方法，其特征在于，具体操作步骤如下：
步骤1，按照质量百分比称取以下材料：透明质酸钠0.1-5％，甘氨酸0.1-5％，脯氨酸0.1-5％，多元氨基酸1-5％，融合蛋白0.001-0.1％，去离子水80-99％，以上各组分质量百分比之和为100％；
步骤2，在所述去离子水中，首先加入所述透明质酸钠，搅拌溶解后再加入甘氨酸、脯氨酸和多元氨基酸，继续搅拌至完全溶解后，使用1mol/L的NaOH溶液将pH值调节为7.0-7.5；最后加入融合蛋白，充分搅拌混合均匀后，用0.22μm除菌过滤器过滤除菌，即得到含有融合蛋白的复方精华液。
5.根据权利要求4所述的一种含有融合蛋白的复方精华液的制备方法，其特征在于，所述透明质酸钠由以下一种或几种成分组成：分子量为2000-10000Da的小分子透明质酸钠、分子量为1-100万Da的中分子透明质酸钠、分子量大于100万Da的大分子透明质酸钠。
6.根据权利要求4所述的一种含有融合蛋白的复方精华液的制备方法，其特征在于，所述多元氨基酸按照质量百分比由以下成分组成：丙氨酸1-20％、缬氨酸1-20％、苯丙氨酸1-20％、色氨酸1-20％、丝氨酸1-20％、酪氨酸1-20％、谷氨酰胺1-20％、赖氨酸1-20％、精氨酸1-20％和组氨酸1-20％，以上各组分质量百分比之和为100％。
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