CN109293666B - 7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种7‑吡唑胺‑[1,2,4]三氮唑并[1,5‑a]嘧啶类化合物，结构式为

其中，所述结构式中的基团R₁代表氢原子或含硫取代基；基团R₂代表氢原子或烷基；基团R₃代表含取代基的吡唑胺基团。本发明还提供一种上述嘧啶并1,2,4‑三氮唑类BRD4抑制剂的制备方法和应用。上述7‑吡唑胺‑[1,2,4]三氮唑并[1,5‑a]嘧啶类化合物具有嘧啶环并1,2,4‑三氮唑的结构单元，该类化合物可以用于以BRD4为靶点的抗肿瘤药物中，为寻找针对BRD4为靶点的新型抗肿瘤药物开辟新途径。另外，本发明提供的7‑吡唑胺‑[1,2,4]三氮唑并[1,5‑a]嘧啶类化合物的合成方法可行，收率高。

Description

7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物及其制备 方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物及其制备方法，以及其在制备以BRD4为靶点的抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

BRD4属于BET蛋白家族中的一种，具有两个BRD区域，BRD4底物广泛，可以识别多种组蛋白赖氨酸的乙酰化修饰，也对多种非组蛋白赖氨酸的乙酰化具有识别作用，其主要底物有H3K9ac，H3K27ac，H3K14ac和H4K5ac，H4K16ac，参与多种生物学功能，对多种疾病的发生有重要作用。由于BRD4底物广泛，可以与多种蛋白相互作用参与多种生物功能，因此BRD4参与多种疾病的发生和发展过程。

在血液系统肿瘤中，BRD4是参与AML的一个关键蛋白，用BRD4抑制剂JQ-1 处理AML细胞系后，BRD4对下游c-Myc基因启动子区域的结合减少，并减少其表达量，抑制c-Myc下游基因表达，并可以在体内延缓肿瘤发展，延长生存期。这种作用在其他类型血液肿瘤中也被发现。BRD4抑制剂也可以增强其他抗肿瘤药物如阿糖胞苷在血液肿瘤中的抗肿瘤活性。在MLL融合型白血病中，BRD4抑制剂I-BET762和 I-BET151可以有效抑制c-Myc和下游基因表达，在小鼠移植模型中具有很强抗肿瘤作用。急性淋巴细胞白血病对BRD4抑制剂也有应答，且可以与地塞米松联用加强其作用。在多发性骨髓瘤MM中，BRD4抑制剂可以抑制c-Myc转录，诱导细胞周期在G1 期阻滞，诱导细胞衰老，并且在体内也有很好抑制肿瘤作用；在淋巴瘤中，BRD4抑制剂可以抑制不同起源的淋巴瘤细胞的生长。BET抑制剂可以在弥散型B细胞淋巴瘤模型中具有很强抑制肿瘤的作用。

在实体瘤中，BRD4也具有重要作用。BRD4在睾丸线癌中的作用是第一次发现 BRD4在实体瘤中的作用。BRD4的BRD编码区可与NUT基因染色质易位形成 BRD-NUT融合型原癌基因，表达的融合蛋白招募HAT蛋白，导致组蛋白高度乙酰化，上调c-Myc及其下游基因表达，抑制细胞分化，引起线癌的发生。NMC移植模型中， BRD4抑制剂可有效抑制肿瘤生长，延长生存期。BRD4在肺腺癌中也异常表达，BRD4 抑制剂在肺腺癌细胞移植瘤模型中影响BRD4/NF-κB的相互作用，在非小细胞肺癌中， BRD4抑制剂影响c-Myc表达，并且主要参与在野生型LKB的KRAS突变体中。在前列腺癌和乳腺癌的发生中，BRD4的抑制剂可以下调c-Myc和BCL2的表达，抑制肿瘤细胞生长。BRD4还可以和BRD3与雌激素受体启动子结合，影响下游雌激素靶基因表达，这种作用可以被BRD4抑制剂阻止，抑制乳腺癌肿瘤细胞生长，与ER去稳定剂氟维司群联用可加强抗肿瘤作用。在体内，BRD4抑制剂也表现出很强的抑制乳腺肿瘤生长的作用。在恶性胰腺癌细胞中，c-Myc，HMGA2和FOSL1的表达可以被 BRD4抑制剂调节，影响肿瘤生长。BRD4在许多原发或者转移性的黑色素瘤中过度表达，BRD4抑制剂MS417和MS436可以在不同黑色素瘤细胞中表现较强的抗恶性肿瘤细胞增生的作用，下调c-Myc的表达，上调p21和p27表达；MS417可以在A375 黑色素细胞移植瘤中抑制肿瘤生长，减少肿瘤细胞转移；还可以下调NF-κB，影响多种基因转录表达。BRD4在恶性胶质瘤中和成神经细胞瘤也过度表达，c-Myc和BCL2 的表达可以被JQ1下调从而减少常位恶性胶质瘤的增殖，也可以上调p21表达，诱导细胞凋亡，在不同种成神经细胞瘤小鼠移植模型中，JQ1可有效减小肿瘤体积，延长生存期。下调MYCN、c-Myc和BCL2的表达。

由此可见，BRD4在血液肿瘤(白血病，多发性骨髓瘤，淋巴瘤)，实体瘤(NUT 线癌，肺腺癌，前列腺癌，乳腺癌，黑色素瘤等)多种肿瘤中异常表达，其抑制剂也用于多种疾病的治疗，因此，BRD4作为药物靶点，其抑制剂的发现对肿瘤治疗具有重要意义。所以，设计靶向BRD4的用于肿瘤治疗的新型小分子化合物具有重大的科学意义和实际应用价值。

发明内容

有鉴于此，本发明确有必要提供一种7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物及其制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明提供一种7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物，结构式为：

其中，所述结构式基团R₁代表氢原子或含硫取代基，基团R₂代表氢原子或烷基，基团R₃代表含取代基的吡唑胺基团。其中，本文中“含硫取代基”主要是由巯基中的氢原子被含烷基的基团取代而得到的，其能在所述结构式中形成硫醚官能团的基团；本文中“含取代基的吡唑胺基团”主要是吡唑胺基团中吡唑中的碳原子上的氢原子被其它基团取代而形成的。

基于上述，所述结构式的基团R₂代表氢原子、甲基或正戊烷基。

基于上述，所述7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物为具有下列基团的化合物之一：

D1:

R₂＝H-，

D2:

R₂＝H-，

D3:

R₂＝H-，

D4:

R₂＝H-，

D5:

R₂＝H-，

D6:

R₂＝H-，

D7:

R₂＝H-，

D8:

R₂＝H-，

D9:

R₂＝H-，

D10:

R₂＝H-，

D11:

R₂＝H-，

D12:

R₂＝H-，

D13:

R₂＝H-，

D14:

R₂＝H-，

D15:

R₂＝H-，

D16:

R₂＝H-，

D17:

R₂＝H-，

D18:

R₂＝H-，

D19:

R₂＝H-，

D20:

R₂＝H-，

D21:

R₂＝H-，

D22:

R₂＝H-，

D23:

R₂＝CH₃-，

D24:

R₂＝CH₃(CH₂)₄-，

D25:

R₂＝H-，

D26:

R₂＝H-，

D27:

R₂＝H-，

D28:

R₂＝H-，

D29:R₁＝H-，R₂＝H-，

本发明还提供一种上述所述7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物的制备方法，包括步骤：以乙醇为溶剂，以乙醇为溶剂，将化合物C与吡唑胺类化合物R₃H 于碱性环境中常温进行反应，制得所述7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物，其中，所述化合物C的结构式为

所述7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a] 嘧啶类化合物的制备路线如下所示：

基于上述，提供所述碱性环境的物质为三乙胺。

基于上述，所述化合物C的制备方法包括：化合物B与三氯氧磷于85℃-95℃进行回流反应，制得所述化合物C；其中，所述化合物B的结构式为

所述化合物C的制备路线如下所示：

基于上述，所述化合物B的制备方法包括：化合物A与β-酮酸酯类化合物CH₃COR₂COOC₂H₅在115℃-125℃温度下于冰醋酸中进行反应，制得所述化合物B；其中，所述化合物A的结构式为

所述化合物B的制备路线如下所示：

其中，当化合物A的结构为

时，可以通过购买获得。当所述基团R₁代表含硫取代基时，所述化合物A的制备方法包括：以丙酮为溶剂，将2-氨基-5-巯基 -1,2,4-三氮唑在碱性条件下与氯化物R₄Cl于55℃-65℃反应，制得所述化合物A；其中，所述化合物A基团R₁为R₄S-，所述基团R₄代表含烷基的基团，包括烷基、具有烷基的烯烃基团、具有烷基的炔烃基团、具有烷基的环烃基团以及它们的各种取代基团；此时，该化合物A的制备路线如下所示：

本发明还提供一种7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物在制备以BRD4 为靶点的抗肿瘤药物中的应用。

因此，本发明提供的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物具有嘧啶环并 1,2,4-三氮唑的结构单元，该类化合物可以用作BRD4抑制剂，用于制备以BRD4为靶点的抗肿瘤药物中，为寻找针对BRD4为靶点的新型抗肿瘤药物开辟新途径，比如肺癌、胃癌或白血病等实体瘤或血液瘤。另外，本发明提供的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并 [1,5-a]嘧啶类化合物的合成方法可行，收率高；进一步，本发明提供的以化合物B与不同结构的吡唑胺类化合物为原料，在碱性环境中合成7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a] 嘧啶类化合物产品，有利于合成反应向正反应方向进行，促进化合物C中的嘧啶环上的Cl原子与吡唑胺类化合物中的吡唑环上的胺基NH₂发生取代反应，避免化合物C 中的嘧啶环上的Cl原子被其他基团取代，从而有利于提高原料利用率和产品收率；当以2-氨基-5-巯基-1,2,4-三氮唑为原料、化合物A、B及C为中间体时，合成7-吡唑胺 -[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类目标化合物的总收率可达45％以上。

附图说明

图1为本发明实施例提供的化合物D1至D29在浓度为10μM时对BRD4-BD1蛋白的抑制率柱状图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种化合物D1，该化合物D1的结构式如下所示：

该化合物D1的制备方法包括以下步骤：

(1)制备化合物A将1g(约8.61mmoL)的2-氨基-5-巯基-1,2,4-三氮唑和1.37g (约12.92mmoL)的碳酸钠分别加入到反应瓶中，然后加入约20mL丙酮，加(约 9.47mmoL)氯化物

并在60℃下回流反应，采用薄层层析TLC监测反应。反应结束后，直接抽滤，滤液经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)得到纯品化合物A。经测量计算：化合物A的收率约为64％。该化合物A为白色固体，熔点140℃-147℃。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.98(d,J＝1.9Hz,1H),7.70(s, 1H),7.41(m,1H),6.10(s,2H),4.50(s,2H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ139.20, 138.23,132.05,129.40,127.48,124.65,124.48,121.63,56.00,28.20,18.52.HRMS(ESI): m/z calcd for C₁₁H₁₀ClN₄S₂(M+H)^-,297.0035；found,297.0024；因此，可以确定所述化合物A的结构式为

(2)制备化合物B将1g(约3.37mmoL)化合物A加入反应瓶中，再加入20mL 冰醋酸，然后缓慢滴加526.20mg(约4.04mmol)乙酰乙酸乙酯并在120℃加热回流，采用TLC监测反应。反应结束后，将该反应体系投入冰水中，有大量白色固体析出，直接抽滤得白色固体。将该白色固体置于60℃烘箱中干燥6h得纯品化合物B。经测量计算：该化合物B的收率约为73％。该化合物B为白色固体，熔点215℃-218℃。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.21(s,1H),8.05(t,J＝5.7Hz,2H),7.83(s,1H),7.43(m,J ＝8.6,2.0Hz,1H),5.83(s,1H),4.72(s,2H),2.30(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ 161.71,154.82,151.19,150.76,139.08,138.22,131.01,129.56,128.29,124.73,124.61,121.56, 98.54,27.93,18.50.HRMS(ESI):m/z calcd for C₅H₁₂ClN₄OS₂(M+H)⁺,363.0141；found, 363.0127；因此，可以确定所述化合物B的结构式为

(3)制备化合物C将1.12g化合物B加入反应瓶中后，再缓慢滴加20mL三氯氧磷，并在90℃加热回流下；采用TLC监测该反应体系，待反应结束后，依次经乙酸乙酯萃取、无水硫酸镁干燥2h后，再经抽滤、浓缩得化合物C，该化合物C的结构式为

该化合物C为橘红色固体，且该化合物不稳定。

(4)制备化合物D1将150mg(约0.393mmol)化合物C，和62.63mg(约 0.393mmoL)3-苯基-1H-吡唑-5-胺加入反应瓶中，再加入2mL乙醇后加入119.43mg (约1.18mmol)三乙胺，并于常温下反应；采用TLC监测该反应体系。待反应结束后，经柱层析处理得到纯化合物D1。该化合物D1为白色固体，且经检测计算其收率约为56％，熔点为169℃-172℃。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(d,J＝1.8Hz,1H), 8.04(d,J＝8.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.76(d,J＝7.5Hz,2H),7.49(t,J＝7.6Hz,2H), 7.46–7.32(m,3H),6.70(s,1H),4.86(s,2H),2.50(s,3H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ164.18,155.58,147.55,142.98,142.67,139.14,138.25,131.48,129.52, 129.04,128.85,128.43,125.18,124.71,124.55,121.65,95.00,91.92,27.85,24.97.HRMS (ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,504.0832；found,504.0830；因此，可以确定所述化合物D1的结构式如上所示。

实施例2

本实施例提供一种化合物D2，该化合物D2的结构式如下所示：

该化合物D2的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、化合物B及化合物C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D2为白色固体，且经检测计算其收率约为73％，150℃-153℃；¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ7.56(d,J＝7.6Hz,2H),7.23(t,J＝7.5Hz,2H),7.18–7.06(m,2H),6.51(s, 1H),3.02(t,J＝7.1Hz,2H),2.30(s,3H),1.51(m,2H),0.77(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C NMR (100MHz,DMSO-d₆)δ165.51,160.01,151.78,146.17,144.50,143.19,129.00,128.67, 128.60,125.32,95.81,92.55,32.74,22.68,22.08,13.01.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,366.1501；found,366.1496；因此，可以确定所述化合物D2的结构式如上所示。

实施例3

本实施例提供一种化合物D3，该化合物D3的结构式如下所示：

该化合物D3的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D3为白色固体，且经检测计算其收率约为62％，182℃-193℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 7.76(d,J＝7.4Hz,2H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.39(dd,J＝17.4,10.0Hz,2H),6.70(s, 1H),6.06(m,1H),5.37(dd,J＝17.0,1.5Hz,1H),5.23–5.07(m,1H),3.97(d,J＝6.9Hz, 2H),2.49(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.18,164.02,155.49,142.93, 133.96,129.04,128.49,125.17,118.07,94.96,91.86,33.33,24.92.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,364.1344；found,364.1345；因此，可以确定所述化合物D3的结构式如上所示。

实施例4

本实施例提供一种化合物D4，该化合物D4的结构式如下所示：

该化合物D4的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D4为白色固体，且经检测计算其收率约为61％，151℃-158℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.65 (dd,J＝8.2,1.1Hz,2H),7.37(t,J＝7.6Hz,2H),7.26(dd,J＝10.5,4.2Hz,1H),5.86– 5.74(m,2H),4.02(d,J＝2.6Hz,2H),3.21(s,1H),2.30(s,3H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ160.90,154.84,151.32,150.91,128.55,127.19,124.67,98.54,79.98,73.86, 19.03,18.56.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,362.1188；found,362.1181；因此，可以确定所述化合物D4的结构式如上所示。

实施例5

本实施例提供一种化合物D5，该化合物D5的结构式如下所示：

该化合物D5的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D5为白色固体，且经检测计算其收率约为81％，166℃-172℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.79 (d,J＝7.3Hz,2H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),7.43–7.30(m,2H),6.73(s,1H),3.25(d,J＝7.3Hz,2H),2.53(s,3H),1.33–1.18(m,1H),0.63–0.50(m,2H),0.44–0.30(m,2H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ165.52,160.78,152.51,146.41,144.21,143.13,129.03, 128.74,128.60,125.29,95.65,92.40,55.99,36.45,22.65,11.11,5.72.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,378.1501；found,378.1497；因此，可以确定所述化合物D5 的结构式如上所示。

实施例6

本实施例提供一种化合物D6，该化合物D6的结构式如下所示：

该化合物D6的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D6为白色固体，且经检测计算其收率约为71％，192℃-196℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.75 (d,J＝7.5Hz,2H),7.58–7.23(m,4H),6.70(s,1H),3.19(d,J＝6.6Hz,2H),2.48(s,3H), 1.86(d,J＝11.9Hz,2H),1.65(d,J＝19.4Hz,4H),1.17(m,3H),1.02(m,2H).¹³C NMR (100MHz,DMSO-d₆)δ165.22,163.49,155.06,143.06,129.03,128.49,125.18,95.08, 91.84,31.81,25.80,25.43,24.61.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺, 420.1970；found,420.1963；因此，可以确定所述化合物D6的结构式如上所示。

实施例7

本实施例提供一种化合物D7，该化合物D7的结构式如下所示：

该化合物D7的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D7为白色固体，且经检测计算其收率约为59％，199℃-202C；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23 (d,J＝8.3Hz,1H),7.97(d,J＝7.9Hz,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.75(m,3H),7.67–7.34(m,7H),6.69(s,1H),5.08(s,2H),2.50(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ 133.49,133.03,130.96,129.03,128.69,128.24,127.66,126.43,125.97,125.47,125.16, 123.81,32.59,24.96.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,464.1657；found, 464.1656；因此，可以确定所述化合物D7的结构式如上所示。

实施例8

本实施例提供一种化合物D8，该化合物D8的结构式如下所示：

该化合物D8的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D8为白色固体，且经检测计算其收率约为61％，136℃-142℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 7.84–7.74(m,2H),7.62–7.53(m,2H),7.49(t,J＝7.6Hz,2H),7.40(t,J＝7.4Hz,1H), 7.35(s,1H),7.20–7.13(m,2H),6.74(s,1H),4.58(s,2H),2.54(s,3H).¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d₆)δ164.25,164.08,155.42,143.09,137.42,131.90,130.85,129.12,128.59, 128.42,125.25,95.09,92.01,33.75,24.88.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺, 432.1407；found,432.1411；因此，可以确定所述化合物D8的结构式如上所示。

实施例9

本实施例提供一种化合物D9，该化合物D9的结构式如下所示：

该化合物D9的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物A、 B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D9为白色固体，且经检测计算其收率约为53％，174℃-177℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.81 –7.71(m,2H),7.59–7.46(m,4H),7.37(m,4H),6.70(s,1H),4.55(s,2H),2.49(s,3H). ¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.17,164.00,155.35,143.02,137.34,131.82,130.78, 129.04,128.51,128.35,125.17,95.01,91.93,33.67,24.81.HRMS(ESI):m/z calcd for C₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,448.1111；found,448.1107；因此，可以确定所述化合物D9的结构式如上所示。

实施例10

本实施例提供一种化合物D10，该化合物D10的结构式如下所示：

该化合物D10的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为。该化合物D10为白色固体，且经检测计算其收率约为77％，162℃-164℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.75 (d,J＝7.5Hz,2H),7.48(d,J＝4.5Hz,6H),7.36(m,2H),6.69(s,1H),4.52(s,2H),2.48 (s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.16,163.97,155.26,143.05,137.73,131.26, 131.13,129.05,128.88,128.53,125.17,120.33,95.03,91.94,33.73,24.73.HRMS(ESI): m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,492.0606；found,492.0602；因此，可以确定所述化合物D10的结构式如上所示。

实施例11

本实施例提供一种化合物D11，该化合物D11的结构式如下所示：

该化合物D11的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D11 为白色固体，且经检测计算其收率约为88％，181℃–183℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.84–7.78(m,2H),7.75(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.67(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),7.50(t, J＝7.6Hz,2H),7.43–7.33(m,3H),7.25(m,1H),6.75(s,1H),4.67(s,2H),2.54(s,3H). ¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ161.65,154.82,151.26,150.84,140.59,131.50,130.55, 130.11,128.55,127.92,127.18,124.66,121.50,98.53,33.71,18.56.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,492.0606；found,492.0602；因此，可以确定所述化合物D8 的结构式如上所示。

实施例12

本实施例提供一种化合物D12，该化合物D12的结构式如下所示：

该化合物D12的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D12 为白色固体，且经检测计算其收率约为78％，138℃-142℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.81–7.72(m,3H),7.58–7.37(m,5H),7.30(m,2H),6.70(d,J＝5.7Hz,1H),4.56(s, 2H),2.49(s,3H).¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.07,155.46,142.98,141.17, 131.60,130.55,130.05,129.05,128.51,128.03,125.18,121.46,94.98,91.94,33.68,24.90. HRMS(ESI):m/z calcd forC₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,492.0606；found,492.0603；因此，可以确定所述化合物D12的结构式如上所示。

实施例13

本实施例提供一种化合物D13，该化合物D13的结构式如下所示：

该化合物D13的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D13 为白色固体，且经检测计算其收率约为83％，150℃-155℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ8.27–8.12(m,3H),7.88–7.69(m,5H),7.49(t,J＝7.6Hz,2H),7.37(m,2H),6.70(s, 1H),4.68(s,2H),2.48(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.13,163.77,155.43, 150.81,146.62,146.55,146.00,143.03,130.15,130.02,129.03,128.49,125.19,123.49, 98.56,95.02,91.97,33.62,24.85,18.47.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺, 459.1352；found,459.1340；因此，可以确定所述化合物D13的结构式如上所示。

实施例14

本实施例提供一种化合物D14，该化合物D14的结构式如下所示：

该化合物D14的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D14 为白色固体，且经检测计算其收率约为76％，158℃-162℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.83(d,J＝7.3Hz,2H),7.61(d,J＝8.0Hz,2H),7.54(t,J＝7.6Hz,2H),7.50–7.41(m, 3H),6.78(s,1H),4.91(s,2H),2.59(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.08, 162.38,153.83,146.82,143.77,143.02,135.12,131.95,130.59,129.04,128.84,128.58, 125.24,95.30,92.41,31.64,23.64.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺, 482.0721；found,482.0717；因此，可以确定所述化合物D14的结构式如上所示。

实施例15

本实施例提供一种化合物D15，该化合物D15的结构式如下所示：

该化合物D15的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D15 为白色固体，且经检测计算其收率约为63％，169℃-172℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.75(m,4H),7.68(t,J＝4.1Hz,3H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),7.37(m,2H),6.70(s,1H), 4.64(s,2H),2.48(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ161.69,154.82,151.24, 150.82,137.23,131.29,131.03,128.55,127.18,124.66,120.38,98.51,33.75,18.55. HRMS(ESI):m/z calcd forC₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,482.1375；found,482.1368；因此，可以确定所述化合物D15的结构式如上所示。

实施例16

本实施例提供一种化合物D16，该化合物D16的结构式如下所示：

该化合物D16的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D16 为白色固体，且经检测计算其收率约为69％，173℃-175℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.81–7.74(m,2H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.46–7.38(m,3H),7.35(s,1H),6.92–6.86(m,2H),6.73(s,1H),4.53(s,2H),3.73(s,3H),2.53(s,3H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ164.84,162.31,158.53,153.88,146.83,143.67,143.02,130.18,129.45, 129.05,128.82,128.57,125.23,113.87,95.35,92.19,55.04,34.19,23.69.HRMS(ESI): m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,444.1607；found,444.1602；因此，可以确定所述化合物D16的结构式如上所示。

实施例17

本实施例提供一种化合物D17，该化合物D17的结构式如下所示：

该化合物D17的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D17为白色固体，且经检测计算其收率约为82％，151℃-156℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.75(d,J＝7.5Hz,2H),7.58–7.26(m,6H),7.12(d,J＝7.7Hz,2H),6.70(s,1H),4.52 (s,2H),2.49(s,3H),2.26(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.49,164.06, 155.46,142.92,136.43,134.75,129.03,128.98,128.83,128.49,125.17,94.93,91.89, 34.39,24.91,20.64.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,428.1657；found, 428.1651；因此，可以确定所述化合物D17的结构式如上所示。

实施例18

本实施例提供一种化合物D18，该化合物D18的结构式如下所示：

该化合物D18的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D18 为白色固体，且经检测计算其收率约为59％，168℃-176℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.76(d,J＝7.5Hz,2H),7.56–7.30(m,9H),7.27–7.19(m,1H),6.70(s,1H),3.56– 3.49(m,2H),3.13–3.01(m,2H),2.49(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.66, 163.95,155.51,142.95,139.99,129.04,128.63,128.49,128.32,126.30,125.17,95.00, 91.83,35.42,31.94,24.88.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,428.1657； found,428.1650；因此，可以确定所述化合物D18的结构式如上所示。

实施例19

本实施例提供一种化合物D19，该化合物D19的结构式如下所示：

该化合物D19的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D19 为白色固体，且经检测计算其收率约为60％，208℃-212℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.84–7.73(m,2H),7.49(t,J＝7.6Hz,2H),7.45–7.12(m,7H),6.70(s,1H),3.27(t,J ＝7.1Hz,2H),2.88–2.68(m,2H),2.48(s,3H),2.13–1.94(m,2H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ164.76,163.75,155.33,142.98,141.14,129.02,128.48,128.31,128.28, 125.84,125.17,95.01,91.85,33.99,31.08,30.30,24.78.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,442.1814；found,442.1807；因此，可以确定所述化合物D19的结构式如上所示。

实施例20

本实施例提供一种化合物D20，该化合物D20的结构式如下所示：

该化合物D20的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D20 为白色固体，且经检测计算其收率约为59％，213℃-216℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ7.83(m,4H),7.60–7.48(m,4H),7.46–7.37(m,2H),6.99(s,1H),5.13(s,2H),2.52(s, 3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ162.78,162.51,154.10,150.70,146.64,143.76, 142.95,130.65,129.04,128.82,128.57,125.93,125.28,113.96,95.72,92.41,25.17,23.51. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,454.1562；found,454.1558；因此，可以确定所述化合物D20的结构式如上所示。

实施例21

本实施例提供一种化合物D21，该化合物D21的结构式如下所示：

该化合物D21的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D21 为白色固体，且经检测计算其收率约为43％，138℃-145℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ8.10(d,J＝6.4Hz,2H),7.93–7.26(m,9H),6.72(s,1H),5.07(s,2H),2.49(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ193.35,164.45,162.36,153.82,146.79,143.65,143.03, 135.48,133.71,129.03,128.84,128.56,128.38,125.25,124.50,95.36,92.20,23.71. HRMS(ESI):m/z calcd forC₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,442.1450；found,442.1453；因此，可以确定所述化合物D21的结构式如上所示。

实施例22

本实施例提供一种化合物D22，该化合物D22的结构式如下所示：

该化合物D22的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为

该化合物D22 为白色固体，且经检测计算其收率约为39％，221℃-223℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ8.34(m,1H),8.12–7.85(m,4H),7.81–7.65(m,5H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),7.39(t,J ＝7.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.85(s,1H),6.69(d,J＝5.6Hz,1H),4.88(s,2H),2.49(s,3H). ¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.39,163.30,159.54,154.69,152.26,150.25,143.49, 143.01,134.29,129.03,128.84,128.55,127.93,127.47,125.20,124.05,122.30,121.56, 120.99,114.66,113.53,95.24,92.19,31.01,24.23.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S (M+H)⁺,532.1556；found,532.1541；因此，可以确定所述化合物D22的结构式如上所示。

实施例23

本实施例提供一种化合物D23，该化合物D23的结构式如下所示：

该化合物D23的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁和基团R₂不同，本实施例中的基团R₁为

基团R₂为CH₃-。该化合物D23为白色固体，且经检测计算其收率约为65％，167℃-171℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.76(d,J＝7.3Hz,2H),7.52–7.42(m,4H),7.34(m, 3H),6.57(s,1H),4.44(s,2H),2.47(s,3H),1.91(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆) δ163.59,142.78,137.46,131.72,130.73,128.94,128.26,124.95,102.02,100.38,97.34, 33.47,23.86,12.92.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,462.1268；found, 462.1260；因此，可以确定所述化合物D23的结构式如上所示。

实施例24

本实施例提供一种化合物D24，该化合物D24的结构式如下所示：

该化合物D24的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁和基团R₂不同，本实施例中的基团R₁为

基团 R₂为CH₃(CH₂)₄-。该化合物D24为白色固体，且经检测计算其收率约为59％，153℃-156℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.79(d,J＝7.3Hz,2H),7.45(t,J＝7.5Hz,2H),7.37(m, 3H),7.31–7.26(m,2H),6.72(s,1H),4.33(s,2H),2.53(s,3H),2.48–2.40(m,2H),1.35 (t,J＝15.2Hz,2H),1.23–1.03(m,4H),0.73(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ163.82,151.36,144.50,143.83,136.98,131.80,130.64,128.96,128.59, 128.25,125.17,124.50,106.80,98.98,33.44,31.15,27.83,25.26,21.87,20.82,13.83. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,518.1894；found,518.1889；因此，可以确定所述化合物D24的结构式如上所示。

实施例25

本实施例提供一种化合物D25，该化合物D25的结构式如下所示：

该化合物D25的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁和基团R₃不同，本实施例中的基团R₁为

基团 R₃为

该化合物D25为白色固体，且经检测计算其收率约为63％，172℃-175℃；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.80(dd,J＝8.6,5.4Hz,2H),7.57–7.45 (m,4H),7.35(dd,J＝10.9,6.7Hz,3H),6.67(d,J＝2.1Hz,1H),4.54(s,2H),2.49(s,3H). ¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.14,155.50,147.61,142.91,141.75,137.83,131.28, 131.13,127.43,127.35,125.52,120.32,116.14,115.93,95.00,91.95,33.72,24.96.HRMS (ESI):m/z calcd forC₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,510.0512；found,510.0510；因此，可以确定所述化合物D25的结构式如上所示。

实施例26

本实施例提供一种化合物D26，该化合物D26的结构式如下所示：

该化合物D26的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁和基团R₃不同，本实施例中的基团R₁为

基团 R₃为

该化合物D26为白色固体，且经检测计算其收率约为49％， 186℃-188℃；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.78(d,J＝8.5Hz,2H),7.52(m,6H), 7.33(s,1H),6.71(d,J＝1.8Hz,1H),4.54(s,2H),2.49(s,3H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ161.54,154.81,151.27,150.84,142.78,129.58,128.54,127.18,125.28, 125.24,124.66,98.53,33.83,18.54.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺, 526.0216；found,526.0215；因此，可以确定所述化合物D26的结构式如上所示。

实施例27

本实施例提供一种化合物D27，该化合物D27的结构式如下所示：

该化合物D27的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁和基团R₃不同，本实施例中的基团R₁为

基团R₃为

该化合物D27为白色固体，且经检测计算其收率约为68％，167℃-169℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.49(m,4H),7.36(s,1H),6.05(d,J＝2.3Hz,1H),4.52(s, 2H),2.46(s,3H),1.29(s,9H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.51,156.00,153.67, 146.73,143.32,138.36,131.77,131.64,120.82,93.91,92.40,56.50,34.17,31.14,30.34, 25.45,19.02.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,472.0919；found,472.0918；因此，可以确定所述化合物D27的结构式如上所示。

实施例28

本实施例提供一种化合物D28，该化合物D28的结构式如下所示：

该化合物D28的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁和基团R₃不同，本实施例中的基团R₁为

基团 R₃为

该化合物D28为白色固体，且经检测计算其收率约为45％，171℃–176℃；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.62(d,J＝4.7Hz,1H),7.48(q,J＝8.5Hz,5H),7.36(s, 1H),7.19–7.13(m,1H),6.52(s,1H),4.53(s,2H),2.49(s,3H).¹³C NMR(100MHz, DMSO-d₆)δ164.67,155.91,143.38,138.30,131.78,131.62,128.59,126.86,125.44, 120.84,95.63,92.54,34.26,25.41.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺, 498.0170；found,498.0171；因此，可以确定所述化合物D28的结构式如上所示。

实施例29

本实施例提供一种化合物D29，该化合物D29的结构式如下所示：

该化合物D29的制备方法与实施例1提供的化合物D1的制备方法基本相同，不同之处主要在于：参加反应的化合物A、B及C的结构式与实施例1中的不同，尤其是化合物 A、B及C的结构式中的基团R₁不同，本实施例中的基团R₁为H-。该化合物D29为白色固体，且经检测计算其收率约为59％，138℃-141℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.89 (s,1H),7.87–7.74(m,2H),7.50(t,J＝7.6Hz,3H),7.40(t,J＝7.4Hz,1H),6.75(s,1H), 2.59(s,3H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ163.51,151.69,150.86,146.40,145.26, 143.17,129.04,128.70,128.64,125.32,95.66,93.50,23.23.HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₃H₁₂N₅S(M+H)⁺,292.1311；found,292.1304；因此，可以确定所述化合物D29的结构式如上所示。

BRD4抑制活性测定

实验方法：样品为上述实施例所合成的化合物D1至D29，用作BRD4的抑制剂；样品储备液：称取1-2mg样品于1.5mL EP管中，用DMSO溶剂配制成浓度为20mM 的溶液，4℃保存，实验过程中，再用DMSO溶剂稀释至所需浓度。将样品和BRD4 重组蛋白和H4Ac底物及化合物室温孵育，加入Anti-GST-Cryptate和Streptavidin-d2孵育，酶标仪HTRF方法测定在激发光320nm，发射光665nm和615nm处荧光数值，并计算 665nm/615nm值，实验结果采用Graphpad软件计算样品浓度为10μM时对BRD4-BD1 蛋白的抑制率，结果如图1所示。

从图1中可以看出：抑制率大于30％的样品有化合物D1、D7、D12至D15、D18、 D19和D24。对抑制率大于30％的样品针对BRD4-BD1和BRD4-BD2进行进一步的半抑制浓度IC₅₀值测定，结果如表1所示。

表1抑制率大于30％的样品对BRD4蛋白的IC₅₀值表

肿瘤细胞增殖抑制活性的测定

样品为本发明实施例提供的上述化合物D1、D7、D12至D15、D18、D19和D24；样品储备液：称取1-2mg样品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成浓度是 10mM的溶液，4℃保存放置，实验所需浓度利用培养基稀释。

取对数生长期的THP-1细胞，将化合物用细胞培养基1640培养基配置为浓度为50，25，12.5，6.26，3.125，1.56，0.78，0.39，0.19，0.09μM的梯度浓度溶液，并用来培养THP-1细胞，形成THP-1细胞悬液；稀释上述THP-1细胞悬液，用血细胞计数板计数，然后将适量稀释后的THP-1细胞悬液加入不同化合物浓度溶液中，保证细胞密度为4000/100μL，移液器吹打混匀；将上述THP-1细胞和化合物的混合液加入96孔细胞培养板中，每孔100μL，在培养板最外层孔中加入200μL PBS。培养2-3天后，取出培养板，800rpm离心6min，小心吸出50μL上层培养基，加入新鲜的样品储备液，继续培养至5天。化合物刺激THP-1细胞5天后，在THP-1细胞中加入MTT溶液，每孔20μL，培养箱中继续培养4h，每孔中加入100μL三联液，培养箱中过夜，酶标仪570nm测定吸光度，根据吸光度计算THP-1细胞存活率，利用GraphPad计算化合物对THP-1细胞增殖抑制的IC₅₀，如表2所示。

表2样品对THP-1细胞的增值抑制活性表

样品	IC<sub>50</sub>(μM)	样品	IC<sub>50</sub>(μM)
				化合物D1	16.59±0.71	化合物D15	16.01±1.82
化合物D7	17.48±1.73	化合物D18	30.23±2.15
				化合物D12	26.94±1.21	化合物D19	19.97±0.56
化合物D13	11.89±0.95	化合物D24	55.68±2.69
				化合物D14	17.74±1.19	——	——

从表2中可以看出本发明实施例提供的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物对THP-1细胞有抑制作用，可以用作BRD4抑制剂，能够用于制备以BRD4为靶点的抗肿瘤药物中，为寻找针对BRD4为靶点的新型抗肿瘤药物开辟新途径，比如肺癌、胃癌或白血病等实体瘤或血液瘤。

最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (6)

1.一种7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物，结构式为

其中，它为具有下列基团的化合物之一：

D1:

R₂＝H-，

D2:

R₂＝H-，

D3:

R₂＝H-，

D4:

R₂＝H-，

D5:

R₂＝H-，

D6:

R₂＝H-，

D7:

R₂＝H-，

D8:

R₂＝H-，

D9:

R₂＝H-，

D10:

R₂＝H-，

D11:

R₂＝H-，

D12:

R₂＝H-，

D13:

R₂＝H-，

D14:

R₂＝H-，

D15:

R₂＝H-，

D16:

R₂＝H-，

D17:

R₂＝H-，

D18:

R₂＝H-，

D19:

R₂＝H-，

D20:

R₂＝H-，

D21:

R₂＝H-，

D22:

R₂＝H-，

D23:

R₂＝CH₃-，

D24:

R₂＝CH₃(CH₂)₄-，

D25:

R₂＝H-，

D26:

R₂＝H-，

D27:

R₂＝H-，

D28:

R₂＝H-，

D29:R₁＝H-，R₂＝H-，

2.一种权利要求1所述的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物的制备方法，包括步骤：以乙醇为溶剂，将化合物C与吡唑胺类化合物R₃H在碱性环境中，于常温下反应，制得所述7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物；其中，所述化合物C结构为

3.根据权利要求2所述的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于，提供所述碱性环境的物质为三乙胺。

4.根据权利要求2或3所述的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物C的制备方法包括：化合物B与三氯氧磷于85℃-95℃进行回流反应，制得所述化合物C；其中，所述化合物B的结构式为

5.根据权利要求4所述的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物B的制备方法包括：化合物A与β-酮酸酯类化合物

在115℃-125℃温度下于冰醋酸中进行反应，制得所述化合物B；其中，所述化合物A的结构式为

6.一种权利要求1所述的7-吡唑胺-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶类化合物在制备以BRD4为靶点的抗肿瘤药物中的应用。

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