CN109293588B - 一种具有ido1/tdo双靶点的小分子化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种具有ido1/tdo双靶点的小分子化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于化学医药领域，具体涉及具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物，其通式如下：
。并证实了该化合物的一些实施方案中，该小分子化合物能够同时对IDO1和TDO这两种酶产生较好的抑制作用，从而减少肿瘤细胞的免疫逃避，实现肿瘤疾病的治愈，具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择；同时，本发明提供的新化合物的制备方法简便，反应条件温和，便于操作和控制，能耗小，产率高，成本低，可适合产业化生产，制备得到的化合物生物活性较高，对肿瘤细胞的选择性强，类药性显著，在医药行业具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及化学合成药物技术领域，具体是指一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物及其制备方法与应用。
背景技术
肿瘤免疫治疗是当今一个重要的研究方向，其中包括一些在临床上获得成功的免疫检查点化合物，比如Keytrude(PD-1)(Cancer,2015,3,36.)、Opdivo(PD-1/PD-L1)(NEngl J Med.,2012,366,2455–2465.；N Engl J Med.,2012,366,2443–2454.)及Yervoy(CTLA-4)(J Clin Oncol.,2010,28,3167–3175.)等。随着肿瘤疾病研究的深入，研究发现肿瘤微环境中还存在其它免疫检查点，通过调节这些免疫检查点的功能相应地改善肿瘤微环境，继而可实现肿瘤的免疫治疗。
色氨酸是人体必需且人体内有无法合成的一种氨基酸，只能通过我们的日常饮食来摄取。从饮食中获取的色氨酸，一部分可用于体内生物合成功能蛋白，其余部分则通过生物代谢形成多种生物活性递质。除血清素代谢途径外，体内95％以上的色氨酸通过犬尿氨酸途径进行生物代谢，发挥重要的生物学功能。近年来，关于色氨酸的犬尿氨酸途径代谢研究已经引起了广大科研工作者的重视。吲哚胺2,3-双加氧酶1(Indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)、吲哚胺2,3-双加氧酶2(Indoleamine 2,3-dioxygenase 2,IDO2)及色氨酸2,3-双加氧酶(Tryptophan 2,3-dioxygenase,IDO1)是参与色氨酸犬尿氨酸途径代谢的关键酶，催化色氨酸反应生成N-甲酰犬尿氨酸，其结果导致色氨酸水平降低及一系列代谢产物的产生(J.Med.Chem.,2015,58,8762-8782.)。研究发现，当组织细胞中IDO1/IDO2/TDO高表达时，大量色氨酸经犬尿氨酸途径代谢，色氨酸含量降低，直接抑制了效应T细胞的活化与增殖(J.Exp.Med.，1999,189,1363-1372.；Immunology 2002,107,452-460.)。此外，色氨酸的犬尿氨酸途径代谢产物KYN、3-Hydroxy-L-kynurenine及3-Hydroxyanthranilic acid等也可抑制效应T细胞的活化与增殖(J.Exp.Med.2002,196,459-468.；Cell Death Differ.2002,9,1069-1077.)。大量研究表明，色氨酸的犬尿氨酸代谢途径是导致肿瘤细胞发生免疫逃逸的重要原因(Trends Pharmacol Sci,2013,2,136-143.；Crit Rev Microbiol,2014,40,360-368.)。IDO1、IDO2及TDO均为细胞溶质的亚铁血红素双氧化酶，作为色氨酸的犬尿氨酸途径代谢的限速酶来平衡组织色氨酸水平并产生一系列生物活性代谢产物。IDO1、IDO2作为IDO的两大家族成员，关于IDO2研究比较少，直到2007年才有相关研究报道(Gene 2007,396,203-213.；Cancer Res.2007,67,7082-7087.；J.Mol.Evol.2007,65,705-714.)。目前，基于色氨酸犬尿氨酸途径的代谢的研究主要集中在IDO1和TDO。从分布上来说，IDO1较TDO更为广泛，除肝脏外，IDO1分布在人体多组织中。从底物选择性来说，IDO1对底物的选择性较低，除了最适底物L-色氨酸外，IDO1也可以催化D-色氨酸、色胺、5-羟基色氨酸及5-羟基色胺的相关代谢反应(J Biol Chem,1978,253,4700-4706.)。作为肝脏外催化色氨酸进行犬尿氨酸途径代谢的限速酶，IDO1可降解人体90％的色氨酸。相比IDO1，TDO主要分布在肝脏及脑中(Biochem.Soc.Trans.,2008,36,1120-1123.；Nat.Rev.Neurosci.,2012,13,465-477.)，可催化肝脏中90％的色氨酸进行犬尿氨酸途径代谢。大量临床研究表明，在炎症、癌症、精神分裂症、阿尔兹海默症以及亨廷顿等多种类型疾病中，存在着IDO1、TDO高表达，同时研究揭示了IDO1、TDO的高表达是导致肿瘤细胞发生免疫逃逸的重要原因。因此，IDO1、TDO有望成为肿瘤疾病免疫治疗的新靶标。
目前，关于IDO1的研究开展的比较早，并且靶向IDO1的小分子化合物已有相关报道(J.Med.Chem.2006,49,684–692.；J.Med.Chem.2008,51,1706–1718.；J.Med.Chem.2009,52,7364–7367.；J.Med.Chem.2012,55,5270-5290.；J.Med.Chem.2013,56,8321-8331.)。例如，Incyte公司研发的IDO1小分子化合物(INCB024360/Epacadosta)已进入临床3期(J.Med.Chem.2013,56,8321-8331.)，有望成为第一个靶向IDO1的小分子上市药物。同时，关于靶向TDO的小分子化合物的研究也获得了一定的进展，相继报道出多种高活性的新型骨架的小分子化合物(Nature 2011,478,197-203.；J.Med.Chem.2011,54,5320-5334.；J.Med.Chem.2015,58,7807-7819.；ACS Med.Chem.Lett.2017,8,11-13.)。
2012年，Vanden Eynde等人研究发现(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2012,109,2497-2502.)，IDO1和TDO的表达情况在不同的癌症种类中有所不同，在104种人类肿瘤细胞系中，有20种肿瘤只表达TDO，17种肿瘤只表达IDO1，16种肿瘤两者均表达。也就是说，IDO1或者TDO的单靶点化合物只能应用于约30％的肿瘤类型，而IDO1和TDO的双靶标化合物则可以应用于大约50％的肿瘤类型。因此，双靶点化合物可以更广泛的应用于多种肿瘤疾病中。除此之外，Ken Garber还指出，当肿瘤细胞的IDO1和TDO其中一个靶点受到抑制时，可能会导致另一个靶点的表达量增加，在这种情况下，双靶标化合物就体现出了明显的优势，依旧可以起到降低色氨酸代谢的关键作用(J.Natl.Cancer Inst.,2012,104,349-352.)。然而关于IDO1、TDO双靶点的小分子化合物还没有相关文章报道，因此临床上急需一种可同时抑制IDO1、TDO活性的小分子化合物，来减少肿瘤细胞的免疫逃避，继而通过免疫治疗，实现肿瘤疾病的治愈。
IDO1/TDO双靶点小分子化合物作为药物在医药行业具有良好的应用前景，但是目前尚未找到很好的IDO1/TDO双靶点小分子化合物作为上市药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物。
本发明的另一个目的在于提供一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物的制备方法。
本发明还有一个目的在于提供该具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物的具体应用。
本发明还有一个目的在于提供一种活性较高，选择性强，类药性显著，以具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物为主要成分，且能够治疗相应癌症的药物。
本发明提供一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物，其通式如下：
其中，
A为氮原子或C-R9；
B为含有至少一个碳原子的五元碳环或芳杂环；
R1、R2、R3、R4、R5、R8、R9分别独立地选自氢、硝基、卤素、羧基、三氟甲基、甲氧基、羟基、氰基、甲砜基、氨基、未取代的C1-C4烷烃基或取代的C1-C4烷烃基、C1-C4烷氧基、C1-C3氨酰基；
R6独立地选自氢、硝基、卤素、羧基、三氟甲基、甲氧基、羟基、氰基、甲砜基、氨基、肽基、未取代的C1-C4烷烃基或取代的C1-C4烷烃基、C1-C4烷氧基、C1-C3酰胺基、
R7独立地选自氢、硝基、卤素、羧基、三氟甲基、甲氧基、羟基、氰基、甲砜基、氨基、酯基、未取代的C1-C4烷烃基或取代的C1-C4烷烃基、C1-C4烷氧基、C1-C3氨酰基。
其具体合成线路如下：
具体制备方法，包括以下步骤：
(1)将原料A在强碱叔丁醇钾以及氧气作用下，以叔丁醇为溶剂，发生氧化反应，制备得到中间体I；
(2)原料B在叔丁基亚硝酸酯作用下，叠氮三甲基硅烷为叠氮化试剂，以乙腈为溶剂，制备得到中间体II；所述原料B：叔丁基亚硝酸酯：叠氮三甲基硅烷的摩尔比为1︰1.5:1.5；所述反应的温度为0℃；所述反应的时间为1h～5h；
(3)中间体I与中间体II在1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯的作用下，以聚乙二醇-400位溶剂，制备得目的化合物；所述中间体I与中间体II、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯的摩尔比为1:1:0.1；所述反应温度为80℃；所述反应时间为2h～18h。
通过此制备方法，得到如下结构式：
上述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备抑制IDO1及TDO活性的双靶点靶向药物中的用途。
上述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途。
上述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途，所述口服或静脉注射制剂包含至少一种上述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物及其盐、水合物或药物组合物以及任意的赋形剂和/或佐剂。
本发明还提供一种能够对IDO1和TDO作用的活性抑制剂，以上述述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物为主要活性成分的生物药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物，能够直接使用或者以药物组合物的形式使用。
本发明还提供一种治疗癌症的药物，以上述的能够对IDO1和TDO作用的活性抑制剂为主要成分，其余为药学上可接受的，对人和动物无毒、无惰性的药用载体和/或赋形剂辅助性成分制备而成。治疗的癌症包括结肠癌、路易斯肺癌。
该治疗癌症的药物的药用载体或赋形剂为一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型：喷剂、气雾剂、液体制剂或固体制剂；所述的液体制剂包括注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂或糖浆剂；所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂或冲剂。其给药途径为口服、舌下给药或粘膜透析；所述的注射包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射或皮下注射。
制备得到的该小分子化合物能够抑制IDO1和TDO两个靶点，IDO1和TDO作为细胞溶质的亚铁血红素双氧化酶，在细胞中的功能主要是作为色氨酸的犬尿氨酸途径代谢的限速酶来平衡组织色氨酸水平并产生一系列生物活性代谢产物。大量临床研究表明，在炎症、癌症、精神分裂症、阿尔兹海默症以及亨廷顿等多种类型疾病中，存在着IDO1、TDO高表达，同时研究揭示了IDO1、TDO的高表达是导致肿瘤细胞发生免疫逃逸的重要原因。因此，当抑制这两种酶的表达时，可以起到降低色氨酸代谢的关键作用，减少肿瘤细胞的免疫逃避，继而通过免疫治疗，实现肿瘤疾病的治愈。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
本发明合成了一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物，并证实了该化合物的一些实施方案中，该小分子化合物能够同时对IDO1和TDO这两种酶产生较好的抑制作用，从而减少肿瘤细胞的免疫逃避，实现肿瘤疾病的治愈，具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择；同时，本发明提供的新化合物的制备方法简便，反应条件温和，便于操作和控制，能耗小，产率高，成本低，可适合产业化生产，制备得到的化合物生物活性较高，对肿瘤细胞的选择性强，类药性显著，在医药行业具有良好的应用前景。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其他特征、目的和优点将会变得更为明显：
图1为本发明化合物在10uM浓度下对IDO1的抑制率；
图2为本发明化合物在10uM浓度下对TDO的抑制率；
图3为本发明中化合物7作用于患有路易斯肺癌小鼠后，小鼠体内的荷瘤体积增长曲线图；
图4为本发明化合物7作用于患有路易斯肺癌小鼠后，小鼠体重曲线增长曲线图；
图5为本发明化合物7作用于患有结肠癌小鼠后，小鼠体内的荷瘤体积增长曲线图；
图6为本发明化合物7作用于患有结肠癌小鼠后，小鼠体重曲线增长曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。
为使本发明的目的、工艺条件及优点作用更加清楚明白，结合以下实施实例，对本发明作进一步详细说明，此处所描述的具体实施实例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明所给通式所包含化合物具体合成路线如下：
实施例1：
化合物1：1-苯基-1H-萘并[2,3-d][1,2,3]三唑-4,9-二酮
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B1)。
合成路线如下：
具体合成方法为：
(1)在12mL的无水叔丁醇溶剂中加入原料A1(1g,6.85mmol)以及强碱叔丁醇钾(3.84g,34.25mmol)，随后在1atm的氧气环境下常温搅拌2h。反应结束后，在反应体系中加入稀盐酸调PH为1～2，反应体系中有黄色固体析出，抽滤得中间体I1，反应产率为50％。中间体I1无需进一步纯化可直接用于下一步反应。
(2)在100mL的圆底烧瓶中加入原料B1(1g,10.75mmol)、20mL的乙腈并在0℃搅拌溶解，随后在反应体系中先后逐滴滴加t-BuONO(2.92mL,16.13mmol)、TMSN3(2.12mL,16.13mmol)。滴加完成后，在室温下反应1h。反应结束后，将反应液旋转蒸发可定量得到中间体II2，中间体II2可直接用于下一步反应。
(3)在50mL的圆底烧瓶中加入中间体I1(870mg,5mmol)、中间体II2(595mg,5mmol)、催化量的1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(76μL,0.5mmol)以及乙二醇-400溶剂(10mL)，并在80℃反应5h。反应结束后，反应体系有固体洗出，抽滤，并用少量的乙腈洗涤，干燥即可得到化合物1，近白色固体，产率51％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.24(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.12(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),8.01–7.90(m,2H),7.87–7.75(m,2H),7.74–7.61(m,3H).ESI-MS m/z:276.06[M+H]+.
实施例2：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物2：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B2)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物2的产率为88％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.13(dd,J＝7.3,1.7Hz,1H),8.01–7.92(m,2H),7.92–7.85(m,2H),7.54(t,J＝8.8Hz,2H).ESI-MS m/z:296.08[M+H]+.
实施例3：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物3：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B3)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物3的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(dd,J＝7.3,1.7Hz,1H),8.15(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),8.03–7.93(m,3H),7.86–7.76(m,2H),7.73(dd,J＝17.8,9.9Hz,1H).ESI-MS m/z:312.05[M+H]+.
实施例4：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物4：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B4)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物4的产率为82％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝8.9Hz,1H),8.19–8.08(m,3H),8.08–7.90(m,4H),7.65(s,2H).ESI-MS m/z:355.04[M+H]+.
实施例5：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，
具体如下：
化合物5：使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B5)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物5的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(s,1H),8.69(s,1H),8.27(d,J＝8.9Hz,1H),8.17(s,1H),7.98(d,J＝5.1Hz,1H).ESI-MS m/z:ESI-MS m/z:354.98[M+H]+.
实施例6：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物6：使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B6)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物6的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.15(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),8.11(d,J＝2.1Hz,1H),8.03–7.91(m,2H),7.76(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,1H),3.51(s,3H).ESI-MS m/z:368.00[M+H]+.
实施例7：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物7：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物7的产率为91％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.25(d,J＝8.9Hz,1H),8.20(dd,J＝6.5,2.5Hz,1H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),8.05–7.93(m,2H),7.90(ddd,J＝8.8,4.1,2.7Hz,1H),7.77(t,J＝8.9Hz,1H).ESI-MS m/z:328.02[M+H]+.
实施例8：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物8：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B8)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物8的产率为90％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.46(s,1H),8.26(dd,J＝7.4,1.5Hz,1H),8.12(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.06(s,1H),8.01–7.91(m,3H),7.82(d,J＝9.1Hz,1H),7.60(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H).ESI-MS m/z:316.08[M+H]+.
实施例9：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物9：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B9)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物9的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝0.7Hz,1H),8.29–8.20(m,2H),8.12(d,J＝6.4Hz,1H),8.01–7.90(m,2H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(dd,J＝8.9,1.7Hz,1H).ESI-MSm/z:316.08[M+H]+.
实施例10：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物10：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B10)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物10的产率为95％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(dd,J＝7.6,1.3Hz,1H),8.10(dd,J＝8.7,1.7Hz,2H),8.00(td,J＝7.5,1.4Hz,1H),7.95(td,J＝7.4,1.4Hz,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,1H),7.79(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H).ESI-MS m/z:343.99[M+H]+。.
实施例11：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物11：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B11)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物11的产率为90％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(dd,J＝7.5,1.3Hz,1H),8.10(dd,J＝7.5,1.4Hz,1H),7.99(td,J＝7.5,1.6Hz,1H),7.94(td,J＝7.4,1.5Hz,1H),7.87–7.81(m,1H),7.82–7.75(m,1H),7.65(ddd,J＝9.8,8.5,1.1Hz,1H),7.53(t,J＝7.7Hz,1H).ESI-MS m/z:296.08[M+H]+.
实施例12：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物12：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B12)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物12的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(dd,J＝7.3,1.7Hz,1H),8.15(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),8.02–7.93(m,2H),7.80(dt,J＝9.4,2.1Hz,1H),7.78–7.67(m,2H),7.62–7.53(m,1H).ESI-MS m/z:296.08[M+H]+.
实施例13：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物13：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B13)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物13的产率为92％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝9.0Hz,1H),8.27(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.15(d,J＝9.0Hz,1H),8.04–7.89(m,1H).ESI-MS m/z:321.05[M+H]+.
实施例14：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物14：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B14)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物14的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(d,J＝2.4Hz,1H),8.29–8.25(m,1H),8.22(d,J＝2.5Hz,1H),8.19–8.13(m,1H),8.04–7.94(m,1H).ESI-MS m/z:355.02[M+H]+.
实施例15：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物15：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B15)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物15的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(dd,J＝4.8,1.7Hz,1H),8.35(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),8.27(dd,J＝7.5,1.0Hz,1H),8.15–8.07(m,1H),8.01(td,J＝7.5,1.4Hz,1H),7.95(td,J＝7.4,1.3Hz,1H),7.83(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H).ESI-MS m/z:311.02[M+H]+
实施例16：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物16：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B16)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物16的产率为96％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),8.70(d,J＝5.7Hz,1H),8.67(d,J＝1.9Hz,1H),8.30–8.25(m,2H),8.18(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),8.15(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.04(d,J＝5.8Hz,1H),8.03–7.91(m,2H).ESI-MS m/z:327.08[M+H]+.
实施例17：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物17：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B17)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物17的产率为86％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(d,J＝2.4Hz,1H),8.87(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),8.31(ddd,J＝8.2,2.4,1.5Hz,1H),8.26(dd,J＝7.4,1.6Hz,1H),8.14(dt,J＝9.2,4.3Hz,1H),7.98(pd,J＝7.4,1.6Hz,2H),7.76(dd,J＝8.2,4.8Hz,1H).ESI-MS m/z:277.06[M+H]+.
实施例18：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物18：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B18)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物18的产率为85％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.97–8.40(m,4H),8.09(s,1H),8.00(s,1H),7.57(s,2H),6.63(s,1H),3.78(s,6H),3.70(s,3H),2.61(s,3H).LC-MS:m/z 435.1[M+H]+.
实施例19：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物19：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B19)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物19的产率为87％。
其1H NMR数据如下：
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝8.9Hz,1H),8.20(d,J＝8.5Hz,2H),8.18–8.11(m,1H),8.07(d,J＝8.0Hz,2H),8.03–7.89(m,2H).ESI-MS m/z:301.06[M+H]+.
实施例20：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物20：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B20)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物20的产率为80％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.19(m,3H),8.14(d,J＝8.7Hz,1H),8.02–7.92(m,4H),3.94(s,3H).ESI-MS m/z:334.07[M+H]+.
实施例21：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物21：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B21)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物21的产率为92％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝8.9Hz,1H),8.20(s,1H),8.13(d,J＝8.6Hz,3H),8.00-7.92(m,2H),7.91(d,J＝8.5Hz,2H),7.61(s,1H).ESI-MS m/z:319.08[M+H]+.
实施例22：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物22：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B22)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物22的产率为90％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(d,J＝8.7Hz,2H),8.26(dd,J＝7.4,1.7Hz,1H),8.15(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),8.02–7.91(m,4H).ESI-MS m/z:344.08[M+H]+.
实施例23：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物23：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B23)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物23的产率为95％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.23(d,J＝6.0Hz,2H),8.17(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),7.99(qd,J＝7.3,5.9Hz,2H).ESI-MS m/z:361.97[M+H]+.
实施例24：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物24：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B24)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物24的产率为88％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.95(d,J＝2.3Hz,1H),8.80(d,J＝2.3Hz,1H),8.27(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.18(dd,J＝7.3,1.4Hz,1H),8.11–7.88(m,2H).ESI-MS m/z:344.99[M+H]+.
实施例25：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物25：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B25)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物25的产率为77％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.26(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.24(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),8.04–7.92(m,3H),7.87(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H).ESI-MS m/z:343.99[M+H]+.
实施例26：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物26：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B26)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物26的产率为68％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.35(s,1H),8.27(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),8.17(d,J＝5.9Hz,1H),8.08(d,J＝7.9Hz,1H),8.05–7.93(m,2H).ESI-MS m/z:378.02[M+H]+.
实施例27：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物27：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B27)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物27的产率为62％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.25(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),8.15(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),8.02–7.90(m,2H),7.20(s,2H),3.83(s,6H),3.79(s,3H).ESI-MS m/z:366.10[M+H]+.
实施例28：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料B，具体如下：
化合物28：
使用原料A为
(原料A1)，原料B为
(原料B28)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物28的产率为83％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.26–8.21(m,1H),8.14–8.10(m,1H),8.00–7.92(m,1H),7.63(d,J＝9.1Hz,2H),7.16(d,J＝9.1Hz,2H),6.99(d,J＝1.6Hz,1H),3.33(s,4H),2.69(s,4H),2.40(s,3H).ESI-MS m/z:374.15[M+H]+.
实施例29：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物29：
使用原料A为
(原料A2)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物29的产率为85％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.19(dd,J＝6.6,2.6Hz,1H),8.11(d,J＝8.7Hz,1H),7.90-7.86(m,1H),7.76(t,J＝8.9Hz,1H),7.66(d,J＝2.7Hz,1H),7.47(dd,J＝8.7,2.7Hz,1H),4.00(s,3H).ESI-MS m/z:358.02[M+H]+.
实施例30：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B2，具体如下：
化合物30：
使用原料A为
(原料A2)，原料B为
(原料B2)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物30的产率为79％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.08(d,J＝8.5Hz,1H),7.87(dd,J＝8.7,4.9Hz,2H),7.66(d,J＝2.0Hz,1H),7.52(t,J＝8.8Hz,2H),7.46(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),4.00(s,3H).ESI-MS m/z:324.07[M+H]+.
实施例31：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B3，具体如下：
化合物31：
使用原料A为
(原料A2)，原料B为
(原料B3)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物31的产率为68％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.10(d,J＝5.6Hz,1H),7.98(s,1H),7.85–7.74(m,2H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(s,1H),7.47(d,J＝6.9Hz,1H),4.00(s,3H).ESI-MS m/z:340.04[M+H]+.
实施例32：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B5，具体如下：
化合物32：
使用原料A为
(原料A2)，原料B为
(原料B5)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物32的产率为87％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.22–8.90(m,1H),8.68(s,1H),8.12(s,1H),7.67(s,1H),7.48(d,J＝5.9Hz,1H),4.00(s,2H).ESI-MS m/z:384.99[M+H]+.
实施例33：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B4，具体如下：
化合物33：
使用原料A为
(原料A2)，原料B为
(原料B4)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物33的产率为83％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.16–8.04(m,1H),8.01(d,J＝7.8Hz,2H),7.89(d,J＝7.8Hz,2H),7.74–7.57(m,1H),7.55–7.33(m,1H),6.30(s,2H),4.00(s,3H).ESI-MS m/z:385.05[M+H]+.
实施例34：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B4，具体如下：
化合物34：
使用原料A为
(原料A3)，原料B为
(原料B4)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物34的产率为90％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.21(d,J＝8.6Hz,1H),8.07(dd,J＝24.2,8.7Hz,4H),7.64(s,2H),7.54(d,J＝2.6Hz,1H),7.50(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H),3.96(s,3H).ESI-MS m/z:385.05[M+H]+.
实施例35：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物35：
使用原料A为
(原料A3)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物35的产率为92％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.24–8.15(m,2H),7.91-7.87(m,1H),7.76(t,J＝9.0Hz,1H),7.56(d,J＝2.7Hz,1H),7.50(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H),3.97(s,3H).ESI-MS m/z:358.03[M+H]+.
实施例36：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B2，具体如下：
化合物36：
使用原料A为
(原料A3)，原料B为
(原料B2)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物36的产率为91％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.20(d,J＝8.6Hz,1H),7.92–7.81(m,2H),7.57–7.45(m,4H),3.96(s,3H).ESI-MS m/z:324.05[M+H]+.
实施例37：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B3，具体如下：
化合物37：
使用原料A为
(原料A3)，原料B为
(原料B3)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物37的产率为89％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.21(d,J＝8.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.83-7.63(m,2H),7.71(t,J＝8.0Hz,1H),7.56(d,J＝2.6Hz,1H),7.49(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H),3.96(s,3H).ESI-MS m/z:340.04[M+H]+.
实施例38：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B5，具体如下：
化合物38：
使用原料A为
(原料A3)，原料B为
(原料B5)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物38的产率为85％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.05(d,J＝3.7Hz,2H),8.68(s,1H),8.22(d,J＝8.6Hz,1H),7.57(s,1H),7.51(d,J＝7.5Hz,1H),3.97(s,3H).ESI-MS m/z:384.99[M+H]+.
实施例39：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物39：
使用原料A为
(原料A4)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物39的产率为71％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.23–8.12(m,3H),8.03(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.91-7.87(m,1H),7.77(t,J＝9.0Hz,1H).ESI-MS m/z:346.01[M+H]+.
实施例40：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B14，具体如下：
化合物40：
使用原料A为
(原料A4)，原料B为
(原料B14)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物40的产率为76％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.74–8.67(m,1H),8.34–8.11(m,3H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.83(s,1H).ESI-MS m/z:373.01[M+H]+.
实施例41：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B23，具体如下：
化合物41：
使用原料A为
(原料A4)，原料B为
(原料B23)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物41的产率为79％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.37–8.16(m,3H),7.90–7.70(m,2H).ESI-MS m/z:379.97[M+H]+.
实施例42：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B5，具体如下：
化合物42：
使用原料A为
(原料A4)，原料B为
(原料B5)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物42的产率为82％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.25(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),8.13(dd,J＝7.3,1.7Hz,1H),8.01–7.92(m,2H),7.92–7.85(m,2H),7.54(t,J＝8.8Hz,2H).ESI-MS m/z:372.97[M+H]+.
实施例43：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B4，具体如下：
化合物43：
使用原料A为
(原料A5)，原料B为
(原料B4)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物43的产率为74％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.39–8.28(m,1H),8.17–7.95(m,4H),7.84(s,2H),7.58(s,2H).ESI-MS m/z:373.02[M+H]+.
实施例44：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物44：
使用原料A为
(原料A5)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物44的产率为66％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.57(dd,J＝8.6,5.3Hz,1H),7.23(dd,J＝6.4,2.6Hz,1H),7.06(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.02 6.98(m,1H),6.87–6.81(m,1H),6.74(t,J＝8.8Hz,1H).ESI-MS m/z:346.01[M+H]+.
实施例45：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物45：
使用原料A为
(原料A6)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物45的产率为78％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.30(s,1H),8.17(dd,J＝6.6,2.6Hz,1H),8.01(d,J＝8.6Hz,1H),7.89-7.85(m,1H),7.75(t,J＝9.0Hz,1H),7.53(d,J＝2.5Hz,1H),7.24(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H).ESI-MS m/z:344.03[M+H]+.
实施例46：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物46：
使用原料A为
(原料A7)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物46的产率为80％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.19(s,1H),8.18(dd,J＝6.6,2.6Hz,1H),8.12(d,J＝8.6Hz,1H),7.90-7.86(m,1H),7.76(t,J＝9.0Hz,1H),7.43(d,J＝2.5Hz,1H),7.27(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H).ESI-MS m/z:344.02[M+H]+.
实施例47：
本实施例在上述化合物的基础上，更换了原料A，使用原料B7，具体如下：
化合物47：
使用原料A为
(原料A8)，原料B为
(原料B7)
合成路线如下：
具体制备方法与上述实施例相同，这里不再赘述。
该化合物47的产率为71％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H),8.21-8.18(m,1H),7.91-7.87(m,1H),7.86–7.81(m,1H),7.77(t,J＝8.9Hz,1H),7.69(dd,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.48(dd,J＝8.4,0.9Hz,1H).ESI-MS m/z:344.02[M+H]+.
实施例48：
本实施例以上述47个实施例提供的小分子化合物的具体化学结构为基础，通过表达纯化IDO1/TDO蛋白，体外建立IDO1/TDO酶活检测体系，建立IDO1/TDO化合物高通量筛选模型，对其分别进行体外IDO1和TDO蛋白活性的抑制效果的测试实验。
(1)实验材料：
IDO1和TDO蛋白。
(2)实验原理：
IDO1/TDO在一定反应体系中能把底物L-色氨酸代谢为N-甲酰犬尿氨酸，N-甲酰犬尿氨酸可与三氯乙酸反应生成犬尿氨酸，2％对二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液与犬尿氨酸反应生成黄色产物，在480nm处呈现最大吸光度值。
(3)实验内容：
IDO1/TDO的蛋白酶反应体系为40mM抗坏血酸、200μg/mL过氧化氢酶、20μM亚甲蓝、400μM L-色氨酸、30nM IDO1/TDO的PH＝6.5的磷酸钾缓冲液。500μL的IDO1/TDO的蛋白酶反应体系中，对照组加入DMSO，其它组加入不同浓度的待测化合物(包括本发明化合物，IDO1化合物阳性化合物INCB024360和TDO化合物阳性化合物LM-10)，空白对照为加DMSO的不含hIDO1/hTDO的蛋白酶反应体系(背景值)，每组4个重复。反应体系于37℃静置反应30min，然后加入180μL30％的三氯乙酸，混匀后于65℃孵育30min。此过程的目的是终止反应，沉淀蛋白并同时将L-色氨酸的代谢产物N-甲酰犬尿氨酸转换成可便检测的犬尿氨酸。65℃反应后的样品再于12000rpm离心10min后取上清100μL到96孔板，每孔加入同体积的2％对二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液，振荡混匀后用酶标仪检测480nm处的吸光度值。犬尿氨酸与2％对二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液反应生成黄色物质，可于480nm处检测。
(4)实验结论：
如图1和图2所示，本发明化合物在10uM的浓度下对IDO1和TDO抑制率均具有较好的抑制率，尤其是化合物。本实施例结果为后续酶水平和细胞水平的IC50值的测定以及药理研究提供了数据验证的基础。
实施例49：
本实施例以上述47个实施例提供的小分子化合物的具体化学结构为基础，根据上述实施例中的结果，参照上述实施例中的方法测定本发明化合物在蛋白酶水平对IDO1/TDO半数有效抑制浓度IC50值。结果如表1所示。
实验材料和实验原理参照上述实施例。
方法步骤：在上述实施例中的500μL的IDO1/TDO的蛋白酶反应体系中，加入不同浓度的本发明化合物，并将IDO1化合物阳性化合物INCB024360和TDO化合物阳性化合物LM-10作为对照组，化合物浓度采用三倍稀释法，最高浓度为10uM(LM-10最高浓度采用100uM)，共10个浓度梯度，4个复孔。酶反应完成后的样品处理过程参照上述实施例。
抑制率＝100-(样品孔-空白对照)/(DMSO对照-空白对照)*100
最后用Graphpad Prism软件拟合得出半数有效浓度(IC50)。
A表示<100nM，B表示100nM～500nM，C表示500nM～1μM，D表示1μM～10μM，E表示>10μM。
表一本发明化合物酶水平对IDO1/TDO半数有效抑制浓度IC50值
由表一可知，本发明提供的47种具体的化合物在酶水平上，均能同时对IDO1和TDO这两种酶产生抑制作用，其中，化合物1、2、4、5、10、11、12、13、14、15、17、23、25、39、40、44，相较于传统的单一抑制剂，均有较好的抑制效果。由此可证明本发明提供的化合物对IDO1和TDO这两种酶具有显著抑制活性，在有关于对IDO1和TDO这两种酶抑制剂的技术领域，本发明中合成的化合物作出了创造性的贡献。
实施例50：
本实施例以本发明所述47个化合物的化学结构为基础，对其分别测定化合物在不同细胞上抑制IDO1、TDO的半数有效浓度IC50值并同时检测化合物对该细胞的毒性作用，并将IDO1化合物阳性化合物INCB024360和TDO化合物阳性化合物LM-10作为对照组。结果如表2所示。
IDO1细胞水平：人宫颈癌细胞Hela细胞采用10％胎牛血清，100U的青霉素/链霉素的DMEM高糖培养基培养于37℃、5％CO2培养箱中。待其生长至80％～90％融合时，8000个细胞每孔接种于96孔板，24h后将培养基换成无色的DMEM培养基(含L-色氨酸，终浓度为100uM)，除空白对照孔外，其它孔都加入10ng/mL的IFN-γ，并在相应孔中加入一定量的DMSO和待测化合物，每组4个重复。20h后，取上清100uL加入30uL 30％的三氯乙酸，混匀后于65℃孵育30min后12000rpm离心10min，取上清100uL到新的96孔板中并加入同体积的2％对二甲氨基苯甲醛，振荡混匀后用酶标仪检测480nm处的吸光度值。取上清后剩下的细胞(此时孔内还有100uL培养基)加入20uL MTT，37℃、5％CO2的培养箱中孵育2h后加入50uL20％SDS，8h后用酶标仪检测570nm处的吸光度值，此步骤为检测化合物对细胞活力的影响。
抑制率＝100-(样品孔-空白对照)/(DMSO对照-空白对照)*100
最后用Graphpad Prism软件拟合得出半数有效浓度(IC50)。
TDO细胞水平：人胶质瘤细胞A172细胞采用10％Hyclon胎牛血清，100U的青霉素/链霉素的DMEM高糖培养基培养于37℃、5％CO2培养箱中。待其生长至80％～90％融合时，10000个细胞每孔接种于96孔板，24h后将培养基换成无色的DMEM培养基(含L-色氨酸，终浓度为100uM)，空白对照孔不含L-色氨酸，并在相应孔中加入一定量的DMSO和待测化合物，每组4个重复。20h后，取上清100uL加入30uL的30％三氯乙酸，混匀后于65℃孵育30min后12000rpm离心10min，取上清100uL到新的96孔板中并加入同体积的2％对二甲氨基苯甲醛，振荡混匀后用酶标仪检测480nm处的吸光度值。取上清后剩下的细胞(此时孔内还有100uL培养基)加入20uL MTT，37℃、5％CO2的培养箱中孵育2h后加入50uL 20％SDS，8h后用酶标仪检测570nm处的吸光度值，此步骤为检测化合物对细胞活力的影响。
抑制率＝100-(样品孔-空白对照)/(DMSO对照-空白对照)*100
最后用Graphpad Prism软件拟合得出半数有效浓度(IC50)。
表二本发明细胞水平对IDO1/TDO半数有效抑制浓度IC50值以及细胞毒性
A表示<100nM，B表示100nM～500nM，C表示500nM～1μM，D表示1μM～10μM，E表示>10μM。
由表二内容可知，本发明提供的47个小分子化合物在细胞水平上，其毒性均较小，且在细胞水平，对肿瘤细胞均有较好的抑制效果，其中化合物2、7、14、23、40的抑制效果显著，针对的肿瘤细胞较多元，未发生额外异变，具有很好的药用潜力。可以用于制备治疗和/或预防肿瘤的药物。
实施例51：
本实施例重点针对抑制效果较好的化合物7，进行小鼠体内路易斯肺癌抑制实验
(1)实验目的：
评价本发明化合物7抑制小鼠体内路易斯肺癌的效果。
(2)实验步骤：
取8周龄的雄性C57BL/6J小鼠饲养于SPF级动物房，每只小鼠的右肩膀皮下接种2*106个LL2细胞，一周后开始给药化合物7(此时荷瘤体积已达200mm3)，给药方式为腹腔注射，给药剂量为每日30mg/kg。于首次给药当天开始观察、测量并记录相关指标，每三天测量一次，给药14天后处死荷瘤小鼠，并解剖分离瘤块称重。
(3)实验结果：
如图3，图4所示，小鼠体重曲线显示给药组和溶剂组相比体重增长速率并无显著差异，动物状态良好，并无明显毒副作用。荷瘤体积增长曲线显示化合物7可以明显抑制肿瘤的生长，抑瘤率为43.1％。
实施例52：
本实施例重点针对抑制效果较好的化合物7，进行小鼠体内结肠癌抑制试验
(1)实验目的：
评价本发明化合物7抑制小鼠体内结肠癌的效果。
(2)方法步骤：
取8周龄的雄性Babl/c小鼠饲养于SPF级动物房，每只小鼠的右肩膀皮下接种5*105个CT26细胞，一周后开始给药化合物7(此时荷瘤体积已达200mm3)，给药方式为腹腔注射，给药剂量为每日30mg/kg。于首次给药当天开始观察、测量并记录相关指标，每三天测量一次，给药14天后处死荷瘤小鼠，并解剖分离瘤块称重。
(3)实验结果：
实验结果如图5，图6所示，体重曲线显示给药组和溶剂组相比体重增长速率并无显著差异，动物状态良好，并无明显毒副作用。荷瘤体积增长曲线显示化合物7可以明显抑制肿瘤的生长，抑瘤率为20.0％。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (7)
1.一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物，其通式如下：
2.根据权利要求1所述的一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将原料A在强碱叔丁醇钾以及氧气作用下，以叔丁醇为溶剂，发生氧化反应，制备得到中间体I；所述原料A为以下物质中的至少一种：
(2)原料B在叔丁基亚硝酸酯作用下，叠氮三甲基硅烷为叠氮化试剂，以乙腈为溶剂，制备得到中间体II；所述原料B：叔丁基亚硝酸酯：叠氮三甲基硅烷的摩尔比为1︰1.5:1.5；所述反应的温度为0℃；所述反应的时间为1h～5h；所述原料B为以下物质中的至少一种：
(3)中间体I与中间体II在1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯的作用下，以聚乙二醇-400为溶剂，制备得目的化合物；所述中间体I与中间体II、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯的摩尔比为1:1:0.1；所述反应温度为80℃；所述反应时间为2h～18h。
3.一种根据权利要求1所述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物或其盐或其药物组合物在制备抑制IDO1及TDO活性的双靶点靶向药物中的用途。
4.一种具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物或其盐或其药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途，所述口服或静脉注射制剂包含至少一种权利要求1所述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物或其盐或其药物组合物以及任意的赋形剂和/或佐剂。
5.一种能够对IDO1和TDO作用的活性抑制剂，其特征在于，以权利要求1所述具有IDO1/TDO双靶点的小分子化合物为主要活性成分的生物药学上可接受的盐，能够直接使用或者以药物组合物的形式使用。
6.一种治疗癌症的药物，其特征在于，以权利要求5所述的能够对IDO1和TDO作用的活性抑制剂为主要成分，其余为药学上可接受的，对人和动物无毒、无惰性的药用载体和/或赋形剂辅助性成分制备而成。
7.根据权利要求6所述治疗癌症的药物，其特征在于，治疗的癌症为结肠癌、路易斯肺癌。
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