CN109289057B - 一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂及其制备方法 - Google Patents

一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂，将地塞米松负载到基于4‑羟基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精药物载体上，外层覆盖有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇3500‑叶酸共轭物的纳米制剂，该纳米制剂为球形结构，粒径在200‑300纳米之间。一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，本发明的公开的地塞米松纳米制剂具有主动靶向性、高分散性和长效循环性，能够有效提高地塞米松治疗类风湿性关节炎的效果，本发明同时还公开了这种地塞米松纳米制剂的制备方法，方法简单，易于推广性。

Description

一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂及其制备 方法
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂及其制备方法。
背景技术
类风湿性关节炎的治疗手段除关节置换等外科治疗方式外，主要是使用抗炎和降低免疫反应的药物治疗，从而减轻患者痛苦和防止关节形态和功能的进一步损害。常用的治疗药物主要包括非甾体类抗炎药、改善病情的抗风湿药物(如甲氨蝶呤、生物药物等)及糖皮质激素类药物(如地塞米松、泼尼松等)。尽管这些药物能够在一定程度上控制病变部位炎症、缓解患者痛苦，但均因具有较严重的副作用而受限。地塞米松(dexamethasone，DMS)作为一种非类固醇激素，对软骨细胞可产生重要的影响，可减少或避免软骨细胞受损，缓解软骨充血症状，同时可影响炎症细胞，防止其不断移动，从而可抑制炎症递质的产生，具备较强的抗炎作用。地塞米松化学结构式如下图：
Figure BDA0001881371900000011
尽管地塞米松能够在一定程度上控制病变部位炎症、缓解患者痛苦，但因其具有较严重的副作用而使用受限。传统口服给药方式能够引起骨质疏松、感染几率增加、甚至心肌梗死等严重不良反应。究其原因是为维持病变部位达到一定药物浓度而使血液循环中药物浓度维持在高水平，从而引起严重不良反应，导致该类药物使用严重受限，仅用于短期快速缓解症状的“过渡治疗”。而局部关节腔内给药方式由于给药不便、患者依从性差、给药间隔期太长(每次间隔不少于3-4个月)等原因，无法解决药物治疗在临床应用中面临的问题。因此，开发能最大程度发挥现有类风湿性关节炎治疗药物的药效、而又同时能避免其不良反应的纳米制剂对于类风湿性关节炎的药物治疗意义重大，且具有极大的临床应用前景。
纳米制剂能提高药物在病变部位的浓度，改变亲脂性药物的溶解性能等，并提高治疗效果。本发明根据类风湿性关节炎的炎症部位有高浓度活性氧(如H2O2,O2-,HO·等)和叶酸受体高表达的特点，利用本实验室前期报道过的生物安全性较好的4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精(其为活性氧响应性的药物载体)、卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物为药物载体(上述三个磷脂和磷脂衍生物均具有很好的生物安全性)，将地塞米松药物制备成具有高分散性、长循环性和主动靶向叶酸受体的纳米制剂药物(已有大量文献报道，采用聚乙二醇2000及更大分子量的聚乙二醇对纳米制剂表面进行修饰，可减少内皮网状系统对纳米粒的清除，延长纳米粒在体内的循环时间，而载体表面采用叶酸修饰，可选择性的与叶酸受体结合)，可主动靶向于类风湿性关节炎的病变部位，提高其对类风湿性关节炎的治疗效果。药物载体4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精载体结构如下图所示：
Figure BDA0001881371900000021
4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精载体(活性氧响应性载体)在双氧水(H2O2)作用下可发生如下降解反应：
Figure BDA0001881371900000022
当环糊精上的羟基被4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰后，其在水中溶解度减小，在有机溶剂(如甲醇、乙腈、二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺等)中溶解度增加，而且上述有机溶剂能与水互溶。因此，将4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精载体和地塞米松溶于有机溶剂中，然后再滴加到分散有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液中，通过亲水-疏水作用及自组装作用可形成纳米粒沉淀，并对地塞米松药物进行包裹。该纳米制剂外层覆盖的有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物，故分散性较好，且具有长循环的特性和主动靶向于叶酸受体的能力。当纳米粒在活性氧微环境中(H2O2)，亲脂性的4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精载体发生降解，纳米制剂结构被破坏，因而释放出地塞米松药物。
发明内容
针对现有技术中所存在的不足，本发明的目的在于提供一种具有主动靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂及其制备方法，本发明的公开的地塞米松纳米制剂具有主动靶向性、高分散性和长效循环性，能够有效提高地塞米松治疗类风湿性关节炎的效果，本发明同时还公开了这种地塞米松纳米制剂的制备方法，方法简单，易于推广性。
为实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：
一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂，将地塞米松负载到基于4-羟基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精药物载体上，外层覆盖有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的纳米制剂，该纳米制剂为球形结构，粒径在200-300纳米之间。
一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂制备步骤如下：
(1)将地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精用甲醇混合溶液溶解；
(2)将卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物用有机溶剂进行超声分散，然后再加入水继续超声分散，并在65摄氏度加热30分钟，并冷却至室温；
(3)将步骤(1)所得溶液滴定到步骤(2)溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得地塞米松纳米制剂悬浮液；
(4)将步骤(3)所述纳米制剂悬浮液在离心机中分离，去离子水洗，得固化的地塞米松纳米制剂。
环糊精具有疏水区和亲水区，被4-羟基苯硼酸频哪醇酯修饰后，地塞米松被选择性负载在环糊精上。卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物生成一种亲水疏水结构，与负载有地塞米松的环糊精易于形成了纳米制剂。这种纳米制剂的外部具有亲水区，彼此之间不相容，将地塞米松高度分散开，防止其聚集成团，影响其生物性能。制备方法简单易于推广，制备后的纳米制剂可以制备成多种制剂。
本发明的制备方法简单易于推广，制备后的地塞米松纳米制剂可以进一步制备成多种制剂。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
1、本纳米制剂由4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精对地塞米松进行包裹，并表面覆盖有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物，其改进之处是将地塞米松制备成了一种主动靶向性、高分散性和长循环性的生物安全性好的纳米制剂。
2、纳米制剂的粒径在200-300纳米之间，使得地塞米松具有高的生物利用度，进一步显著提高了地塞米松的抗炎作用。
3、提高地塞米松抗炎作用的同时减少了地塞米松毒副作用的发生几率，提高了地塞米松用药安全。
附图说明
图1本发明的地塞米松纳米制剂组份示意图；
图2本发明透射电镜图片；
图3各组药物对类风湿性关节炎模型小鼠的靶向作用(活体成像)照片；
图4各组药物对类风湿性关节炎模型小鼠治疗后的照片；
图5各组药物对类风湿性关节炎模型小鼠治疗后的关节炎指数值；
图6各组药物对类风湿性关节炎模型小鼠治疗后的脚掌厚度值；
图7患类风湿性关节炎小鼠治疗后的体重。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：
如图1所示，一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂，将地塞米松负载到基于4-羟基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精药物载体上，外层覆盖有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的纳米制剂，该纳米制剂为球形结构，粒径在200-300纳米之间。
一种靶向治疗类风湿性关节炎地塞米松纳米制剂的制备方法，靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备步骤如下：
(1)将地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精用甲醇混合溶液溶解；
(2)将卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物用有机溶剂进行超声分散，然后再加入水继续超声分散，并在65摄氏度加热30分钟，并冷却至室温；
(3)将步骤(1)所得溶液滴定到步骤(2)溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得地塞米松纳米制剂悬浮液；
(4)将步骤(3)所述纳米制剂悬浮液在10000转离心分离，去离子水洗三次，得固化的地塞米松纳米制剂。
步骤(1)中地塞米松与4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的质量比为1：10～15。
步骤(1)中4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯通过N,N′-羰基二咪唑为活化剂与环糊精进行修饰连接。
步骤(1)中甲醇混合溶液中包括甲醇和乙腈、丙酮、二甲亚砜、N,N’-二甲基甲酰胺中的任意一种比例为1：1～2。
步骤(2)中卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的质量比为1：1～1.5：1～1.5。
步骤(2)中有机溶剂和水的体积比为1:15～20。
步骤(2)中的有机溶剂为甲醇、乙腈、无水乙醇中的一种，所述有机溶剂优选为无水乙醇。
步骤(4)中每次清洗用的去离子水的体积与步骤(2)中去离子水的体积相同。
环糊精为α、β、γ-环糊精中的一种或多种。
本发明的地塞米松纳米制剂是将地塞米松用4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精进行负载而得到的，并通过卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的覆盖而实现了纳米制剂的主动靶向性、高分散性和长循环性。验证表明，本发明的地塞米松纳米制剂在治疗类风湿性关节炎方面的效果，明显优于地塞米松游离药物。由于本发明的地塞米松纳米制剂实际是对地塞米松的制剂方法进行了改进，主要是通过4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的负载和卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的覆盖，提高了地塞米松治疗效果。因此，地塞米松纳米制剂自然也就适合于在治疗其它炎症相关的疾病的进一步开发应用了。
本发明的制备方法简单，也即能够用生物安全性好的药物载体来得到有较好药用效果地塞米松纳米制剂。因此，从制备方法和生物安全性方面讲也非常有利于进一步开发应用。
实施例1
将甲醇与乙腈按照体积比1：1的比例混合制得甲醇-乙腈混合溶液，将3.0mg地塞米松药物和30.0mg 4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精用3.0ml甲醇-乙腈混合溶液溶解；
将6.0mg卵磷脂和6.0mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及6.0mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物用1.0ml无水乙醇进行超声分散，然后再加入10.0ml水继续超声分散，并在65℃加热30分钟，然后冷却至室温，得到分散得有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液。
溶解有地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的甲醇-乙腈混合溶液滴定至分散的有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得地塞米松纳米制剂悬浮液；
将纳米药物悬浮液在10000转离心分离，用10ml去离子水洗三次，得固化的地塞米松纳米制剂。
实施例2
将甲醇与二甲亚砜按照体积比1：1.5的比例混合制得甲醇-二甲亚砜混合溶液，将3.5mg地塞米松和35.0mg 4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的γ-环糊精用4.0ml甲醇-二甲亚峰混合溶液溶解；
将7.0mg卵磷脂和10.0mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及10.0mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物用1.0ml无水乙醇进行超声分散，然后再加入15.0ml水继续超声分散，并在65℃加热30分钟，然后冷却至室温，得到分散得有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液。
溶解有地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的甲醇-二甲亚砜混合溶液滴定至分散得有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得地塞米松纳米制剂悬浮液；
将纳米药物悬浮液在10000转离心分离，用15ml去离子水洗三次，得固化的地塞米松纳米制剂。
实施例3
将甲醇与N,N-二甲基甲酰胺按照体积比1：1.3的比例混合制得甲醇-N,N-二甲基甲酰胺混合溶液，将3.0mg地塞米松和45.0mg 4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精用3.5ml甲醇-N,N-二甲基甲酰胺混合溶液溶解；
将6.5mg卵磷脂和6.5mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及6.5mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物用0.8ml无水乙醇进行超声分散然后再加入12.0ml水继续超声分散，并在65℃加热30分钟，然后冷却至室温，得到分散有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液。
将溶解有地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的甲醇乙腈混合溶液滴定至分散的有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得地塞米松纳米制剂悬浮液；
将纳米药物悬浮液在10000转离心分离，用12ml去离子水洗三次，得固化的地塞米松纳米制剂。
实施例4：
将甲醇与乙腈按照体积比1：1的比例混合制得甲醇-乙腈混合溶液，将3.0mg地塞米松和30.0mg 4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精用3.0ml甲醇-乙腈混合溶液溶解；
将6.0mg卵磷脂和10.0mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及10mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物用0.8ml无水乙醇进行超声分散，然后再加入12.0ml水继续超声分散，并在65℃加热30分钟，然后冷却至室温，得到分散的有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000的水溶液。
溶解有地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的甲醇-乙腈混合溶液滴定至分散的有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000的水溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得空非靶向的地塞米松纳米制剂悬浮液；
将非靶向地塞米松纳米制剂浮液在10000转离心分离，用12ml去离子水洗三次，得固化的非靶向的地塞米松纳米制剂。
总结：
一、利用高效液相色谱法制作地塞米松的标准工作曲线，色谱条件为十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(28：72)为流动相，检测波长为240nm。取地塞米松对照品溶于甲醇中，制备为每1ml中约含地塞米松对照品为10ug、30ug、50ug、70ug、90ug的标准溶液，取20ul注入液相色谱仪中，记录色谱图，计算标准曲线。
通过实施例1～4中离心分离后的纳米制剂再分散于200ul去离子水中，取20ul分散的纳米制剂低温冷冻干燥后称重，并用甲醇1ml溶解，采用高效液相色谱法测定地塞米松药物含量，计算其包封率和载药量，其中：
Figure BDA0001881371900000081
Figure BDA0001881371900000082
表一：实施例1～4地塞米松纳米制剂的包封率和载药量
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
包封率(％) 85.23 88.45 86.67 88.89
载药量(％) 9.6 6.5 8.2 9.4
二、纳米制剂稳定性
将实施例1～4制备的地塞米松纳米制剂加入5％蔗糖后冻干保存，并在1周、2周、3周和4周后加入水再分散，测试其粒径分布，考察纳米制剂的稳定性，检测结果如下：
表二：实施例1～4地塞米松纳米制剂稳定性(nm)
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
1周后 220 282 295 180
2周后 230 278 289 213
3周后 225 289 310 215
4周后 243 295 332 224
结果表明我们制备的纳米粒有较好的稳定性，能在冻干条件下低温较长期保存。
验证实验：
一、粒径
本发明在实验室采用了粒度仪对地塞米松纳米制剂进行了表征。按照实施例3方式制备地塞米松纳米制剂，并通过透射电镜观察，其结果如图2所示。地塞米松纳米制剂的粒径在200-300nm之间，进一步在250-300纳米之间，聚合分散指数低于0.2，表面电荷在-20ev至-25ev之间。透射电镜图片结果显示该纳米粒为球形结构，从上述粒度仪分析可以得出，该纳米药物具有适合体内应用的纳米尺寸和聚合分散指数以及表面电荷。
二、动物实验：
1、纳米药物的靶向性评价
为了评价我们制备的纳米药物能靶向到关节炎病变部位，我们采用Cy5(一种荧光剂)对纳米制剂进行了标记，采用活体成像方式观察了纳米粒和游离的Cy5(代表游离药物)到达关节炎病变部位的情况，结果如图3所示。在图3中，小鼠的脚掌关节炎部位越呈现出亮黄色，表面到达的荧光剂越多，也就是代表纳米药物到达关节炎病变部位越多。从图3中可以看出，与未给任何荧光剂的小鼠相比，给游离Cy5的小鼠关节炎部位只有少量红色荧光，证明到达关节炎症部位的荧光剂很少，该结果表明游离药物能很少到达关节炎症部位。而非靶向纳米制剂的荧光强度要强于游离药物，说明非靶向的纳米制剂能被动靶向到关节炎症部位，而且聚集量明显增加。主动靶向纳米制剂的荧光强度最强，说明纳米制剂除了能被动靶向到关节炎症部位外，还能通过叶酸介导的主动靶向于关节炎症部位。体内活体成像结果表明我们制备的纳米制剂能有效靶向于小鼠关节炎症部位，提高病变部位的药物浓度。
2、对地塞米松纳米制剂的动物体内治疗类风湿性关节炎进行了评价，如图4所示。
患有类风湿性关节炎的模型小鼠其脚掌越肿胀，说明其炎症越严重。若类风湿性关节炎模型小鼠的脚掌无明显红肿，且与正常小鼠相比较无明显差异，则说明药物治疗效果好。从图4中可以得知叶酸修饰后的地塞米松纳米制剂治疗效果最好，患有类风湿性关节炎的模型小鼠脚掌红肿程度明显减弱，与正常小鼠无明显差异。其次是非靶向地塞米松纳米药物组，其治疗效果略逊于叶酸修饰后的地塞米松纳米制剂组，但优于地塞米松游离药物组。该结果说明叶酸的修饰能提高地塞米松纳米制剂对类风湿性关节炎的治疗效果。
类风湿性关节炎的小鼠模型，我们采用经典的胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型。建模方法如下：对7-8周龄的DBA/1小鼠，首先将2mg/ml的鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)与等量完全弗氏佐剂充分乳化，于冰上配制，制得CⅡ乳剂，现配现用；然后在小鼠尾根部皮内注射，每只DBA/1小鼠给予0.1mL乳剂，记为0天；21天后，同前将2mg/ml的鸡Ⅱ型胶原与等量不完全弗氏佐剂充分乳化，制得CⅡ乳剂，给小鼠以加强免疫，建立CIA模型。在加强免疫4-7天后出现炎症高峰，表现为实验动物双侧足爪明显肿胀，可累及前爪，造模时间与疾病进行性加重呈正相关。其免疫学过程和关节表现与人类具有较高的一致性。
3、关节炎指数值越低，说明关节的炎症程度越弱。图5中结果表明叶酸修饰后的地塞米松纳米制剂治疗类风湿性关节炎模型小鼠后，小鼠具有更低的关节指数值，说明叶酸修饰后地塞米松靶向纳米制剂对于类风湿性关节炎具有最好的治疗效果，其治疗效果优于非靶向地塞米松纳米制剂和地塞米松游离药物。
4、脚掌厚度值越小，同样说明关节炎肿胀程度越低，进一步说明药物治疗效果好。从图6中可以得知，叶酸修饰后的地塞米松纳米药物治疗组的关节炎模型小鼠脚掌厚度明显低于非靶向地塞米松纳米制剂组和游离地塞米松组，该结果同样说明该项目制备的地塞米松靶向纳米制剂对类风湿性关节炎具有最好的治疗效果。
三、对纳米制剂的毒性进行了初步评价
与正常小鼠相比，类风湿性关节炎模型小鼠体重会降低，且与炎症程度成正比。如果纳米药物毒性较大，同样会使得小鼠体重降低。若治疗后小鼠体重逐渐升高，可初步说明小鼠的关节炎症状减轻，且纳米药物没有明显的毒性。从图7中可以看出，各个治疗组的小鼠体重增加值明显高于安慰剂组，说明药物治疗减轻了小鼠关节炎症状，同时也说明纳米药物组没有明显的毒性，未导致小鼠体重明显下降得不良副反应。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂，其特征在于：将地塞米松药物负载到具有活性氧响应性的4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精药物载体上，外层覆盖有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000的纳米粒，并覆盖有二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物作为靶向单元，该纳米制剂为球形结构，粒径在200-300纳米之间；
所述地塞米松纳米制剂的制备方法包括：将4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精载体和地塞米松溶于有机溶剂中，然后再滴加到分散有卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的水溶液中，通过亲水-疏水作用及自组装作用可形成纳米粒沉淀，并对地塞米松药物进行包裹。
2.一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：地塞米松纳米制剂的制备步骤如下：
(1)将地塞米松和4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精用甲醇混合溶液溶解；
(2)将卵磷脂，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物加入到有机溶剂中分散，然后再加入去离子水超声分散，再在65摄氏度加热30分钟，并冷却至室温；
(3)将步骤(1)所得溶液滴定到步骤(2)的溶液中，滴定完后快速搅拌3分钟，然后在室温继续缓慢搅拌进行自组装1.5小时，得地塞米松纳米制剂悬浮液；
(4)将步骤(3)所述纳米制剂悬浮液在离心机中分离，去离子水洗，得固化的地塞米松纳米制剂。
3.根据权利要求2所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中地塞米松与4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的质量比为1:5～10。
4.根据权利要求3所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯通过N,N′-羰基二咪唑作为活化剂与环糊精进行修饰连接。
5.根据权利要求4所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中甲醇混合溶液中包括甲醇与乙腈、丙酮、二甲亚砜、N,N′-二甲基甲酰胺中的一种的比例为1:1～2。
6.根据权利要求2所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3500-叶酸共轭物的质量比为1:1～1.5:1～1.5。
7.根据权利要求6所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(3)中卵磷脂与4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的环糊精的质量比为1:5～6。
8.根据权利要求2所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中有机溶剂和去离子水的体积比为1:10～15。
9.根据权利要求8所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中的有机溶剂为甲醇、乙腈、无水乙醇中的一种。
10.根据权利要求2所述的一种靶向治疗类风湿性关节炎的地塞米松纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤(4)中每次清洗用的去离子水的体积与步骤(2)中去离子水的体积相同。
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