CN109266554A - 一种生物指示剂菌片制备方法 - Google Patents

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王卫
闫岩
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Nanjing Jusha Display Technology Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms

Abstract

本发明公开了一种生物指示剂菌片的制备方法，包括以下步骤：1)取芽孢悬液，涡旋混合均匀；2)取无菌载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取定量的菌悬液滴至载体中央；3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中进行干燥，烘干的温度为60‑70℃，烘干的时间为60‑120min；4)将染菌载体装入无菌包装中保存。采用本发明所得到的生物指示剂菌片在不同暴露时间下的可复苏试验菌的染菌载体数量的与理论值一致，从而保证了使用本发明所制备的生物指示剂菌片检测灭菌效果的准确性，解决实际工作中，常发生的暴露时间长的可复苏数量多于暴露时间短的可复苏实验菌的染菌载体的问题。

Description

一种生物指示剂菌片制备方法
技术领域
本发明属于无菌检测领域，具体涉及一种生物指示剂菌片制备方法。
背景技术
在医疗保健行业，卫生检疫行业，制药企业等多种涉及无菌技术的行业，常常有必要对各种无菌生产工艺、无菌产品、无菌包装材料等灭菌效果进行评估验证，检测设备的灭菌效力。世界各地每年都会有因灭菌不彻底导致感染事件发生的报道。生物监测即是通过标准化的菌株，其合乎要求的抗力来考核灭菌负荷是否达到无菌保障水平的要求。
生物指示剂是灭菌监测的金标准，通过标准化的菌株及符合要求的抗力来对特定灭菌过程进行监测。生物指示剂中所用菌株比器械或敷料上真实的微生物负荷的抗力更大，因此通过生物指示剂可对灭菌过程进行检测，保证灭菌有效性。
生物指示剂的抗力D值(指的是在一定的灭菌温度下，杀灭90％的实验菌所需要的灭菌时间)测定主要通过部分阴性法测定。部分阴性数据通过使试样逐级暴露于灭菌条件下，每级暴露采用不少于20个试样，记录为可复苏试验菌的染菌载体数与每次暴露于亚致死剂量的染菌载体数之比。随着暴露时间的延长，可复苏试验菌的染菌载体数量应逐渐减少，至全部为阴性。但是在实际工作中，经常发生暴露时间长的可复苏数量多于暴露时间短的可复苏试验菌的染菌载体数量，呈现与理论值相背离的趋势。本专利通过发明新型技术方案，以解决上述问题，使可复试验菌的染菌载体数量与暴露时间相吻合。
发明内容
针对上述问题，本发明提出一种生物指示剂菌片制备方法。
实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：
一种生物指示剂菌片的制备方法，包括以下步骤：
1)取芽孢悬液，涡旋混合均匀；
2)取无菌载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取定量的菌悬液滴至载体中央；
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中进行干燥，烘干的温度为60-70℃，烘干的时间为60-120min；
4)将染菌载体装入无菌包装中保存。
作为本发明的进一步改进，所述芽孢悬液中的芽孢包括嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
作为本发明的进一步改进，所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液的浓度为106～108芽孢/ml。
作为本发明的进一步改进，优选的，所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液的浓度为1*107～9*107芽孢/ml。
作为本发明的进一步改进，所述无菌载体包括滤纸片、聚丙烯片、不锈钢片、玻璃片中的一种或几种。
进一步，优选的，所述的染菌载体的烘干温度为63-68℃。
进一步，优选的，所述的染菌载体的烘干时间为70-90min。
作为本发明的进一步改进，所制备的生物指示剂菌片适用于压力蒸汽灭菌生物指示剂，过氧化氢等离子体灭菌生物指示剂中的一种或几种。
本发明的有益效果：本发明通过采用60-70℃的烘干温度对悬菌液进行干燥所得到的生物指示剂菌片在不同暴露时间下的可复苏试验菌的染菌载体数量的与理论值一致，从而保证了使用本发明所制备的生物指示剂菌片检测灭菌效果的准确性，解决实际工作中，常发生的暴露时间长的可复苏数量多于暴露时间短的可复苏实验菌的染菌载体的问题。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例一：
一种过氧化氢等离子体生物指示剂菌片的制备方法，包括以下步骤：
1)取湿热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液，稀释至浓度为107，涡旋混合均匀；
2)取100片无菌聚丙烯载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取20ul的菌悬液滴至载体中央；
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中进行干燥，依照设定烘干的温度60℃、63℃、68℃、70℃，烘干的时间60min、70min、90min、120min完成正交试验；
4)将染菌载体装入无菌包装中保存。
5)制备出过氧化氢等离子体生物指示剂。
实施例二：
一种压力蒸汽离子体生物指示剂菌片的制备方法，包括以下步骤：
1)取湿热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液，稀释至浓度为5*107，涡旋混合均匀；
2)取100片无菌不锈钢片载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取20ul的菌悬液滴至载体中央；
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中进行干燥，依照设定烘干的温度60℃、63℃、68℃、70℃，烘干的时间60min、70min、90min、120min完成正交试验；
4)将染菌载体装入无菌包装中保存。
5)制备出压力蒸汽生物指示剂。
实施例三：
实验组1：制备A组干燥生物指示剂菌片
1)取嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液，稀释至浓度为2*107芽孢/ml，涡旋混合均匀。
2)取150片无菌载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取10ul菌悬液依次滴至每片载体的中央。
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中在65℃的烘干温度下烘干70min。
4)将染菌载体装入无菌包装中保存。
对照组1-1：制备B组干燥生物指示剂菌片
1)取嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液，稀释至浓度为2*107芽孢/ml，涡旋混合均匀。
2)取150片无菌滤纸载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取10ul菌悬液依次滴至每片载体的中央。
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中在75℃的烘干温度下烘干120min。
4)将染菌载体只要无菌包装中保存。
对照组1-2：制备C组干燥生物指示剂菌片
1)取嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液，稀释至浓度为2*107芽孢/ml，涡旋混合均匀。
2)取150片无菌载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取10ul菌悬液依次滴至每片载体的中央。
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中在45℃的烘干温度下烘干70min。
4)将染菌载体只要无菌包装中保存。
结果测试：
测试过冲中所使用的抗力仪为KYQJ-5型压力蒸汽灭菌抗力检测仪。
结果验证实验：将所制备的A、B、C三组样品用作压力蒸汽灭菌生物指示剂进行抗力测试。
首先根据消毒技术规范，配置芽孢恢复生长培养基，随后按照以下条件进行如下正交试验。
验证试验1-1：分别取20片A组样品，20片B组样品，20片C组样品，至于抗力仪中121℃11min灭菌。
采用无菌操作将上述灭菌样品转移至芽孢恢复生长培养基中，56℃培养。
验证试验1-2：分别取20片A组样品，20片B组样品，20片C组样品，至于抗力仪中121°13min灭菌。
采用无菌操作将上述灭菌样品转移至芽孢恢复生长培养基中，56℃培养。
验证试验1-3：分别取20片A组样品，20片B组样品，20片C组样品，至于抗力仪中121℃15min灭菌。
采用无菌操作将上述灭菌样品转移至芽孢恢复生长培养基中，56℃培养。
验证试验1-4：分别取20片A组样品，20片B组样品，20片C组样品，至于抗力仪中121℃17min灭菌。
采用无菌操作将上述灭菌样品转移至芽孢恢复生长培养基中，56℃培养。
验证试验1-5：分别取20片A组样品，20片B组样品，20片C组样品，至于抗力仪中121℃19min灭菌。
采用无菌操作将上述灭菌样品转移至芽孢恢复生长培养基中，56℃培养。
上述样品培养48h后，记录每组阳性样品数量，最终的结果如表1所示。
表1：压力蒸汽灭菌生物指示剂菌片测试结果
由表1可以看出：A组样品菌片干燥温度为65℃，70min制备菌片抗力与理论值一致；B组样品13min，阳性数量为7片，15min阳性数量为10min，趋势与理论值背离；C组样品11min，阳性数量11片，13min阳性数量18片，趋势与理论值背离。由此可知制作干燥染菌载体时，采用65℃的烘干温度对菌悬液进行烘干所得到的干燥染菌载体在不同暴露时间下的可复苏试验菌的染菌载体数量的一致性。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (8)

1.一种生物指示剂菌片的制备方法，包括以下步骤：
1)取芽孢悬液，涡旋混合均匀；
2)取无菌载体分散的放置在无菌平台上，之后采用移液器精准的量取定量的菌悬液滴至载体中央；
3)将放置染菌载体的平台盖上盖子后放置无菌干燥箱中进行干燥，烘干的温度为60-70℃，烘干的时间为60-120min；
4)将染菌载体装入无菌包装中保存。
2.根据权利要求1所述的一种生物指示剂菌片的制备方法，其特征在于：所述芽孢悬液中的芽孢包括嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢。
3.根据权利要求2所述的一种生物指示剂菌片的制备方法，其特征在于：所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液的浓度为106～108芽孢/ml。
4.根据权利要求3所述的一种生物指示剂菌片的制备方法，其特征在于：所述的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢悬液的浓度为1*107～9*107芽孢/ml。
5.根据权利要求1所述的一种生物指示剂菌片的制备方法，其特征在于：所述无菌载体包括滤纸片、聚丙烯片、不锈钢片、玻璃片中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的一种生物指示剂菌片制备方法，其特征在于：所述的染菌载体的烘干温度为63-68℃。
7.根据权利要求1所述的一种生物指示剂菌片制备方法，其特征在于：所述的染菌载体的烘干时间为70-90min。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种生物指示剂菌片制备方法，其特征在于：所制备的生物指示剂菌片适用于压力蒸汽灭菌生物指示剂，过氧化氢等离子体灭菌生物指示剂中的一种或几种。
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