CN109258626A - 一种猪冻精解冻液及其制备方法和解冻方法 - Google Patents

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    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
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Abstract

本发明公开了一种猪冻精解冻液及其制备方法和解冻方法，涉及猪冻精技术领域。该猪冻精解冻液包括以下组分：葡萄糖、柠檬酸钠、Tris、柠檬酸、磷酸二氢钾和半胱氨酸。采用该解冻液解冻猪冻精，具有良好的解冻效果，可使猪精保持较好的活力。

Description

一种猪冻精解冻液及其制备方法和解冻方法
技术领域
本发明涉及猪冻精技术领域，具体而言，涉及一种猪冻精解冻液及其制备方法和解冻方法。
背景技术
猪常温精液人工授精技术作为一项非常成熟的实用技术，在养猪生产中广泛使用，但由于常温精液不适宜长期保存和长途运输，在使用上存在一定局限性。
猪冻精技术对提高种猪利用效率和种质资源保存有重要作用。但目前市场上尚无国产专用猪冻精解冻液或者稀释粉，用鲜精稀释液解冻冻精效果不理想；而进口产品解冻效果好，但价格昂贵，不利于冻精推广。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种猪冻精解冻液，采用该解冻液解冻猪冻精，具有良好的解冻效果，可使猪精保持较好的活力。
本发明的另一目的在于提供一种制备上述猪冻精解冻液的方法。
本发明的另一目的在于提供猪冻精的解冻方法，采用该解冻方法解冻猪冻精，具有良好的解冻效果，可使猪精保持较好的活力。
本发明是这样实现的：
一方面，本发明提供了一种猪冻精解冻液，所述解冻液包括以下组分：葡萄糖、柠檬酸钠、Tris、柠檬酸、磷酸二氢钾和半胱氨酸。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述猪冻精解冻液的渗透压为300-350mOsm。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，按1000ml计，所述猪冻精解冻液包括以下组分：葡萄糖20-30g、柠檬酸钠6-10g、Tris 4-8g、柠檬酸2-4g、磷酸二氢钾1-1.8g以及半胱氨酸0.5-2mM。
例如，在本发明的一些实施方案中，葡萄糖在1000ml的猪冻精解冻液的含量可以是20、21、22、23、24、25、26、27、28、29和30g中的任意一者或两者之间的范围；
柠檬酸钠在1000ml的猪冻精解冻液的含量可以是6、7、8、9和10g中的任意一种或两者之间的范围。
Tris在1000ml的猪冻精解冻液的含量可以是4、5、6、7和8g中的任意一种或两者之间的范围。
柠檬酸在1000ml的猪冻精解冻液的含量可以是2、2.2、2.4、2.6、2.8、3、3.2、3.4、3.6、3.8和4g中的任意一者或两者之间的范围；
磷酸二氢钾在1000ml的猪冻精解冻液的含量可以是1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7和1.8g中的任意一者或两者之间的范围；
半胱氨酸在1000ml的猪冻精解冻液的含量可以是0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9和2mM中的任意一者或两者之间的范围。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，Tris、柠檬酸和磷酸二氢钾三者的物质的量满足以下公式：n1＝n2/3.1+n3*0.65；其中，n1为Tris的物质的量，n2为柠檬酸的物质的量，n3为磷酸二氢钾的物质的量。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，按1000ml计，所述解冻液包括以下组分：葡萄糖24.54g、柠檬酸钠7.02g、Tris 6g、柠檬酸2.65g、磷酸二氢钾1.42g以及半胱氨酸1mM。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述解冻液还可加抗生素。抗生素的添加在于起到抑菌作用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述半胱氨酸可替换为N-乙酰半胱氨酸或半胱氨酸盐酸盐。
另一方面，本发明提供了上述猪冻精解冻液的制备方法，其包括：将葡萄糖、柠檬酸钠、Tris、柠檬酸、磷酸二氢钾和半胱氨酸溶解于水中。
另一方面，本发明提供过来一种猪冻精的解冻方法，其包括：将猪冻精加入到上述的猪冻精解冻液中。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述解冻方法包括：将冷冻的猪冻精置于48-52℃水浴中解冻15-16s，然后加入到经28-32℃水浴加热的猪冻精解冻液中孵育10-20min。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供的猪冻精解冻液，每1000ml含有：无水葡萄糖24.54g、无水柠檬酸钠7.02g、Tris 6g、无水柠檬酸2.65g、磷酸二氢钾1.42g以及半胱氨酸1mM。
该猪冻精解冻液的制备方法如下：
称取：一水葡萄糖27g，二水柠檬酸钠8g，Tris 6g，一水柠檬酸2.9g，磷酸二氢钾1.42g和半胱氨酸盐酸盐0.175g，溶于600ml双蒸水或超纯水，定容至1000ml。
渗透压：330mOsm；pH:6.8-7.2。
实验例
另按说明书配制一份进口解冻液Androhep CryoGuard Thaw Extender(购自美国mofa公司)，作为对照解冻液。
将两种解冻液(实施例1的解冻液和对照解冻液)1.5ml于2ml离心管，置于30℃水浴锅预热。另一水浴锅调温度至50℃，取0.5ml细管(规格是0.5ml的细管)猪冻精在50℃水浴解冻15-16s，擦净细管，将细管精液分作两等份，分别加到两种解冻液中，混匀，孵育15-20min。
用CASA系统分析两份精液，记录PM(前向运动精子比例)和TM(总活动精子比例)。重复6次。结果见表1。
表1
TM(％) PM(％)
实施例1 61±8.3 42±5.6
对照解冻液 62±7.1 44±3.9
从表1数据可以看出，两种解冻液在统计上没有显著差异，表明本实施例1的猪冻精解冻液和进口产品效果一样好啊，但本发明专利的猪冻精解冻液生产成本比进口产品低上十倍，其具有良好的应用前景。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种猪冻精解冻液，其特征在于，所述解冻液包括以下组分：葡萄糖、柠檬酸钠、Tris、柠檬酸、磷酸二氢钾和半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的猪冻精解冻液，其特征在于，所述解冻液的渗透压为300-350mOsm。
3.根据权利要求2所述的猪冻精解冻液，其特征在于，按1000ml计，所述解冻液包括以下组分：葡萄糖20-30g、柠檬酸钠6-10g、Tris4-8g、柠檬酸2-4g、磷酸二氢钾1-1.8g以及半胱氨酸0.5-2mM。
4.根据权利要求3所述的猪冻精解冻液，其特征在于，Tris、柠檬酸和磷酸二氢钾三者的物质的量满足以下公式：n1＝n2/3.1+n3*0.65；其中，n1为Tris的物质的量，n2为柠檬酸的物质的量，n3为磷酸二氢钾的物质的量。
5.根据权利要求4所述的猪冻精解冻液，其特征在于，按1000ml计，所述解冻液包括以下组分：葡萄糖24.54g、柠檬酸钠7.02g、Tris6g、柠檬酸2.65g、磷酸二氢钾1.42g以及半胱氨酸1mM。
6.根据权利要求1-5任一项所述的猪冻精解冻液，其特征在于，所述解冻液还可加抗生素,如青霉素0.6g、链霉素1g。
7.根据权利要求1-5任一项所述的猪冻精解冻液，其特征在于，所述半胱氨酸可替换为N-乙酰半胱氨酸或半胱氨酸盐酸盐。
8.权利要求1所述的猪冻精解冻液的制备方法，其特征在于，其包括：将葡萄糖、柠檬酸钠、Tris、柠檬酸、磷酸二氢钾和半胱氨酸溶解于水中。
9.一种猪冻精的解冻方法，其特征在于，其包括：将猪冻精加入到权利要求1-7任一项所述的猪冻精解冻液中。
10.根据权利要求9所述的解冻方法，其特征在于，所述解冻方法包括：将冷冻的猪冻精置于48-52℃水浴中解冻15-16s，然后加入到经28-32℃水浴加热的猪冻精解冻液中，孵育10-20min。
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