CN109239364A - 一种血型抗体效价检测能力验证方法、试剂盒及系统 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种血型抗体效价检测能力验证方法、试剂盒及系统。所述方法为：评估者将标准效价已知的IgG抗体样本、质控品、说明书交付受试者；受试者按照说明书将质控IgG抗体与相应红细胞反应获得检测图片，与质控图片比对以排除抗体样本受到明显损害的情形；受试者检测抗体样本的效价，将材料、方法和结果交付评估者；评估者根据受试者所使用的试剂的种类、方法的类型、结果及IgG抗体样本的标准效价，综合判断得到受试者的血型抗体效价检测能力。所述试剂盒包含IgG抗体样本、质控品和说明书。所述系统包括所述试剂盒、评估端、受试端和验证平台。本发明有助于客观准确的评估免疫血液学等相关实验室或人员的血型抗体效价检测能力。

Description

一种血型抗体效价检测能力验证方法、试剂盒及系统

技术领域

本发明涉及血液检测领域，具体地说，涉及一种血型抗体效价检测能力验证方法、试剂盒及系统。

背景技术

免疫血液学相关实验室或专业技术人员在血型抗体效价检测方面应具备足够的能力，以满足临床或科研的需求。目前市场上缺乏用于评估血型抗体效价检测能力的质控产品和方法。现有类似的质控产品，为行业、组织或实验室发放的“室间质控品”，用于对血型抗体检测中凝集强度判定进行质控。通过发放这些样本给参与实验室，并回收参与实验室的检测结果加以分析，获得该参与实验室对血型抗体凝集强度的评估能力。这类室间质控品的不足之处在于只检测血型抗体凝集强度，受到抗体亲和力等多种因素的影响，凝集强度无法真实反映和用于评估血型抗体的含量。且使用不同反应介质、方法检测得出的抗体效价结果往往没有可比性。因此这种质控方法存在一定的缺陷。

《中国输血杂志》2015年4月第28卷第4期，刊出的论文“基层输血科自制室内质控品的方法与可行性探讨”，自制单独血浆与红细胞质控品，经亲和力、抗体效价检测、凝集强度和稳定性等验证后，按照自行设计的室内质控模式，进行ABO血型鉴定、RhD血型、交叉配血试验及不规则抗体筛查等试验，结果表明自制的室内质控品，其有效性、特异性、稳定性和可靠性，符合《ISO15189医学实验室认可准则》中对IQC的基本要求，可以有效控制输血差错事故的发生。

《临床输血与检验》2016年8月第18卷第4期，刊出的论文“输血相容性检测室内质控品自制及应用探讨”，利用输血科现有血液样本资源自制室内质控品，具体选取A、B、O、AB型血液样本各10份，同型混合后离心，分离血浆备用；压积红细胞用生理盐水洗涤后与CPDA保养液等量混合备用；选取ABO同型Rh(D)阴性血液样本1～2份，经确认后，与CPDA保养液等量混合备用；IgG抗-D血清采用商品化试剂。各型血液的红细胞和血浆按照标准操作规程进行血清学验证试验，符合血清学反应格局，且质控红细胞与标准血清凝集强度达4+、质控血浆与相应红细胞凝集强度为2+，方作为室内质控品使用。室内质控品用于监测输血相容性检测结果的准确度，结果表明制备的室内质控品合格，能满足4～6周使用。

专利文献CN107576807A，公开日2018.01.12，公开了一种血型检测试剂质控品及其制备方法和在血型检测中的应用，所述质控品包括6瓶ABO、RhD血型检测质控品、5瓶交叉配血质控品和4瓶不规则抗体筛检质控品，所述6瓶ABO、RhD血型检测质控品分别为：A1型RhD(+)红细胞、B型RhD(+)红细胞、A血清、B血清、O型RhD(+)红细胞及RhD(-)红细胞各1瓶；所述5瓶交叉配血质控品分别为AB型(+)红细胞、O型RhD(+)红细胞、RhD(-)红细胞、O血清、含IgG型抗D的AB血清各1瓶；所述4瓶不规则抗体筛检质控品分别为O血清及含IgG型抗D的AB血清各2瓶。所述血型检测试剂质控品用于确保血型检测的准确性、特异性、亲和力、稳定性，避免检测过程中因为检测本身不合格而使检测结果受到影响。

然而以上质控品均为室内质控，用于监控实验室内部检测过程，无法用来评估比较各免疫血液学实验室之间的检测能力。用于血型抗体效价检测能力评估的质控品未见报道。

综上所述，亟需一种能客观准确的评估、验证或比较免疫血液学相关实验室或专业技术人员的血型抗体效价检测能力的产品和方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种血型抗体效价检测能力验证方法。

本发明的再一的目的是，提供一种血型抗体效价检测能力验证试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种血型抗体效价检测能力验证系统。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血型抗体效价检测能力验证方法，包括以下步骤：

a)评估者将抗体样本、质控品、说明书交付给受试者；所述抗体样本为IgG抗体样本，且其标准效价对于评估者来说是已知的；所述质控品包括凝集强度为1+～3+的质控IgG抗体，以及所述质控IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片；所述说明书记载了将质控IgG抗体与相应红细胞反应的操作方法；

b)受试者接收抗体样本、质控品、说明书，按照所述操作方法将质控IgG抗体与相应红细胞反应获得检测图片，并与质控图片比对以排除抗体样本在运输中受到明显损害的情形；

c)受试者以标准抗球蛋白法检测抗体样本的效价，将使用的材料、方法和结果交付给评估者；

d)评估者根据受试者交付的材料、方法和结果，将受试者检测抗体样本效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，综合判断，得到受试者的血型抗体效价检测能力。

作为一个优选例，步骤c)所述的材料包含试剂的购买厂商。

作为另一优选例，步骤c)所述的标准抗球蛋白法为标准手工试管抗球蛋白法或柱凝集法。

作为另一优选例，步骤c)所述的结果包括受试者检测得到的抗体样本的效价，还包括所述检测图片。

优选地，在步骤c)和步骤d)之间还包括步骤：评估者将所述检测图片与标准图片比对，以再次排除抗体样本在运输中受到明显损害的情形。

作为另一优选例，所述操作方法与评估者将质控IgG抗体与相应红细胞反应以获得质控图片的方法相同。

作为另一优选例，步骤d)之后还包括步骤：评估者将同一受试者多次的血型抗体效价检测能力进行比较；或还包括步骤：评估者将不同受试者的血型抗体效价检测能力进行比较。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血型抗体效价检测能力验证试剂盒，包含：

抗体样本：所述抗体样本为IgG抗体，其标准效价对于试剂盒提供者来说是已知的；

质控品：所述质控品包含凝集强度为1+～3+的质控IgG抗体，以及所述质控IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片；

说明书：所述说明书记载了将质控IgG抗体与相应红细胞反应的操作方法。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血型抗体效价检测能力验证系统，包括：

如上所述的血型抗体效价检测能力验证试剂盒；

评估端和受试端：所述的评估端对受试端的血型抗体效价检测能力进行验证；以及

验证平台；所述的验证平台包括：

试剂盒发放记录模块：用于记录评估端向受试端交付血型抗体效价检测能力验证试剂盒的状态；

质控记录模块：用于上传和储存受试者的质控IgG抗体和相应红细胞反应获得的检测图片；

质控结果反馈模块：包含质控IgG抗体和相应红细胞反应的标准图片，并用于将标准图片和质控记录模块中的检测图片进行比对，得出比对结果；

检测结果记录模块：用于上传和储存受试者检测IgG抗体样本的效价的材料、方法和结果；

检测结果分析模块：用于评估端根据检测结果记录模块的材料、方法和结果，将受试者检测抗体样本效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，综合判断受试者的血型抗体效价检测能力；

检测结果反馈模块：用于评估端将血型抗体效价检测能力的结果反馈给受试者。

作为一个优选例，所述的血型抗体效价检测能力验证系统还包括统计比较模块，用于比较同一受试者多次的血型抗体效价检测能力，或不同受试者的血型抗体效价检测能力。

本发明优点在于：

1、本发明提供了一种客观公正的验证或评估免疫血液学实验室(从事红细胞血型检测的实验室)或专业技术人员的血型抗体效价检测能力的方法，其通过将抗体样本与国际标准品进行精确比对，得到抗体样本效价的标准值，再根据不同参试实验室递交的结果，分别判断其检测值与真实值之间的差异，并依据各参试实验室使用的介质和方法，综合判断其血型抗体效价检测能力，有助于为单个参试实验室提供血型抗体效价检测能力的客观准确的纵向比较，或为不同参试实验室提供血型抗体效价检测能力的客观准确的横向比较。本发明为验证专业实验室在血型抗体检测能力方面是否符合质量体系要求提供了一种更加有效的评估工具，适于在质量体系的建设中广泛推广应用。

2、本发明的方法在抗体样本的寄送过程中增加了质控品及图片，能排除抗体样本在运输中受到明显损害的情形，提高了参试实验室血型抗体检测能力验证结果的准确性。

附图说明

图1.各类型实验室效价检测结果分布。

图2.柱凝集法与试管法效价比较。

图3.基于不同厂商试剂的效价结果分布。

图4.本发明的血型抗体效价检测能力验证方法的流程图。

图5.本发明的血型抗体效价检测能力验证系统的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

本申请发明人经过广泛而深入的研究，认识到目前血型抗体效价检测的质控产品或质控方法均无法用于客观验证或评估免疫血液学相关实验室或专业技术人员的血型抗体效价检测能力，因此提出应当考察对血型抗体含量的检测能力，进一步依据检测过程使用的介质和方法，来综合判断各参试者的效价检测值与真实值之间的差异，以客观的评估、验证或比较免疫血液学相关实验室或专业技术人员的血型抗体效价检测能力。基于此完成了本发明。

实施例1

血型抗体性质可以是IgM型和IgG型，血型抗体特异性可以是抗A、抗B、抗D等。IgM型血型抗体，由于目前还没有国际标准品，目前仅仅能进行实验室间以及不同方法间比对。IgG型抗体存在国际标准品，可以在实验室间比对的同时，实现定量评估。方法是将原料抗体和国际标准品(英国布里斯托国际血型参比实验室)同样进行1.25倍稀释，加入相应2％红细胞悬浮液，在抗球蛋白凝胶卡中反应并比对，获得该抗体与国际标准品的抗体含量精确比值。由于原料抗体的效价较高，通常需要首先定量稀释至较低浓度后才和标准品比对。通过比较，可以将原料抗体的含量进行标定，单位是ng/ml。将标定好的抗体样本寄给参试单位，并回收结果，统计不同实验室、不同试验方法的结果，并将结果反馈给参试实验室。

为了防止邮寄过程中抗体的变化，在邮寄样本的同时，附带质控品，质控品包括凝集强度为2+左右(1+～3+)的抗体，以及该抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的图片。参试时按说明书要求使用这些质控品与相应红细胞反应，将得到的图片与提供的图片比对，可以判断抗体在运输中是否受到明显损害。

本发明已经在国内近200家实验室进行了试用研究，从反馈的结果分析，本发明的方法可以有效评估实验室对血型抗体效价检测的能力。该试用研究评估了实验室对IgG型抗体效价检测的能力，具体情况如下：

1、上海市血液中心确定血型抗体效价检测能力验证项目的参试实验室，共143家。

2、上海市血液中心将已标定含量的抗体样本、质控品、说明书邮寄给各参试实验室。

其中，抗体样本为IgG抗体，通过抗体定量检测，以及与国际标准品(英国布里斯托国际血型参比实验室，批号：73/515)精确比对，测得其抗D绝对量为1930ng/ml。按标准抗球蛋白法检测抗D的标准检测灵敏度10ng/ml计，该IgG抗体样本的标准效价为193。

质控品为凝集强度为2+左右(1+～3+)的IgG抗体，以及该IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片。

3、各参试实验室接收上海市血液中心寄送的抗体样本、质控品、说明书，首先按说明书要求将质控品的IgG抗体与相应红细胞反应，将得到的结果与上海市血液中心提供的质控图片比对，以判断抗体在运输中是否受到明显损害。如判断未受到明显损害，则采用标准手工试管抗球蛋白法或柱凝集法分别测定抗体样本的效价，将测定结果以及质控IgG抗体与相应红细胞反应的图片以回执形式反馈给上海市血液中心。

4、上海市血液中心根据各参试实验室提供的质控IgG抗体与相应红细胞反应的图片，判定各参试实验室是否排除了抗体样本在运输中受到明显损害的情形，由此筛选出有效质控的参试实验室的结果共142家。

5、上海市血液中心分析筛选出的有效质控结果。首先将各参试实验室的检测得到的效价结果与抗体样本的标准效价比较，初步评估该参试实验室的血型抗体效价检测能力，结果：上海市血液中心以标准手工试管抗球蛋白法操作，得到的效价平均值(几何平均)为143，较抗体样本的标准效价193略微偏低；由于很多实验室的敏感度检测已经低于10ng/mL，因此效价检测的数值右移大于128，大部分实验室效价检测在512-1024之间，提示实验室的最高敏感度已经升至2-5ng/mL左右；此外还可发现不同级别的采血单位实验室与不同级别的医院实验室对检测的可靠性也产生了一定的影响(图1)。然后统计并计算试管法和柱凝集法检测得到的血型抗体效价的平均值，结果分别为311和591，可见柱凝集的方法几乎敏感度比试管法高一倍(图2)，反映出采用的血型抗体效价检测方法的类型对检测结果的影响。再统计分析不同厂商的试剂对检测结果的影响，反映出不同厂商的试剂对检测的可靠性也产生了一定的影响(图3)。最后结合各参试实验室采用的血型抗体效价检测方法的类型、使用的试剂厂商、参试实验室的级别，来综合评估或比较各参试实验室的血型抗体效价检测能力。作为半定量的效价检测，行业通行的规则是允许存在±1倍的误差。例如标准值为64，则检测值为32、64、128均为可接受范围。

实施例2

参见图4，图4是本发明的血型抗体效价检测能力验证方法的流程图。包括以下步骤：

1、评估者将抗体样本、质控品、说明书交付给受试者。所述抗体样本为IgG抗体样本，且其标准效价对于评估者来说是已知的；所述质控品包括凝集强度为2+左右(1+～3+)的质控IgG抗体，以及该质控IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片；所述说明书记载了所述质控品的操作方法，所述质控品的操作方法也就是将质控IgG抗体与相应红细胞反应的操作方法，该操作方法具有特定的操作步骤和参数，该操作步骤和参数与评估者得出质控图片所采取的步骤和参数一致。

2、受试者接收抗体样本、质控品、说明书。首先按照说明书记载的质控品的操作方法，将质控IgG抗体与相应红细胞反应，获得检测图片，将所述检测图片与质控图片进行比较，以判定抗体样本在运输中是否受到明显损害。

如判定抗体样本在运输中未受到明显损害，则进行下一步的抗体样本效价检测；如判定抗体样本在运输中受到明显损害，则重新获取另一份的抗体样本、质控品、说明书。

3、受试者以标准抗球蛋白法检测抗体样本的效价，记录使用的材料、方法和结果，连同质控IgG抗体与相应红细胞反应的检测图片和质控图片，一起交付给评估者。所述标准抗球蛋白法包括标准手工试管抗球蛋白法和柱凝集法。

4、评估者首先根据所述检测图片和质控图片，再次判断，以保证受试者是在样本抗体无明显损害情况下进行的效价检测。

如判定受试者是在样本抗体无明显损害情况下进行的效价检测，则进行下一步的能力验证；如判定受试者不是在样本抗体无明显损害情况下进行的效价检测，则提供另一份的抗体样本、质控品、说明书给受试者。

5、评估者根据受试者的效价检测值，结合所述抗体样本的标准效价，受试者效价检测使用的试剂的种类和方法的类型，综合判断受试者的血型抗体效价检测能力。

其中，IgG抗体样本的标准效价，评估者可以通过与国际标准品的精确比对获得；质控品优选为凝集强度为2+左右(1+～3+)的质控IgG抗体，质控图片为质控IgG抗体100％-60％浓度下和相应红细胞反应的图片，原因是该凝集强度下获得的与红细胞的检测图片能更容易的与质控图片进行比对，以准确辨识抗体是否受到损害；所述受试者可以是单位或个人；双方交付的方式可以是邮寄、快递、当面交付等；在对受试者的血型抗体效价检测能力综合评估后，还可以对不同受试者的血型抗体效价检测能力进行比较，或对同一受试者多次的血型抗体效价检测能力进行比较。

实施例3

一种血型抗体效价检测能力验证试剂盒，包含：

抗体样本：所述抗体样本的标准效价对于试剂盒提供者来说是已知的；

质控品：所述质控品包含凝集强度为2+左右(1+～3+)的质控IgG抗体，以及该质控IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片；

说明书：所述说明书记载了所述质控品的操作方法。所述质控品的操作方法也就是将质控IgG抗体与相应红细胞反应的操作方法，该操作方法具有特定的操作步骤和参数，该操作步骤和参数与试剂盒提供者得出质控图片所采取的步骤和参数一致。

实施例4

请参见图5，图5是本发明的血型抗体效价检测能力验证系统的结构示意图。所述的血型抗体效价检测能力验证系统包括：

血型抗体效价检测能力验证试剂盒：所述的血型抗体效价检测能力验证试剂盒如实施例3所述，其还可进一步包含抗体效价检测的试剂，尤其是用于质控品中质控IgG抗体和红细胞反应的试剂，且该试剂与获得质控图片所用的试剂种类和浓度等保持一致。

评估端和受试端：所述的评估端对受试端的血型抗体效价检测能力进行验证；

验证平台；所述的验证平台包括：

试剂盒发放记录模块：用于在评估端向受试端交付血型抗体效价检测能力验证试剂盒后，记录试剂盒发放状态，如“已交付”、“未交付”，还可记录交付日期、交付方式、发放次数等；

质控记录模块：用于上传和储存受试者的质控IgG抗体和红细胞反应获得的检测图片；

质控结果反馈模块：包含质控IgG抗体和红细胞反应的标准图片，用于将标准图片和质控记录模块中的检测图片进行比对，得出比对结果，结果可以为“合格”或“不合格”；

检测结果记录模块：用于上传和储存受试者的抗体样本的效价检测材料、方法和结果；

检测结果分析模块：用于评估端根据检测结果记录模块的材料、方法和结果，结合抗体样本的标准效价，综合评估受试者的血型抗体效价检测能力，例如可根据公式对血型抗体效价检测能力进行打分。

检测结果反馈模块：用于评估端将血型抗体效价检测能力的结果反馈给受试者，还可记录和传送评估端给予受试端的指导建议。

所述的验证平台还可进一步包括统计比较模块，用于评估端根据不同受试者的血型抗体效价检测能力对不同受试者的血型抗体效价检测能力进行排序，或用于评估端对同一受试者的多次血型抗体效价检测能力进行比较。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种血型抗体效价检测能力验证方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)评估者将抗体样本、质控品、说明书交付给受试者；所述抗体样本为IgG抗体样本，且其标准效价对于评估者来说是已知的；所述质控品包括凝集强度为1+～3+的质控IgG抗体，以及所述质控IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片；所述说明书记载了将质控IgG抗体与相应红细胞反应的操作方法；

b)受试者接收抗体样本、质控品、说明书，按照所述操作方法将质控IgG抗体与相应红细胞反应获得检测图片，并与质控图片比对以排除抗体样本在运输中受到明显损害的情形；

c)受试者以标准抗球蛋白法检测抗体样本的效价，将使用的材料、方法和结果交付给评估者；

d)评估者根据受试者交付的材料、方法和结果，将受试者检测抗体样本效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，综合判断，得到受试者的血型抗体效价检测能力。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)所述的材料包含试剂的购买厂商。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)所述的标准抗球蛋白法为标准手工试管抗球蛋白法或柱凝集法。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)所述的结果包括受试者检测得到的抗体样本的效价，还包括所述检测图片。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤c)和步骤d)之间还包括步骤：评估者将所述检测图片与标准图片比对，以再次排除抗体样本在运输中受到明显损害的情形。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述操作方法与评估者将质控IgG抗体与相应红细胞反应以获得质控图片的方法相同。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d)之后还包括步骤：评估者将同一受试者多次的血型抗体效价检测能力进行比较；或还包括步骤：评估者将不同受试者的血型抗体效价检测能力进行比较。

8.一种血型抗体效价检测能力验证试剂盒，其特征在于，包含：

抗体样本：所述抗体样本为IgG抗体，其标准效价对于试剂盒提供者来说是已知的；

质控品：所述质控品包含凝集强度为1+～3+的质控IgG抗体，以及所述质控IgG抗体100％～60％浓度下和相应红细胞反应的质控图片；

说明书：所述说明书记载了将质控IgG抗体与相应红细胞反应的操作方法。

9.一种血型抗体效价检测能力验证系统，其特征在于，包括：

如权利要求8所述的血型抗体效价检测能力验证试剂盒；

评估端和受试端：所述的评估端对受试端的血型抗体效价检测能力进行验证；以及

验证平台；所述的验证平台包括：

试剂盒发放记录模块：用于记录评估端向受试端交付血型抗体效价检测能力验证试剂盒的状态；

质控记录模块：用于上传和储存受试者的质控IgG抗体和相应红细胞反应获得的检测图片；

质控结果反馈模块：包含质控IgG抗体和相应红细胞反应的标准图片，并用于将标准图片和质控记录模块中的检测图片进行比对，得出比对结果；

检测结果记录模块：用于上传和储存受试者检测IgG抗体样本的效价的材料、方法和结果；

检测结果分析模块：用于评估端根据检测结果记录模块的材料、方法和结果，将受试者检测抗体样本效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，综合判断受试者的血型抗体效价检测能力；

检测结果反馈模块：用于评估端将血型抗体效价检测能力的结果反馈给受试者。

10.根据权利要求9所述的血型抗体效价检测能力验证系统，其特征在于，所述的血型抗体效价检测能力验证系统还包括统计比较模块，用于比较同一受试者多次的血型抗体效价检测能力，或不同受试者的血型抗体效价检测能力。