CN109234368A - 一种针对乙型肝炎病毒ymdd基序区耐药突变的方法 - Google Patents

一种针对乙型肝炎病毒ymdd基序区耐药突变的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法，属于分子生物学技术领域。具体是运用RNase H2和Taq DNA聚合酶双相酶系统，针对HBVYMDD耐药基因突变rtM204I/V(C区)±rtL180M(B区)设计型特异引物及探针，实现乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变检测。本发明提供的方法敏感度高，检测快速，稳定性好，封闭式检测，减少了后期污染的可能性。

Description

一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，属于体外诊断试剂领域耐药突变检测方法，具体涉及一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法。
背景技术
目前治疗慢性乙肝主要用干扰素或核苷类似物，如拉米夫定、阿德福韦、更昔洛韦等，干扰HBV复制来达到治疗的目的。拉米夫定(Lamivudine)，中文名贺普汀，是口服胞核嘧啶核苷类似物，由葛兰素史克公司在1992年研发成功并生产，1998年进入中国并被批准用于临床，拉米夫定服用方便、不良反应少，易为患者接受，是目前公认的最有效而安全的抑制病毒复制的核苷类似药物，该药的出现使抗HBV治疗发生了质的飞跃，使不适宜用α-干扰素治疗或治疗无应答病人有了新的治疗选择。
HBV基因组复制要通过逆转录机制才能进行，首先形成RNA复制中间体，而RNA复制中间体的形成需要逆转录酶的作用才得以进行，但该酶缺乏校对功能，逆转录过程中容易发生错配导致基因突变，在HBV基因组中逆转录聚合酶的催化结合部位有一个高度保守的YMDD基序，即酪氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸，拉米夫定能够与其特异性结合，通过抑制前基因组RNA逆转录为负链DNA及终止DNA链延伸而有效地抑制HBV DNA复制。
YMDD基序是聚合酶活性所必需的，是HBV逆转录酶的高保守区，变异后的HBV对拉米夫定的敏感性下降，从而导致治疗失败，甚至导致病情恶化。如果耐药突变发生后继续用药，不仅增加病人不必要的经济负担和造成社会资源的浪费，还可能存在严重的流行病学危害。临床上检测YMDD基序变异对调整治疗方案、合理用药及提高疗效具有重要的指导意义。
近年来报道了拉米夫定治疗乙肝过程中产生的耐药突变主要集中在552位氨基酸的YMDD→YIDD/YVDD，即在HBVYMDD基序区发生碱基替代G743T或A741G，即Atg→Att/Gtg，有趣的是有些耐药突变中除了这些碱基突变还常伴有其他碱基突变，如M552V突变总伴随着P基因B区的L528M突变，两种突变同时存在可能与M552V和M552I耐药性强弱有关。体外实验表明各种突变耐药的强弱顺序为：M552I＞L528M+M552V＞M552V＞L528M，目前有人建议将这些突变分为Ⅰ组(M552V/L528M)和Ⅱ组(M552I)。
按照新的命名法，拉米夫定相关的HBV耐药株的变异位置和类型为rtM204I/V(C区)±rtL180M(B区)，体外实验表明，rtL180M不仅能恢复C区突变株(rtM204I/V)的复制能力，而且能够增加对核苷类似物药物的耐受程度。提示两种突变联合出现比单一形式的突变可能更增加病毒的耐药性。
目前耐药突变的检测方法主要有以下几种：质谱分析，荧光偏振，PCR-肽核酸，限制性片段长度多态方法RFLP，线性探针分析法LiPA，荧光定量PCR熔解曲线分析法，PCR反向点杂交法。质谱分析、荧光偏振对技术和设备要求很高或者操作繁琐，不利于广大基层医院开展应用。
荧光PCR的优点是反应灵敏、特异性高：具有模版序列特异的Taqman探针在引物特异的基础上进一步提高的PCR的专一性；每扩增一个特异产物只释放一个分子的荧光染料，仪器检测的是特异扩增的结果，非特异产物对检测信号没有影响，有效提高检测的专一性。有多种不同波长的荧光基团对可供选择，使得Taqman探针法可以实现在同一管内检测多重PCR，降低成本也提高效率和准确性避免了荧光染料对PCR反应的影响。
RNase H2是一种专一识别RNA-DNA杂合体的酶，并能特异识别单个RNA碱基与DNA模板互补的位点。本专利利用RNase H2和PCR技术相结合开发一种新型的乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变检测方法，目前暂未查询到将该方法运用到乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变检测中的相关技术。
发明内容
有鉴于此，本发明充分利用了Taqman探针技术的优点，结合RNase H2的特点，采用双酶系统针对HBV YMDD耐药基因突变rtM204I/V(C区)±rtL180M(B区)设计型特异探针，各探针标记不同的荧光染料，在不同波长检测，从而达到检测低耐药变异基因的目的，本发明提供的一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法可以更灵敏方便地对样本进行检测。
本发明提供了一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变检测的方法，包括以下步骤：
(1)样本提取：提取血清中的HBV DNA模板；
(2)PCR扩增检测：以步骤(1)提取的HBV DNA为模板，利用以下试剂盒进行PCR扩增：
所述试剂盒包括检测rtM204I突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2，检测rtM204V突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3，检测rtL180M突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；针对rtM204I/V突变位点对应的探针序列SEQ ID NO.6，针对rtL180M突变位点对应的探针序列SEQ ID NO.7，所述序列SEQID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；包括RNase H2和热启动Taq DNA聚合酶的酶混合液，所述RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:50～1:500权利要求3所述酶混合液，PCR缓冲液、dNTPs；以及PCR缓冲液、dNTPs；
(3)结果判定：根据各荧光通道的信号值来判断是否有扩增，有扩增就代表该荧光通道对应的检测位点为阳性，即有突变存在，没有扩增，就说明该通道对应的检测位点突变低于本试剂盒检测限。
优选的，所述试剂盒包括如下试剂：
(1)PCR反应预混液1：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.6、引物由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2混合而成；
(2)PCR反应预混液2：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.6、引物由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3混合而成；
(3)PCR反应预混液3：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.7、引物由SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5混合而成；
(4)酶混合液：主要成分由RNase H2和热启动Taq DNA聚合酶混合而成，所述RNaseH2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:50～1:500；
(5)阴性质控品：经过灭活处理的YMDD突变阴性的正常人血清；
(6)阳性质控品：经过灭活处理的YMDD rtM204I+rtL180M突变阳性的人血清；
其中，PCR扩增检测过程包括：将PCR反应预混液1、2和3分别和酶混合液按照36：0.5配成混合液后，加入到相应的反应孔中，然后加入提取的DNA模板后进行PCR扩增，并且做一个阴性对照孔和一个阳性对照孔；所述PCR扩增反应条件为：95℃预变性5分钟，然后95℃变性10秒，60℃退火延伸45秒，共35循环，收集荧光在退火延伸阶段。
更加优选的，所述酶混合液中，RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:250。
更加优选的，所述探针序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端标记有FAM荧光基团，3’端标记有淬灭基团BHQ1。
更加优选的，所述引物序列SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4的3'端连接有间隔臂。
更加优选的，所述试剂盒内试剂还包括DNA提取液。所述DNA提取液用于从乙型肝炎病毒血清样本进行DNA抽提，提取为常规的乙型肝炎病毒浓缩裂解方法。但DNA的提取方式并不局限于采用此DNA提取液，也可选择采用其他常规的DNA浓缩裂解试剂盒获取DNA作为模板。
本发明的有益效果是：本发明开发了一种新的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变检测的方法，运用了双相酶系统RNase H2和DNA聚合酶技术，由于采用的是双酶系统扩增法，在普通引物的基础上有所改变，即在引物的3'端用一个RNA碱基代替了DNA碱基使RNase H2能够发挥作用，设计了针对rtM204I/V突变位点、rtL180M突变位点的引物探针，采用荧光PCR，封闭式检测，减少了后期污染的可能性，另外，相比PCR反向点杂交法，检测时间能缩短一半，效率明显提高。
附图说明
图1所示为rtM204I突变位点阳性的扩增曲线；
图2所示为rtM204V突变位点阳性的扩增曲线；
图3所示为rtL180M突变位点阳性的扩增曲线；
图4所示为样本rtM204V突变、rtL180M突变为阳性的扩增曲线。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明提供的一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法予以进一步说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。
实施例一
本实施例设计了针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的引物探针，设计针对rtM204I突变位点的特异性引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，针对rtM204V突变位点的特异性引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3，及rtM204I/V突变位点对应的探针SEQ ID NO.6；针对rtL180M突变位点的特异性引物SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，及针对rtL180M突变位点对应的探针SEQ ID NO.7。具体序列如下：
5'-AGTCCGTTTCTCTTGGCTC-3，序列如SEQ ID NO.1所示；
5'-CCCCAAWACCACATCATCaAAATA-x，序列如SEQ ID NO.2所示；
5'-CCAAWACCACATCATCCAcATAAC-x，序列如SEQ ID NO.3所示；
5'-GGCCTCAGTCCGTTTCTCaTGG-x，序列如SEQ ID NO.4所示；
5'-AGCGGCATAAAGGGACTC-3'，序列如SEQ ID NO.5所示；
FAM-GGGAAAGCCCTACGAACCACTG-BHQ1，序列如SEQ ID NO.6所示；
FAM-TGCCATTTGTTCAGTGGTTCGYAGG-BHQ1，序列如SEQ ID NO.7所示。
上述引物与普通引物不同的是，本发明专利由于采用的是双酶系统扩增法，即RNase H2和Taq DNA聚合酶双酶系统，因此，在普通引物的基础上有所改变，即在引物的3'端一个RNA碱基代替了DNA碱基，这样RNase H2才能发挥作用。本发明专利经过对序列的分析和引物探针的优化设计，最终筛选出了本发明专利所示的一组能够对针对rtM204I突变位点、rtM204V突变位点、rtL180M突变位点的引物探针。为了保证检测系统的可靠性，本发明专利还引入了阳性及阴性质控品。
实施例二
本实施例制备了一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法。
试剂盒具体设计如下：
(1)DNA提取液，包括浓缩液和裂解缓冲液；
(2)PCR反应预混液1：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.6、引物由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2混合而成；其中，探针SEQ ID NO.6浓度为0.25μM，引物SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2浓度为0.25μM。
(3)PCR反应预混液2：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.6、引物由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3混合而成；其中，探针SEQ ID NO.6浓度为0.25μM，引物SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.3浓度为0.25μM。
(5)PCR反应预混液3：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.7、引物由SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5混合而成；其中，探针SEQ ID NO.7浓度为0.25μM，引物SEQ IDNO.4和SEQ ID NO.5浓度为0.25μM。
(6)酶混合液：主要成分由RNase H2和热启动Taq DNA聚合酶混合而成，所述RNaseH2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:250；所述Taq DNA聚合酶浓度为0.5U。
(7)阴性质控品：经过灭活处理的YMDD突变阴性的正常人血清；
(8)阳性质控品：经过灭活处理的YMDD rtM204I+rtL180M突变阳性的人血清。
由上述八种试剂按照不同规格包装成不同大小的试剂盒。
实施例三
本实施例采用实施例二制备得到的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法检测样本，具体检测步骤如下。
(1)提取HBV DNA模板：采用DNA提取液提取乙型肝炎病毒血清样本中的HBV DNA模板。
具体过程包括：向乙型肝炎病毒血清中加入浓缩液100μL，12000rpm离心10分钟；弃上清；加入25μL裂解缓冲液混匀，100℃10分钟裂解；最后12000rpm离心10分钟，上清即为所用的HBVDNA模板。
(2)PCR扩增检测：以步骤(1)提取的HBV DNA为模板，利用本发明提供的试剂盒进行相应的扩增检测。
将PCR反应预混液1、2和3分别和酶混合液按照36：0.5质量比配成混合液1、混合液2、混合液3后，将36μL混合液1、36μL混合液2、36μL混合液3加入到相应的反应孔中，然后分别加入提取的HBV DNA模板4μl，建立40μL PCR反应体系进行PCR反应，同时做一个阴性对照孔和一个阳性对照孔。PCR反应条件为95℃预变性5分钟，然后95℃变性10秒，60℃退火延伸45秒，共35循环，收集荧光在退火延伸阶段。
(3)结果判定：根据各荧光通道的信号值来判断是否有扩增，有扩增就代表该荧光通道对应的检测位点为阳性，即有突变存在，没有扩增，就说明该通道对应的检测位点突变低于本试剂盒检测限。
按上述方法测定的rtM204I突变位点阳性样本、rtM204V突变位点阳性样本、rtL180M突变位点阳性样本的扩增曲线分别如附图1～3所示。
将针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法用于某血清样本的检测，采用DNA提取液提取血清样本中的HBV DNA模板，按上述方法步骤进行检测，检测所得扩增曲线如附图4所示，图4显示该样本rtM204V突变为阳性，rtL180M突变为阳性，试剂盒检测结果与测序结果一致。
进一步的，选取一百例HBV患者的血清样本采用试剂盒进行乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变测试，将上述临床样本的试剂盒检测结果与测序结果对照，相符率达98.3％，临床样本验证结果良好。本发明提供的试剂盒及检测方法能够快速、准确的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变进行检测，且检测准确度和检测效率高，对于临床上乙肝患者实时调整治疗方案、合理用药及提高疗效具有重要的指导意义。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)样本提取：提取血清中的HBV DNA模板；
(2)PCR扩增检测：以步骤(1)提取的HBV DNA为模板，利用以下试剂盒进行PCR扩增：
所述试剂盒包括检测rtM204I突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2，检测rtM204V突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.1和SEQID NO.3，检测rtL180M突变位点的特异性引物序列SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；针对rtM204I/V突变位点对应的探针序列SEQ ID NO.6，针对rtL180M突变位点对应的探针序列SEQ ID NO.7，所述序列SEQ IDNO.6和SEQ ID NO.7的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；包括RNase H2和热启动Taq DNA聚合酶的酶混合液，所述RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:50～1:500权利要求3所述酶混合液，PCR缓冲液、dNTPs；以及PCR缓冲液、dNTPs；
(3)结果判定：根据各荧光通道的信号值来判断是否有扩增，有扩增就代表该荧光通道对应的检测位点为阳性，即有突变存在，没有扩增，就说明该通道对应的检测位点突变低于本试剂盒检测限。
2.如权利要求1所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法，其特征在于：所述试剂盒包括如下试剂：
(1)PCR反应预混液1：主要成分包括：PCR缓冲液、4种dNTPs、SEQ ID NO.6、由SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2混合而成的引物组；
(2)PCR反应预混液2：主要成分包括：PCR缓冲液、4种dNTPs、SEQ ID NO.6、由SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.3混合而成的引物组；
(3)PCR反应预混液3：主要成分有PCR缓冲液、4种dNTPs、探针SEQ ID NO.7、引物由SEQID NO.4和SEQ ID NO.5混合而成；
(4)酶混合液：主要成分包括：RNase H2和热启动Taq DNA聚合酶，所述RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:50～1:500；
(5)阴性质控品：为经过灭活处理的YMDD突变阴性的正常人血清；
(6)阳性质控品：为经过灭活处理的YMDD rtM204I+rtL180M突变阳性的人血清；
其中，PCR扩增检测过程包括：将PCR反应预混液1、2和3分别和酶混合液按照36：0.5配成混合液后，加入到相应的反应孔中，然后加入提取的DNA模板后进行PCR扩增，并且做一个阴性对照孔和一个阳性对照孔；所述PCR扩增反应条件为：95℃预变性5分钟，然后95℃变性10秒，60℃退火延伸45秒，共35循环，收集荧光在退火延伸阶段。
3.如权利要求2所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法，其特征在于：所述酶混合液中，RNase H2酶与Taq DNA聚合酶浓度比为1:250。
4.如权利要求2所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法，其特征在于：所述探针序列SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端标记有FAM荧光基团，3’端标记有淬灭基团BHQ1。
5.如权利要求2所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法，其特征在于：所述引物序列SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4的3'端连接有间隔臂。
6.如权利要求2所述的针对乙型肝炎病毒YMDD基序区耐药突变的方法，其特征在于：试剂盒内试剂还包括DNA提取液。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109161588A (zh) * 2018-09-29 2019-01-08 武汉千麦医学检验所有限公司 用于检测乙型肝炎病毒ymdd基序区耐药突变的引物组、探针、试剂盒以及检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1737164A (zh) * 2004-08-27 2006-02-22 上海复旦悦达生物技术有限公司 一种快速检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的方法
CN101928763A (zh) * 2009-06-26 2010-12-29 上海主健生物工程有限公司 乙肝拉米夫定用药疗效检测
CN108148915A (zh) * 2017-12-29 2018-06-12 星阵（广州）基因科技有限公司 用于检测老鼠肉的引物和探针、试剂盒及方法
CN108291253A (zh) * 2015-11-25 2018-07-17 综合基因技术公司 用于变体检测的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1737164A (zh) * 2004-08-27 2006-02-22 上海复旦悦达生物技术有限公司 一种快速检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的方法
CN101928763A (zh) * 2009-06-26 2010-12-29 上海主健生物工程有限公司 乙肝拉米夫定用药疗效检测
CN108291253A (zh) * 2015-11-25 2018-07-17 综合基因技术公司 用于变体检测的方法
CN108148915A (zh) * 2017-12-29 2018-06-12 星阵（广州）基因科技有限公司 用于检测老鼠肉的引物和探针、试剂盒及方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109161588A (zh) * 2018-09-29 2019-01-08 武汉千麦医学检验所有限公司 用于检测乙型肝炎病毒ymdd基序区耐药突变的引物组、探针、试剂盒以及检测方法

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