CN109232685B - 一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,属于植物提取领域,包括将山楂叶粗提液水沉除杂,采用大孔树脂吸附后用碱性有机溶剂洗脱。本发明能够提高山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷的纯度,具有工艺简单、生产成本低、污染小、适合工业化生产的优点。
Description
技术领域
本发明涉及中草药提取,尤其是一种山楂叶中有效成分的提取,属于植物提取领域。
背景技术
山楂叶富含黄酮类有效成分,对心脑血管疾病具有广泛而确切的治疗作用。山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷含量较高,牡荆素鼠李糖苷被证实具有药理活性,能够治疗心血管疾病,并能有很强的抑制人类乳癌细胞DNA的合成,具有抗氧化作用,是山楂叶提取物的专属性药理活性成分。中国药典2010年版一部中规定,将牡荆素鼠李糖苷作为山楂叶提取物的指纹图谱特征指标成分,规定山楂叶总黄酮提取物中的牡荆素鼠李糖苷需达到8.8%以上。
在对山楂叶提取的过程中发现山楂叶提取物中组分复杂,包含芦丁、山萘酚、槲皮素、金丝桃苷、牡荆素鼠李糖苷等多种黄酮类,此外还含有有机酸类成分及未知杂质,这些成分中与牡荆素鼠李糖苷极性相近的成分很多,且牡荆素鼠李糖苷属极性较大的成分,无论是对其分离或富集均存在很大困难,目前市售山楂叶提取物中的牡荆素鼠李糖苷均低于20%。
专利文献CN03102024.0记载了一种用于治疗心血管疾病的山楂叶注射剂,其中公开了牡荆素鼠李糖苷的含量为30~50%的山楂叶提取物,其制备方法为:山楂叶用乙醇提取,经大孔吸附树脂处理,再用醋酸乙酯萃取,余液经正丁醇萃取,正丁醇液回收溶剂后干燥而成。该制备方法复杂,需要同时使用大量的醋酸乙酯和正丁醇,成本高,不适合工业化生产。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,能够提高山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷的纯度,具有工艺简单、生产成本低、污染小、适合工业化生产的优点。
为解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案是:
一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,包括将山楂叶粗提液水沉除杂,采用大孔树脂吸附后用碱性有机溶剂洗脱。
本发明技术方案的进一步改进在于包括如下步骤:
A.山楂叶经干燥、粉碎,加入提取溶剂浸提,得到山楂叶粗提液;
B.将山楂叶粗提液浓缩,得到浓缩液,向浓缩液中加入纯净水,搅拌、离心后得到上清液;
C.上清液经过大孔树脂吸附后,用碱性有机溶剂洗脱,得到洗脱液;
D.将洗脱液调节pH至4~6,除去有机溶剂,得到不含有机溶剂的洗脱液;
E.将不含有机溶剂的洗脱液经过聚酰胺柱,有机溶剂洗脱后,浓缩、干燥后得到富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物。
本发明技术方案的进一步改进在于:步骤A中提取溶剂为乙醇、甲醇或异丙醇中的任一种,提取溶剂的质量百分数为40~70%。
本发明技术方案的进一步改进在于:步骤B中浓缩至无提取溶剂,纯净水的加入量为浓缩液体积的1~3倍。
本发明技术方案的进一步改进在于:步骤B中离心前先静置,离心转速为2000~4000r/min,离心时间为10~20min。
本发明技术方案的进一步改进在于:步骤C中大孔树脂的型号为D101、LX158、HPD100或HZ841中的任一种。
本发明技术方案的进一步改进在于:步骤C中用碱性有机溶剂洗脱前,先用纯净水洗脱,再用10~20%的乙醇溶液洗脱,碱性有机溶剂为含碱性溶液的有机溶剂,碱性溶液为碳酸氢钠溶液、碳酸氢钾溶液或氢氧化钙溶液中的任一种,有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇中的任一种或几种的组合,有机溶剂的质量百分数为50~70%。
本发明技术方案的进一步改进在于:碱性有机溶剂中碱性溶液的浓度为5~20g/L。
本发明技术方案的进一步改进在于:步骤E中有机溶剂洗脱前,先用水洗,有机溶剂为乙醇或甲醇,有机溶剂质量百分数为20~40%。
由于采用了上述技术方案,本发明取得的技术进步是:
本发明提供的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,能够提高山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷的纯度,具有工艺简单、生产成本低、污染小、适合工业化生产的优点。
本发明采用40~70%的乙醇、甲醇或异丙醇进行提取,试验发现,牡荆素鼠李糖苷的水溶性和醇溶性均较好,采用乙醇、甲醇或异丙醇提取时,不但能够将牡荆素鼠李糖苷全部提取出来,同时也能够将黄酮类物质提取出来,使得山楂叶提取物中总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量均较高,能够满足药典要求。
本发明在有机溶剂提取后采用了加水沉淀的方法去除杂质,提取时采用的是乙醇等醇类有机溶剂,在提取黄酮类目标成分的同时,还会同时提取出一些醇溶性的杂质,提取后加水,粗提液中的醇溶性杂质在水中的溶解性小,就会沉淀出来,而牡荆素鼠李糖苷等目标成分在水中的溶解度很好,不会沉淀出来,这样就将牡荆素鼠李糖苷和不溶于水的杂质分离开来。当纯净水的加入量为浓缩液体积的1~3倍时,可将粗提液中的大部分醇溶性杂质除去,得到的粗提液澄清,在达到除杂目的的同时使用的水量最小,减少了后续的废水处理量。经过此步除杂,为后续提高山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷纯度打下了良好的基础,后续大孔树脂吸附纯化过程相对来说就比较容易,杂质的减少可以防止堵塞大孔树脂孔径,提高大孔树脂的回收利用率和使用寿命。
本发明采用大孔树脂对山楂叶粗提液进行纯化,牡荆素鼠李糖苷的极性较大,当采用型号为D101、LX158、HPD100或HZ841的大孔树脂时,树脂对牡荆素鼠李糖苷等黄酮类组分与其它极性较小的杂质的吸附能力相差较大,通过梯度洗脱,可以实现各成分按照极性大小初步分离的目的,从而提高了山楂叶提取物中总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量。
本发明在大孔树脂吸附后选用碱性有机溶剂洗脱,碱性溶液为碳酸氢钠溶液、碳酸氢钾溶液或氢氧化钙溶液中的任一种,因牡荆素鼠李糖苷同时含有7,4’两个羟基,属于酸性相对较强的黄酮,可与碳酸氢钠或碳酸氢钾成盐,成盐后极性增加。采用大孔吸附树脂处理,先用水洗除杂质、再用低浓度10~20%的乙醇洗脱除杂质,最后用50~70%的醇类溶剂加入碳酸氢钠、碳酸氢钾或氢氧化钙,制成碱性有机溶剂洗脱,牡荆素鼠李糖苷可与碳酸氢钠或碳酸氢钾成盐,极性变大,可被洗脱,而与牡荆素鼠李糖苷极性相近、无法成盐的杂质仍保留于大孔树脂柱中,当碱性有机溶剂中碱性溶液的浓度为5~20g/L时,牡荆素鼠李糖苷与杂质可以达到很好的分离,实现了牡荆素鼠李糖苷高浓度的富集。牡荆素鼠李糖苷含有9个羟基,极性较大,易溶于水及含水比例较大的醇溶液,所以当醇浓度低于30%时,会析出大量的牡荆素鼠李糖苷。但是,其他黄酮类单体,如山奈酚等极性较小,易溶于含水比例较小的醇溶液。试验发现,当有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇中的任一种或几种的组合,有机溶剂的质量百分数为50~70%时,对总黄酮及其中的单体牡荆素鼠李糖苷的洗脱能力最强。该方法洗脱效果好,得到的产品总黄酮含量达80%以上,牡荆素鼠李糖苷含量可达66%以上,远远高出现有产品中牡荆素鼠李糖苷的含量。
本发明在大孔树脂吸附洗脱后将洗脱液调节pH至4~6,此时可将洗脱液中全部的碱性物质碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钙转化为盐类,防止后续分离时碱性物质进入聚酰胺柱,进而影响聚酰胺柱的分离性能,而碱性物质转化为盐类后上柱,通过水洗即可以很容易将盐类洗脱下来,这样就将大孔树脂洗脱时引入的碱性物质除去,保证了后续的纯化效果。
本发明在聚酰胺柱吸附后,采用乙醇或甲醇洗脱,经过前面的除杂步骤,在上聚酰胺柱前产品中的总黄酮和牡荆素鼠李糖苷含量已经比较高,当洗脱溶剂中乙醇或甲醇质量百分数为20~40%时,其极性与牡荆素鼠李糖苷极性相似,能够将聚酰胺柱上的牡荆素鼠李糖苷全部洗脱下来,进一步将牡荆素鼠李糖苷和杂质分离,达到提高产品中牡荆素鼠李糖苷含量的目的。
具体实施方式
下面是本发明的一些具体实施方式,用以作进一步详细说明。
一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,包括将山楂叶粗提液水沉除杂,采用大孔树脂吸附后用碱性有机溶剂洗脱。
制备方法包括如下步骤:
A.山楂叶经干燥、粉碎,加入质量百分数为40~70%的乙醇、甲醇或异丙醇进行浸提,得到山楂叶粗提液;
B.将山楂叶粗提液减压浓缩,浓缩至无溶剂后得到浓缩液,向浓缩液中加入浓缩液体积的1~3倍的纯净水,搅拌后静置、离心,离心转速为2000~4000r/min,离心时间为10~20min,得到上清液;
C.上清液经过大孔树脂吸附后,先用纯净水洗脱,再用10~20%的乙醇溶液洗脱除去杂质,最后用碱性有机溶剂洗脱,碱性有机溶剂洗脱得到洗脱液;
大孔树脂的型号为D101、LX158、HPD100或HZ841中的任一种;
碱性有机溶剂为含碱性溶液的有机溶剂,碱性溶液为碳酸氢钠溶液、碳酸氢钾溶液或氢氧化钙溶液中的任一种,碱性有机溶剂中碱性溶液的浓度为5~20g/L;有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇中的任一种或几种的组合,有机溶剂的质量百分数为50~70%;
D.将洗脱液调节pH至4~6,除去有机溶剂,得到不含有机溶剂的洗脱液;
E.将不含有机溶剂的洗脱液经过聚酰胺柱,先用水洗,再用质量百分数为20~40%的乙醇或甲醇洗脱,洗脱液经浓缩、干燥后得到富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物。
富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物经紫外分光光度计检测总黄酮含量≥80%,高效液相色谱仪检测牡荆素鼠李糖苷含量为60~80%。
本发明制备的富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物中的总黄酮含量和牡荆素鼠李糖苷含量的检测方法按照《国际商务标准植物提取物山楂叶提取物》进行。
实施例1
一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,包括将山楂叶粗提液水沉除杂,采用大孔树脂吸附后用碱性有机溶剂洗脱。
制备方法包括如下步骤:
A.山楂叶经干燥、粉碎,加入质量百分数为50%的乙醇、甲醇或异丙醇进行浸提,得到山楂叶粗提液;
B.将山楂叶粗提液减压浓缩,浓缩至无溶剂后得到浓缩液,向浓缩液中加入浓缩液体积3倍的纯净水,搅拌后静置、离心,离心转速为2000r/min,离心时间为10min,得到上清液;
C.上清液经HPD100大孔树脂吸附后,先用纯净水洗脱,再用20%的乙醇溶液洗脱除去杂质,最后用含有10g/L碳酸氢钠的70%乙醇水溶液洗脱,得到洗脱液;
D.将洗脱液调节pH至4.5,除去有机溶剂,得到不含有机溶剂的洗脱液;
E.将不含有机溶剂的洗脱液经过聚酰胺柱,先用水洗,再用40%的乙醇洗脱,洗脱液经浓缩、干燥后得到富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物。
富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物经紫外分光光度计检测总黄酮含量≥93.27%,高效液相检测牡荆素鼠李糖苷含量为74.9%。
实施例2~4
实施例2~4与实施例1中的生产工艺步骤相同,所不同的是工艺参数的选择,如下面表1中所示,其中“纯净水的加入量”为纯净水的加入量是浓缩液的多少倍。
实施例5~7
实施例5~7为对比实施例,工艺步骤及工艺参数的选择与实施例1不同,如下面表1中所示,其中“——”表示无此步骤或参数,如实施例5、6中无水沉除杂的步骤。
表1
根据表1中结果可以看出,本发明实施例1~4中制备的富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物中总黄酮含量平均为85.11%,牡荆素鼠李糖苷含量平均为70.13%,而对比实施例(实施例5~7)制备的富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物中总黄酮含量平均为77.54%,牡荆素鼠李糖苷含量平均为63.57。采用本发明的制备方法得到的产品总黄酮含量≥80%,牡荆素鼠李糖苷含量≥60%,而2010版中国药典中规定总黄酮含量≥80%,牡荆素鼠李糖苷含量≥8.8%,本发明制备得到的产品远远高于中国药典的要求。
为了更好地验证本发明的优越性,发明人进行了稳定性试验。
将实施例1~7中所得的山楂叶提取物在常温下放置72h,检测总黄酮含量及牡荆素鼠李糖苷含量,结果如下表2所示。
表2
根据表2中结果可以看出,本发明实施例1~4中制备的富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物稳定性较高,常温放置72h后总黄酮含量损失平均为0.36%,牡荆素鼠李糖苷的含量损失平均为0.78%,而对比实施例(实施例5~7)中总黄酮的含量损失平均为1.53%,牡荆素鼠李糖苷的含量损失平均为2.05%,由此可见本发明制备得到的富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物稳定性更好。
Claims (7)
1.一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
A.山楂叶经干燥、粉碎,加入提取溶剂浸提,得到山楂叶粗提液;
B.将山楂叶粗提液浓缩,得到浓缩液,向浓缩液中加入纯净水,搅拌、离心后得到上清液;
C.上清液经过大孔树脂吸附后,用碱性有机溶剂洗脱,得到洗脱液;
D.将洗脱液调节pH至4~6,除去有机溶剂,得到不含有机溶剂的洗脱液;
E.将不含有机溶剂的洗脱液经过聚酰胺柱,有机溶剂洗脱后,浓缩、干燥后得到富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物;
步骤C中用碱性有机溶剂洗脱前,先用纯净水洗脱,再用10~20%的乙醇溶液洗脱,碱性有机溶剂为含碱性溶液的有机溶剂,碱性溶液为碳酸氢钠溶液、碳酸氢钾溶液或氢氧化钙溶液中的任一种,有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇中的任一种或几种的组合,有机溶剂的质量百分数为50~70%。
2.根据权利要求1所述的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:步骤A中提取溶剂为乙醇、甲醇或异丙醇中的任一种,提取溶剂的质量百分数为40~70%。
3.根据权利要求1所述的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:步骤B中浓缩至无提取溶剂,纯净水的加入量为浓缩液体积的1~3倍。
4.根据权利要求1所述的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:步骤B中离心前先静置,离心转速为2000~4000r/min,离心时间为10~20min。
5.根据权利要求1所述的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:步骤C中大孔树脂的型号为D101、LX158、HPD100或HZ841中的任一种。
6.根据权利要求1所述的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:碱性有机溶剂中碱性溶液的浓度为5~20g/L。
7.根据权利要求1所述的一种富含牡荆素鼠李糖苷的山楂叶提取物的制备方法,其特征在于:步骤E中有机溶剂洗脱前,先用水洗,有机溶剂为乙醇或甲醇,有机溶剂质量百分数为20~40%。
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GR01 | Patent grant | ||
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