CN109223865A - 一种桑叶生物碱的制备方法及制备得到的桑叶生物碱的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种桑叶生物碱的制备方法及制备得到的桑叶生物碱的应用，涉及生物碱的提取技术领域。本发明所述制备方法，包括以下步骤：1)将桑叶与乙醇水溶液按照1g：(15～26)mL的料液比混合，得混合料；2)将步骤1)得到的所述混合料经超声波后过滤，得滤液；所述超声波的功率为720～900W；3)将步骤2)得到的所述滤液浓缩，得浓缩液；4)将步骤3)得到的所述浓缩液过柱纯化，得桑叶生物碱。利用本发明所述方法制备得到的桑叶生物碱纯度在60％以上，可应用于制备治疗肝功能损伤药物、改善肝脏组织炎症反应药物中以及抑制肝脏细胞凋亡药物中。

Description

一种桑叶生物碱的制备方法及制备得到的桑叶生物碱的应用

技术领域

本发明属于生物碱的提取技术领域，具体涉及一种桑叶生物碱的制备方法及制备的桑叶生物碱的应用。

背景技术

随着我国经济的发展，居民膳食中脂肪和胆固醇的摄入量增加，脂肪供能比不断升高，高脂饮食成为日常饮食。长期高脂饮食除了会导致高血脂外，还会导致脂肪在肝脏中聚集，肝脏细胞变性，形成非酒精性肝损伤，过量脂肪堆积可发展为脂肪肝，从而引起肝损伤。国内外医院统计数据显示，肝损伤患者数量呈逐年上升的趋势。针对这一趋势，市场上出现了许多保肝护肝的药品和保健食品，这些化合性或生物性的保肝药物中有上千种具有潜在的、导致肝损伤的可能性。有资料证实，多数肝损伤都伴有炎症反应，肝脏炎症几乎存在于所有原因导致的肝脏疾病。

古代药典中记载，桑叶性寒、归肺、肝经，味苦、甘，具有益血凉血、滋阴止咳、疏散风热、清肺润燥、平抑肝阳、清肝明目、益肝通气的功效，但现代医学对其是否具有保护肝脏的作用报道极少。现代研究证明，桑叶中含有生物碱、黄酮、多糖等生物活性物质，具有降血糖、降血脂、消炎抑菌、抗病毒等多种功能。桑叶生物活性物质中最具代表性是1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin)，是一种天然的α-葡萄糖苷酶抑制剂，DNJ具有对α-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶的活性具有较强抑制作用。

目前中药生物碱的提取工艺已较成熟，根据生物碱的理化特性，采用适宜的溶剂如水、酸水、酸醇及碱醇等，利用浸渍、渗漉、煎煮和酶解等技术将生物碱类成分提取出来，但由于生物碱在中药中的相对含量较低，所以需要多步反应，且需要大量的有机溶剂，最终得到的生物碱纯度低，还有可能受有机溶剂二次污染。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种桑叶生物碱的制备方法及制备得到的桑叶生物碱的应用，提取纯化方法简单，提取效率高，纯度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种桑叶生物碱的制备方法，包括以下步骤：1)将桑叶与乙醇水溶液按照1g：(15～26)mL的料液比混合，得混合料；

2)将步骤1)得到的所述混合料经超声波后过滤，得滤液；所述超声波的功率为720～900W；

3)将步骤2)得到的所述滤液浓缩，得浓缩液；

4)将步骤3)得到的所述浓缩液过柱纯化，得桑叶生物碱；所述过柱纯化用柱包括732型阳离子交换树脂和D101型大孔吸附树脂。

优选的，步骤1)所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为55～68％。

优选的，步骤2)所述超声的时间为8～15min。

优选的，步骤2)所述过滤为真空抽滤，所述过滤的次数为2～4次，将每次过滤的滤液合并。

优选的于，步骤3)所述浓缩的浓缩比为(1～3.5)：1。

优选的，步骤4)所述过柱纯化的方法，包括以下步骤：A.将浓缩液过所述D101大孔吸附树脂柱进行纯化，收集流出液；

B.将步骤A.得到的所述流出液与无水乙醇按照1：(3～5.5)的体积比混合，过滤得上清液，去除乙醇，得无乙醇上清液；

C.将步骤B.得到的所述无乙醇上清液置于732阳离子交换树脂柱内，先用蒸馏水洗至中性，再用(0.3～1)mol/L的氨水溶液洗脱，当流出液呈碱性时进行收集流出液，得洗脱液；

D.将步骤C.得到的所述洗脱液进行浓缩，得桑叶生物碱。

优选的，步骤D所述浓缩的浓缩比为(20～40)：1

本发明还提供了上述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备治疗肝功能损伤药物中的应用。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备改善肝脏组织炎症反应药物中的应用。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备抑制肝脏细胞凋亡药物中的应用。

本发明提供了一种桑叶生物碱的制备方法，利用桑叶超声波提取、浓缩和过柱纯化，从而得到纯度在60％以上的桑叶生物碱，该桑叶生物碱可通过调控炎症因子基因TNF-αmRNA、IL-10mRNA表达来改善肝脏炎症浸润，通过下调Bax蛋白表达，上调Bcl-2蛋白表达，调控Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达，发挥抑制细胞凋亡的作用，从蛋白水平和转录水平上减少机体脂肪的聚积、炎症的浸润和细胞凋亡的发生，降低体重、肝脏系数，从而达到改善肝损伤的目的。

附图说明

图1为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清AST的影响图；

图2为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清ALT活力的影响图；

图3为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清ALP活力的影响图；

图4为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清TBIL含量的影响图；

图5为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清DBIL含量的影响图；

图6为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清TP含量的影响图；

图7为制备得到的桑叶生物碱对小鼠血清ALB含量的影响图；

图8为制备得到的桑叶生物碱对对小鼠肝脏TNF-α含量的影响图；

图9为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝脏IL-10含量的影响图；

图10为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝脏TNF-αmRNA含量的影响图；

图11为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝脏IL-10mRNA含量的影响图；

图12为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝细胞凋亡百分比的影响图；

图13为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝细胞Bax蛋白表达量的影响图；

图14为制备得到的桑叶生物碱对对小鼠肝细胞Bcl-2蛋白表达的影响图；

图15为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝细胞Bax mRNA表达量的影响图；

图16为制备得到的桑叶生物碱对小鼠肝细胞Bcl-2mRNA表达量的影响图。

具体实施方式

本发明提供了一种桑叶生物碱的制备方法，包括以下步骤：1)将桑叶与乙醇水溶液按照1g：(15～26)mL的料液比混合，得混合料；

2)将步骤1)得到的所述混合料经超声波后过滤，得滤液；所述超声波的功率为720～900W；

3)将步骤2)得到的所述滤液浓缩，得浓缩液；

4)将步骤3)得到的所述浓缩液过柱纯化，得桑叶生物碱；所述过柱纯化用柱包括732型阳离子交换树脂和D101型大孔吸附树脂。

在本发明所述桑叶生物碱的制备方法中，将桑叶与乙醇水溶液按照1g：(15～26)mL的料液比混合，得混合料。本发明所述桑叶优选干桑叶，所述桑叶的水分含量优选不超过10％。本发明所述桑叶优选为桑叶粉，所述桑叶粉的粒径优选为不超过200目。本发明所述桑叶与乙醇水溶液的料液比优选为1g：(16～25)mL，更优选为1g：(18～22)mL，最优选为1g：20mL。本发明对所述桑叶的来源及品种并没有特殊限定，利用本领域的常规桑叶即可。本发明所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数优选为55～68％，更优选为58～65％，最优选为60％。

得混合料后，本发明将得到的所述混合料经超声波后过滤，得滤液；所述超声波的功率为720～900W。本发明所述超声波的功率优选为750～880W，更优选为780～850W，最优选为800W。本发明所述超声波的时间优选为8～15min，更优选为9～12min，最优选为10min。本发明所述超声波处理可以利用超声波产生高速、强烈的空化效应和搅拌的作用，快速破坏植物的细胞，使溶剂能够渗透到药材细胞中，缩短提取时间，提高提取效率。本发明所述过滤优选为真空抽滤，所述真空抽滤时优选采用定性滤纸，所述定性滤纸的直径优选为9cm，设置中速。本发明所述过滤的次数优选为2～4次，更优选为3次。本发明将每次过滤得到的滤液合并，得滤液。本发明所述过滤可除去桑叶粉残渣得到更为澄清的滤液。

得滤液后，本发明将得到的所述滤液浓缩，得浓缩液。本发明所述浓缩优选为旋蒸浓缩，所述浓缩的温度优选为75～90℃，更优选为78～85℃，最优选为80℃。本发明所述浓缩时的旋转速率优选为80～120rpm，更优选为90～105rpm，最优选为100rpm。本发明所述浓缩的浓缩体积比优选为(1.5～4)：1，更优选为(1.8～2.5)：1，最优选为2:1。

得浓缩液后，本发明将得到的所述浓缩液过柱纯化，得桑叶生物碱。本发明所述过柱纯化用柱优选包括732型阳离子交换树脂和D101型大孔吸附树脂。本发明在所述过柱纯化前优选还包括纯化前树脂处理，所述732型阳离子交换树脂的纯化前树脂处理优选包括：用乙醇反复浸泡洗涤至洗出液澄清，无异味，然后分别用2mol/L HCl溶液浸泡4h，以超纯水洗至中性，再以2mol/LNaOH溶液浸泡4h，以超纯水洗至中性，最后以2mol/L HCl溶液浸泡4h，将其转化为H⁺型，以超纯水洗至中性备用。本发明所述D101型大孔吸附树脂的纯化前树脂处理优选包括：用乙醇反复浸泡洗涤至洗出液澄清，无异味，然后分别用2mol/L HCl溶液浸泡4h，以超纯水洗至中性，再以2mol/LNaOH溶液浸泡4h，以超纯水洗至中性，备用。本发明所述过柱纯化时优选采用湿法装柱。

本发明所述过柱纯化的步骤优选包括：

A.将浓缩液过所述D101大孔吸附树脂柱进行纯化，收集流出液；

B.将步骤A.得到的所述流出液与无水乙醇按照1：(3～5.5)的体积比混合，过滤得上清液，去除乙醇，得无乙醇上清液；

C.将步骤B.得到的所述无乙醇上清液置于732阳离子交换树脂柱内，先用蒸馏水洗至中性，再用(0.3～1)mol/L的氨水溶液洗脱，当流出液呈碱性时进行收集流出液，得洗脱液；

D.将步骤C.得到的所述洗脱液进行浓缩，得桑叶生物碱。

本发明在进行所述过柱纯化时，将浓缩液过所述D101大孔吸附树脂柱进行纯化，收集流出液。本发明对利用所述D101大孔吸附树脂柱进行纯化的方法并没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可。

得流出液后，本发明将所述流出液与无水乙醇按照1：(3～5.5)的体积比混合，过滤得上清液，去除乙醇，得无乙醇上清液。本发明所述流出液与无水乙醇的体积比优选为1：(3.4～5)，更优选为1：(3.8～4.5)，最优选为1:4。本发明所述混合的时间优选为10～14g，更优选为11～13h，最优选为12h。本发明所述混合的温度优选为0～8℃，更优选为2～5℃，最优选为4℃。本发明在所述混合过程中，多糖会发生沉淀，过滤得上清液。本发明所述过滤优选为离心后取上清液，所述离心的转速优选为3500～8000rpm，更优选为4000～6000rpm，最优选为5000rpm。本发明所述离心的时间优选为6～15min，更优选为8～12min，最优选为10min。本发明在过滤得上清液后去除所述上清液中的乙醇，所述去除优选采用旋蒸法。本发明所述去除时的旋蒸温度优选为60℃。本发明所述去除时的旋蒸速度优选为80～120rpm，更优选为90～110rpm，最优选为100rpm。本发明对所述旋蒸的时间并没有特殊限定，优选无乙醇气味即可。本发明所述D101大孔吸附树脂柱可以选择性地通过物理吸附水溶液中的有机物，可以吸附黄酮等物质，从而达到纯化的目的。

得无乙醇上清液后，本发明将所述无乙醇上清液置于732阳离子交换树脂柱内，先用蒸馏水洗至中性，再用氨水溶液洗脱，当流出液呈碱性时进行收集，得洗脱液。本发明所述氨水溶液的浓度优选为0.3～1mol/L，更优选为0.4～0.8mol/L，最优选为0.5mol/L。本发明所述洗脱的速度优选为1～3BV/h，更优选为1.5～2.6BV/h，最优选为2BV/h。本发明对所述碱性的pH值并没有特殊限定，只要利用pH试纸测定碱性即可。本发明在所述洗脱液收集后，优选还包括将所述洗脱液蒸发浓缩后干燥。本发明所述蒸发浓缩的体积比优选为(20～40)：1，更优选为(25～34)：1，最优选为30:1。本发明所述蒸发浓缩的温度优选为75～90℃，更优选为78～85℃，最优选为80℃。本发明对所述干燥的方式并没有特殊限定，优选为真空冷冻干燥。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备治疗肝功能损伤药物中的应用。在本发明实施例中，对小鼠灌胃桑叶生物碱提取物后，能够显著降低AST、ALT、ALP活力和TBil、DBil含量，升高TP、Alb含量，并随着灌胃时间的延长和剂量的增加，作用效果逐渐增加，对高脂诱导肝损伤保护作用也越好。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备改善肝脏组织炎症反应药物中的应用。在本发明实施例中，高剂量桑叶生物碱提取物可以有效抑制促炎基因TNF-α的表达，上调抑炎基因IL-10的表达。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备抑制肝脏细胞凋亡药物中的应用。在本发明实施例中，灌胃桑叶生物碱提取物后随着时间的延长和剂量的增加，通过降低肝细胞凋亡指数、下调Bax的蛋白表达，上调Bcl-2的蛋白表达，调控Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达水平，实现抑制肝脏细胞凋亡的作用，随着时间的延长，其作用效果越好。

下面结合实施例对本发明提供的桑叶生物碱的制备方法及制备得到的桑叶生物碱的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

称取桑叶粉，按照料液比1:20(g:mL)加入到60％乙醇水溶液中，置于超声频率为800W超声清洗机超声10min，采用真空抽滤(定性滤纸，中速，Φ9cm)过滤得滤液，重复提取3次合并滤液，80℃用旋转(转速为100rpm)蒸发浓缩至体积比为2:1备用。

将得到的浓缩液，先过D101大孔吸附树脂柱进行纯化，收集流出液备用。

流出液加入4倍体积的无水乙醇，于4℃过夜沉淀多糖。滤液于4℃、5000r/min离心10min，弃沉淀得上清液，上清液旋转蒸发(转速为100rpm)浓缩以除去乙醇至无味，进入下一步操作。

采用732阳离子交换树脂柱进一步纯化，先用蒸馏水洗至中性，再用0.5mol/L的氨水溶液洗脱，洗脱速度为2BV/h，当流出液呈碱性时(用pH试纸测)，进行收集，将洗脱液按30：1(V：V)在80℃下进行旋转(转速为100rpm)蒸发浓缩。将浓缩液分装于器皿中，于真空冷冻干燥备用。

利用实施例1制备得到的桑叶生物碱进行实验：

1、桑叶生物碱对小鼠肝功能指标的影响

400只昆明种小鼠适应性喂养7d后，随机分为正常组、高脂对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，共5组，每组80只。桑叶生物碱提取物低、中、高灌胃组灌胃剂量按DNJ含量为8.0、4.0和2.0mg/kg进行换算，分别稀释8倍、4倍、2倍进行灌胃，每天1次，灌胃量为0.1mL/10g·bw，连续灌胃4周、8周、12周、16周，测定小鼠肝功能生化指标(AST、ALT、AKP、TBIL、DBIL、TP、ALB)。具体测定数据如表1～7和图1～7所示：

表1.桑叶生物碱对小鼠血清AST活力的影响(单位：U/L)

注：同一列中上标字母不同，表示间具有显著性差异，P＜0.05，n＝10。文中其他表格上标字母意义与此相同。

表2.桑叶生物碱对小鼠血清AST活力的影响(单位：U/L)

表3.桑叶生物碱对小鼠血清ALP活力的影响(单位：U/L)

表4.桑叶生物碱对小鼠血清TBIL含量的影响(单位：μmol/L)

表5.桑叶生物碱对小鼠血清DBIL含量的影响(单位：μmol/L)

表6.桑叶生物碱对小鼠血清TP含量的影响(单位：g/L)

表7.桑叶生物碱对小鼠血清ALB含量的影响(单位：g/L)

根据表1～7的数据结果表明，高脂饮食会引起血清酶AST、ALT、ALP活力的显著升高，血清胆红素TBil、DBil含量的明显上升，血清蛋白TP、Alb含量显著下降。灌胃桑叶生物碱提取物后，能够显著降低AST、ALT、ALP活力和TBil、DBil含量，升高TP、Alb含量，并随着灌胃时间的延长和剂量的增加，作用效果逐渐增加，对高脂诱导肝损伤保护作用也越好。高剂量桑叶生物碱提取物灌胃16周时，作用效果最好，均能够使雌雄小鼠肝功能指标(AST、ALT、ALP、TBil、DBil、TP、Alb)恢复到正常组水平。

2、桑叶生物碱对小鼠肝脏促炎基因的表达的影响

400只昆明种小鼠适应性喂养7d后，随机分为正常组、高脂对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，共5组，每组80只。桑叶生物碱提取物低、中、高灌胃组灌胃剂量按DNJ含量为8.0、4.0和2.0mg/kg进行换算，分别稀释8倍、4倍、2倍进行灌胃，每天1次，灌胃量为0.1mL/10g·bw，连续灌胃4周、8周、12周、16周，检测小鼠肝匀浆中TNF-α和IL-10的含量及RT-qPCR测定肝脏组织中TNF-α和IL-10的mRNA的表达量，数据如表8～11和图8～11所示：

表8.桑叶生物碱对小鼠肝脏组织炎症因子TNF-α的影响(单位：ng/L)

表9.桑叶生物碱对肝脏组织炎症因子IL-10的影响(单位：pg/mL)

表10.桑叶生物碱对小鼠肝脏TNF-αmRNA表达的影响

表11.桑叶生物碱对小鼠肝脏组织IL-10表达的影响

由表8～11的数据结果表明，高脂饮食导致肝脏组织中TNF-α的含量明显增加，IL-10的含量明显减少。与高脂对照组相比，高剂量桑叶生物碱提取物有效降低肝脏组织中TNF-α的含量、升高IL-10的含量，当灌胃时间为16周时，作用效果最好，TNF-α和IL-10含量恢复到正常组水平。

通过测定小鼠肝脏中炎症因子相关基因的mRNA表达量发现，高剂量桑叶生物碱提取物可以有效抑制促炎基因TNF-α的表达，上调抑炎基因IL-10的表达，灌胃16周时，能够使雌雄小鼠的炎症基因表达接近正常组水平。

3、桑叶生物碱对小鼠肝脏细胞凋亡的影响

400只昆明种小鼠适应性喂养7d后，随机分为正常组、高脂对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，共5组，每组80只。桑叶生物碱提取物低、中、高灌胃组灌胃剂量按DNJ含量为8.0、4.0和2.0mg/kg进行换算，分别稀释8倍、4倍、2倍进行灌胃，每天1次，灌胃量为0.1mL/10g·bw，连续灌胃4周、8周、12周、16周，取小鼠肝脏石蜡切片，用免疫组化染色法检测肝脏细胞凋亡情况。数据结果如表12～16和图12～16所示：

表12.桑叶生物碱对小鼠肝细胞凋亡百分比的影响(单位：％)

表13.小鼠肝细胞Bax蛋白表达量

表14.小鼠肝细胞Bcl-2蛋白表达量

表15.小鼠肝细胞Bax mRNA表达

表16.小鼠肝细胞Bcl-2mRNA表达

由表12～16的数据结果表明，高脂饮食导致小鼠肝脏细胞凋亡随着时间的延长而逐渐加重。灌胃桑叶生物碱提取物后随着时间的延长和剂量的增加，通过降低肝细胞凋亡指数、下调Bax的蛋白表达，上调Bcl-2的蛋白表达，调控Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达水平，实现抑制肝脏细胞凋亡的作用，随着时间的延长，其作用效果越好，当高剂量桑叶生物碱提取物灌胃16周时，能够使小鼠肝细胞凋亡的情况接近正常组水平。

本发明提供了一种桑叶生物碱的制备方法及其应用，制备得到的桑叶生物碱纯度在60％以上，该桑叶生物碱可通过调控炎症因子基因TNF-αmRNA、IL-10mRNA表达来改善肝脏炎症浸润，通过下调Bax蛋白表达，上调Bcl-2蛋白表达，调控Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达，发挥抑制细胞凋亡的作用，从蛋白水平和转录水平上减少机体脂肪的聚积、炎症的浸润和细胞凋亡的发生，降低体重、肝脏系数，从而达到改善肝损伤的目的，可应用于制备治疗肝功能损伤药物、改善肝脏组织炎症反应药物中以及抑制肝脏细胞凋亡药物中。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种桑叶生物碱的制备方法，包括以下步骤：

1)将桑叶与乙醇水溶液按照1g：(15～26)mL的料液比混合，得混合料；

2)将步骤1)得到的所述混合料经超声波后过滤，得滤液；所述超声波的功率为720～900W；

3)将步骤2)得到的所述滤液浓缩，得浓缩液；

4)将步骤3)得到的所述浓缩液过柱纯化，得桑叶生物碱；所述过柱纯化用柱包括732型阳离子交换树脂和D101型大孔吸附树脂。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1)所述乙醇水溶液的体积浓度为55～68％。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)所述超声的时间为8～15min。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)所述过滤为真空抽滤，所述过滤的次数为2～4次，将每次过滤的滤液合并。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3)所述浓缩的浓缩比为(1～3.5)：1。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤4)所述过柱纯化的方法，包括以下步骤：

A.将浓缩液过所述D101大孔吸附树脂柱进行纯化，收集流出液；

B.将步骤A得到的所述流出液与无水乙醇按照1：(3～5.5)的体积比混合，过滤得上清液，去除乙醇，得无乙醇上清液；

C.将步骤B得到的所述无乙醇上清液置于732阳离子交换树脂柱内，用蒸馏水洗至中性，再用(0.3～1)mol/L的氨水溶液洗脱，当流出液呈碱性时进行收集流出液，得洗脱液；

D.将步骤C得到的所述洗脱液进行浓缩，得桑叶生物碱。

7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，步骤D所述浓缩的浓缩比为(20～40)：1。

8.权利要求1～7任意一项所述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备治疗肝功能损伤药物中的应用。

9.权利要求1～7任意一项所述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备改善肝脏组织炎症反应药物中的应用。

10.权利要求1～7任意一项所述制备方法制备得到的桑叶生物碱在制备抑制肝脏细胞凋亡药物中的应用。