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Abstract

本发明属生物技术领域，涉及新的预测MTX临床疗效和副作用的基因标志物，本发明通过研究TNIP1 SNP位点rs10036748基因型与MTX治疗银屑病临床疗效和肝功能损害/肝纤维化指标的异常的关系，提出TNIP1 SNP位点rs10036748 TT基因型作为预测MTX治疗银屑病的临床疗效和肝损害的基因标志物。本发明进一步提供了用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效及副作用的检测试剂盒；本发明可用于预测MTX治疗银屑病的临床疗效及副作用的评估，有助于指导临床医生制定适合的MTX治疗干预方案。为提高甲氨蝶呤的临床疗效和降低毒副作用提供了基础。

Description

一种用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病疗效和毒副作用的检测试 剂盒
技术领域
本发明属生物技术领域，涉及预测甲氨蝶呤(MTX)疗效和副作用的检测试剂盒，具体涉及一种新型的可用于预测甲氨蝶呤干预治疗银屑病临床疗效和毒副作用的检测试剂盒，该试剂盒通过检测银屑病患者易感基因TNIP1的SNP位点，预测MTX的临床干预疗效和毒副作用。
背景技术
现有技术公开了银屑病为常见的慢性炎症性疾病，可累及皮肤、指甲、关节、肾脏、心血管等多个脏器。由于该疾患发病率高、病程长、易复发、难根治，给患者带来严重的身心损害和经济负担。目前临床实践中常采用的药物干预中，如常使用的阿维A有效率只有20％左右，而且会引起血脂增高，增加患者心血管疾病的风险，且部分患者还会出现肝肾功能的损害；生物制剂的临床有效率虽然高在50％-80％左右，但由于价格昂贵，致使大多数患者无力承担；甲氨蝶呤(MTX)为目前较常采用的较经济、有效的治疗银屑病的药物，但由于其存在有骨髓抑制和肝纤维化影响的风险，严重限制了MTX在银屑病治疗中的广泛应用。因此，寻找一个生物标记预测MTX的临床疗效和毒副作用，有利于提高临床疗效和降低毒副作用，该课题成为越来越多的本领域科学家和医生关注的热点。
银屑病的病因及发病机制尚未完全阐明，经典的炎症信号核因子κB(nuclearfactor-kappa B,NF-κB)是介导银屑病炎症反应的主要信号通路。全基因组关联研究(genome-wide associationstudy,GWAS)已经鉴定出肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1(TNFα-induced protein3interacting protein1，TNIP1)为银屑病易感基因，因为在调控NF-κB信号方面的重要作用而备受关注。TNIP1是一种新发现的内源性炎症调控因子，不仅参与对炎症反应的调节，也参与对免疫功能的调节。目前已经有研究报道，TNIP1基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)与欧美及中国人群银屑病的发病相关。进行期银屑病患者皮损和外周血淋巴细胞中TNIP1蛋白下调，动物实验表明下调小鼠皮肤局部TNIP1蛋白水平，会加剧IMQ诱导的小鼠银屑病样皮炎表现，提示TNIP1的表达降低可能是造成银屑病炎症反应过程不能被有效抑制的一个重要原因。
MTX在1972年被FDA批准治疗银屑病，结构类似叶酸，与二氢叶酸还原酶不可逆地结合，发挥抗增殖活性，诱导凋亡和增加腺苷浓度，具有抗炎和免疫调节作用。既往的研究发现叶酸代谢通路相关的酶的基因多态性与MTX治疗类风湿性关节炎的临床疗效和毒副作用的相关：如MTHFR1298A＞C(rs1801131)，ATIC347C＞G(rs2372536)，RFC-180G＞A(rs1051266)，SLC19A1A＞G(rs2838956)and SLC19A1G＞A(rs7499)与MTX的临床疗效相关；而RFC-180G＞A(rs1051266)基因多态性与MTX的毒性相关。很少研究关注疾病易感基因位点与MTX临床疗效间和毒副作用间的关系。
发明内容
本发明的目的是基于现有技术的现状，提供新的预测MTX临床疗效和副作用的基因标志物，本发明通过研究TNIP1SNP位点rs10036748基因型与MTX治疗银屑病临床疗效和肝功能损害/肝纤维化指标的异常的关系，提出TNIP1SNP位点rs10036748TT基因型作为预测MTX治疗银屑病的临床疗效和肝损害的基因标志物。可以指导临床医生哪群患者更适合用MTX治疗，为提高MTX的临床疗效和降低毒副作用提供了基础。
本发明的进一步目的是提供用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效和副作用的检测试剂盒。本发明中，通过研究TNIP1SNP位点rs10036748基因型与MTX治疗银屑病临床疗效和肝功能损害/肝纤维化指标的异常的关系，以TNIP1SNP位点rs10036748TT基因型作为预测MTX治疗银屑病的临床疗效和肝损害的基因标志物的检测试剂盒。有助于指导临床医生制定适合的MTX治疗干预方案，为提高MTX的临床疗效和降低毒副作用提供了基础。
本发明实验显示，未经基因检测MTX治疗银屑病的临床疗效在47％，但针对携带TNIP1SNP位点rs10036748TT基因型的银屑病患者采用MTX治疗干预，有效率可提高到64％，但肝毒性的风险也由34％-37％增加到43％-45％，提示该类患者在使用MTX干预的过程中需要要密切监测肝功能或者配合保肝药同时服用，有助于提高MTX的临床疗效，降低肝毒性的风险。
本发明检测了90例银屑病患者TNIP1SNP位点rs10036748的基因型与MTX治疗银屑病临床疗效和毒副作用间的关系。结果显示：1.携带TNIP1易感基因TT基因型的患者在治疗第8周PASI50的改善率(76％)显著高于携带TC/TT基因型患者(43％/33％)，在治疗第12周PASI75改善率为64％；2.携带TNIP1易感基因TT基因型的患者用MTX治疗时发生肝功能异常或肝纤维化的风险分别为43％和45％，显著高于TC/CC基因型患者(22％和24％，17％和0)；3.银屑病患者中43％的患者携带TT基因型，49％的患者携带TC基因型，8％的患者携带CC基因型；本发明证实了检测银屑病患者TNIP1SNP位点rs10036748的基因型，可预测MTX治疗银屑病的临床疗效和毒副作用。
本发明提供了新的预测MTX临床疗效及副作用的基因标志物，尤其是TNIP1SNP位点rs10036748TT基因型作为预测MTX治疗银屑病的临床疗效和肝损害的基因标志物。
本发明进一步提供了用于预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效及副作用的检测试剂盒；本发明可用于预测MTX治疗银屑病的临床疗效及副作用的评估，有助于指导临床医生制定适合的MTX治疗干预方案。
具体实施方式
实施例1：MTX治疗银屑病的临床疗效和毒副作用观察
材料与方法
1)银屑病患者：从2015年1月到2017年6月到华山医院皮肤科银屑病专病门诊就诊的银屑病患者。
2)用药干预方法：
治疗第1周和第2周每周单次口服MTX7.5mg，第3周到第4周每周单次口服10mg，第5周到第12周每周单次口服12.5mg。
3)纳入标准
(1)年龄18-60岁；
(2)诊断为寻常型、关节病型、红皮病型和脓疱型银屑病的患者，体表受累面积(BSA)＞10％或或银屑病面积与严重程度指数(PASI)＞10；
(3)填写完整流行病学调查表，签署知情同意书者。
4)排除标准
(1)其他特殊类型的寻常型银屑病患者(点滴型、反向型)；
(2)年龄<18岁、妊娠、哺乳期妇女，或6个月内计划生育者及伴侣；
(3)已知对本研究所用药物过敏、及含有相关药物成分过敏的患者；
(4)2w内未使用过除保湿剂外的治疗银屑病其他外用药物，4w内未使用过治疗银屑病的系统用药等其他治疗方案的患者；
(5)造血系统、循环系统、呼吸系统、消化系统、免疫系统等其他原发性疾病患者，原发或继发免疫缺陷、肝脏纤维化或慢性肝病、结核患者，其他感染性疾病及精神疾病患者等；
(6)正在接受其他免疫抑制剂治疗及近期接种或计划接种疫苗患者；
5)定期随访指标：血尿常规，肝肾功能，肝纤维化，血脂，血糖，糖化血红蛋白。
结果显示，
1)90例银屑病患者的一般信息及临床疗效
本实验结果显示：MTX可使47％的银屑病患者获得PASI75的改善；30％的患者有胃肠道不适等不良反应；34％的患者和37％的患者出现肝功能异常和肝纤维化指标的异常；36％患者伴有血脂异常；37％患者伴有高血压；18％患者合并糖尿病(如表1所示)。
表1 90例银屑病患者的一般资料
Figure BDA0001339192840000041
Figure BDA0001339192840000051
实施例2：银屑病易感基因与MTX临床疗效间的相关性
材料与方法
1)提取患者DNA，利用sequenom平台对90例患者的18个非HLA位点进行基因分型，按12w是否达到PASI75分别定义为有效组和无效组，经生物信息学分析，发现TNIP1SNP位点rs10036748基因型在有效组和无效组间有统计学意义。
结果显示：
2)MTX治疗有效组和无效组患者信息比较
用MTX治疗12周达到PASI75改善设为有效组，余下设为无效组，有效组病程(19±12)显著长于无效组(14±11)，差异有统计学意义p<0.05。TNIP1SNP位点rs10036748TT基因型的概率在有效组(50％)也显著高于无效组(25％)，差异有统计学意义p<0.05(如2所示)
3)TNIP1SNP位点rs10036748不同基因型患者信息比较
本实验表明携带TNIP1SNP位点rs10036748TT基因型患者接受MTX治疗12周PASI75的改善率为64％，肝功能异常和肝纤维化指标异常的发生率分别为43％和45％，显著高于AA基因型(22％和24％)和GG基因型(17％和0)患者，差异有统计学意义p<0.05(如表3所示)。
表2MTX治疗有效组和无效组一般资料和基因型的比较
Figure BDA0001339192840000052
Figure BDA0001339192840000061
表3携带TNIP1SNP位点rs10036748不同基因型患者信息比较
Figure BDA0001339192840000062

Claims (3)

1.TNIP1 SNP位点rs10036748在用于制备预测甲氨蝶呤治疗银屑病的临床疗效和毒副作用的基因标志物中的用途。
2.TNIP1 SNP位点rs10036748在用于制备预测甲氨蝶呤治疗银屑病临床疗效和毒副作用的检测试剂盒中的用途。
3.按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的检测试剂盒在进行银屑病采用甲氨蝶呤干预治疗前，检测确定银屑病患者携带易感基因TNIP1 SNP位点rs10036748的基因型，以预测评估甲氨蝶呤的临床疗效和毒副作用。
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