CN109197398B - 一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法 - Google Patents

一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，包括：用棉球蘸取70%乙醇擦拭子实体表面，从菌柄与菌盖连接处剪掉菌柄，将菌盖倒置于超净台内；将硫酸纸对折两次后剪掉直角，将硫酸纸展开后放入培养皿底部，取两条可高压灭菌的橡皮筋套在培养皿上，将菌盖置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，盖上培养皿盖，静置4‑24小时；取走子实体菌盖，移除橡皮筋，将硫酸纸向内对折两次，使载有孢子的一面位于内侧，将硫酸纸展成漏斗状置于离心管口上方，用无菌水均匀冲洗硫酸纸内侧收集担孢子。本发明能获取洁净的担孢子，孢子回收率高，操作简单。

Description

一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体来说涉及一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法。
背景技术
担孢子是进行伞菌类真菌分离培养、遗传改良和生态习性研究的重要材料，其形态特征也是伞菌类真菌的重要鉴别依据。纯净担孢子的收集对伞菌类真菌的研究极为关键。目前伞菌类真菌担孢子的收集方法主要有套袋收集法、孢子印收集法、弹射收集法等。在担孢子收集方法方面，李荣同等在《食用菌学报》2010年17(1)：44-47“菌核侧耳担孢子收集及萌发条件”中提到利用菌褶冲洗法收集菌核侧耳担孢子，该方法中菌褶与孢子收集液直接接触，增大了污染几率，另外该方法不适合含菌孔的牛肝菌属伞菌担孢子的收集。中国专利公开号CN103688746A于2014年04月02日公开了 “一种食用菌孢子的采集培养方法”，该方法为传统的孢子印法，由于孢子收集过程子实体与收集纸有接触，难以保证收集孢子的洁净度，另外收集纸收集到的孢子难以转移；中国专利公开号CN105039178A于2015年11月11日公开了“一种暗褐网柄牛肝菌担孢子萌发的方法”，该方法将子实体组织粘附于试管内壁，很难保证孢子的洁净度；另外受限于试管直径，子实体大多数孢子无法被收集；同时，试管内收集的孢子很难进行转移操作；中国专利公开号CN 106754624A于2017年05月31日公开了“一种灵芝担孢子萌发的方法”，该方法收集环境相对密闭，子实体易腐败，不适合伞菌类真菌担孢子的收集；同时孢子收集过程与子实体接触较多，难以获取洁净的担孢子。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种能获取洁净的担孢子，孢子回收率高，操作简单的伞菌类真菌洁净担孢子收集方法。
本发明目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：
本发明的一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，包括以下步骤：
（1）筛选成熟或近熟伞菌子实体，用棉球蘸取70%乙醇擦拭子实体表面，从菌柄与菌盖连接处剪掉菌柄，将菌盖倒置于超净台内；
（2）根据待收集担孢子的子实体的大小剪取直径略大于子实体直径的圆形硫酸纸；
（3）将硫酸纸对折两次后剪掉直角，在硫酸纸中心形成方孔；
（4）将硫酸纸展开后放入培养皿底部，取两条橡皮筋套在培养皿上，两条橡皮筋平行放置，橡皮筋间距小于子实体菌盖直径，将菌盖置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，盖上培养皿盖，关上超净工作台挡板，静置4-24小时；
（5）取走子实体菌盖，移除橡皮筋，将硫酸纸向内对折两次，使载有孢子的一面位于内侧，将硫酸纸展成漏斗状置于离心管口上方，用无菌水均匀冲洗硫酸纸内侧，将未经冲洗的一侧重新展成漏斗状，用无菌水冲洗硫酸纸内侧，收集担孢子，将收集瓶或离心管盖好后置于4 ℃保存。
上述的一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，其中：对硫酸纸、可高压灭菌的橡皮筋、孢子收集瓶或离心管、蒸馏水进行高压蒸汽灭菌。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明通过将硫酸纸、可高压灭菌的橡皮筋和方形培养皿配合使用来实现对伞菌类真菌担孢子的收集。该方法获取的担孢子洁净，具有操作简单、孢子回收率高等特点。
具体实施方式
实施例1
一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，包括以下步骤：
（1）选择外观完整、无破损和虫洞的成熟或近熟伞菌子实体，以墨汁鬼伞子实体为例。用棉球蘸取70%乙醇擦拭子实体表面，从菌柄与菌盖连接处剪掉菌柄，将菌盖倒置放于超净台内；
（2）选取73g/m2硫酸纸，根据待收集担孢子的子实体的大小剪取直径略大于子实体直径的圆形硫酸纸，当子实体大于12cm时，使用直径12cm的硫酸纸。
（3）将硫酸纸沿对折两次后剪掉直角，在硫酸纸中心形成1cm×1cm的方孔。对硫酸纸、可高压灭菌的橡皮筋、50ml离心管和蒸馏水在121℃下高压蒸汽灭菌20 min。
（4）于超净工作台进行如下操作：将硫酸纸展开后放入12cm×12cm一次性方形培养皿底部，取两条可高压灭菌的橡皮筋套在方形培养皿上，两条橡皮筋平行放置，橡皮筋间距小于子实体菌盖直径。将菌盖置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，盖上培养皿盖，关上超净工作台挡板，静置4小时。
（5）取走子实体菌盖，移除橡皮筋。将硫酸纸向内对折两次，使载有孢子的一面位于内侧。将硫酸纸展成漏斗状置于50ml离心管口上方，用一次性巴斯德吸管吸取无菌水均匀冲洗硫酸纸内侧，将孢子洗入离心管。将未经冲洗的一侧重新展成漏斗状，用无菌水冲洗硫酸纸内侧。将硫酸纸置于显微镜下镜检，确认孢子收集完全。无菌水使用量在10ml左右。将离心管盖好后置于4℃保存。
实施例2
一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，包括以下步骤：
（1）选择外观完整、无破损和虫洞的成熟或近熟伞菌子实体，以多汁乳菇的子实体为例。用棉球蘸取70%乙醇擦拭子实体表面，从菌柄与菌盖连接处剪掉菌柄，将菌盖倒置放于超净台内；
（2）选取73g/m2硫酸纸，根据待收集担孢子的子实体的大小剪取直径略大于子实体直径的圆形硫酸纸，当子实体大于12cm时，使用直径12cm的硫酸纸。
（3）将硫酸纸沿对折两次后剪掉直角，在硫酸纸中心形成1cm×1cm的方孔。对硫酸纸、可高压灭菌的橡皮筋、收集瓶和蒸馏水在121℃下高压蒸汽灭菌20 min。
（4）于超净工作台进行如下操作：将硫酸纸展开后放入12cm×12cm一次性方形培养皿底部，取两条可高压灭菌的橡皮筋套在方形培养皿上，两条橡皮筋平行放置，橡皮筋间距小于子实体菌盖直径。将菌盖置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，盖上培养皿盖，关上超净工作台挡板，静置12小时；
（5）取走子实体菌盖，移除橡皮筋。将硫酸纸向内对折两次，使载有孢子的一面位于内侧。将硫酸纸展成漏斗状置于收集瓶口上方，用一次性巴斯德吸管吸取无菌水均匀冲洗硫酸纸内侧，将孢子洗入离心管。将未经冲洗的一侧重新展成漏斗状，用无菌水冲洗硫酸纸内侧。将硫酸纸置于显微镜下镜检，确认孢子收集完全。无菌水使用量在10ml左右。将收集瓶盖好后置于4℃保存。
实施例3
一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，包括以下步骤：
（1）选择外观完整、无破损和虫洞的成熟或近熟伞菌子实体，以新苦粉孢牛肝菌的子实体为例，用棉球蘸取70%乙醇擦拭子实体表面，从菌柄与菌盖连接处剪掉菌柄，将菌盖倒置放于超净台内；
（2）选取73g/m2硫酸纸，根据待收集担孢子的子实体的大小剪取直径略大于子实体直径的圆形硫酸纸，当子实体大于12cm时，使用直径12cm的硫酸纸。
（3）将硫酸纸沿对折两次后剪掉直角，在硫酸纸中心形成1cm×1cm的方孔。对硫酸纸、可高压灭菌的橡皮筋、50ml离心管和蒸馏水在121℃下高压蒸汽灭菌20 min。
（4）于超净工作台进行如下操作：将硫酸纸展开后放入12cm×12cm一次性方形培养皿底部，取两条可高压灭菌的橡皮筋套在方形培养皿上，两条橡皮筋平行放置，橡皮筋间距小于子实体菌盖直径。将菌盖置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，盖上培养皿盖，关上超净工作台挡板，静置24小时。
（5）取走子实体菌盖，移除橡皮筋。将硫酸纸向内对折两次，使载有孢子的一面位于内侧。将硫酸纸展成漏斗状置于离心管口上方，用一次性巴斯德吸管吸取无菌水均匀冲洗硫酸纸内侧，将孢子洗入离心管。将未经冲洗的一侧重新展成漏斗状，用无菌水冲洗硫酸纸内侧。将硫酸纸置于显微镜下镜检，确认孢子收集完全。无菌水使用量在10ml左右。将离心管盖好后置于4℃保存。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (2)

1.一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，包括以下步骤：
（1）筛选成熟或近熟伞菌子实体，用棉球蘸取70%乙醇擦拭子实体表面，从菌柄与菌盖连接处剪掉菌柄，将菌盖倒置于超净台内；
（2）根据待收集担孢子的子实体的大小剪取直径略大于子实体直径的圆形硫酸纸；
（3）将硫酸纸对折两次后剪掉直角，在硫酸纸中心形成方孔；（4）将硫酸纸展开后放入培养皿底部，取两条可高压灭菌的橡皮筋套在培养皿上，两条橡皮筋平行放置，橡皮筋间距小于子实体菌盖直径，将菌盖置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，盖上培养皿盖，关上超净工作台挡板，静置4-24小时；
（5）取走子实体菌盖，移除橡皮筋，将硫酸纸向内对折两次，使载有孢子的一面位于内侧，将硫酸纸展成漏斗状置于收集瓶或离心管口上方，用无菌水均匀冲洗硫酸纸内侧，将未经冲洗的一侧重新展成漏斗状，用无菌水冲洗硫酸纸内侧，收集担孢子，将收集瓶或离心管盖好后置于4 ℃保存。
2.如权利要求1所述的一种伞菌类真菌洁净担孢子收集方法，其中：对硫酸纸、橡皮筋、收集瓶或离心管、蒸馏水进行高压蒸汽灭菌。
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