CN109187779A - 一种甾体化合物的分析方法 - Google Patents

一种甾体化合物的分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109187779A
CN109187779A CN201810992938.4A CN201810992938A CN109187779A CN 109187779 A CN109187779 A CN 109187779A CN 201810992938 A CN201810992938 A CN 201810992938A CN 109187779 A CN109187779 A CN 109187779A
Authority
CN
China
Prior art keywords
map
analysis method
reference substance
sample
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810992938.4A
Other languages
English (en)
Inventor
杜琳
吴进
张翔
向世明
宋立波
杜烨
彭捷
黄清东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baxter Sichuan Fanghua Medical Technology Co Ltd
Original Assignee
Baxter Sichuan Fanghua Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baxter Sichuan Fanghua Medical Technology Co Ltd filed Critical Baxter Sichuan Fanghua Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201810992938.4A priority Critical patent/CN109187779A/zh
Publication of CN109187779A publication Critical patent/CN109187779A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components

Landscapes

  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开的是一种甾体化合物的分析方法，解决了现有技术中均需要通过多种检测方法相结合，导致现有分析方法操作十分复杂，且检测结果也不一定准确的问题。本发明包括1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类和含量。本发明具有检测更加简单，效果更加显著等优点。

Description

一种甾体化合物的分析方法
技术领域
本发明涉及一种质量检测方法，具体涉及的是一种甾体化合物的分析方法。
背景技术
甾体母核，指的是它的基本碳架具有一个"环戊烷并多氢菲"的母核和三个侧链。化学结构中都具有甾体母核。据C17链不同，其可以分为胆酸类、强心苷、甾醇和昆虫变态激素、C21甾体类、甾体皂苷和甾体生物碱等。
甾体化合物广泛存在于动植物体内，许多具有各种生物活性，它们的应用非常广泛，有些被采用治疗疾病或发展生产，如治疗过敏性疾病的氢化可的松、避孕药黄体酮、利尿剂安体舒通、合成甾体激素的薯蓣皂甙元、强心作用的狄戈辛、蟾毒甙等都是甾体化合物。
奥贝胆酸属法尼醇X受体激动剂，通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达。由于CYP7A1是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪性肝病。奥贝胆酸作为PBC的二线治疗药物，用于熊去氧胆酸响应不足或不耐受患者，有望取代熊去氧胆酸的治疗地位。奥贝胆酸由美国Intercept制药公司研发成功，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，市场潜力巨大。
奥贝胆酸及其中间体均属于甾体化合物，但在现有技术中，由于奥贝胆酸大都都是从生物体中提取获得，在制备获得的成品中不仅仅包含有奥贝胆酸，也包含有奥贝胆酸的中间体以及其他杂质，因而在制备完成后，需要结合多种检测方法才能有效检测出成品中各物质的具体种类和含量，现有分析方法操作十分复杂，检测结果也不一定准确。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中均需要通过多种检测方法相结合，导致现有分析方法操作十分复杂，且检测结果也不一定准确的问题；提供解决上述问题的一种甾体化合物的分析方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种甾体化合物的分析方法，包括：
1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.5mL/min～0.8mL/min、检测波长为250nm～270nm、色谱柱温度为35℃～50℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；
2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。
通过本发明的方法，可以只需分别对已知杂质进行一次高效液相色谱仪检测，即可有效将其添加到对照品图谱中，完善对照品图谱的构建，进而，在后期待测样品检测时，无需重复的分别采用不同的杂质作为对照进行检测分析，只需对待测样品图谱进行一次检测即可获得待测样品图谱，通过待测样品图谱与对照图谱进行对比，即可有效实现待测样品中杂质的分析检测，获得杂质的种类的含量，检测更加简单，效果更加显著。
进一步，所述流动相为体积比为30︰50～60︰10～20的甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的混合溶液。优选地，所述甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的体积比30︰57︰13。
进一步，所述对照品溶液和待测溶液的终浓度为0.15mg/mL。
进一步，所述高效液相色谱仪检测的条件为：流动相流速为0.6mL/min、检测波长为260nm、色谱柱温度为42℃。
进一步，所述高效液相色谱仪的进样体积为10μL。
通过上述参数的优化，能获得最佳的峰分离度，由于含量与峰的面积大小相关，进而获得更加准确的杂质的含量，效果十分显著。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
1、本发明能有效检测出成品中各物质的组成和含量，检测更加简单，效果更加显著；
2、本发明能获得最佳的峰分离度，由于含量与峰的面积大小相关，进而获得更加准确的杂质的含量，效果十分显著。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种甾体化合物的分析方法，包括：
1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.15mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.6mL/min、检测波长为260nm、色谱柱温度为42℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；
2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。
其中，所述高效液相色谱仪的进样体积为10μL。甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的体积比30︰57︰13；对照品溶液中单一杂质与奥贝胆酸之间的质量比为符合行标或国标的最高含量。
实施例2
本实施例与实施例1的不同在于，参数的不同，具体设置如下：
1)分别取不同的杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.15mg/mL的对照品溶液，其中杂质为奥贝胆酸和杂质总质量的0.015％，将对照品溶液在流动相流速为1mL/min、检测波长为280nm、色谱柱温度为35℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同杂质情况下的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中不同杂质的波面积Sd；高效液相色谱仪的进样体积为10μL；所述流动相为体积比为20︰50︰30的甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的混合溶液。
2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。
通过上述实施例1和实施例2的检测结果对比可知，实施例2中的波峰分离程度不佳，检测出杂质的含量不够准确，实施例1中不仅仅波峰分离程度佳，能有效确定待测样品中的种类，还能有效检测出相应杂质的含量，效果十分显著。
上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明保护范围的限制，但凡采用本发明的设计原理，以及在此基础上进行非创造性劳动而作出的变化，均应属于本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，包括：
1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.5mL/min～0.8mL/min、检测波长为250nm～270nm、色谱柱温度为35℃～50℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；
2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。
2.根据权利要求1所述的一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，所述流动相为体积比为30︰50～60︰10～20的甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的混合溶液。
3.根据权利要求2所述的一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，所述甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的体积比30︰57︰13。
4.根据权利要求1所述的一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，所述对照品溶液和待测溶液的终浓度为0.15mg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪检测的条件为：流动相流速为0.6mL/min、检测波长为260nm、色谱柱温度为42℃。
6.根据权利要求1所述的一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的进样体积为10μL。
CN201810992938.4A 2018-08-29 2018-08-29 一种甾体化合物的分析方法 Pending CN109187779A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810992938.4A CN109187779A (zh) 2018-08-29 2018-08-29 一种甾体化合物的分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810992938.4A CN109187779A (zh) 2018-08-29 2018-08-29 一种甾体化合物的分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109187779A true CN109187779A (zh) 2019-01-11

Family

ID=64916971

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810992938.4A Pending CN109187779A (zh) 2018-08-29 2018-08-29 一种甾体化合物的分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109187779A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989009088A1 (en) * 1988-03-24 1989-10-05 Terrapin Technologies,Inc. Paralog affinity chromatography
US5674688A (en) * 1991-04-02 1997-10-07 Terrapin Technologies, Inc. Method for analyte classification by SC profiles
GB2396314A (en) * 2002-10-14 2004-06-23 Bruker Daltonik Gmbh Separating bio-substances for mass spectrometric analysis
CN101191788A (zh) * 2006-11-24 2008-06-04 天津药业研究院有限公司 甾体化合物分析方法
CN106990186A (zh) * 2017-05-22 2017-07-28 成都欣捷高新技术开发股份有限公司 衍生检测甾体化合物a环双键异构体的高效液相色谱方法
CN107917972A (zh) * 2017-11-03 2018-04-17 江苏开元药业有限公司 一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989009088A1 (en) * 1988-03-24 1989-10-05 Terrapin Technologies,Inc. Paralog affinity chromatography
US5674688A (en) * 1991-04-02 1997-10-07 Terrapin Technologies, Inc. Method for analyte classification by SC profiles
GB2396314A (en) * 2002-10-14 2004-06-23 Bruker Daltonik Gmbh Separating bio-substances for mass spectrometric analysis
CN101191788A (zh) * 2006-11-24 2008-06-04 天津药业研究院有限公司 甾体化合物分析方法
CN106990186A (zh) * 2017-05-22 2017-07-28 成都欣捷高新技术开发股份有限公司 衍生检测甾体化合物a环双键异构体的高效液相色谱方法
CN107917972A (zh) * 2017-11-03 2018-04-17 江苏开元药业有限公司 一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JEVRIC LR等: "Lipophilicity estimation and characterization of selected steroid derivatives of biomedical importance applying RP HPLC", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
杨惠钟等: "高效液相色谱在甾体化合物II-β-羟化研究中的应用", 《西南民族学院学报》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Setchell et al. The multicomponent analysis of conjugates of neutral steroids in urine by lipophilic ion exchange chromatography and computerised gas chromatography-mass spectrometry
Fan et al. Simultaneous quantification of three major bioactive triterpene acids in the leaves of Diospyros kaki by high-performance liquid chromatography method
ENGEL The chemical estimation of steroid hormone metabolites
Pauli et al. Occurrence of progesterone and related animal steroids in two higher plants
CN103203123B (zh) 一种娑罗子提取液在接收洗脱液过程中的自动判断和控制
Sun et al. Pharmacokinetic study of ginsenoside Rc and simultaneous determination of its metabolites in rats using RRLC-Q-TOF-MS
CN110441426A (zh) 一种甲磺酸达比加群酯的检测方法
CN109187779A (zh) 一种甾体化合物的分析方法
CN110927279B (zh) 一种盐酸咪达普利有关物质的分离方法
Wallace et al. Gas-liquid and thin-layer chromatographic determination of morphine in biologic specimens
Anderson et al. Stable isotope studies on steroid metabolism and kinetics: sulfates of 3α-hydroxy-5α-pregnane derivatives in human pregnancy
CN112480198B (zh) 去氢表雄酮粗品的纯化方法及去氢表雄酮的定量检测方法
CN109655571A (zh) 一种奥贝胆酸的高效液相色谱分析方法
Liu et al. Pharmacokinetics and oral bioavailability studies of three saikogenins in rats using a validated UFLC-MS/MS method
CN113466392B (zh) 右雷佐生及其有关物质的检测方法
CN105021734B (zh) 一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法
CN103018389B (zh) 高效液相色谱分析方法及其应用
CN108828082A (zh) 一种从鱼肉中提取阿苯达唑类化合物的检测方法
CN107764909A (zh) 一种盐酸阿莫罗芬及其干扰物的测定方法
CN108872405A (zh) 一种洛度沙胺氨丁三醇有关物质的hplc分析检测方法
Gonzalo-Lumbreras et al. High-performance liquid chromatographic separation of corticoid alcohols and their derivatives: a hydrolysis study including application to pharmaceuticals
CN105987978B (zh) 一种同时测定香加皮中7种化合物含量的方法
KR20120059257A (ko) 동위원소 희석-질량분석법을 이용한 생체 시료 내 활성 남성호르몬의 정량방법
CN106892957A (zh) 一种齐墩果烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和应用
CN116183758B (zh) 一种二乙基茚胺盐酸盐中异构体杂质的分析方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190111

RJ01 Rejection of invention patent application after publication