CN109187150A - 一种荧光染色真菌检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医学检验技术领域，公开了一种荧光染色真菌检测法,进行皮屑、指甲等取材标本：①标本置于载玻片上；②滴加1号溶液；③火焰固定；④滴加3号荧光染液；⑤加盖玻片；⑥荧光显微镜镜检体液标本：①标本置于载玻片上；②滴加2号固定液；③滴加3号荧光染液；④加盖玻片；⑤荧光显微镜镜检。本发明前期检测约两万份标本的结果统计显示，本发明的方法与现有的真菌检测方法相比，检出率大大提高了，由30％～88％提高到98％；操作步骤简单，仅需要三步：固定‑染色‑荧光镜检，且平均每步需要2min，每份标本取材后检测时间仅需要5min左右，大大提高了检测速率，缩短了检测时间。
Description
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，尤其涉及一种荧光染色真菌检测方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
现今真菌引起的感染日渐突出，据WHO统计，能引起人类疾病的真菌约有270余种，根据感染部位又可分为浅表真菌和深部真菌。浅表真菌侵袭皮肤、毛发和指甲，而深部真菌感染心、肺、血液、胃肠等人体各个器官和系统，危及患者生命。
快速准确地诊断感染的原因对选择适合治疗至关重要，临床上常用的真菌病诊断方法显微镜直接镜检、真菌培养和组织病理检查等检查方法受限于临床医生送检样本的敏感性、取材者的经验和检验医师的检测水平，且耗时长，不利于病人的治疗，尤其给重症病人的治疗带来了严重的危害。
综上所述，现有技术存在的问题是：
现有技术中，没有结合荧光染色法检测真菌，没有采用一步染色，造成现有技术操作不简便，检测速度慢，不利于及时诊治。
现有技术中，显微镜直接镜检阳性率低，准确率低，背景杂质干扰多；真菌分离培养取材要求高，培养要求高，检测周期长，有假阴性。
解决上述技术问题的意义：
新型真菌检测方法需要简化操作步骤的同时提高检测效率，而结合荧光法检测真菌操作简便，检测结果快速准确。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种荧光染色真菌检测方法。
本发明是这样实现的，一种荧光染色真菌检测方法，所述荧光染色真菌检测方法包括：
固定：将皮屑、指甲取材标本滴加1号KOH溶液1-2滴，1-3min后火焰固定；体液标本滴加2号甲醛固定液1-2滴，1-3min；
染色：取出避光保存的3号吖啶橙荧光染液，滴加1滴，1min后加盖玻片；
荧光镜检：将制备好的玻片置于荧光显微镜下进行真菌检测。
进一步，皮屑、指甲等取材标本滴加1号溶液1-2滴，1-3min后火焰固定前，需进行：
取材：选取典型病理部位的皮屑、指甲、体液等标本，取材后均匀涂布于载玻片中心。
进一步，将制备好的玻片置于荧光显微镜下进行真菌检测后，需进行：
打印报告单：彩色打印荧光显微镜镜检的结果照片。
本发明的另一目的在于提供一种利用所述荧光染色真菌检测方法的荧光染色真菌检测设备。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明的荧光染色法检测真菌采用一步染色，操作简便，速度快，有利于及时诊治。
本发明前期检测约两万份标本的结果统计显示，本发明的方法与现有的真菌检测方法相比，检出率大大提高了，由30％～88％提高到98％。
操作步骤简单，仅需要三步：固定-染色-荧光镜检，且平均每步需要2min，每份标本取材后检测时间仅需要5min左右，而以往的方法需要10min～48h不等，该法大大提高了检测速率，缩短了检测时间。
检测结果易于判断，准确可靠。
检测范围广，能检出各类真菌，可增加阳性的病人的进一步诊疗及复诊量。
检测所需的仪器设备和试剂少，检测设备仅需荧光显微镜，检测一份标本所需试剂的成本低于1元，大大地降低了检测成本。
附图说明
图1是本发明实施提供的荧光染色真菌检测方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
现有技术中，显微镜直接镜检阳性率低，准确率低，背景杂质干扰多；真菌分离培养取材要求高，培养要求高，检测周期长，有假阴性。
本发明实施例提供的荧光染色真菌检测方法，包括：
皮屑、指甲等取材标本：①标本置于载玻片上；②滴加1号溶液；③火焰固定；④滴加3号荧光染液；⑤加盖玻片；⑥荧光显微镜镜检
体液标本：①标本置于载玻片上；②滴加2号固定液；③滴加3号荧光染液；④加盖玻片；⑤荧光显微镜镜检。
下面结合具体分析对本发明作进一步描述。
如图1所述，本发明实施例提供的荧光染色真菌检测方法，包括：
S101：取材：选取典型病理部位的皮屑、指甲、体液等标本，取材后均匀涂布于载玻片中心，具体取材要求与常用的真菌检查方法取材要求一致。
S102：固定：皮屑、指甲等取材标本滴加1号溶液1-2滴，1-3min后火焰固定；体液等标本滴加2号固定液1-2滴，1-3min。
S103：染色：取出避光保存的3号荧光染液，滴加1滴，1min后加盖玻片。
S104：荧光镜检：将制备好的玻片置于荧光显微镜下进行真菌检测。
S105：打印报告单：彩色打印荧光显微镜镜检的结果照片。
下面结合具体效果对本发明作进一步描述。
本发明检出率高，检测范围广，能检出各类真菌，可增加阳性的病人的进一步诊疗及复诊量，操作简便快速、结果准确、成本低，非常适合我国的医疗体系的现状，能很好地满足各级医院的诊断需求，为临床诊断和科研工作提供了一种非常有价值的检测手段。
前期检测结果统计发现，本发明的方法与现有的真菌检测方法相比，检出率大大提高了，由30％～88％提高到98％，且此种新型快速的荧光染色真菌检测法荧光显微镜镜检形态典型，易于判断，结果准确。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种荧光染色真菌检测方法，其特征在于，所述荧光染色真菌检测方法包括：
固定：将皮屑、指甲取材标本滴加1号KOH溶液1-2滴，1-3min后火焰固定；体液标本滴加2号甲醛固定液1-2滴，1-3min；
染色：取出避光保存的3号吖啶橙荧光染液，滴加1滴，1min后加盖玻片；
荧光镜检：将制备好的玻片置于荧光显微镜下进行真菌检测。
2.如权利要求1所述的荧光染色真菌检测方法，其特征在于，皮屑、指甲取材标本滴加1号溶液1-2滴，1-3min后火焰固定前，需进行：
取材：选取典型病理部位的皮屑、指甲、体液标本，取材后均匀涂布于载玻片中心。
3.如权利要求1所述的荧光染色真菌检测方法，其特征在于，
将制备好的玻片置于荧光显微镜下进行真菌检测后，需进行：
打印报告单：彩色打印荧光显微镜镜检的结果照片。
4.一种利用权利要求1所述荧光染色真菌检测方法的荧光染色真菌检测设备。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110806408A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-02-18 | 珠海伊斯佳科技股份有限公司 | 一种检测头皮马拉色菌的方法 |
| CN114235765A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-25 | 江西业力医疗器械有限公司 | 一种用于皮肤真菌检测的方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN87101986A (zh) * | 1986-03-21 | 1987-11-18 | 希巴—盖吉股份公司 | 真菌检测 |
| JPH04271798A (ja) * | 1991-02-27 | 1992-09-28 | Higeta Shoyu Kk | 酵母生菌数の測定法 |
| JP2000232897A (ja) * | 1999-02-15 | 2000-08-29 | Nippon Mizushori Giken:Kk | 菌類の即時判別方法 |
| CN105950700A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-09-21 | 南京汉瑞生物科技有限公司 | 一种真菌荧光染色剂 |
| CN107796681A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-03-13 | 安徽信灵检验医学科技有限公司 | 一种真菌荧光染色液及其制备方法 |
-
2018
- 2018-09-07 CN CN201811042189.5A patent/CN109187150A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN87101986A (zh) * | 1986-03-21 | 1987-11-18 | 希巴—盖吉股份公司 | 真菌检测 |
| JPH04271798A (ja) * | 1991-02-27 | 1992-09-28 | Higeta Shoyu Kk | 酵母生菌数の測定法 |
| JP2000232897A (ja) * | 1999-02-15 | 2000-08-29 | Nippon Mizushori Giken:Kk | 菌類の即時判別方法 |
| CN105950700A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-09-21 | 南京汉瑞生物科技有限公司 | 一种真菌荧光染色剂 |
| CN107796681A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-03-13 | 安徽信灵检验医学科技有限公司 | 一种真菌荧光染色液及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 柳旭伟: "种公羊白色念珠菌的分离与鉴定", 《中国兽医杂志》 * |
| 黄培忠 等: "免疫荧光技术在临床检验中的应用", 《国外医学临床生物化学与检验学分册》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110806408A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-02-18 | 珠海伊斯佳科技股份有限公司 | 一种检测头皮马拉色菌的方法 |
| CN114235765A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-25 | 江西业力医疗器械有限公司 | 一种用于皮肤真菌检测的方法 |
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