CN109181852A - 一种赛葵挥发油在制备防治癌症和抑菌产品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本申请提供一种赛葵挥发油及其应用，该赛葵挥发油通过如下步骤提取纯化得到：(1)将赛葵粉碎，加水后搅拌进行水蒸气蒸馏提取，得含挥发油水系；(2)向含挥发油水系中加入有机溶剂进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的有机溶剂中加入脱水干燥剂脱水，过滤回收有机溶剂，即得到干燥纯净的挥发油。经验证本申请的赛葵挥发油同时具有良好的抑菌和抗癌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌均有良好的抑菌作用，对HepG2(人肝癌细胞)和MCF‑7(人乳腺癌细胞)具有良好的抗癌抑癌效果，适合工业化生产应用。

Description

一种赛葵挥发油在制备防治癌症和抑菌产品中的应用
技术领域
本申请涉及医药领域，具体涉及一种赛葵挥发油及其应用。
背景技术
赛葵(Malvastrum coromandelianum(L.))，属于锦葵科、赛葵属植物，别名黄花棉、山黄麻、火叶黄花猛、山桃仔、苦麻赛葵、苦麻、黄花如意、山索血、山茶心、黄花草、黄花虱麻头。全草入药，清热利湿，去瘀消肿。治黄疸，痢疾，疟疾，小儿食滞，肺热咳嗽，喉头炎，疮疖，跌打肿痛。原产地美洲，现广布于全球的热带区域。中国分布于台湾、福建、广东、香港、海南、广西、云南等地区，适生于温暖湿润的气候。
目前，对于赛葵的研究较少，多采用内服煎汤，或者捣烂或研磨调敷外用；还未有关于赛葵挥发油提取与使用的报道。因此，随着天然产物精细化应用的逐步实施，以及为进一步的拓展赛葵的应用领域，有必要对赛葵挥发油的提取与使用开展研究。
发明内容
正如背景技术所介绍的，挥发油成分十分复杂，且来源不同，功效各异，对于赛葵的研究较少，多采用内服煎汤，或者捣烂或研磨调敷外用；目前还未有关于赛葵挥发油提取与使用的报道。基于此，本申请提出了一种赛葵挥发油及其应用。
具体地，本申请是通过如下技术方案实现的：
首先，本申请提供了一种提取纯化赛葵挥发油的方法，所述方法包括：
(1)将赛葵粉碎，加水后搅拌进行水蒸气蒸馏提取，得含挥发油水系；
(2)向含挥发油水系中加入有机溶剂进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的有机溶剂中加入脱水干燥剂脱水，过滤回收有机溶剂，即得到干燥纯净的挥发油。
优选地，步骤(1)中，将赛葵粉碎至粒径为50-100目；优选将赛葵粉碎至粒径为60目。
优选地，步骤(1)中，赛葵和水的质量比为1：2～6，优选为1:3.5。
优选地，步骤(1)中，水蒸气蒸馏提取时间为3-6h；
优选地，步骤(2)中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、丙烯酸乙酯、正己烷或乙醚中的一种或几种；优选为乙醚；
优选地，步骤(2)中，所述脱水干燥剂选自无水硫酸钠和无水硫酸钙；优选为无水硫酸钠。
在本申请的一种实施方案中，提供了一种赛葵挥发油的提取纯化方法，步骤如下：
(1)取新鲜赛葵洗净晾干后粉粹至粒径为50-100目，加入蒸馏水后搅拌进行水蒸汽蒸馏，得含挥发油水系；
(2)向含挥发油水系中加入有机溶剂进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的有机溶剂中加入脱水干燥剂脱水，过滤回收有机溶剂即得到干燥纯净的挥发油。
赛葵属的植物现有已发现的化合物结构主要为木脂素类、苯丙素类、黄酮类、香豆精类、有机酸类、醇类、烃类、皂苷类、氨基酸及多糖、挥发油等，而发明人发现赛葵挥发油有自己的特点和化合物种类(如实施例4表3所示)，发明人前期研究赛葵挥发油的特点，采用多种方式尝试提取赛葵挥发油，并通过GC-MS检测，发现赛葵所含挥发油成分绝大部分化合物在水中溶解度极低，相对更适宜通过水蒸气蒸馏法进行提取，因此提出本方案，其相较于其他挥发油提取方式而言，挥发油提取效率以及挥发油种类比例提取更高。
其中，水蒸气蒸馏法提取赛葵挥发油过程中，极易产生原料焦化的问题，发明人实验发现，控制赛葵干粉的粒径是一个至关重要的因素，将粒径限制在50目以上，焦化现象明显消失，在此基础上，发明人进一步的采用合适的赛葵与蒸馏水的比例，减缓原料焦化问题和辅助提取。
具体的实施方案中，本申请所述洗净晾干后的赛葵与蒸馏水的质量比为1：2～6，进一步优选为1:3.5；所述赛葵粉粹粒径优选为60目；发明人在实验研究中发现，粉粹颗粒较大，会使水蒸汽从原料间隙流出，从而使得提取率降低，且浪费资源；而粉粹粒径过小，则使得水蒸汽无法均匀透过原料，导致蒸汽从冲开的原料中逸出，同样导致提取率不高。
此外，由于赛葵的提取工艺是新建立的，在本申请期间，发明人参考了其他植物挥发油的提取工艺，然而与之不同的是，本申请所述挥发油含有较多易氧化成分(以烯类居多)，为避免加热过程造成挥发油成分中热敏性、易分解、易氧化成分损失，本申请所述水蒸汽蒸馏提取时间限制在3-6h；适宜的提取时间能够保证尽可能由赛葵中提取出挥发油组分，同时也避免提取时间过长造成的资源浪费。
所述有机溶剂选自乙酸乙酯、丙烯酸乙酯、正己烷、乙醚中的一种或几种，优选为乙醚；申请人对于水蒸气蒸馏-有机溶剂萃取法进行单因素实验发现，乙醚对赛葵挥发油组分萃取效果最佳，相较于其他的有机溶剂具有更好的提取率。
所述脱水干燥剂选自无水硫酸钠或无水硫酸钙，优选为无水硫酸钠。
本申请的优选地一个实施方式中，赛葵挥发油的提取纯化方法，包括：
(1)取新鲜赛葵洗净晾干后粉粹至粒径为60目，加入蒸馏水后搅拌进行水蒸汽蒸馏，蒸馏提取时间为5h，得含挥发油水系；其中，所述洗净晾干后的赛葵与蒸馏水的质量比为1：3.5；
(2)向含挥发油水系中加入乙醚进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的乙醚溶液中加入无水硫酸钠脱水，过滤回收乙醚即得到干燥纯净的挥发油。
本申请的一个实施方式中，提供一种由上述提取纯化方法制备得到的赛葵挥发油。
优选地，所述挥发油中的含水率为0.5～0.65wt％，优选为0.65wt％。
所述赛葵挥发油的主要化学成分包括棕榈酸、六氢法呢基丙酮、亚油酸、β-石竹烯、柏木烯醇。
更为全面的，本申请所述赛葵挥发油的主要化学成分包括：异丙苯、十一烷、月桂烯酮、十二烷、壬酸、十三烷、β-大马烯酮、β-榄香烯、β-石竹烯、邻苯二甲酸二甲酯、α-蛇麻烯、别香橙烯、β-愈创木烯、β-紫罗酮、十五烷、α-芹子烯、紫罗兰醇、δ-毕澄茄烯、α-二去氢菖蒲烯、十二碳酸、橙花叔醇、石竹素、十四烷醛、荜澄茄油烯醇、τ-依兰油醇、α-毕橙茄醇、十氢二甲基甲乙烯基萘酚、(2E)-2-十四碳烯醛、卡达烯、3,4'-二乙基-1,1'-联苯、柏木烯醇、十五烷醛、Widdrenal(其结构为)、十四碳酸、风毛菊内酯、Dehydrofukinone(其结构为)、六氢法呢基丙酮、棕榈油酸甲酯、十七烷酮、法尼基丙酮、棕榈酸甲酯、棕榈油酸、异植醇、棕榈酸、亚油酸、油酸。
其次，为了便于更为有效的对赛葵挥发油提取工艺进行过程质量控制，本申请提供了一种赛葵挥发油的检测方法，该方法包括：
(1)按上述方法提取纯化赛葵挥发油；
(2)采用气相色谱-质谱法对赛葵挥发油进行分析检测。
优选地，分析检测的条件为：HP-5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；载气：氦气；流速：1.2mL/min，溶剂延迟4min；升温程序：初始温度为60℃，保持2min，以5℃/min升温到200℃，保持4min，再以5℃/min升到280℃，保持2min。离子化方式：EI，70eV；离子源温度：250℃；载气：氦气；柱流速：1.2mL/min。
该方法检测并控制所述赛葵挥发油化学成分，包括棕榈酸、六氢法呢基丙酮、亚油酸、β-石竹烯、柏木烯醇等成分的控制；
更为全面的，检测所述赛葵挥发油的主要化学成分包括：异丙苯、十一烷、月桂烯酮、十二烷、壬酸、十三烷、β-大马烯酮、β-榄香烯、β-石竹烯、邻苯二甲酸二甲酯、α-蛇麻烯、别香橙烯、β-愈创木烯、β-紫罗酮、十五烷、α-芹子烯、紫罗兰醇、δ-毕澄茄烯、α-二去氢菖蒲烯、十二碳酸、橙花叔醇、石竹素、十四烷醛、荜澄茄油烯醇、τ-依兰油醇、α-毕橙茄醇、十氢二甲基甲乙烯基萘酚、(2E)-2-十四碳烯醛、卡达烯、3,4'-二乙基-1,1'-联苯、柏木烯醇、十五烷醛、Widdrenal、十四碳酸、风毛菊内酯、Dehydrofukinone、六氢法呢基丙酮、棕榈油酸甲酯、十七烷酮、法尼基丙酮、棕榈酸甲酯、棕榈油酸、异植醇、棕榈酸、亚油酸、油酸。
针对赛葵挥发油的主要化学成分分析，其成分及含量明显有异于其他物种的挥发油，因此上述检测方法可以用于赛葵挥发油的鉴别以及将上述分离方法结合检测方法用于赛葵的鉴别。
在一个实施方案中，将上述检测方法用于赛葵挥发油的鉴别以及将上述分离方法结合检测方法用于赛葵的鉴别。
例如，一种赛葵挥发油的鉴别方法，所述方法包括将待测挥发油采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析检测，检测条件为：HP-5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；载气：氦气；流速：1.2mL/min，溶剂延迟4min；升温程序：初始温度为60℃，保持2min，以5℃/min升温到200℃，保持4min，再以5℃/min升到280℃，保持2min。离子化方式：EI，70eV；离子源温度：250℃；载气：氦气；柱流速：1.2mL/min；
待测挥发油检测结果与赛葵挥发油化学成分(比如棕榈酸、六氢法呢基丙酮、亚油酸、β-石竹烯、柏木烯醇等)比对。
因此，本发明还提供了一种赛葵的鉴别方法，所述方法包括待测物种挥发油的提取和待测物种挥发油的检测，
所述待测物种挥发油的提取包括：(1)取待测物种洗净晾干后粉粹至粒径为50-100目，加入蒸馏水后搅拌进行水蒸汽蒸馏，得含挥发油水系；(2)向含挥发油水系中加入有机溶剂进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的有机溶剂中加入脱水干燥剂脱水，过滤回收有机溶剂即得到干燥纯净的挥发油；(3)然后对待测物种挥发油进行检测，包括：将待测物种挥发油采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析检测，检测条件为：HP-5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；载气：氦气；流速：1.2mL/min，溶剂延迟4min；升温程序：初始温度为60℃，保持2min，以5℃/min升温到200℃，保持4min，再以5℃/min升到280℃，保持2min。离子化方式：EI，70eV；离子源温度：250℃；载气：氦气；柱流速：1.2mL/min；(4)待测挥发油检测结果与赛葵挥发油化学成分(比如棕榈酸、六氢法呢基丙酮、亚油酸、β-石竹烯、柏木烯醇等)比对。
此外，本申请研究了所述赛葵挥发油的系列可能功用，发现上述赛葵挥发油同时具有良好的抑菌和抗癌活性多种功能，对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌均有良好的抑菌作用，对HepG2(人肝癌细胞)和MCF-7(人乳腺癌细胞)具有良好的抗癌抑癌效果。
发明人前期也研究过多种植物挥发油的功能，如錾菜挥发油、豆腐菜挥发油、刺毛峨参挥发油等，但不同植物挥发油成分十分复杂，且来源不同，功能也存在较大差异，据发明人了解，同时具有抑菌、抗肿瘤活性多功能用途的挥发油种类仍较少，其功能仍主要跟活性成分及其相关比例有关。
因此，又一方面，本申请提供了提供上述赛葵挥发油在制备抑菌剂中的应用；所述抑菌剂对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有较好的抑菌效果，可用于食品、药品、化妆品和保健品等领域。
以及，本申请还提供上述赛葵挥发油在制备预防和/或治疗癌症的食品、药品或保健品中的应用，优选地，所述癌症选自肝癌和乳腺癌。
又一方面，本申请还提供一种抑菌剂，其活性成分为上述的赛葵挥发油。
又一方面，本申请还提供一种抗癌的药物组合物，其含有治疗有效量的上述赛葵挥发油。
本文使用的术语“治疗有效量”表示，治疗、改善靶向的疾病或病症或者表现出可检测的治疗效果所需的治疗剂的量。
本申请的药物组合物在相当宽的剂量范围内是有效的。实际服用本申请药物组合为的剂量可根据有关的情况来决定。这些情况包括：受试者的身体状态、给药途径、年龄、体重、对药物的个体反应，症状的严重程度等。
进一步的，上述药物组合物可以制成各种药物剂型，根据不同的剂型选配相应的药学上可接受的载体，制成口服的混悬剂、胶囊剂、乳状剂，直接通过肠胃吸收用于抗癌作用；可以制成泡沫剂、乳状剂和混悬剂，直接涂抹或喷洒在病灶部位，外用药的原理是利用挥发油的渗透作用，通过皮肤或者粘膜吸收后作用于病灶，外用药例如治疗乳腺癌。
本申请的有益效果：
(1)本申请首次采用水蒸气蒸馏和有机萃取技术提取纯化得到赛葵挥发油，所述提取工艺针对赛葵挥发油成分特点，可以有效防止原料焦化、避免加热过程造成挥发油成分中热敏性、易分解、易氧化成分损失、避免造成挥发油活性损失和挥发油品质降低，提高挥发油成分(包括成分种类和活性成分含量)的提取率；并且提取纯化方法工艺简单，成本低，制备工艺中的蒸馏水和有机溶剂能够重复利用，经本申请制备工艺获得的挥发油含水率低，挥发油主活性成分较全面保留。
(2)本申请首次建立了赛葵挥发油的组成及量化分析，通过赛葵挥发油的特点其他物种挥发油活性成分的不同，分别建立了赛葵挥发油提取工艺的质量控制检测方法和赛葵挥发油的鉴别以及于赛葵的鉴别方法。
(3)本申请提取纯化得到的赛葵挥发油，经试验验证同时具有良好的抑菌和抗癌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌均有良好的抑菌作用，对HepG2(人肝癌细胞)和MCF-7(人乳腺癌细胞)具有良好的抗癌抑癌效果，适合工业化生产应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本申请方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本申请实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
实施例1：预实验
该实施例分别采用不同的提取方法对赛葵挥发油进行提取，具体如下：
1.水蒸气蒸馏法：
(1)取600g干赛葵粉粹磨粉于蒸馏烧瓶中，加入1000g蒸馏水后进行水蒸汽蒸馏，蒸馏提取时间为5h，得含挥发油水系；
(2)向含挥发油水系中加入乙醚进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的乙醚溶液中加入无水硫酸钠脱水，过滤回收乙醚即得到干燥纯净的挥发油。
2.同时蒸馏萃取法：
称取600g干赛葵粉粹磨粉于蒸馏烧瓶中，加入1000g蒸溜水，同时量取乙醚于蒸馏烧瓶中，连接同时蒸德萃取装置，同时蒸留萃取收集乙醚液，并用无水硫酸钠脱水，乙醚萃取液于旋转蒸发仪真空浓缩，得到挥发油。
3.乙醚回流萃取法：
称取600g干赛葵粉粹磨粉于蒸馏烧瓶中，加入乙醚进行回流萃取。
预实验的考察结果见表1。
表1预实验结果
提取方法 水蒸气蒸馏法 乙醚回流萃取法 同时蒸馏萃取法
挥发油得率 0.390 0.262 0.361
由表1可以看出，采用水蒸气蒸馏法的挥发油得率较高，因此，后续实验中对于挥发油的提取采用水蒸气蒸馏法。
实施例2：赛葵挥发油的提取纯化方法
(1)取500g新鲜赛葵洗净晾干后粉粹至粒径为60目，加入1000g蒸馏水后搅拌进行水蒸汽蒸馏，蒸馏提取时间为5h，得含挥发油水系；
(2)向含挥发油水系中加入乙醚进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的乙醚溶液中加入无水硫酸钠脱水，过滤回收乙醚即得到干燥纯净的挥发油；提取率为0.41％，挥发油中的含水率为0.65％。
实施例3：其他提取方法:
对比例1：赛葵挥发油的提取纯化
将步骤(1)中赛葵粉碎的粒径调整为40目，其余操作同实施例2，制备得到挥发油，提取率为0.35％，挥发油中的含水率为0.68％。
对比例2：赛葵挥发油的提取纯化
将步骤(1)中赛葵粉碎的粒径调整为120目，其余操作同实施例2，制备得到挥发油，提取率为0.32％，挥发油中的含水率为0.71％。
对比例3：赛葵挥发油的提取纯化
将步骤(2)中“向含挥发油水系中加入乙醚进行萃取”调整为“向含挥发油水系中加入二氯甲烷进行萃取”，其余操作同实施例2，制备得到挥发油，提取率为0.37％，挥发油中的含水率为0.66％。
实施例4：赛葵挥发油的检测
采用GC-MS对实施例2得到的赛葵挥发油进行检测，具体检测条件如下：HP-5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；载气：氦气；流速：1.2mL/min，溶剂延迟4min；升温程序：初始温度为60℃，保持2min，以5℃/min升温到200℃，保持4min，再以5℃/min升到280℃，保持2min。离子化方式：EI，70eV；离子源温度：250℃；载气：氦气；柱流速：1.2mL/min。共检测出赛葵挥发油中化学成分46种，具体化学成分及相对含量见表2。
表2赛葵挥发油化学成分
实施例5：赛葵挥发油的抑菌作用
1、验菌种和培养基
试验菌种：选择四种细菌菌株用于抑菌试验，包括革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)，枯草芽孢杆菌(ATCC 6633)和革兰氏阴性菌：大肠杆菌(ATCC 25922)，绿脓杆菌(ATCC 27853)。
试验用培养基：细菌MHB(Mueller Hinton Broth)培养基。
2、试验方法
(1)灭菌：
将实验所需要的培养基、试管、培养皿、滤纸片(6mm)、枪头、蒸馏水等在121℃湿热灭菌20min，灭完菌将其放置超净工作台紫外灭菌30min。
(2)菌悬液的配制：
从经过活化的菌体斜面上挑取一环菌体接种于相应的MHB培养基中，放入恒温摇床中37℃条件下隔夜培养。分别吸取以上培养好的处于对数生长期的供试菌液0.5mL，用MH肉汤稀释成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。再用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后，得到1-2×106CFU/ml备用。
(3)供试药物：
对照药物：氯霉素；样品：实施例2所得赛葵挥发油的5mg/mL稀释液。
(4)抑菌活性的测定：
采用滤纸片法测定抑菌活性。无菌条件下，在已灭菌的培养皿中倾入MHA培养基20mL，冷却凝固后制成固体平板。向每个固体平板中加入100μL已稀释好的菌悬液，涂布均匀，放置5min，使培养基充分吸收菌液。用记号笔在有菌琼脂平板上标号。用无菌镊子将灭完菌的干燥的滤纸片夹出，放入写相应对照编号的培养皿中，向灭完菌的干燥的滤纸片滴加配制好的样品溶液或氯霉素溶液10μL，每个样品做三个平行，放入37℃恒温培养箱培养25h。培养时间到后取出培养皿观察透明抑菌圈，采用十字交叉法用测微尺测量每个抑菌圈两个垂直方向的直径大小，取其平均值(mm)为测定结果，每项抑菌实验均平行重复3次。以抑菌圈直径的大小来进行抑菌活性强弱的判定，抑菌圈表现得越大，则表明其抗菌活性也就越强。
(5)MIC的测定：
吸取稀释好的菌液加于96孔细胞培养板中，每孔100μL，并加入已配置好的不同浓度的药物100μL。倒数第二孔不加药物(仅加培养基和细菌)加入稀释菌液100μL，为细菌生长对照孔。最后一列为阳性对照氯霉素。置于振荡器上振荡1min，使孔内溶液充分混匀后，将96孔板振荡摇匀后置于37℃恒温培养箱中培养16-18小时后，向每孔中加入用无菌水配置的1％TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)溶液20μL，振荡摇匀于37℃恒温培养箱中培养30到60分钟，观察每孔颜色变化。取未呈现颜色变化的最后一孔所含挥发油浓度为其最低抑菌浓度MIC。
重复所有MIC值的测量一式三份。
3、实验结果
抑菌效果用最小抑菌浓度MIC表示，测量结果见表3。
表3赛葵挥发油抑菌活性
由表2可以看出，赛葵挥发油对4种供试菌都有一定的抑制作用，其对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.156mg/mL，对枯草杆菌的最低抑菌浓度为0.156mg/mL，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.078mg/mL，对绿脓杆菌的最低抑菌浓度为1.250mg/mL。
该结果表明赛葵挥发油可作为天然抗菌剂用于食品、药品保健品或化妆品行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。
实施例5：赛葵挥发油的细胞毒性
1、细胞培养
HepG2(人肝癌细胞)和MCF-7(人乳腺癌细胞)细胞株用含10％新生牛血清以及青霉素、链霉素各100U/mL的RPMI1640培养基置于37℃、饱和湿度、5％CO2的培养箱中培养。
2、MTT法检测细胞活力
取对数生长期的肿瘤细胞悬浮于含10％胎牛血清以及2mM谷氨酰胺的RPMI-1640培养基中，用玻璃吸管轻轻吹打成单细胞悬液，用TC10自动细胞计数仪计数。将细胞接种于96孔培养板，细胞密度为5×103个/mL，每孔200μL。在37℃、5％CO2的培养箱预培养25h使细胞粘附后，加入预先配制的浓度分别为0.016、0.031、0.063、0.125、0.250、0.500、1和2mg/mL的挥发油溶液对肿瘤细胞进行处理。并设阴性对照及空白对照。再分别连续培养25h、48h、72h，然后用MTT法测定。每孔加入10μL 5mg/mL的MTT溶液，继续培养2h后，吸去上清液。每孔加入100μL DMSO，置微量振荡器振荡10min使结晶完全溶解，于Multiskan Ascent酶标仪在波长570nm下测定吸光度(A)值，计算细胞增殖抑制率，该测定一式三份。
细胞增殖抑制率如下计算：
细胞增殖抑制率/％＝[1-OD处理组/OD对照]×100％
3、实验结果
细胞毒性以抑制50％细胞生长时所需样品浓度即(IC50值)表示，测量结果见表4。
表4赛葵挥发油对HepG2及MCF-7细胞毒活性
由表3可以看出，赛葵挥发油对HepG2、MCF-7两种细胞都有一定的抑制作用，其对HepG2 72小时IC50为116.40μg/mL；对MCF-7 72小时IC50为120.27μg/mL，该结果说明赛葵挥发油可作为天然抗癌细胞剂用于食品、药品或保健品行业。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.赛葵挥发油，其通过如下步骤提取纯化得到：
(1)将赛葵粉碎，加水后搅拌进行水蒸气蒸馏提取，得含挥发油水系；
(2)向含挥发油水系中加入有机溶剂进行萃取，弃去分出的水层，向含挥发油的有机溶剂中加入脱水干燥剂脱水，过滤回收有机溶剂，即得到干燥纯净的挥发油。
2.根据权利要求1所述的赛葵挥发油，其特征在于，步骤(1)中，将赛葵粉碎至粒径为50-100目；优选将赛葵粉碎至粒径为60目；
优选地，步骤(1)中，赛葵和水的质量比为1：2～6，优选为1:3.5；
优选地，步骤(1)中，水蒸气蒸馏提取时间为3-6h；
优选地，步骤(2)中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、丙烯酸乙酯、正己烷或乙醚中的一种或几种；优选为乙醚；
优选地，步骤(2)中，所述脱水干燥剂选自无水硫酸钠和无水硫酸钙；优选为无水硫酸钠。
3.根据权利要求1或2所述的赛葵挥发油，其特征在于，所述赛葵挥发油中至少包括化学成分：棕榈酸、六氢法呢基丙酮、亚油酸、β-石竹烯、柏木烯醇；
优选地，所述赛葵挥发油中至少包括化学成分：异丙苯、十一烷、月桂烯酮、十二烷、壬酸、十三烷、β-大马烯酮、β-榄香烯、β-石竹烯、邻苯二甲酸二甲酯、α-蛇麻烯、别香橙烯、β-愈创木烯、β-紫罗酮、十五烷、α-芹子烯、紫罗兰醇、δ-毕澄茄烯、α-二去氢菖蒲烯、十二碳酸、橙花叔醇、石竹素、十四烷醛、荜澄茄油烯醇、τ-依兰油醇、α-毕橙茄醇、十氢二甲基甲乙烯基萘酚、(2E)-2-十四碳烯醛、卡达烯、3,4'-二乙基-1,1'-联苯、柏木烯醇、十五烷醛、Widdrenal、十四碳酸、风毛菊内酯、Dehydrofukinone、六氢法呢基丙酮、棕榈油酸甲酯、十七烷酮、法尼基丙酮、棕榈酸甲酯、棕榈油酸、异植醇、棕榈酸、亚油酸、油酸。
4.抑菌剂，其以权利要求1至3中任一项所述的赛葵挥发油为活性成分。
5.药物组合物，其含有权利要求1至3中任一项所述赛葵挥发油或以权利要求1至3中任一项所述的赛葵挥发油为活性成分。
6.药物制剂，其含有权利要求1至3中任一项所述的赛葵挥发油或权利要求5所述的药物组合物，以及药学上可接受的辅料或载体；
优选地，所述药物制剂为口服制剂或外用制剂；
优选地，所述药物制剂选自混悬剂、胶囊剂、乳状剂、泡沫剂、乳状剂和混悬剂。
7.赛葵挥发油或其药物组合物在制备预防和/或治疗癌症的产品中的应用，优选地，所述赛葵挥发油如权利要求1至3中任一项所述；所述药物组合物如权利要求5所述。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述癌症选自肝癌和乳腺癌；
优选地，所述预防和/或治疗癌症的产品选自食品、药品和保健品。
9.赛葵挥发油在制备抑制细菌的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述细菌选自金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌；
优选地，所述产品选自食品、药品、化妆品和保健品。
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