CN109180702A - 一种噻吩并嘧啶酮化合物及其用途 - Google Patents
一种噻吩并嘧啶酮化合物及其用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于化学医药领域，具体一种噻吩并嘧啶酮化合物，其结构式为：本发明合成了一种新型噻吩并嘧啶酮化合物，证实了化合物能够对Tankyrase产生较好的抑制作用，无明显的毒性作用，用该化合物处理STF3A细胞后，发现可明显抑制肿瘤细胞增殖，具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择；该新型噻吩并嘧啶酮化合物能增强wnt信号途径中轴蛋白的表达水平,诱导β‑连环蛋白的降解，从而抑制肿瘤细胞增殖，能够作为多种肿瘤细胞的临床前药候选化合物，具有进一步研究开发的潜力；还提供了该新型噻吩并嘧啶酮化合物，该制备方法能够得到较高产率高生物活性的化合物，该使得该化合物类药性显著，具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及化学合成药物技术领域，具体是指一种噻吩并嘧啶酮化合物及其用途。
背景技术
端粒是真核细胞染色体末端的一个特殊结构，由一段具有特定重复序列的DNA和端粒结合蛋白组成，是维持染色体结构稳定的重要因素。端粒DNA的复制不是通过DNA聚合酶完成的，而是由端粒酶催化合成后，直接添加到染色体末端形成的。
目前已知人的端粒功能需要两个特殊的端粒结合蛋白TRF1(telomericrepeatbindingfactor1)和TRF2(telomericrepeatbindingfactor2)。
Tankyrase是人端粒复合物中的一个重要组分，其基因定位于人第8号染色体。它是一个由1327个氨基酸残基构成的蛋白质，其中心区域含有24个锚蛋白的重复区，C末端与聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶的催化区域同源，可以控制TRF1与端粒DNA的结合与分离。
端粒结构的稳定性与细胞癌变有极密切的关系，Tankyrase与端粒酶活性升高呈正相关，因而Tankyrase抑制剂可诱导端粒的缩短，进而诱导肿瘤细胞凋亡。在少数以ALT机制维持端粒长度相对恒定的肿瘤细胞中，Tankyrase抑制剂则通过抑制细胞的有丝分裂诱导肿瘤细胞的生长阻滞。此外，Tankyrase抑制剂增强wnt信号途径中轴蛋白的表达水平，诱导β-连环蛋白的降解，从而抑制肿瘤细胞增殖。由于Tankyrase抑制剂可通过多种途径拮抗肿瘤细胞的生长，因而其表现出广谱的抗肿瘤活性。在端粒酶活性升高的生殖系统(卵巢和睾丸)及多种肿瘤细胞如高分化非何杰金氏淋巴瘤、结肠癌、肝癌等中，检测到Tankyrase表达升高，因此Tankyrase的表达与端粒酶活性呈正相关关系。Tankyrase已成为继端粒酶之后又一个同细胞的癌变和衰老密切相关的蛋白质。Tankyrase被认为是细胞癌变机制和癌症治疗靶标研究的新热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够在制备治疗癌症药物中进行使用的噻吩并嘧啶酮化合物。
本发明还有一个目的在于提供一种活性较高，选择性强，类药性显著的Tankyrase抑制剂以及相应治疗癌症的药物。
本发明还有一个目的在于提供该Tankyrase抑制剂的具体应用。
本发明提供一种噻吩并嘧啶酮化合物，其结构式如下：
其具体包含如下化合物：
本发明还还提供一种上述式I所示的噻吩并嘧啶酮化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备抑制Tankyrase活性的靶向药物中的用途。
本发明还还提供上述式I所示的抑制Tankyrase活性的噻吩并嘧啶酮化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途。
本发明还提供一种Tankyrase活性抑制剂，以上述噻吩并嘧啶酮化合物为主要活性成分的生物药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物，能够直接使用或者以药物组合物的形式使用。
本发明还提供一种治疗癌症的药物，以上述的Tankyrase活性抑制剂为主要成分，其余为药学上可接受的，对人和动物无毒、无惰性的药用·载体和/或赋形剂辅助性成分制备而成。
为了进一步得到本发明的所述的治疗癌症的药物，所述的药用载体或赋形剂为一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。
为了进一步得到本发明的所述的治疗癌症的药物，所述药物采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型：喷剂、气雾剂、液体制剂或固体制剂；所述的液体制剂包括注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂或糖浆剂；所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂或冲剂。
为了进一步得到本发明的所述的治疗癌症的药物，所述药物的给药途径为口服、舌下给药或粘膜透析；所述的注射包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射或皮下注射。
为了进一步得到本发明的所述的治疗癌症的药物，治疗的癌症包括高分化非何杰金氏淋巴瘤、结肠癌、肝癌。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
(1)本发明合成了一种新型噻吩并嘧啶酮化合物，证实了化合物能够对Tankyrase产生较好的抑制作用，无明显的毒性作用，用该化合物处理STF3A细胞后，发现可明显抑制肿瘤细胞增殖，具有很好的药用潜力，为临床用药提供了一种新的潜在选择；
(2)本发明提供的新型噻吩并嘧啶酮化合物能增强wnt信号途径中轴蛋白的表达水平，诱导β-连环蛋白的降解，从而抑制肿瘤细胞增殖，能够作为多种肿瘤细胞的临床前药候选化合物，具有进一步研究开发的潜力；
(3)本发明还提供的新型噻吩并嘧啶酮化合物治疗或预防癌症均有作用，为本领域中Tankyrase抑制剂的开发、抗肿瘤的开发提供了新的选择，类药性显著，具有很好的应用前景。
附图说明
图1为本发明中化合物14对Tankyrase的抑制活性曲线图；
图2为本发明中化合物17对Tankyrase的抑制活性曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。
为使本发明的目的、工艺条件及优点作用更加清楚明白，结合以下实施实例，对本发明作进一步详细说明，此处所描述的具体实施实例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明所给通式所包含化合物具体合成路线如下：
实施例1：
化合物1：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、四氢呋喃，三乙胺，室温，2h；
b、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，3h；
c、无水四氢呋喃，三乙胺，0℃至室温，3h；
d、N，N-二甲基甲酰胺，DIEA，80℃，12h。
具体合成过程为：
(1)制备中间体I
将2g 4-(叔丁氧羰基)哌嗪溶于四氢呋喃中，加入1.5mL三乙胺，室温条件下缓慢滴入1.75g 3-硝基苯甲酰氯，室温反应2h，浓缩反应液，加入二氯甲烷，用饱和碳酸钠、水、饱和氯化钠溶液依次对有机相萃取，使用无水硫酸镁干燥有机相，浓缩得淡黄色固体，即为中间体I，产率为75％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.81(s,1H),8.71(d,J＝9.1Hz,1H),8.28(dd,J＝8.4,7.3Hz,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),3.68(dd,J＝22.5,13.2Hz,4H),3.51(dd,J＝23.1,11.5Hz,4H),1.42(s,9H).
(2)制备中间体II
将500mg中间体I溶于15mL二氯甲烷中，加入3mL三氟乙酸，室温反应3h，TLC显示反应完成，浓缩反应液，加水后调pH至8.0，用二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥有机相后浓缩，得中间体II，产率为90％，无需经进一步纯化继续使用。
(3)制备中间体III
将200mg中间体II溶于15mL无水四氢呋喃中，将反应置于低温条件下进行搅拌，加入150μL三乙胺，接着缓慢滴入200μL2-巯基噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(3H)-酮，将反应逐渐升至室温，反应3h后，浓缩反应液，用饱和碳酸钠、水、饱和氯化钠溶液与二氯甲烷依次萃取，无水硫酸镁干燥有机相后进行柱层析得白色固体，即为中间体III，产率为60％。
其1H NMR数据如下
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.72(s,1H),8.46(d,J＝8.5Hz,1H),8.34(d,J＝7.3Hz,1H),7.85(d,J＝7.8Hz,1H),4.24(s,2H),3.63(dd,J＝23.9,12.0Hz,4H),3.51(dd,J＝24.7,11.3Hz,4H).
(4)制备目的化合物1
将322mg中间体侧III，原料3 200mg溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入200μLDIEA,80℃反应12h，浓缩反应液进行柱层析分离，二氯甲烷/甲醇＝50:1洗脱出产物，得淡黄色固体，即为化合物1，产率为50％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.81(s,1H),8.33(d,J＝8.3Hz,1H),8.28(s,1H),8.15(d,J＝4.0Hz,1H),7.92(d,J＝7.4Hz,1H),7.78(t,J＝7.8Hz,1H),7.29(d,J＝4.7Hz,1H),4.29(d,J＝25.3Hz,2H),4.09–3.35(m,8H).
实施例2：
化合物2：
其合成路线与制备过程与化合物1相同，这里不在赘述。
化合物2的产率为72％。
1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87(d,J＝3.9Hz,1H),7.52(s,1H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),7.19(d,J＝7.3Hz,1H),7.03–6.94(m,1H),6.90(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),3.89(s,3H),3.82(s,2H),3.44(s,2H),3.11(s,1H),3.00(d,J＝10.9Hz,2H),2.00(s,2H),1.87(s,2H).
实施例3：
化合物3：
其合成路线与制备过程与化合物1相同，这里不在赘述。
化合物3产率为62％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.82(s,1H),8.15(d,J＝5.2Hz,1H),8.09(t,J＝7.7Hz,1H),7.66(d,J＝7.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,1H),7.29(t,J＝5.8Hz,1H),7.13(d,J＝8.3Hz,1H),7.03(t,J＝7.5Hz,1H),4.15–4.02(m,2H),3.87(s,3H),3.14(d,J＝21.3Hz,1H),3.03–2.76(m,2H),2.05–1.78(m,3H),1.59(d,J＝10.5Hz,1H),1.38(dt,J＝27.9,13.4Hz,2H).
实施例4：
化合物4：
其合成路线与制备过程与化合物1相同，这里不在赘述。
化合物4的产率为67％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),8.17(t,J＝4.7Hz,1H),7.47-7.37(m,1H),7.33-7.17(m,2H),7.10(t,J＝7.2Hz,1H),7.02(q,J＝7.0Hz,1H),4.33(s,1H),4.26(d,J＝5.5Hz,2H),3.81(d,J＝7.2Hz,3H),3.72(d,J＝19.8Hz,2H),3.56(s,3H),3.45(s,1H),3.27(d,J＝16.9Hz,1H).
实施例5：
化合物5：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、四氢呋喃，三乙胺，室温，2h；
b、甲醇，钯碳，氢气，室温，3h；
c、无水四氢呋喃，三乙胺，0℃至室温，3h；
d、N，N-二甲基甲酰胺，DIEA，80℃，12h。
具体制备过程为：
(1)制备中间体IV
将2g 3-氨基苯异丙醚，溶于四氢呋喃中，加入1.5mL三乙胺，室温条件下缓慢滴入2.1g4-硝基苯甲酰氯，室温反应2h，浓缩反应液，加入二氯甲烷，用饱和碳酸钠、水、饱和氯化钠溶液依次对有机相萃取，无水硫酸镁干燥有机相后进行柱层析得淡黄色固体，即为中间体IV，产率为85％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.29(s,1H),8.39(d,J＝8.4Hz,2H),8.21(d,J＝7.7Hz,2H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),7.33(s,1H),7.22(dd,J＝7.3,6.7Hz,1H),6.78(d,J＝6.4Hz,1H),4.69(dd,J＝8.5,5.9Hz,1H),1.29(s,6H).
(2)制备中间体V
将500mg中间体IV溶于20mL甲醇中，加入170mg钯碳，在氢气气氛下室温反应3h，TLC显示反应完成，将反应液用硅藻土过滤，浓缩滤液得褐黄色固体，即为中间体V，产率为80％，无需进一步纯化继续使用。
(3)制备中间体VI
将200mg中间体V溶于15mL无水四氢呋喃中，将反应置于低温条件下进行搅拌，加入200μL三乙胺，接着缓慢滴入200μL氯乙酰氯，缓慢升至室温，反应3h后，浓缩反应液，加入饱和碳酸钠溶液抽滤，用乙醇洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体VI，产率为75％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.33(s,1H),10.02(s,1H),8.39(d,J＝7.6Hz,2H),7.82(d,J＝8.6Hz,2H),7.75(d,J＝8.9Hz,1H),7.46(d,J＝7.7Hz,1H),7.38(s,1H),7.29(dd,J＝8.5,4.7Hz,1H),4.77(dd,J＝8.3,7.5Hz,1H),1.35(s,6H).
(4)制备目的化合物5
将50mg中间体VI，65mg2-巯基噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(3H)-酮溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入45μL DIEA，80℃反应12h，浓缩反应液进行柱层析分离，二氯甲烷/甲醇＝50:1洗脱出产物，得淡黄色固体。即为化合物5，产率为50％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),10.65(s,1H),10.06(s,1H),8.14(d,J＝5.2Hz,1H),7.94(d,J＝8.7Hz,2H),7.73(d,J＝8.7Hz,2H),7.44(s,1H),7.32(d,J＝8.2Hz,1H),7.25–7.17(m,2H),6.64(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),4.23(s,2H),1.29(s,3H),1.28(s,3H).
实施例6：
化合物6：
其合成路线与制备过程与化合物5相同，这里不在赘述。
该化合物6的产率为71％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),10.66(s,1H),9.99(s,1H),8.14(d,J＝5.1Hz,1H),7.97(d,J＝8.5Hz,2H),7.74(d,J＝8.5Hz,2H),7.60(t,J＝7.5Hz,1H),7.29(dd,J＝15.4,6.8Hz,2H),7.24–7.16(m,2H),4.23(s,2H).
实施例7：
化合物7：
其合成路线与制备过程与化合物5相同，这里不在赘述。
该化合物7的产率为63％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),10.59(d,J＝4.5Hz,1H),10.20(s,1H),8.14(d,J＝5.2Hz,1H),8.11(s,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,1H),7.64(d,J＝7.7Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.43(s,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.22(dd,J＝9.9,6.6Hz,2H),6.66(d,J＝8.2Hz,1H),4.22(s,2H),1.29(s,3H),1.28(s,3H).
实施例8：
化合物8：
其合成路线与制备过程与化合物5相同，这里不在赘述。
该化合物8的产率为54％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),10.64(s,1H),9.30(s,1H),8.15(d,J＝5.2Hz,1H),7.95(d,J＝8.7Hz,2H),7.79(d,J＝6.9Hz,1H),7.73(d,J＝8.7Hz,2H),7.22(d,J＝5.2Hz,1H),7.17(t,J＝7.8Hz,1H),7.09(d,J＝7.5Hz,1H),6.97(t,J＝7.6Hz,1H),4.23(s,2H),3.84(s,3H).
实施例9：
化合物9：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、二氯甲烷，HATU，DIEA，35℃，12h；
b、四氢呋喃，碳酸钾，0℃至40℃，12h；
c、四氢呋喃，硫氰酸铵，65℃，6h；
d、乙醇、水，氢氧化钾，85℃，4h；
e、N,N-二甲基甲酰胺，DIEA，80℃，12h。
具体制备过程为：
(1)制备中间体VII
将300mg对氨基苯甲酸、HATU 400mg、DIEA 600μL溶于二氯甲烷中，常温搅拌2小时，加入305mg 2-甲氧基苯胺，35℃反应12小时。反应结束浓缩反应液，使用二氯甲烷、饱和食盐水萃取，浓缩萃取液，得黄色固体，即为中间体VII，产率为75％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.15(s,1H),7.85(d,J＝6.8Hz,1H),7.53(d,J＝7.5Hz,2H),7.24(d,J＝8.7Hz,2H),7.18(d,J＝8.7Hz,1H),7.08(dd,J＝7.2,6.5Hz,1H),6.99(dd,J＝8.3,6.9Hz,1H),6.27(s,2H),3.83(s,3H).
(2)制备中间体VIII
将200mg中间体VII溶于四氢呋喃中，加入400μL4-硝基苯甲酰氯、碳酸钾600mg，40℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用二氯甲烷、饱和食盐水萃取，浓缩萃取液，得偏白色固体，未经进一步纯化，即为中间体VIII，产率为60％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.09(s,1H),9.29(s,1H),7.89(d,J＝9.2Hz,2H),7.75(d,J＝8.8Hz,2H),7.74(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(dd,J＝9.8,7.2Hz,1H),7.08(d,J＝8.1Hz,1H),6.97(dd,J＝9.5,6.8Hz,1H),4.32(s,2H),3.85(s,3H).
(3)制备中间体IX
将4g苯甲酰氯，常温下加入2g硫氰酸铵的四氢呋喃溶液中，65℃回流3小时，加入3g 3-氨基-4-甲基噻吩-2-甲酸甲酯，65℃继续反应3小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体IX，无需进一步纯化继续使用。
(4)制备中间体X
将2.5g中间体IX溶于乙醇、水混合液中，加入氢氧化钾水溶液，85℃回流反应4小时，反应液冷却至常温后减压浓缩，加入盐酸溶液调节pH值至2，产生大量白色沉淀，将溶液置于85℃回流，趁热过滤，滤饼使用乙醇洗涤，得灰白色固体，即为中间体X，产率为50％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.90(s,1H),12.51(s,1H),7.79(s,1H),2.29(s,3H).
(5)制备目的化合物9
将100mg中间体X，160mg中间体VIII，DIEA 500μL溶于N，N-二甲基甲酰胺中，80℃回流反应12小时，将反应液抽滤，使用乙醇洗涤滤饼，得白色固体，即为化合物9，产率为65％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.95(s,1H),10.72(s,1H),9.37(s,1H),8.01(d,J＝8.7Hz,2H),7.86(d,J＝6.8Hz,1H),7.84–7.78(m,3H),7.28–7.20(m,1H),7.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),4.25(s,2H),3.91(s,3H),2.23(s,3H).
实施例10：
化合物10：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、乙腈，三乙胺，85℃，12h；
b、乙醇，雷尼镍，水合肼，室温，3h；
c、二氯甲烷，三乙胺，三光气，室温，24h；
d、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，12h；
e、四氢呋喃，DIEA，室温，4h
f、甲醇，水，氢氧化钾，65℃，1h
g、N，N-二甲基甲酰胺，DIEA，HATU，室温，18；
具体制备过程为：
(1)制备中间体XI
将1.5g 2-氟-3-硝基吡啶，1.5g反式-(4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯溶于乙腈中，加入4mL三乙胺，85℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入柠檬酸的水溶液，30℃加热搅拌，趁热抽滤，滤饼用少量乙醚洗涤，得橙色固体，即为中间体XI，产率为65％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.49(d,J＝2.8Hz,1H),8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.08(d,J＝7.6Hz,1H),6.77(dd,J＝8.1,4.6Hz,2H),4.15–4.00(m,1H),3.27(d,J＝7.4Hz,1H),1.96(d,J＝11.3Hz,2H),1.82(d,J＝11.7Hz,2H),1.47(dd,J＝24.4,12.0Hz,2H),1.38(s,9H),1.29(dd,J＝24.3,12.0Hz,2H).
(2)制备中间体XII
将1g中间体XI溶于乙醇中，加入3mL雷尼镍、1mL水合肼，常温密闭反应3小时。反应液使用硅藻土抽滤。将滤液浓缩柱层析。石油醚/乙酸乙酯＝3:1得洗脱液，浓缩洗脱液得偏墨绿色油状物，加入少量乙醚与大量石油醚，进行超声，抽滤得白色固体，即为中间体XII，产率为80％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.79(d,J＝8.0Hz,1H),6.52(d,J＝2.2Hz,1H),6.43(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.37(d,J＝8.5Hz,1H),4.83(s,2H),4.23(d,J＝7.5Hz,1H),3.21(s,1H),3.05(s,1H),1.97(d,J＝11.8Hz,2H),1.79(d,J＝10.8Hz,2H),1.34(s,J＝29.8Hz,9H),1.20(dt,J＝36.9,12.6Hz,4H).
(3)制备中间体XIII
将2g中间体XII溶于四氢呋喃中，加入700μL三乙胺，随后滴加1.2mL三光气的四氢呋喃溶液，室温反应24小时。向反应液中加入碳酸钾溶液调pH至弱碱性，浓缩反应液，向其中补加入水，40℃搅拌30分钟，趁热抽滤，滤饼用乙醇、石油醚洗涤，得粉色固体，即为中间体XIII，产率为50％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.07(s,1H),7.94(d,J＝5.2Hz,1H),7.27(d,J＝7.6Hz,1H),6.98(dd,J＝7.6,5.3Hz,1H),6.79(d,J＝7.7Hz,1H),4.18(t,J＝12.2Hz,1H),3.32(s,1H),2.42(dd,J＝24.4,12.2Hz,2H),1.90(d,J＝11.2Hz,2H),1.69(d,J＝11.5Hz,2H),1.40(s,9H),1.36–1.27(m,2H).
(4)制备中间体XIV
将100mg中间体XIII溶于二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体XIV，产率为90％，无需进一步纯化继续使用。
(5)制备中间体XV
将430mg2-巯基噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(3H)-酮溶于含有DIEA的四氢呋喃溶液中，常温滴加465mg溴乙酸乙酯，室温反应4小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用柠檬酸水溶液和二氯甲烷进行萃取，将萃取液减压浓缩，抽滤，使用乙醇洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XV，产率为80％，未经进一步纯化继续使用。
(6)制备中间体XVI
将243mg中间体XV溶于甲醇、水混合液中，加入80mg氢氧化钾，65℃反应1小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入酸液析出固体，抽滤，使用乙醇、石油醚洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XVI，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.12(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),3.96(s,2H).
(7)制备目的化合物10
将170mg中间体XVI溶于N，N-二甲基甲酰胺中，加入350mg DIEA、290mg HATU，室温搅拌2小时。加入中间体XIV，室温反应16小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入硫代硫酸钠水溶液，用二氯甲烷进行萃取，有机相用水，饱和氯化钠洗涤，硫酸镁干燥后柱层析，二氯甲烷/甲醇＝10：1洗脱，浓缩洗脱液得粉红色固体，即为化合物10，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.89(s,1H),11.12(s,1H),8.31(d,J＝7.8Hz,1H),8.15(d,J＝5.2Hz,1H),8.03-7.87(m,1H),7.27(t,J＝5.4Hz,2H),6.98(dd,J＝7.5,5.3Hz,1H),4.24(t,J＝11.9Hz,1H),3.93(s,2H),3.62(d,J＝7.8Hz,1H),2.48-2.35(m,2H),1.91(d,J＝11.6Hz,2H),1.71(d,J＝11.1Hz,2H),1.39(dd,J＝24.2,11.7Hz,2H).
实施例11：
化合物11：
其合成路线与制备过程与化合物10相同，这里不在赘述。
该化合物11的产率为58％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.89(s,1H),11.03(s,1H),8.25(d,J＝7.6Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),7.26(d,J＝5.2Hz,1H),6.99(d,J＝6.7Hz,2H),4.16(s,1H),3.93(s,2H),3.73(s,1H),2.22(dd,J＝23.1,12.5Hz,2H),1.92(d,J＝11.9Hz,2H),1.68(d,J＝11.1Hz,2H),1.41(dd,J＝23.1,11.7Hz,2H).
实施例12：
化合物12：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、二氯甲烷，HATU，DIEA，35℃，12h，
b、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，12h，
c、四氢呋喃，碳酸钾，0℃至40℃，12h，
d、N,N-二甲基甲酰胺，DIEA，80℃，6h。
具体制备过程为：
(1)制备中间体XVII
将1g1-BOC-吡咯烷-3-甲酸、HATU 2.12g、DIEA 720mg溶于二氯甲烷中，常温搅拌2小时，加入630mg 2-甲氧基苯胺，35℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，柱层析，石油醚/乙酸乙酯＝4:1得洗脱液，浓缩洗脱液，得橙色油状物，即为中间体XVII，产率为65％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝7.9Hz,1H),7.88(s,1H),7.06(t,J＝7.7Hz,1H),6.96(t,J＝7.6Hz,1H),6.88(d,J＝8.0Hz,1H),3.89(s,3H),3.68–3.52(m,2H),3.43(ddd,J＝26.2,16.1,7.8Hz,2H),3.14–2.98(m,1H),2.36–2.08(m,2H),1.47(s,9H).
(2)制备中间体XVIII
将2.5g中间体XVII溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体XVIII，产率为85％，无需进一步纯化继续使用。
(3)制备中间体XIX
将2g制备中间体XVIII溶于四氢呋喃中，加入1.5g氯乙酰氯，2.5g碳酸钾，40℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用二氯甲烷、饱和食盐水萃取，浓缩有机相，柱层析，石油醚/乙酸乙酯＝5:1洗脱，浓缩洗脱液，得橙色油状物，即为中间体XIX，产率为70％，无需进一步纯化继续使用。
(4)制备目的化合物12
将700mg2-巯基噻吩并[2,3-d]嘧啶酮，中间体XIX1g溶于N,N-二甲基甲酰胺中，85℃回流反应6小时，反应液冷却至常温后减压浓缩，使用乙酸乙酯洗脱杂质、二氯甲烷/乙酸乙酯＝500：6.5洗脱产品，减压浓缩洗脱液，得土黄色固体，即为化合物12，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.86(s,1H),9.36(d,J＝20.6Hz,1H),8.14(d,J＝3.7Hz,1H),7.93(t,J＝8.6Hz,1H),7.31(d,J＝18.6Hz,1H),7.14–7.01(m,2H),6.91(d,J＝6.9Hz,1H),4.23–4.06(m,2H),3.93(d,J＝8.2Hz,1H),3.84(d,J＝5.0Hz,3H),3.72–3.61(m,1H),3.51(d,J＝9.2Hz,2H),2.10(dd,J＝78.6,21.9Hz,2H),1.24(s,1H).
实施例13：
化合物13：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、二氯甲烷，HATU，DIEA，35℃，12h
b、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，12h
c、四氢呋喃，DIEA，室温，4h
d、甲醇，水，氢氧化钾，65℃，1h
e、N，N-二甲基甲酰胺，HATU，DIEA，35℃，18h。
具体合成过程为：
(1)制备中间体XX
将600mg N-BOC-氨基环己胺羧酸、HATU 1.2g、DIEA 390mg加入二氯甲烷中，常温搅拌30分钟，加入305mg 2-甲氧基苯胺，35℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入水，滴加少量盐酸使反应液成酸性，40S℃加热搅拌15分钟，趁热抽滤，滤饼用少量乙醚洗涤，烘干，得白色固体，即为中间体XX，产率为85％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),7.32(s,1H),7.17(t,J＝8.0Hz,1H),7.10(d,J＝7.8Hz,1H),6.75(d,J＝7.9Hz,1H),6.59(d,J＝8.1Hz,1H),3.71(s,3H),3.18(s,1H),2.20(d,J＝12.2Hz,1H),1.82(s,4H),1.49–1.40(m,2H),1.38(s,9H),1.25–1.15(m,2H).
(2)制备中间体XXI
将150mg中间体XX溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体2，产率为75％，未经进一步纯化继续使用
(3)制备中间体XV
将430mg2-巯基噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(3H)-酮溶于含有DIEA的四氢呋喃溶液中，常温滴加465mg溴乙酸乙酯，室温反应4小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用柠檬酸水溶液和二氯甲烷进行萃取，将萃取液减压浓缩，抽滤，使用乙醇洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XV，产率为80％，未经进一步纯化继续使用。
(4)制备中间体XVI
将243mg中间体XV溶于甲醇、水混合液中，加入80mg氢氧化钾，65℃反应1小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入酸液析出固体，抽滤，使用乙醇、石油醚洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XVI，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.12(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),3.96(s,2H).
(5)制备目的化合物13
将104mg中间体XVI溶于二氯甲烷中，加入100μL DIEA、196mg HATU，室温搅拌2小时。加入中间体2的N，N-二甲基甲酰胺溶液，35℃反应18小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入柠檬酸水溶液调pH至2，60℃搅拌15分钟，趁热抽滤，使用水、乙醇、乙醚洗涤滤饼，得棕红色固体，即为化合物13，产率为50％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.89(s,1H),8.97(s,1H),8.21(d,J＝7.7Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),7.94(d,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(q,J＝8.1Hz,2H),6.88(t,J＝7.3Hz,1H),3.91(s,2H),3.82(s,3H),3.51(d,J＝7.5Hz,1H),1.84(d,J＝9.4Hz,4H),1.45(dd,J＝23.2,12.4Hz,2H),1.24(dd,J＝21.9,12.8Hz,3H).
实施例14：
化合物14：
具体合成路线及制备方法与化合物13相同，这里不再赘述。
该化合物14的产率为70％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),9.76(s,1H),8.75–7.84(m,3H),7.30(s,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.56(d,J＝7.8Hz,1H),4.59–4.44(m,1H),4.33(s,1H),3.91(s,2H),3.51(s,1H),1.84(d,J＝10.6Hz,4H),1.24(t,J＝8.0Hz,8H).
实施例15：
化合物15：
具体合成路线及制备方法与化合物13相同，这里不再赘述。
该化合物15的产率为66％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),10.27(s,1H),8.19(d,J＝7.8Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),8.10-7.61(m,4H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),3.91(s,2H),2.32(s,1H),1.87(d,J＝10.7Hz,4H),1.47(d,J＝11.0Hz,2H),1.24(dd,J＝21.3,9.0Hz,3H).
实施例16：
化合物16：
具体合成路线及制备方法与化合物13相同，这里不再赘述。
该化合物16的产率为62％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),8.38(t,J＝6.0Hz,1H),8.16(t,J＝6.4Hz,2H),7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.40(d,J＝8.1Hz,2H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),4.32(d,J＝5.9Hz,2H),3.90(s,2H),3.55–3.46(m,1H),2.14(t,J＝11.8Hz,1H),1.81(t,J＝13.2Hz,4H),1.42(dd,J＝25.8,13.0Hz,2H),1.20(dd,J＝23.6,11.2Hz,2H).
实施例17：
化合物17：
具体合成路线及制备方法与化合物13相同，这里不再赘述。
该化合物17的产率为66％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),9.80(s,1H),8.19(d,J＝7.6Hz,1H),8.16(d,J＝5.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.24(d,J＝5.3Hz,1H),7.17(t,J＝8.0Hz,1H),7.11(d,J＝7.8Hz,1H),6.59(d,J＝7.6Hz,1H),3.91(s,2H),3.71(s,3H),2.26(s,2H),1.85(s,3H),1.46(d,J＝10.9Hz,2H),1.24(s,3H).
实施例18：
化合物18：
具体合成路线及制备方法与化合物13相同，这里不再赘述。
该化合物18的产率为76％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),9.67(s,1H),8.18(dd,J＝11.9,6.4Hz,2H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),3.91(s,2H),3.70(s,3H),3.52(s,1H),2.26(dd,J＝30.2,18.6Hz,1H),1.83(d,J＝12.0Hz,4H),1.47(dd,J＝23.7,11.6Hz,2H),1.23(dd,J＝22.7,11.8Hz,2H).
实施例19：
化合物19：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、乙腈，三乙胺，85℃，12h；
b、乙醇，雷尼镍，水合肼，室温，3h；
c、二氯甲烷，三乙胺，三光气，室温，24h；
d、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，12h；
e、四氢呋喃，DIEA，室温，4h；
f、甲醇，水，氢氧化钾，65℃，1h；
g、N，N-二甲基甲酰胺，DIEA，HATU，室温，18h。
具体合成过程为：
(1)制备中间体XXII
将1.5g 5-氯-2-氟硝基苯，1.5g反式-(4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯溶于乙腈中，加入三乙胺，85℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入柠檬酸的水溶液，30℃加热搅拌，趁热抽滤，滤饼用少量乙醚洗涤，得橙色固体，即为中间体XXII，产率为75％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.04(d,J＝2.6Hz,1H),7.88(d,J＝7.7Hz,1H),7.53(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),7.21(d,J＝9.4Hz,1H),6.81(d,J＝7.1Hz,1H),3.55(d,J＝6.9Hz,1H),3.28(s,1H),2.00(d,J＝11.5Hz,2H),1.81(d,J＝11.2Hz,2H),1.42(s,2H),1.38(s,9H),1.33(d,J＝13.2Hz,2H).
(2)制备中间体XXIII
将1g中间体XXII溶于乙醇中，加入3mL雷尼镍、1mL水合肼，常温密闭反应3小时。反应液使用硅藻土抽滤。将滤液浓缩拌样、柱层析。石油醚/乙酸乙酯＝1:1洗脱，浓缩洗脱液得偏墨绿色油状物，加入少量乙醚与大量石油醚，进行超声，抽滤得白色固体，即为中间体XXIII，产率为65％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.79(d,J＝8.0Hz,1H),6.52(d,J＝2.2Hz,1H),6.43(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.37(d,J＝8.5Hz,1H),4.83(s,2H),4.23(d,J＝7.5Hz,1H),3.21(s,1H),3.05(s,1H),1.97(d,J＝11.8Hz,2H),1.79(d,J＝10.8Hz,2H),1.34(s,J＝29.8Hz,9H),1.20(dt,J＝36.9,12.6Hz,4H).
(3)制备中间体XXIV
将1g中间体XXIII溶于四氢呋喃中，加入700μL三乙胺，随后滴加760μL三光气的四氢呋喃溶液(5分钟内滴加完毕)，室温反应24小时。反应液中加入碳酸钾溶液调pH至9，浓缩反应液，向其中加入20mL水，40℃搅拌30分钟，趁热抽滤，滤饼用乙醇、石油醚洗涤，得粉色固体，即为中间体XXIV，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),6.99(d,J＝8.1Hz,2H),6.81(d,J＝7.9Hz,1H),4.08(d,J＝11.8Hz,1H),3.60(s,1H),2.18(dd,J＝23.2,11.8Hz,2H),1.89(d,J＝11.7Hz,2H),1.76(s,1H),1.66(d,J＝11.4Hz,2H),1.37(s,J＝17.9Hz,9H),1.37–1.28(m,2H).
(4)制备中间体XXV
将100mg中间体XXIV溶于二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体XXV，产率为88％，未经进一步纯化继续使用。
(5)制备中间体XXVI
将400mg 2-巯基噻吩并[2,3-d]嘧啶酮，溶于含有DIEA的四氢呋喃溶液中，常温滴加450mg溴乙酸乙酯，室温反应4小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用柠檬酸水溶液和二氯甲烷进行萃取，萃取液减压浓缩，使用乙醇进行洗涤，抽滤，得白色固体，即为中间体XXVI，产率为75％。未经进一步纯化继续使用。
(6)制备中间体XXVII
将中间体XXVI 250mg溶于甲醇、水混合液中，加入氢氧化钾100mg，65℃反应1小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入酸液析出固体，使用乙醇、石油醚进行洗涤，抽滤，得白色固体，即为中间体XXVII，产率为70％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.56(s,1H),9.35(s,1H),7.72(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),3.96(s,2H).
(7)制备目的化合物19
将100mg中间体XXVII溶于二氯甲烷中，加入70mg DIEA、190mg HATU，室温搅拌2小时。加入中间体XXV，室温反应18小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入柠檬酸水溶液，60℃搅拌30分钟，趁热抽滤，用乙醇、乙醚洗涤滤饼，得粉红色固体，即为化合物19，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),11.02(s,1H),8.24(d,J＝7.6Hz,1H),7.41(dd,J＝11.1,7.5Hz,2H),7.30(d,J＝5.7Hz,1H),6.98(d,J＝6.5Hz,2H),4.19(s,1H),3.92(s,2H),3.72(s,1H),2.22(d,J＝11.8Hz,2H),1.92(d,J＝11.5Hz,2H),1.69(d,J＝10.2Hz,2H),1.40(d,J＝12.3Hz,2H).
实施例20：
化合物20：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、二氯甲烷，HATU，DIEA，35℃，12h；
b、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，12h；
c、四氢呋喃，DIEA，室温，4h；
d、甲醇，水，氢氧化钾，65℃，1h；
e、N，N-二甲基甲酰胺，DIEA，HATU，35℃，18h。具体合成过程为：
(1)制备中间体XXVIII
将300mg邻甲氧基苯甲酸、HATU 400mg、DIEA 600μL溶于二氯甲烷中，常温搅拌2小时，加入100mg(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯，35℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，柱层析，石油醚/乙酸乙酯＝4:1得洗脱液，浓缩洗脱液，得白色固体，即为中间体XXIX，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.02(s,1H),9.15(s,1H),7.92(s,1H),7.62(d,J＝45.1Hz,2H),7.59(s,1H),7.33(s,1H),7.28(s,1H),7.19(d,J＝23.0Hz,2H),3.83(s,3H),1.38(s,9H).
(2)制备中间体XXIX
将200mg中间体XXVIII溶于二氯甲烷中，加入适量三氟乙酸，室温反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体XXIX，产率为90％，未经进一步纯化继续使用。
(3)制备中间体XV
将430mg2-巯基噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(3H)-酮溶于含有DIEA的四氢呋喃溶液中，常温滴加465mg溴乙酸乙酯，室温反应4小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用柠檬酸水溶液和二氯甲烷进行萃取，将萃取液减压浓缩，抽滤，使用乙醇洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XV，产率为80％，未经进一步纯化继续使用。
(4)制备中间体XVI
将243mg中间体XV溶于甲醇、水混合液中，加入80mg氢氧化钾，65℃反应1小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入酸液析出固体，抽滤，使用乙醇、石油醚洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XVI，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.12(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),3.96(s,2H).
(5)制备目的化合物20
将100mg XVI溶于二氯甲烷中，加入DIEA 250μL、HATU 150mg，室温搅拌2小时。随后加入100mg中间体XXIX的N，N-二甲基甲酰胺溶液，35℃反应18小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入柠檬酸水溶液60℃搅拌15分钟，趁热抽滤，使用水、乙醇、乙醚洗涤滤饼，得粉色固体，即为化合物20，产率为80％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.90(s,1H),10.34(s,1H),10.08(s,1H),8.15(s,1H),7.61(d,J＝45.1Hz,6H),7.21(d,J＝23.0Hz,2H),7.06(s,1H),4.18(s,2H),3.90(s,3H).
实施例21：
化合物21：
合成路线如下：
其中，各步骤反应条件如下：
a、二氯甲烷，HATU，DIEA，35℃，12h；
b、二氯甲烷，三氟乙酸，室温，12h；
c、四氢呋喃，DIEA，室温，4h；
d、甲醇，水，氢氧化钾，65℃，1h；
f、N，N-二甲基甲酰胺，DIEA，HATU，35℃，18h
具体合成过程为：
(1)制备中间体XXVIII
将300mg邻甲氧基苯甲酸、HATU 400mg、DIEA 600μL溶于二氯甲烷中，常温搅拌2小时，加入100mg(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯，35℃反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，柱层析，石油醚/乙酸乙酯＝4:1得洗脱液，浓缩洗脱液，得白色固体，即为中间体XXIX，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.02(s,1H),9.15(s,1H),7.92(s,1H),7.62(d,J＝45.1Hz,2H),7.59(s,1H),7.33(s,1H),7.28(s,1H),7.19(d,J＝23.0Hz,2H),3.83(s,3H),1.38(s,9H).
(2)制备中间体XXIX
将200mg中间体XXVIII溶于二氯甲烷中，加入适量三氟乙酸，室温反应12小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，得中间体XXIX，产率为90％，未经进一步纯化继续使用。
(3)制备中间体XV
将430mg2-巯基噻吩并[3,2-D]嘧啶-4(3H)-酮溶于含有DIEA的四氢呋喃溶液中，常温滴加465mg溴乙酸乙酯，室温反应4小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，使用柠檬酸水溶液和二氯甲烷进行萃取，将萃取液减压浓缩，抽滤，使用乙醇洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XV，产率为80％，未经进一步纯化继续使用。
(4)制备中间体XVI
将243mg中间体XV溶于甲醇、水混合液中，加入80mg氢氧化钾，65℃反应1小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入酸液析出固体，抽滤，使用乙醇、石油醚洗涤滤饼，得白色固体，即为中间体XVI，产率为55％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.12(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),3.96(s,2H).
(5)制备目的化合物21
将150mg中间体XXIX溶于二氯甲烷中，加入DIEA 300μL，HATU 200mg，室温搅拌2小时。加入200mg中间体XVI的N，N-二甲基甲酰胺溶液，35℃反应18小时。反应液冷却至常温后减压浓缩，加入柠檬酸水溶液60℃搅拌15分钟，趁热抽滤，使用水、乙醇、乙醚进行洗涤滤饼，得粉色固体，即为化合物21，产率为70％。
其1H NMR数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),10.35(s,1H),10.08(s,1H),7.68(d,J＝8.9Hz,2H),7.64(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.54(d,J＝8.9Hz,2H),7.52–7.46(m,1H),7.43(d,J＝5.8Hz,1H),7.30(d,J＝5.8Hz,1H),7.18(d,J＝8.3Hz,1H),7.06(t,J＝7.4Hz,1H),4.17(s,2H),3.90(s,3H).
实施例22：
本实施例以上述实施例提供的21个噻吩并嘧啶酮化合物为基础，对其进行体外激酶实验。
测试方法如下：
(1)实验材料：
体外激酶试验采用BPS Bioscience公司提供的Kinase Profiler服务完成。
(2)实验方法：
将待测小分子SKLB-YSY-01(0.001-10μM)、待测蛋白激酶、与包含底物、NAD+，生物素化的NAD+,活化的DNA和[Tris·HCl，pH8.0]的缓冲液共同孵育，在室温下孵育一段时间后，向缓冲液中加入链霉亲和素过氧化物酶再继续孵育30分钟，随后向每个孔加入100μL显影剂，通过BioTek SynergyTM2microplate reader测定荧光强度；化合物的抑制活性用半数抑制浓度IC50来表示，IC50值由各浓度梯度对应的抑制率拟合得到。
(3)实验结果：
通过以上实验方法，测试了本发明中各化合物针对Tankyrase的抑制活性，如表一所示，
表一本发明所述化合物对Tankyrase的抑制活性
由表一内容可知，本发明所述化合物均能对Tankyrase的活性起到一定的抑制作用，其中部分化合物抑制效果较好，部分化合物抑制效果不显著，或者抑制效果不明显。
实施例23：
本实施例根据表一的数据，选择化合物14和化合物17做代表化合物，详细研究了其具体抑制活性数据，如图1，图2，表二、表三所示。
表二化合物14对Tankyrase的抑制活性数据
表三化合物17对Tankyrase的抑制活性数据
由表一可知，本发明提供的代表化合物14和17能对Tankyrase产生较好的抑制作用，本发明中合成的噻吩并嘧啶酮化合物在Tankyrase抑制领域具有显著的进步。
实施例23：
本实施例以上述实施例提供的噻吩并嘧啶酮化合物的具体化学结构为基础，对其抑制WNT通路活性测试实验，用来测试本发明受试化合物对于抑制STF3A细胞WNT通路的生物活性。
(1)实验材料：
胎牛血清(Cell-box)；DMEM细胞培养基(Gibco)；青霉素链霉素溶液(Hyclone)；STF3A细胞；96孔组织细胞培养板(Corning Incorporated)；胰酶(Gibco)；生理盐水(四川科伦)；二氧化碳培养箱(Thermo Scientific)；二甲基亚砜(Sinophma chemical reagentcompany)；化学发光仪(Promega)；100mm细胞培养皿(Jet Biofil)；单荧光素酶报告基因检测试剂盒(Galen，可配置Cell Lysis Buffer和Luciferase Assay Reagent)涡旋混匀器(Crystac)。
(2)实验方法：
具体步骤如下：
(1)将STF3A细胞于100mm培养皿在完全培养基(以DMEM+10％胎牛血清+100U/ml青霉素+100μg/ml青霉素为培养液)中进行培养(37℃，5％二氧化碳)，直至细胞融合度达到70-80％；
(2)吸除100mm培养皿中的培养基，加2ml胰蛋白酶，将细胞培养皿置于细胞培养箱中消化细胞，用完全培养基中和消化后离心收集细胞。弃上清，用适量完全培养基将细胞制备成单细胞悬液后计数，调整细胞浓度为100000细胞/ml。吸取100μl细胞悬液接种在康宁96孔细胞培养板上，即10000细胞/孔，每个板边孔用200μl的生理盐水填充(即只有中间60个孔加入100μl含细胞培养基)；
(3)在37℃，5％二氧化碳条件下，将细胞在96孔板中培养24小时；
(4)用DMSO溶解受试化合物，配置10mM母液，使用细胞培养基500倍稀释上面所配置的化合物溶液，配成的溶液再用细胞培养基三倍稀释8次，即得到含化合物浓度为20μM，6.67μM,2.22μM，0.74μM，0.25μM，0.08μM，0.03μM，0.0091μM，0.0030μM的溶液，各取上述溶液100μl加入上述已有细胞的96孔板中，同时做3个复孔，每个板留6个孔只加100μl细胞培养基；
(5)在37℃，5％二氧化碳条件下，培养24小时；
(6)24小时后，吸除各孔中的细胞培养基，加入20ul已配好的细胞裂解液(CellLysis Buffer)，将96孔细胞板放置于涡旋混匀器振荡20分钟以裂解充分；
(7)振荡完成后，取5ul待测样品加入白色96孔板中，加入30ul Luciferase AssayReagent，在化学发光仪上测量荧光值；
使用以下方法计算半数抑制浓度IC50：
IC50＝1-(用药组荧光值/对照组荧光值)；
使用Graphpad Prism5软件拟合药效曲线并计算半数抑制浓度IC50。
(3)实验结果：
实验结果如表四所示，
表四本发明中各化合物抑制WNT通路的生物活性
注：“+++”代表半数抑制浓度IC50<100nM；
“++”代表半数抑制浓度IC50在100nM—1uM之间；
“+”代表半数抑制浓度IC50在1uM—10uM之间；
“-”代表半数抑制浓度IC50>10uM。
由上表可知，本发明所述噻吩并嘧啶酮化合物中，化合物5、11、14、15、17、18、21的半数抑制浓度IC50在均小于1uM，由此可知，上述这几种化合物对能够对WNT通路活性造成较好的抑制效果，化合物2、6、8、12、16、19对WNT通路活性有抑制效果，但是抑制效果不显著，化合物1、3、4、7、9、10、13、20对对WNT通路活性基本没有抑制效果，或者抑制效果不明显。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (11)
1.一种噻吩并嘧啶酮化合物，其结构通式I如下：
其中，A为最多存在一个取代基R2，且含有至少一个硫原子的五元碳杂环；
B为含有一个氨基的，且含有至少一个氮原子，最多两个氮原子的五元碳杂环或六元杂环或芳杂环；
R1独立地选自
R2独立地选自H、甲基。
2.根据权利要求1所述的一种噻吩并嘧啶酮化合物，其结构通式为，
3.根据权利要求1或2所述的一种噻吩并嘧啶酮化合物，其部分结构式如下，
4.一种式I所示的噻吩并嘧啶酮化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备抑制Tankyrase活性的靶向药物中的用途。
5.一种根据权利要求1所述式I所示的抑制Tankyrase活性的噻吩并嘧啶酮化合物及其盐、水合物或药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途。
6.一种Tankyrase活性抑制剂，其特征在于，以权利要求1所述噻吩并嘧啶酮化合物为主要活性成分的生物药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物，能够直接使用或者以药物组合物的形式使用。
7.一种治疗癌症的药物，其特征在于，以权利要求6所述的Tankyrase活性抑制剂为主要成分，其余为药学上可接受的，对人和动物无毒、无惰性的药用·载体和/或赋形剂辅助性成分制备而成。
8.根据权利要求7所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述的药用载体或赋形剂为一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。
9.根据权利要求7所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述药物采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型：喷剂、气雾剂、液体制剂或固体制剂；所述的液体制剂包括注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂或糖浆剂；所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂或冲剂。
10.根据权利要求7所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述药物的给药途径为口服、舌下给药或粘膜透析；所述的注射包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射或皮下注射。
11.根据权利要求7所述治疗癌症的药物，其特征在于，治疗的癌症包括高分化非何杰金氏淋巴瘤、结肠癌、肝癌。
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