CN109152729B - 用于治疗pcos(多囊卵巢综合征)的单味草药提取物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了用于治疗PCOS(多囊卵巢综合征)的单味草药提取物,其以500mg的胶囊的口服剂型,在30至90天的时间内每天两次给药。使用特定的方法从胡卢巴种子获得提取物,该提取物包括以如表1的协同比存在并且具有如图1的分析谱的五种呋甾皂苷。
Description
技术领域
本发明涉及用于有效治疗PCOS(多囊卵巢综合征)的单味草药提取物,其以500mg的胶囊的口服剂型,在30至90天的时间内每天两次提供。使用特别的提取方法从单味草药(即胡卢巴(fenugreek))获得该提取物。
背景技术
关于PCOS:多囊卵巢综合征(PCOS)是女性中最常见的内分泌紊乱之一。PCOS具有各种没有完全了解的原因,但是有证据表明它主要是遗传疾病。多囊卵巢综合征(PCOS)是女性激素失衡的问题。它通常与排卵失败有关。多囊卵巢综合征(PCOS)是影响10%至15%女性群体的内分泌紊乱。该综合征代表了育龄女性中最常见的激素紊乱。
该疾病的症状和严重程度在女性中变化很大。在具有PCOS的女性中,青春期生理性高胰岛素血症可能成为引起发生雄激素过多症和无排卵的触发因素。
原因:多囊卵巢综合征具有与具有胰岛素耐受的氧化综合征相关的基础病因学。通常与该综合征相关的胰岛素耐受和随后的高胰岛素血症不仅在综合征本身的发病机理中起重要作用,而且还在临床症候中起重要作用。PCOS的典型特征-慢性无排卵导致闭锁卵泡(其发展为囊肿)的数目增加以及卵巢基质中间质组织的增加。
PCOS涉及的机制:在正常情况下,女性产生单个优势卵泡,其参与每次月经周期的单次排卵。当一群原始卵泡被募集而开始生长时,该过程开始。成功的募集引起存在于卵巢中的初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡和成熟卵泡的产生。成为优势卵泡的能力不是所有卵泡都具有的特征,由于雄激素增加导致的闭锁,使得缺少这种特性的卵泡死亡。在人类女性中,原始的700万个卵泡中仅约400个卵泡幸免于闭锁,并产生优势卵泡。
在具有PCOS的患者中,卵泡生成的过程不能正常进行。PCOS中初始步骤(募集和生长成小的成熟卵泡阶段)是起作用的,但是最终步骤(可以排卵的优势卵泡的选择)不能有规律地发生。有活力的卵泡很少发育超过约6mm的阶段。以一些无法解释的方式,该状态导致小的成熟卵泡的累积(通常称为囊肿),其中的卵泡膜间质细胞(TIC)产生异常大量的雄激素,但是颗粒细胞(GC)不能表达芳香化酶并且使雄激素底物芳香化为雌二醇。因此,导致了持续的雄激素过多状态。问题在于,因为闭锁卵泡通过“默认”机制成为产雄激素卵泡,某种程度上使其自身永久存在,所述“默认”机制是:在卵巢内,因为闭锁卵泡中的低芳香化酶活性,雄烯二酮被优先代谢为睾酮,此后代谢为二氢睾酮(Poison等人(1988):多囊性卵巢—正常女性中的共同发现(Polycystic ovaries—a common finding in normalwomen),柳叶刀(The Lancet)第331卷,第8590期,1988年4月16日,第870-872页,DOI:10.1016/S0140-6736(88)91612-1)。
PCOS的诊断
·妇科超声波检查法-特别地寻找小卵泡以帮助检测PCOS。小卵泡被认为是伴随排卵失败的受干扰的卵巢功能所导致,病症的特征月经稀少或无月经反映了上述情况。在PCOS中,存在所谓的“卵泡生长停滞(follicular arrest)”;即数个卵泡发育至5至7mm大小,但不再进一步发育。没有单个卵泡达到排卵前大小(16mm或更大)。
·腹腔镜检查-这可以显示卵巢的增厚的、平滑的珍珠白色的外表面。
·激素水平上升-包括雄烯二酮和睾酮的雄激素(雄性激素)的血清(血液)水平可能提高。游离睾酮水平被认为是最佳的测量法,其中约60%的PCOS患者显示了超常水平。当以国际单位测量时,具有PCOS的女性的LH(促黄体激素)与FSH(促卵泡激素)的比提高。
·PCOS中的抗苗勒氏管激素(AMH)提高,并且可以作为其诊断标准部分。
治疗:为PCOS开出的药物治疗包括:
i.组合雌激素和黄体酮激素:避孕丸、阴道环或皮肤斑贴。这些激素纠正不规则月经出血或无月经周期。
ii.合成黄体酮:它使得子宫内膜内层增厚和脱落。这种脱落防止子宫癌。
iii.降低雄激素的安体舒通(螺内酯):利尿剂。它通常与雌激素-黄体酮治疗使用。
iv.二甲双胍(格华止):该糖尿病药物是用于控制胰岛素、血糖水平和雄激素水平的较新的PCOS治疗。
v.克罗米酚(克罗米芬,雪兰芬)(生育药物)和促性腺激素注射(LH和FSH)。
vi.醋酸甲羟孕酮(Medroprogesterone acetate)
vii.促性腺激素释放激素激动剂
viii.糖皮质激素
ix.酮康唑、氟他胺、非那雄胺和二甲双胍。
(来源:http://www.webmd.com)
然而,因为该治疗包括还具有副作用的用于治疗PCOS的激素组合,所以没有治疗是对有效治疗PCOS特异性的。因此,存在开发更安全的制剂(例如来自草药提取物)来治疗多囊卵巢综合征的需求。
用于治疗PCOS的草药提取物
现有技术
美国专利申请号20070298049(2003)公开了用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的治疗剂。该治疗剂包括作为活性成分的蘑菇提取物,其显示了少的(如果存在的话)副作用。它在诱导排卵方面是有效的,并且其不仅可以安全地用于希望生育孩子的女性,而且可以安全地用于未婚的或年轻女性。本发明不同于该现有技术,因为本发明公开了口服给药以有效治疗PCOS的来自胡卢巴种子的呋甾皂苷提取物,并且完全不含任何蘑菇或其提取物。
美国专利申请号8062680(2005)公开了用于治疗患者的多囊卵巢综合征的方法,其中该方法包括将包含有效量的天然草药即红景天(Rhodiola rosea)根提取物、西洋参(Panax quinquefolius)根提取物、珐菲亚(Pfaffia paniculada)等的组合物与药学上可接受的赋形剂一起施用于患者。相反,在本发明中,完全没有使用这样的草药。本发明不是草药的混合物而是获得自单味草药即胡卢巴的种子的提取物。
WO专利申请号2008119131(2007)公开了用于PCOS治疗的组合物,其包括数种草药,即熟地黄(Shu Di Radix rehmanniae)、山药(Shan Yao Radix disocorea)、山萸肉(Shan Yu Rou Fructuscorniofficinalis)等。相反,在本发明中,完全没有使用这样的草药。本发明不是草药的混合物而是明确确定的获得自单味草药即胡卢巴的种子的提取物。
中国专利申请号102847081(2011)公开了用于治疗PCOS的草药的复杂混合物。然而,本发明不是草药的复杂混合物,而是明确确定的获得自单味草药即胡卢巴的种子的提取物。在现有技术专利中完全没有公开胡卢巴。
WO专利申请号2013136257(2012)公开了一种草药组合物,其包括治疗有效量的作为活性成分的红厚壳(Calophyllum)属植物的提取物和任选地药学上可接受的载体。该组合物配制为以片剂、胶囊剂或颗粒剂的形式口服施用,用于治疗如胰岛素耐受、高血糖症、2型糖尿病、多囊卵巢综合征或相关疾病等的代谢紊乱。然而,在本发明中,使用来自胡卢巴种子的呋甾皂苷的提取物,该提取物口服给药时在治疗PCOS中是有效的。在本发明中完全没有使用红厚壳属草药。
文献
Wang等人(2007)公开了使用肉桂治疗PCOS。患者口服接受肉桂提取物,显示了阳性结果(在多囊卵巢综合征中肉桂提取物对胰岛素耐受参数的影响:初步研究(The effictof cinnamon extract on insulin resistance parameters in polycystic ovarysyndrome:a pilot study),生育与不育(Fertility and Sterility)第88卷,第1期,2007年7月,第240-243页)。相反,本发明公开了使用来自胡卢巴种子的呋甾皂苷提取物,该提取物口服给药时在治疗PCOS中是有效的。在本发明中完全没有使用肉桂提取物。
Ethan Basch等人(2003)综述了胡卢巴的治疗应用(胡卢巴的治疗应用(Therapeutic Applications of Fenugreek),替代医学评论(Alternative MedicineReview),第8卷,1号,2003,第20-27页)。已经发现胡卢巴和其提取物在糖尿病的治疗和降低脂质水平中具有良好的治疗应用。该综述没有特别地公开胡卢巴提取物用于治疗PCOS的用途。此外,如本发明公开的胡卢巴种子的提取物是特别的分析上限定的提取物。
Kassem A.等人(2006)评价了完整胡卢巴种子的抗生育作用。在他们的研究中,他们为兔喂食含有30%胡卢巴种子的饮食。该种子对处理的动物的促生育雌激素浓度具有显著的作用。(评价胡卢巴种子在雄性和雌性兔中潜在的抗生育作用(Evaluation of thepotential antifertility effect of fenugreek seeds in male and femalerabbits),避孕(Contraception),第73卷,第3期,2006年3月,第301-306页,DOI:10.1016/j.contraception.2005.08.020)。然而,Kassem等人没有特别地公开用于治疗PCOS的任何制剂或胡卢巴提取物。
Bashtian M.H.等人(2013)公开了用于治疗具有PCOS的女性的胡卢巴种子提取物作为二甲双胍的辅助治疗的作用。这是前瞻性随机的、双盲的和安慰剂对照的试验。将女性随机分配以接受胶囊形式的胡卢巴种子的水醇提取物(500mg剂型)与二甲双胍(500mg剂型),并且评价她们的改善。结果显示显著降低了组中的PAO(出现多囊的卵巢)。(胡卢巴(Trigonella foenum-graceum L.)的评价,种子提取物对具有多囊卵巢综合征的女性的胰岛素耐受的作用,Iran J Pharm Res.2013春;12(2):475-481)。
Bashtian如下公开了该研究中使用的提取物和其制备方法:
干燥和新鲜的胡卢巴种子(25Kg)获得自商业来源。在蒸馏水中洗涤种子,并在冷却条件下在混合器中将种子研磨成细粉末。用过滤的无色乙醇(70%w/w)提取获得的粉末。冻干乙醇提取物。冻干的提取物为2600g。将25%的磷酸三钙添加至干提取物中。将粉末混合物遮蔽(in a blinder)压碎,通过20目筛。使用胶囊充填机制备含有粉末的胶囊。每个胶囊的平均重量为525mg(500mg干提取物)。用1%柠檬黄着色的乳糖粉末充填安慰剂胶囊(525mg)。
相反,本发明不是获得自胡卢巴种子的简单的水醇提取物,而是以协同比例存在并且通过本发明人开发的专有方法从胡卢巴种子获得的五种呋甾皂苷的纯化提取物,对此,本发明人已经在印度申请授予专利,参见日期为08年6月17日,名称为“用于从胡卢巴种子中提取呋甾皂苷的新方法(A NOVEL PROCESS FOR EXTRACTION OF FUROSTANOLICSAPONINS FROM FENUGREEK SEEDS)”的专利申请号1439/DEL/2008,之后是国际专利申请号PCT/IN2008/000559,随后提交并授予了美国专利US 8217165 B2和分案专利US 8754205B2,在欧洲提交了申请EP 08 808 174.0。
图1给出了提取物的分析指纹图谱。下表1给出了提取物的组成。
表1-提取物的组成(图1给出的LCMS指纹图谱)
峰编号 | 洗脱时间(分钟) | 化合物名称 | % |
1 | 13.75 | - | 7.13 |
2 | 13.90 | - | 4.61 |
3 | 14.22 | 胡卢巴皂苷IV a | 15.10 |
4 | 14.42 | 糖苷F | 29.36 |
5 | 14.85 | 原薯蓣皂苷 | 43.80 |
根据上表1,Bashtian M.H.等人没有预期到本发明的提取物,本发明的提取物是特别确定的来自胡卢巴种子的5种呋甾皂苷的协同提取物。Bashtian等人公开的提取物和本发明的提取物之间的显著区别如下表:
因此,现有技术均未预期到本发明的特定提取物的用途,所述提取物获得自单味草药(即胡卢巴)的种子,并且包括以协同比例存在以及由本发明人开发的专有方法从胡卢巴种子提取的五种呋甾皂苷。图1中给出了提取物的分析谱(LCMS指纹图谱)。根据个体响应和临床评价,以每次两粒500mg胶囊的剂量,在30至90天的时间内口服给予的提取物对PCOS的治疗是有效的。
发明目的
本发明的目的是公开获得自单味草药即胡卢巴的草药提取物,当口服时所述提取物对PCOS的治疗是有效的。
本发明的另一目的是公开用于治疗PCOS的草药提取物,其包括以协同比例存在并且获得自胡卢巴种子的五种呋甾皂苷。
本发明的又另一目的是公开获得自胡卢巴种子的提取物的口服组合物,其导致不孕女性的卵巢体积减小,囊肿尺寸减小、囊肿完全溶解和怀孕几率提高。
本发明的最后的目的是公开治疗PCOS的方法,其包括根据个体响应和临床评价,在30至90天的时间内,以每天两次500mg胶囊的形式每天施用1g剂量的所述提取物。
发明内容
本发明公开了用于有效治疗PCOS(多囊卵巢综合征)的单味草药提取物,其以500mg的胶囊的口服剂型,在30至90天的时间内每天两次给药。使用特别的提取方法从胡卢巴种子获得该提取物,并且该提取物包括以如表1(第7页)的协同比例存在并且具有如图1的分析谱的五种呋甾皂苷。
附图说明
图1:来自胡卢巴种子的五种呋甾皂苷的提取物的分析指纹图谱(LCMS谱)。
具体实施方式
本发明公开了包括五种化合物的协同混合物、获得自胡卢巴种子以及当口服给药时适合于治疗PCOS的呋甾皂苷提取物。上表1中给出了该提取物的组成,图1中公开了分析谱。
剂量
以粉末的500mg胶囊的形式制备上述制剂的剂型。在得到伦理委员会批准后,评价所述制剂的剂型对治疗PCOS的临床疗效。给予的剂量为每天2粒胶囊,在早晨和晚上的餐后给药。提取物的施用持续时间在30天至90天(3个月)之间变化。参与研究的受试者的数量为50,年龄为18至45岁。以下给出治疗的结果:
表2:使用本发明的口服剂型的总体的患者响应
表3:本发明的口服剂型对月经周期的影响
在入选时,大多数患者具有月经周期延长(81%)和周期不规律(10%)。少数患者(10%)具有原发性不孕症。
消耗胡卢巴种子提取物使月经周期有显著改善。在最后一次就诊完成时,71%的患者具有规则的周期,19%的患者报告了周期延长,约10%的患者报告了原发性不孕症。
以下总结了研究的结果:
a.本发明的胡卢巴种子提取物引起PCOS患者的卵巢体积显著减小。
b.46%的研究群体显示了囊肿尺寸减小。
c.36%的研究群体显示了囊肿完全溶解。
d.12%的患者怀孕。
e.71%的患者在治疗完成时报告了规律的月经周期。
f.总共94%的患者具有阳性响应或从胡卢巴提取物给药获得了益处。
安全性谱(Safety profile)
评价了提取物的安全性谱。在患者的血清肝功能测试、血清肾功能测试和血像中没有观察到显著的改变。基于临床结果得出以下结论:以500mg的剂量在30至90天的时间内每天两次施用本发明的分析上确定的提取物,提供了对PCOS治疗的有效结果。
本发明的使用方法
将提取物制成每粒500mg胶囊的剂型。当在30至90天的时间内每天口服施用两次时,提取物提供治疗PCOS的有效结果。
新颖性-本发明公开了现有技术中没有公开的来自单味草药的新的草药提取物和其用于治疗PCOS的方法。提取物包括提取自单味草药即胡卢巴的种子的五种呋甾皂苷的协同混合物(第7页表1和图1)。当在30至90天的时间内每天以1g的剂量(500mg胶囊,一天两次)口服给药时,提取物对PCOS的治疗是有效的。
创造性-创造性在于使用获得自单味草药的提取物治疗PCOS的知识的技术进步和其使用方法的公开(根据基于患者响应的临床建议和评价,在固定的时间内的每天的剂量,即在30至90天的时间内每天1g(每天两次500mg胶囊的形式))。新的提取物分离自单味草药即胡卢巴的种子,并且包括五种呋甾皂苷的协同混合物(第7页表1和图1),当以适当的剂量给药时,呋甾皂苷对治疗PCOS是有效的。
工业实用性-所述提取物适于治疗PCOS,并且可以在工业规模上制造。
虽然关于具体实施方式描述了本发明,但是该描述不意味着被以限制性意义解释。关于本发明的描述和进行本发明的最佳方式,公开的实施方式的各种修改以及本发明的供选择的实施方式对本领域技术人员变得明显。因此,预期了在不背离如定义的本发明的精神或范围的情况下,可以进行这样的修改,并且这样的修改会被认为是在本发明的范围内的。
Claims (2)
1.一种获得自胡卢巴种子的单味草药提取物在制备用于治疗PCOS(多囊卵巢综合征)的药物中的用途,其中,所述单味草药提取物包含在低于80℃的温度以及pH值为6-8下从胡卢巴种子中提取的呋甾皂苷的协同混合物,所述提取的方法包括以下步骤:
提供多个葫芦巴种子并通过碾磨将其压碎;
使用第一亲水性极性溶剂对制备的葫芦巴种子进行初级提取,然后进行离子交换色谱,所述第一亲水性极性溶剂为低级脂肪醇;
使用复合溶剂进行次级提取,所述复合溶剂为氯代烃和脂肪醇的混合物;
通过使用活性炭对最终提取物进行脱色;
通过加热和真空干燥浓缩所述提取物;以及
对最终粉末状产物进行过筛,得到纯度>70%的生物活性呋甾皂苷级分,包括浓度>30%的原薯蓣皂苷。
2.权利要求1所述的用途,其中,根据个体的响应和临床评价,有效剂量是每天1 g,在30至90天的时间内以每天两次500 mg的胶囊形式给药。
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