CN109125324A - 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1抑制剂的新用途 - Google Patents
酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1抑制剂的新用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109125324A CN109125324A CN201710454624.4A CN201710454624A CN109125324A CN 109125324 A CN109125324 A CN 109125324A CN 201710454624 A CN201710454624 A CN 201710454624A CN 109125324 A CN109125324 A CN 109125324A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cancer
- acyl
- cell
- coa
- cancer cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 title claims abstract description 56
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 101000785223 Crocosmia x crocosmiiflora Myricetin 3-O-glucosyl 1,2-rhamnoside 6'-O-caffeoyltransferase AT1 Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 79
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims abstract description 77
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 77
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 73
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 33
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 32
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 13
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 13
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 12
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 12
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 claims description 7
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 claims description 6
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims 2
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 claims 1
- 102100021993 Sterol O-acyltransferase 1 Human genes 0.000 abstract description 96
- 101000617830 Homo sapiens Sterol O-acyltransferase 1 Proteins 0.000 abstract description 91
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 78
- 101000598552 Homo sapiens Acetyl-CoA acetyltransferase, mitochondrial Proteins 0.000 abstract description 52
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- -1 cholesteryl ester Chemical class 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- PTQXTEKSNBVPQJ-UHFFFAOYSA-N Avasimibe Chemical compound CC(C)C1=CC(C(C)C)=CC(C(C)C)=C1CC(=O)NS(=O)(=O)OC1=C(C(C)C)C=CC=C1C(C)C PTQXTEKSNBVPQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229950010046 avasimibe Drugs 0.000 description 9
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 7
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 5
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091006625 SLC10A6 Proteins 0.000 description 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 5
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 5
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013062 quality control Sample Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150113296 ACAT1 gene Proteins 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000837584 Homo sapiens Acetyl-CoA acetyltransferase, cytosolic Proteins 0.000 description 2
- 101000642613 Homo sapiens Sterol O-acyltransferase 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000014190 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010011964 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 2
- 102000001494 Sterol O-Acyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010054082 Sterol O-acyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100036673 Sterol O-acyltransferase 2 Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 1
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 1
- 101710203875 Alcohol acyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 108010083294 ethanol acyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005040 ion trap Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000000505 pernicious effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 125000004194 piperazin-1-yl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000005619 thermoelectricity Effects 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶‑1基因表达和/或蛋白活性的物质的用途。所述用途选自下述至少一种：(a)用于制备预防和/或治疗癌症的药物；(b)用于制备预防和/或治疗癌症扩散转移的药物；(c)用于制备促进癌细胞凋亡的药物；(d)用于制备抑制癌细胞成癌的药物；(e)用于制备抑制癌细胞体外增殖生长的药物。发明人通过实验证明抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶‑1(即ACAT1/SOAT1)在肝癌组织明显高表达，其丰度高提示肝癌患者的预后较差。ACAT1/SOAT1抑制剂可在细胞水平有效抑制人肝癌及其他肿瘤细胞的生长，可作为肿瘤尤其肝癌的候选药靶。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶-1 (ACAT1/SOAT1)抑制剂的药物新用途。
背景技术
肝脏是体内胆固醇代谢中心，在维持体内胆固醇代谢平衡中发挥了至关重要的作用。肝脏可通过从头合成的方式产生大量的胆固醇。血液胆固醇含量与肝癌发生率明显正相关。细胞内胆固醇的水平对细胞的生长、增殖、分化等生命活动均非常重要。临床研究表明肝癌患者的血清胆固醇含量明显降低。但肝癌组织中的胆固醇水平明显高于癌旁组织。体内胆固醇可分为游离胆固醇及胆固醇酯。作为胆固醇的运输及储存状态，血液及细胞内的胆固醇酯分别由卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)及脂酰CoA胆固醇酰基转移酶(ACAT/SOAT)催化生成。作为细胞内唯一催化游离胆固醇与长链脂肪酸形成胆固醇酯的酶，脂酰CoA胆固醇酰基转移酶主要分ACAT1及ACAT2两种， ACAT1存在于人体内的所有组织细胞，其合成的胆固醇酯进入细胞内脂滴贮存，维持细胞内的胆固醇、脂肪酸等脂质代谢平衡；ACAT2在生命体内表达具有细胞、发育和种属特异性，对于人则仅在肠与婴儿肝高表达。
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种高发病率和高死亡率的恶性肿瘤。全世界每年新发和死亡的肝癌患者55％发生在我国，肝癌疾病负担重，5年生存率仅10％左右。其主要原因是大部分肝癌病人诊断时已属晚期而失去手术机会，但即使是小于3cm的小肝癌,有的患者可生存达10年或20年之久，有些则在一年内死亡，数月内复发。目前临床上常用的肝癌诊断标记物为甲胎蛋白(AFP)。然而，AFP诊断肝癌的敏感度和特异度并不十分理想。索拉菲尼(Sorafenib)是目前唯一用于肝癌治疗的靶向药，但只能有效延长患者3个月的生存期。其诊疗手段十分有限。因此，寻找肝癌早期诊断的标志物及有效的治疗靶标对肝癌的有效治疗非常重要。
发明内容
本发明的第一方面是提供一种抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1 (ACAT1/SOAT1)基因表达和/或蛋白活性的物质的新用途。
所述用途选自下述至少一种：
(a)用于制备预防和/或治疗癌症的药物；
(b)用于制备预防和/治疗癌症扩散转移的药物；
(c)用于制备促进癌细胞凋亡的药物；
(d)用于制备抑制癌细胞成癌的药物；
(e)用于制备抑制癌细胞体外增殖生长的药物。
所述的癌症包括肝癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌、白血病；更佳地为肝癌。
所述的癌细胞包括肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞、白血病细胞；更佳地为肝癌细胞。
所述肝癌细胞具体可为HepG2，MHCC97H或Huh7。
所述宫颈癌细胞具体可为Hela细胞系，结肠癌细胞具体可为HCT116细胞系，非小细胞肺癌细胞具体可为A549细胞系，乳腺癌细胞具体可为MCF7细胞系，食管癌细胞具体可为ECA109细胞系及白血病细胞具体可为Jurkat细胞系。
本发明所述抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT1/SOAT1)基因表达和 /或蛋白活性的物质可为ACAT1抑制剂。
所述ACAT1抑制剂具体可选自：K604、或具有相同效应的K604衍生物与类似物、或同样具有抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1效应的化合物(如阿伐麦布 (Avasimibe)，其CAS登记号为166518-60-1)。
所述K604的结构式如式I所示，其英文名称为
(2-[4-[2-(benzimidazol-2-ylthio)ethyl]piperazin-1yl]-N-[2,4-bis(methylthio)-6-methyl-3-p yridyl]acetamide.)。
本发明第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括作为活性成分的抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT1/SOAT1)基因表达和/或蛋白活性的物质。
药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物优选被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，还可与其他治疗剂(如抗肿瘤剂)一起使用(包括之前、之中或之后使用)。使用药物组合物时，是将安全有效量的药物施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
所述的药物组合物还可包括额外的抗癌药物。
所述的抗癌药物包括化疗药、肿瘤抗体等。
所述的抗癌药物(但并不限于)：阿霉素、长春新碱、紫杉醇、顺铂、卡铂、5-FU 或其组合。
所述的药物组合物的给药方式为局部给药或癌内给药。
所述药物组合物具有下述至少一种功效：
(a)用于预防和/或治疗癌症；
(b)用于预防和/或治疗癌症扩散转移；
(c)用于促进癌细胞凋亡；
(d)用于抑制癌细胞成癌；
(e)用于抑制癌细胞体外增殖生长。
需要的时候，在上述药物组合物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
所述药物可以制成注射液、悬浮剂、粉剂、片剂、颗粒剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明第三方面，提供了一种体外非治疗性的抑制癌细胞生长的方法，包括：
(Ⅰ)在添加酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的抑制剂的条件下，培养癌细胞，从而抑制癌细胞的生长；
或(I')降低酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1基因的表达或降低酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的蛋白量或蛋白活性。
所述的癌细胞包括肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞、白血病细胞；更佳地为肝癌细胞。
本发明第四方面，提供了一种用于治疗癌症的药盒，所述药盒包括组分：
(a)第一治疗剂，所述第一治疗剂是抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT1/SOAT1)基因表达和/或蛋白活性的物质；在另一优选例中，所述药盒还包括：(b)第二治疗剂，所述第二治疗剂是抗癌药物，所述的抗癌药物含有不同于第一治疗剂的活性成分。
本发明提供的药盒用于治疗癌症，所述的癌症包括肝癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌、白血病；更佳地为肝癌。所述肝癌包括转移与非转移的肝癌。
本发明第五方面，提供了一种治疗癌症的方法，包括步骤：给需要的对象施用抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT1/SOAT1)基因表达和/或蛋白活性的物质，或本发明所述的药物组合物。
所述的对象包括哺乳动物，较佳地为人。
发明人通过实验证明酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(即ACAT1/SOAT1)在肝癌组织明显高表达，其丰度高提示肝癌患者的预后较差。ACAT1/SOAT1抑制剂可在细胞水平有效抑制人肝癌及其它肿瘤细胞的生长，可作为肿瘤尤其肝癌的候选药靶。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为基于包含180点组织芯片(95肝癌，85配对癌旁)检测SOAT1在肝癌及其配对癌旁的表达水平，分析SOAT1与肝癌的发生及预后的相关性。图1A，SOAT1 在组织芯片肝癌(T)及配对癌旁组织(N)蛋白丰度表达的代表图；图1B，SOAT1 在组织芯片T/N蛋白丰度表达的统计学分析。采用非配对Mann-Whitney检验。*P ＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001；图1C，采用kaplan meier test对组织芯片中高表达 SOAT1及低表达SOAT1患者进行生存分析。结果表明SOAT1在HCC明显高表达， SOAT1高表达患者总生存期明显低于SOAT1低表达患者。SOAT1与肝癌的发生及预后均密切相关。
图2为基于质谱法测定25对肝癌及对应癌旁组织中的胆固醇酯含量。图2A， SOAT1在细胞内主要的催化底物CE 18:1的浓度在HCC中的量明显高于配对癌旁组织。采用非配对Mann-Whitney检验。*P＜0.05；图2B，SOAT1的催化产物胆固醇酯(6种)在人肝癌(T)里较癌旁组织(NT)的表达差异。结果表明SOAT1的催化产物胆固醇酯在HCC的量明显高于配对癌旁组织，辅助证明其催化酶SOAT1在肝癌中的表达量明显高于配对癌旁组织。
图3为SOAT1特异抑制剂K604对HepG2、MHCC97H及Huh7肝癌细胞系增殖及迁移的影响检测。SOAT1特异抑制剂K604显著抑制肝癌细胞(HepG2,MHCC97H 及Huh7)的增殖。*P<0.05。结果表明特异抑制SOAT1可明显抑制肝癌细胞系的增殖，提示SOAT1可能作为肝癌治疗的一个靶点。
图4为SOAT抑制剂Avasimibe对HepG2、MHCC97H及Huh7肝癌细胞系增殖及迁移的影响检测。SOAT抑制剂Avasimibe显著抑制肝癌细胞(HepG2,MHCC97H及 Huh7)的增殖。*P<0.05。结果表明抑制SOAT1可明显抑制肝癌细胞系的增殖，提示 SOAT1可能作为肝癌治疗的一个靶点。
图5为SOAT抑制剂Avasimibe对其他肿瘤细胞系增殖及迁移的影响检测。SOAT 抑制剂Avasimibe显著抑制肿瘤细胞(宫颈癌Hela细胞系,结肠癌HCT116细胞系，非小细胞肺癌A549细胞系，乳腺癌MCF7细胞系，食管癌ECA109细胞系及白血病Jurkat 细胞系)的增殖。*P<0.05。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现抑制ACAT1蛋白的活性可以在细胞水平和动物水平有效地抑制癌细胞(尤其是肝癌细胞)的生长。在此基础上完成了本发明。
本发明中的术语：
ACAT1/SOAT1
如本文所用，术语“ACAT1/SOAT1”、“ACAT1蛋白”、“SOAT1蛋白”或“酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1蛋白”可以互换使用。抑制ACAT1的活性可以在细胞水平和动物水平有效抑制肝癌的生长，ACAT1可以作为潜在的治疗癌症(尤其是肝癌，特别是晚期肝癌)的药物靶标。
本领域的普通技术人员可以使用常规方法对ACAT1蛋白的表达量进行调节，降低ACAT1基因的表达或对ACAT1基因表达进行失活处理(中断失活，敲除，同源重组，干扰RNA等)。
降低ACAT1蛋白表达量与活性的方法包括(但不限于)：添加ACAT1特异性抑制剂。
ACAT1/SOAT1抑制剂
如本文所用，术语“ACAT1/SOAT1抑制剂”“ACAT1抑制剂”、“ACAT1特异性的抑制剂”、“酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的抑制剂”、“酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的特异性抑制剂”可以互换使用，都是指对酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1具有抑制效果的化合物，如K604、或具有相同效应的K604衍生物与类似物、或同样具有抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1效应的化合物等。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989) 中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
材料和方法
试剂：
ACAT1抗体(ABN66)购自Merck Millipore公司；
兔二抗(CW0103S)购自北京康为世纪生物科技有限公司；
ACAT1抑制剂Avasimibe购自Sigma公司；
ACAT1特异抑制剂K604由北京世康合成医药科技有限公司合成(参考文献：Lkenoya M.,Yoshinaka Y.,Kobayashi H.,et al.A selective ACAT-1inhibitor,K-604,suppresses fatty streak lesions in fat-fed hamsters without affecting plasmacholesterol levels[J].Atherosclerosis,2007,191(2):290-297.)；
肝癌组织芯片(HLiv-HCC180Sur-05)：生存期肝细胞癌95例：癌95例/癌旁85例。手术时间2006.8－2009.11，随访时间2013.9。随访4－7年。购自上海芯超生物科技有限公司；
胆固醇酯标准品(CE 18:1)购自Sigma公司；
细胞培养基(DMEM)和胎牛血清购自Invitrogen公司；
细胞株和组织样本：
HepG2,Huh7购自协和细胞库(中国协和医科大学基础医学研究所细胞中心)；
MHCC97H购自复旦大学附属中山医院肝癌研究所；
Hela,HCT116,A549,MCF7,ECA109,Jurkat细胞系购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心
用于胆固醇酯测定的肝癌和癌旁组织由上海市中山医院提供，取自进行外科手术治疗的肝癌病人，所有病人都签署了知情同意声明。
方法：
一、通过免疫组化检测SOAT1在95例HCC及85例癌旁样本的表达差异：
1)烘片：将组织芯片放入烘箱中，温度调至63度，烘蜡一小时。
2)脱蜡：片子烘烤完成后，从烘箱内取出，放入全自动染色机中，进行脱蜡；脱蜡过程如下：
二甲苯两缸，每缸15分钟(按仪器设置时间)；
无水乙醇两缸，每缸7分钟(按仪器设置时间)；
90％酒精1缸，5分钟(按仪器设置时间)；
80％酒精1缸，5分钟(按仪器设置时间)；
3)70％酒精1缸，5分钟(按仪器设置时间)；
4)抗原修复：从染色机中取出片子，用纯水冲洗3次，每次不少于1分钟。冲洗过程中将柠檬酸修复液或者EDTA修复液放至电磁炉上开始加热；
5)阻断：使用商品化的即用阻断剂，将阻断剂滴在片子上，计时10-15分钟。
6)按1:2000加入SOAT1一抗(即ACAT1抗体)：取出片子，用PBS缓冲液冲洗3 次，一次1分钟；冰箱中取出一抗，放入离心机里7200转离心不少于30秒；取出一抗，按1：2000抗体稀释液稀释滴加一抗，室温孵育，计时30分钟；
7)加兔二抗：将片子用PBS缓冲液冲洗3次，一次1分钟；滴加二抗即用工作液，室温孵育，计时30分钟；时间到后用PBS冲洗3次，每次不少于1分钟。
8)DAB显色：从冰箱里取出DAB试剂盒，按1mlDAB稀释液+1滴DAB色原进行配制；在片子上滴加稀释后的DAB，观察显色强度，最长显色5分钟，到时后自来水冲洗5分钟。
9)苏木素复染、封片：在片子上滴加哈氏苏木素(SIGMA)1分钟，时间到后在0.25％的盐酸酒精中浸没不少于2秒，用自来水冲洗大于2分钟，室温晾干后封片。
二、基于ESI-MS检测25对肝癌及癌旁组织的胆固醇酯含量
1)样本处理：组织非极性脂质代谢组前处理：称取100mg左右组织，匀浆，加入1ml氯仿：甲醇＝3：1(v/v)，超声提取1h。4℃13200r/min，离心10min，取下层氯仿200ul，离心冷冻浓缩干燥。用400ul异丙醇和乙腈混合液(1：1，v/v)复溶。液质进样检测。
2)色谱分离：采用Thermo Scientific的U3000快速液相色谱使用反相色谱组织样本进行分析。色谱柱:waters UPLC CSH C18(1.7um 2.1mm*100mm)；流动相:A(乙腈/水 4:6,0.1％甲酸,10mM乙酸铵)和B(乙腈/异丙醇9:1，v/v，0.1％甲酸，10mM乙酸铵)；流速：0.3ml/min；进样量为1.0μL；柱温：45℃。
3)质谱分析采用装备了热电喷雾离子源的四极杆轨道离子阱质谱仪(QExactiveTM)。正负离子离子源电压分别为3.7kv和3.5kV。毛细管加热温度320℃。翘气压力30psi，辅助气压力10psi。容积加热蒸发温度300℃。翘气和辅助气均为氮气。碰撞气为氮气，压力为1.5mTorr。一级全扫描参数为：分辨率70000，自动增益控制目标为1×106，最大隔离时间50ms，质荷比扫描范围150–1500。质谱质量轴校准采用外标法，质量误差为5ppm。校准质量正离子选择74.09643,83.06037,195.08465,262.63612,524.26496 和1022.00341。负离子选择91.00368,96.96010,112.98559,265.14790,514.28440和1080.00999。代谢物鉴定采用dd-MS2扫描模式(数据依赖扫描模式)。具体参数为：分辨率17500，自动增益控制目标为1×105，最大隔离时间50ms，最大10个离子扫描二级碎片，动态排除。质量分离窗口2，碰撞能30v。强度限定1×105。液质系统由Xcalibur 2.2SP1.48软件控制，数据采集和靶向代谢物定量处理均由该软件操作。
4)代谢组数据处理：采用Progenesis QI软件处理，依次为导入原始数据、峰对齐、峰提取、归一化处理，最终形成保留时间、质荷比和峰强度的表格。反相色谱和亲水色谱提取峰的时间依次为0.5至19和0.5至9分钟。峰提取的强度限定为模式5。各种添加剂离子如加氢和加钠等均去卷积到每一个离子特征。代谢物鉴定采用人类代谢组数据库和脂质数据库进行一级分子量匹配。为了评价样品采集过程中系统的稳定性和重复性，我们使用质控样本。质控样本是所有样本均移取固定体积混合均匀后得到的。指控样本的前处理方法和其他样品一样。为了得到可信赖的且可重复性的代谢物，本次实验首先采用5个空白样本平衡色谱柱，再采用3个质控样本平衡柱条件。然后每间隔6-8个样本插入1个质控样本用于监测整个液质系统的稳定性和重复性。同时计算质控样本中提取的代谢特征的变异系数值，变异系数超过15％的代谢特征被删除。本实验中，CE 18:1标准品作为外标用于评估样本中胆固醇酯的绝对浓度。
三、CCK8实验
1)第一天，60mm培养皿中细胞常规胰酶消化计数后，5000个细胞/孔，接种4个 96孔板。
2)第二天，大约培养24hour后,细胞生长处于对数期,更换新的加入不同浓度SOAT1抑制剂的培养液,100μl/孔，分别设10μM 20μM浓度组及对照组,对照组为 1‰的DMSO，每组设3个重复孔。取一个96孔板加入10％的CCK8，100μl/孔，1 小时后450nm波长测0小时的OD值，无细胞孔为空白背景。
3)第三天，取一个96孔板加入10％CCK8，1小时后450nm波长测24小时的OD值。
4)第四天，取一个96孔板加入10％CCK8，1小时后450nm波长测48小时的OD值。
5)第五天，最后一个96孔板加入10％CCK8，1小时后450nm波长测72小时的OD 值。
6)汇总所有时间点OD值，绘制生长曲线。
统计分析
所有分析均使用GraphPad Prism软件完成。P<0.05认为有显著性差异。
实施例1、ACAT1在肝癌的高表达与肝癌的发生及预后密切相关
为了证实ACAT1在肝癌高表达的现象，发明人利用肝癌组织芯片(95肝癌/85配套癌旁)检测ACAT1在HCC明显高表达(图1A,B)，ACAT 1高表达患者总生存期明显低于ACAT1低表达患者(图1C)。确证ACAT1与肝癌的发生及预后均密切相关。
实施例2、ACAT1的催化产物胆固醇酯在人肝癌组织明显高表达
为了证实ACAT1在肝癌高表达的现象，发明人利用质谱法测定25对肝癌及对应癌旁组织中的ACAT1催化产物胆固醇酯含量。结果显示，ACAT1在细胞内主要的催化底物胆固醇酯标准品(CE 18:1)的浓度在HCC中的量明显高于配对癌旁组织(图 2A)；ACAT1的催化产物胆固醇酯(6种)在人肝癌(T)里较癌旁组织(NT)的表达差异(图2B)。进一步辅助证明其催化酶ACAT1在肝癌中的表达量明显高于配对癌旁组织。
实施例3、ACAT1抑制剂能抑制肝癌细胞的生长
在本实施例中，发明人研究了ACAT1抑制剂在抑制肝癌细胞生长中的作用。
结果表明ACAT1特异抑制剂K604及非特异抑制剂Avasimibe均可显著抑制肝癌细胞 (HepG2，MHCC97H及Huh7)的增殖(图3,4)。说明抑制ACAT1可明显抑制肝癌细胞系的增殖，提示ACAT1可能作为肝癌治疗的一个靶点。
实施例4、ACAT1抑制剂能抑制癌症细胞的生长
在本实施例中，发明人研究了ACAT1抑制剂在常见癌症细胞生长中的作用。
结果表明ACAT1抑制剂Avasimibe显著抑制常见癌症细胞系(宫颈癌Hela细胞系,结肠癌HCT116细胞系，非小细胞肺癌A549细胞系，乳腺癌MCF7细胞系，食管癌ECA109 细胞系及白血病Jurkat细胞系)的增殖(图5)。ACAT1特异抑制剂K604也能显著抑制常见癌症细胞系(宫颈癌Hela细胞系,结肠癌HCT116细胞系，非小细胞肺癌A549细胞系，乳腺癌MCF7细胞系，食管癌ECA109细胞系及白血病Jurkat细胞系)的增殖。说明ACAT1 可明显抑制癌症细胞系的增殖，提示ACAT1可能作为癌症治疗的一个靶点。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1基因表达和/或蛋白活性的物质的用途，其特征在于：所述用途选自下述至少一种：
(a)用于制备预防和/或治疗癌症的药物；
(b)用于制备预防和/或治疗癌症扩散转移的药物；
(c)用于制备促进癌细胞凋亡的药物；
(d)用于制备抑制癌细胞成癌的药物；
(e)用于制备抑制癌细胞体外增殖生长的药物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述癌症包括下述至少一种：肝癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌和白血病，优选为肝癌；
所述癌细胞包括下述至少一种：肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞和白血病细胞；优选为肝癌细胞。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1基因表达和/或蛋白活性的物质为酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1抑制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1抑制剂选自下述至少一种：K604、具有相同效应的K604衍生物与类似物和同样具有抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1效应的化合物；
所述K604的结构式如式I所示：
5.一种药物组合物，其包括作为活性成分的抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1基因表达和/或蛋白活性的物质；
所述药物组合物具有下述至少一种功效：
(a)用于预防和/或治疗癌症；
(b)用于预防和/或治疗癌症扩散转移；
(c)用于促进癌细胞凋亡；
(d)用于抑制癌细胞成癌；
(e)用于抑制癌细胞体外增殖生长。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于：所述癌症包括下述至少一种：肝癌、宫颈癌、结肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌和白血病，优选为肝癌；
所述癌细胞包括下述至少一种：肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞和白血病细胞；优选为肝癌细胞。
7.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其特征在于：所述抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1基因表达和/或蛋白活性的物质为酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1抑制剂。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：所述酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1抑制剂选自下述至少一种：K604、具有相同效应的K604衍生物与类似物、和同样具有抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1效应的化合物；
所述K604的结构式如式I所示：
9.一种体外非治疗性的抑制癌细胞生长的方法，包括：
(Ⅰ)在添加酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的抑制剂的条件下，培养癌细胞，从而抑制癌细胞的生长；
或(I')降低酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1基因的表达或降低酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的蛋白量或蛋白活性。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述的癌细胞包括下述至少一种：肝癌细胞、宫颈癌细胞、结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、食管癌细胞和白血病细胞；优选为肝癌细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710454624.4A CN109125324A (zh) | 2017-06-15 | 2017-06-15 | 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1抑制剂的新用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710454624.4A CN109125324A (zh) | 2017-06-15 | 2017-06-15 | 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1抑制剂的新用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109125324A true CN109125324A (zh) | 2019-01-04 |
Family
ID=64830315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710454624.4A Pending CN109125324A (zh) | 2017-06-15 | 2017-06-15 | 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1抑制剂的新用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109125324A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020113409A1 (zh) * | 2018-12-04 | 2020-06-11 | 北京蛋白质组研究中心 | 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1在肝癌诊疗中的应用 |
| CN112294787A (zh) * | 2020-11-17 | 2021-02-02 | 四川大学华西医院 | 一种治疗肝癌的联合用药物 |
| CN113616649A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-09 | 四川大学华西医院 | 一种治疗肝癌的联合用药物 |
| CN114487185A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-05-13 | 武汉迈特维尔生物科技有限公司 | 一种胆固醇通路的分离鉴定方法 |
| CN114917345A (zh) * | 2021-04-07 | 2022-08-19 | 北京蛋白质组研究中心 | 靶向soat1蛋白的化合物在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009067397A2 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-28 | Ore Pharmaceuticals Inc. | Treatment for solid tumors |
| CN103536922A (zh) * | 2012-07-13 | 2014-01-29 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 酰基辅酶a:胆固醇酰基转移酶-2抑制剂在抑制肝癌生长中的应用 |
| CN106955353A (zh) * | 2016-01-11 | 2017-07-18 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 酰基辅酶a：胆固醇酰基转移酶acat1抑制剂的新用途 |
-
2017
- 2017-06-15 CN CN201710454624.4A patent/CN109125324A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009067397A2 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-28 | Ore Pharmaceuticals Inc. | Treatment for solid tumors |
| CN103536922A (zh) * | 2012-07-13 | 2014-01-29 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 酰基辅酶a:胆固醇酰基转移酶-2抑制剂在抑制肝癌生长中的应用 |
| CN106955353A (zh) * | 2016-01-11 | 2017-07-18 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 酰基辅酶a：胆固醇酰基转移酶acat1抑制剂的新用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| STEVE SEUNG-YOUNG LEE等: "Avasimibe Encapsulated in Human Serum Albumin Blocks Cholesterol Esterification for Selective Cancer Treatment", 《ACS NANO》 * |
| TAKUJI OHMOTO等: "K604, a Specific acyl CoA:cholesterol Acyltransferase 1 Inhibitor, Suppresses Proliferation of U251 MG Glioblastoma Cells", 《MOLECULAR MEDICINE REPORTS》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020113409A1 (zh) * | 2018-12-04 | 2020-06-11 | 北京蛋白质组研究中心 | 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1在肝癌诊疗中的应用 |
| CN112294787A (zh) * | 2020-11-17 | 2021-02-02 | 四川大学华西医院 | 一种治疗肝癌的联合用药物 |
| CN112294787B (zh) * | 2020-11-17 | 2021-10-19 | 四川大学华西医院 | 一种治疗肝癌的联合用药物 |
| CN114917345A (zh) * | 2021-04-07 | 2022-08-19 | 北京蛋白质组研究中心 | 靶向soat1蛋白的化合物在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用 |
| CN113616649A (zh) * | 2021-09-10 | 2021-11-09 | 四川大学华西医院 | 一种治疗肝癌的联合用药物 |
| CN113616649B (zh) * | 2021-09-10 | 2022-12-09 | 四川大学华西医院 | 一种治疗肝癌的联合用药物 |
| CN114487185A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-05-13 | 武汉迈特维尔生物科技有限公司 | 一种胆固醇通路的分离鉴定方法 |
| CN114487185B (zh) * | 2022-01-21 | 2024-05-28 | 武汉迈特维尔生物科技有限公司 | 一种胆固醇通路的分离鉴定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109125324A (zh) | 酰基辅酶a∶胆固醇酰基转移酶-1抑制剂的新用途 | |
| Li et al. | Anticancer activities of harmine by inducing a pro-death autophagy and apoptosis in human gastric cancer cells | |
| Lee et al. | Inhibition of cell growth and induction of apoptosis by Antrodia camphorata in HER‐2/neu‐overexpressing breast cancer cells through the induction of ROS, depletion of HER‐2/neu, and disruption of the PI3K/Akt signaling pathway | |
| Li et al. | Metabolic characterization and pathway analysis of berberine protects against prostate cancer | |
| Zhang et al. | Berberine inhibits growth of liver cancer cells by suppressing glutamine uptake | |
| Yang et al. | The anti-cancer activity of Antrodia camphorata against human ovarian carcinoma (SKOV-3) cells via modulation of HER-2/neu signaling pathway | |
| Cao et al. | Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ) inhibits hepatoma cell growth via downregulation of SEPT2 expression | |
| Li et al. | Chloride intracellular channel 1 is an important factor in the lymphatic metastasis of hepatocarcinoma | |
| Xia et al. | miR‐31 shuttled by halofuginone‐induced exosomes suppresses MFC‐7 cell proliferation by modulating the HDAC2/cell cycle signaling axis | |
| Ye et al. | Cdc42 expression in cervical cancer and its effects on cervical tumor invasion and migration | |
| Zhang et al. | Artematrolide A inhibited cervical cancer cell proliferation via ROS/ERK/mTOR pathway and metabolic shift | |
| Sun et al. | Acacetin‐induced cell apoptosis in head and neck squamous cell carcinoma cells: Evidence for the role of muscarinic M3 receptor | |
| Zhu et al. | Tubocapsenolide A targets C-terminal cysteine residues of HSP90 to exert the anti-tumor effect | |
| Duan et al. | Natural diterpenoid eriocalyxin B covalently modifies glutathione and selectively inhibits thioredoxin reductase inducing potent oxidative stress-mediated apoptosis in colorectal carcinoma RKO cells | |
| Tang et al. | Saikosaponin D exerts cytotoxicity on human endometrial cancer ishikawa cells by inducing apoptosis and inhibiting metastasis through MAPK pathways | |
| CN105732560B (zh) | 金雀异黄酮衍生物及其制备方法和在制药中的应用 | |
| Li et al. | Triptolide inhibits intrahepatic cholangiocarcinoma growth by suppressing glycolysis via the AKT/mTOR pathway | |
| Lu et al. | Inhibition of BAG3 enhances the anticancer effect of shikonin in hepatocellular carcinoma | |
| CN110876741B (zh) | 一种gbe1抑制剂夫拉平度及其药物组合物在制备治疗肺腺癌药物中的应用 | |
| CN109125329A (zh) | C型1类尼曼-匹克蛋白抑制剂的新用途 | |
| Kim et al. | Flux analysis shows that hypoxia‐inducible‐factor‐1‐alpha minimally affects intracellular metabolism in tumor spheroids | |
| Cui et al. | Cytotoxicity of 9, 11-dehydroergosterol peroxide isolated from Ganoderma lucidum and its target-related proteins | |
| Toton et al. | Effect of 3-O-acetylaleuritolic acid from in vitro-cultured Drosera spatulata on cancer cells survival and migration | |
| CN114306309B (zh) | 萘基取代的三氟甲基苯并环戊酮在癌症治疗中的应用 | |
| Jang et al. | Mychonastes sp. 246 suppresses human pancreatic cancer cell growth via IGFBP3-PI3K-mTOR signaling |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190104 |