CN109124692A - 眼表标本的无创性取材、储存及运输方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，目的是为良好地解决目前眼表标本取材方法普遍存在的问题。本方法在无菌环境下制作检测用滤纸片，经灭菌分装后于常温下储存备用，临床检测应用时，对患者行严格规范下的无创性取材操作，而后可将标本置常温下保存，送致病菌核酸检测或进行其他研究。本发明方法能极大减轻患者的不适感，操作污染性低，引发的并发症少，操作简便快捷，医疗成本低，节约人力和物力资源，为未来眼表标本精准定量取材提供了坚实的基础。本方法能解决眼表标本储存和运输条件苛刻的问题，有利于眼科特殊病例标本的保存和交流。本方法可广泛、迅速地应用于临床及实验室研究，有助于促进眼科教育教学工作的快速发展。

Description

眼表标本的无创性取材、储存及运输方法

技术领域

本发明涉及一种眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，属于医学检测领域。

背景技术

目前，眼表标本的取材的方法有以下几种：

1、泪液的取材方法：有毛细管法、滤纸片吸附法和细管直接采集法等。毛细管法比较直观，但锋利的管边缘可能对眼表上皮造成损害，会增加感染的可能性。滤纸片吸附法对眼表的刺激性小，但采集后的泪液需要进行称重和缓冲液稀释洗脱等过程，操作复杂。细管直接采集法对眼表刺激性较大，病人不适感重。上述方法对泪液产生量少的干眼症患者来说，提取泪液更为困难。

2、刮取法：用刮刀刮取角结膜表面和睑缘的上皮组织，在显微镜下，按病变形态进行诊断，容易造成误诊。这种创伤性操作会造成患者较强的不适感，可能会加重患者的病情，甚至导致结膜下出血、结膜充血、角膜穿孔、角膜瘘和眼内炎等严重并发症。用刮取法获得的标本需要立即送检或床边接种，以免延误，非常不便利。另外，该操作方法复杂，操作者需要经过系统培训和实践锻炼。

3、涂抹法：采用无菌棉拭子旋转蘸取组织表面分泌物，进行显微镜检、培养及药敏试验。以该方法获得的标本时效性降低，需要及时送检。病人多有不适感，取材量较少。由于标本多与棉拭子结合，对其进一步分析处理的步骤繁琐且困难，不适用临床的快节奏。

综上，目前眼科运用的眼表取材方法众多，缺乏规范，各种方法或多或少都存在相关的问题，不能很好地得以应用，特别是对眼表存在严重溃疡、感染及眼表损伤破坏的病人，用现有方法取材更为困难，容易引发较多并发症。

发明内容

本发明的目的就是提供一种眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，该方法具有无创性取材、医疗成本低、可广泛应用于临床及实验室研究等特点。

本发明方法是用Whatman TM公司生产的FTA Card滤纸，在无菌环境下制作检测用滤纸片，经灭菌分装后于常温下储存备用。临床检测应用时，以备用好的滤纸片对怀疑眼表感染、眼表严重溃疡和眼表损伤破坏严重等患者行严格规范下的无创性取材操作，而后，将携有取材标本的滤纸片在常温下保存，并送致病菌核酸检测或进行其他研究。

本发明方法对患者眼部的刺激小、能减轻患者不适感，提高患者依从性。操作污染性低，引发的并发症少。操作简便快捷，培训费用和医疗成本低，能节约人力和物力资源，为未来眼表标本精准定量取材提供了坚实的基础。本方法能解决眼表标本储存和运输条件苛刻的问题，有利于眼科特殊病例标本的保存和交流。本方法可广泛、迅速地应用于临床及实验室研究，有助于促进眼科教育教学工作的快速发展。

附图说明

图1为Whatman TM公司生产的China FTA TM Card示意图。

图2为无菌操作台示意图。

图3为Wex公司生产的打孔器示意图。

图4为FTA Card滤纸片和Eppendorf管分装示意图。

具体实施方式

参照图1至图4对本发明的实施例进一步说明：

本发明方法的具体操作如下：

步骤一、检测纸片的制作、处理及保存：

1.购买成品Whatman TM公司生产的China FTA TM Card(CAT No.WB129237)(见图一)。FTA Card是一种特制的滤纸，它由专利配方的强力变性剂和螯合剂浸泡，纤维基质上含有特殊的化学物质，当捕捉到细胞后自动将其裂解，并与核酸结合，维持样品中DNA的完整性，保护核酸免于降解，免受核酸酶、氧化剂和紫外线损坏，还能够阻止细菌和其他微生物的生长。

操作者带一次性无菌帽子、口罩及手套，取一张FTA Card,在无菌操作台上(见图二)上，用Wex公司生产的No.1059打孔器(见图三)在FTA Card的有效区域(FTA Card上的圆圈)内打出16个(一般打10-20个为宜)圆形的滤纸片。滤纸片直径设定4mm(一般以3-5mm为宜)，纸片过大则与眼表贴合度差，影响取材充分，过小则夹持不稳，标本容易丢失，所以在操作时，可根据实际需要，调整打孔器类别或型号。然后，将滤纸片放入Axygen公司生产的无DNA酶Eppendorf离心管(MCT-150-C))内，注意不要盖紧盖子。

2.将Eppendorf管及滤纸片送环氧乙烷气体灭菌。

3.操作者带一次性无菌帽子、口罩及手套，在无菌操作台上，取出经环氧乙烷气体灭菌的Eppendorf管及滤纸片(见图四)，用灭菌的显微镊将滤纸片分装在Eppendorf管内，每管装4片，然后送常温清洁区储存备用。

步骤二、眼表标本的无创性取材、保存及送检：

1.取材应在眼科治疗室或换药室等比较洁净的环境中进行:

对于怀疑眼表感染的患者：向其结膜囊内点一滴表麻，等待1min后，用灭菌的显微镊分别夹取3个(一般2-4个)滤纸片，将其轻轻放入患者下睑结膜囊内，停留1min(一般1-2min)，使其吸收泪液和分泌物，同时嘱病人闭目。

对于眼表严重溃疡的患者：向其结膜囊内点一滴表麻，等待1min后，用灭菌的显微镊分别夹取4个(一般2-4个)滤纸片，将其轻轻放到患者溃疡灶与正常组织的交界处，轻轻按压、滑动滤纸片10s(一般5-10s)，停留1min(一般1-2min)，使其充分吸收溃疡灶的组织。操作要轻柔，以避免损伤正常组织或造成出血。

对于眼表损伤破坏严重的患者：向其结膜囊内点一滴表麻，等待1min后，用灭菌的显微镊分别夹取4个(一般2-4个)滤纸片，将其轻轻放在患者损伤区，轻轻按压滤纸片10s(一般5-10s)，使其贴合良好，停留1.5min(一般1-2min)。操作要轻柔，以免加重损伤。

2.待滤纸片充分浸润后，用灭菌的显微镊依次轻柔取出，放入Eppendorf管，向患者结膜囊中点一滴氧氟沙星滴眼液，将Eppendorf管送检。若不能及时送检，将Eppendorf管放在常温洁净环境中保存即可，无需特殊保存环境。初次送检一般以3-4个滤纸片为宜，也可根据实际需要适当增加滤纸片数量(如眼表感染及溃疡程度较轻者、眼表损伤面积较大者以及取材不满意者)。

步骤三、眼表标本的储存及运输：

携有取材标本的滤纸片可在常温下稳定保存数年，并可按照普通邮件的方式邮寄。

步骤四、眼表标本致病菌核酸检测或进行其他研究：

按常规方法对滤纸片提取DNA或RNA，并按相关核酸测定盒说明进行致病菌核酸检测或进行其他方面的研究。

Claims (5)

1.一种眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，其特征在于本方法是用Whatman TM公司生产的FTA Card滤纸，在无菌环境下制作检测用滤纸片，经灭菌分装后于常温下储存备用；临床检测应用时，以备用好的滤纸片对怀疑眼表感染、眼表严重溃疡和眼表损伤破坏严重等患者行严格规则下的无创性检测操作；而后，将携有取材标本的滤纸片在常温下保存，并送致病菌核酸检测或进行其他研究。

2.根据权利要求1所述的眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，其特征在于本发明方法的操作步骤如下：

步骤一、检测滤纸片的制作、处理及保存：

1).购买成品Whatman TM公司生产的China FTA TM Card(CAT No.WB129237)；

操作者带一次性无菌帽子、口罩及手套，取FTA Card,在无菌操作台上，用Wex公司生产的No.1059打孔器在FTA Card的有效区域(FTA Card上的圆圈)内打出10-20个直径为3-5mm的滤纸片，然后，将滤纸片放入Axygen公司生产的无DNA酶Eppendorf离心管(MCT-150-C))内，注意不要盖紧盖子；

2).将Eppendorf管及滤纸片送环氧乙烷气体灭菌；

3).操作者带一次性无菌帽子、口罩及手套，在无菌操作台上，取出经环氧乙烷气体灭菌的Eppendorf管及滤纸片，用灭菌的显微镊将滤纸片分装在Eppendorf管内，每管装4片，然后送常温清洁区储存备用；

步骤二、眼表标本的无创性取材、保存及送检：

1).取材应在眼科治疗室或换药室等比较洁净的环境中进行:

对于怀疑眼表感染的患者：向其结膜囊内点一滴表麻，等待1min后，用灭菌的显微镊分别夹取2-4个滤纸片，将其轻轻放入患者下睑结膜囊内，停留1-2min，使其吸收泪液和分泌物，同时嘱患者闭目；

对于眼表严重溃疡的患者：向其结膜囊内点一滴表麻，等待1min后，用灭菌的显微镊分别夹取2-4个滤纸片，将其轻轻放到患者溃疡灶与正常组织的交界处，轻轻按压、滑动滤纸片5-10s，停留1-2min，使其充分吸收溃疡灶的组织；操作要轻柔，以避免损伤正常组织或造成出血；

对于眼表损伤破坏严重的患者：向其结膜囊内点一滴表麻，等待1min后，用灭菌的显微镊分别夹取2-4个滤纸片，将其轻轻放在患者损伤区，轻轻按压小纸片5-10s，使其贴合良好，并于取材部位停留1-2min；操作要轻柔，以免加重损伤；

2).待滤纸片充分浸润后，用灭菌的显微镊依次轻柔取出，放入Eppendorf管，向患者结膜囊中点一滴氧氟沙星滴眼液，将Eppendorf管送检；若不能及时送检，将Eppendorf管放在常温洁净环境中保存即可，无需特殊保存环境；初次送检一般以3-4个滤纸片为宜，也可根据实际需要适当增加滤纸片数量(如眼表感染及溃疡程度较轻者、眼表损伤面积较大者以及取材不满意者)；

步骤三、眼表标本的储存及运输：

携有取材标本的滤纸片可在常温下稳定保存数年，并可按照普通邮件的方式邮寄；

步骤四、眼表标本致病菌核酸检测或进行其他研究：

按常规方法对滤纸片提取DNA或RNA，并按相关核酸测定盒说明进行致病菌核酸检测或进行其他方面的研究。

3.根据权利要求1所述的眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，其特征在于在怀疑眼表感染患者的睑结膜囊内，放入3个检测用的滤纸片，并停留1min。

4.根据权利要求1所述的眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，其特征在于在眼表严重溃疡患者的溃疡灶与正常组织的交界处，放入4个检测用的滤纸片，轻轻按压、滑动滤纸片10s，并停留2min。

5.根据权利要求1所述的眼表标本的无创性取材、储存及运输方法，其特征在于在眼表损伤破坏严重患者的损伤区，放入4个检测用的滤纸片，轻轻按压滤纸片10s，并停留2min。