CN109115900A - Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法 - Google Patents

Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109115900A
CN109115900A CN201810774292.2A CN201810774292A CN109115900A CN 109115900 A CN109115900 A CN 109115900A CN 201810774292 A CN201810774292 A CN 201810774292A CN 109115900 A CN109115900 A CN 109115900A
Authority
CN
China
Prior art keywords
trimethoxy
sample
trimethoxy cinnamoyl
cinnamoyl chloride
tested
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810774292.2A
Other languages
English (en)
Inventor
何攀
彭湘林
张源泉
谢婷婷
陈渠玲
莫兵
聂蓬勃
刘明
闫东阁
李枣枣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Valley Medicine Technology (hunan) Co Ltd
Zhongnan Food Science Research Institute Co Ltd
Original Assignee
Valley Medicine Technology (hunan) Co Ltd
Zhongnan Food Science Research Institute Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Valley Medicine Technology (hunan) Co Ltd, Zhongnan Food Science Research Institute Co Ltd filed Critical Valley Medicine Technology (hunan) Co Ltd
Priority to CN201810774292.2A priority Critical patent/CN109115900A/zh
Publication of CN109115900A publication Critical patent/CN109115900A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明属于药物杂质分析领域，具体公开了一种LC‑MS/MS法测定（E）3,4,5‑三甲氧基肉桂酰氯的方法，具体为：利用(E)3，4，5‑三甲氧基肉桂酰氯与二乙胺能定量反应生成稳定化合物(E)N，N‑二甲基‑3，4，5‑三甲氧基肉桂酰胺的原理，对衍生化后的生成物进行液相色谱串联质谱分析。色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC‑C18(100×2.1mm，2.7μm)；流动相：甲醇‑0.1％甲酸(V/V，50∶50)；流速：0.4ml/min；柱温：35℃；进样体积：5μl；离子源：电喷雾离子化源(ESI)；检测方式：正离子多反应监测模式，(E)N，N‑二甲基‑3，4，5‑三甲氧基肉桂酰胺的监测离子对分别为m/s 294.0/221.0和294.0/190.0。该方法专属性强、检测限低、稳定性好，回收率高可用于马来酸桂哌齐特生产过程中中杂质(E)3，4，5‑三甲氧基肉桂酰氯的质量控制。

Description

LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法
技术领域
本发明属于药物杂质分析领域，具体公开了一种马来酸桂哌齐特中杂质(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的分析方法。
背景技术
马来酸桂哌齐特化学名称为(E)1-[(吡咯烷羰基)甲基]-4-(3，4，5-三甲氧基肉桂酰基)哌嗪顺丁烯二酸盐，商品名为克林澳，为哌嗪类钙离子拮抗剂[1]，具有多种药理作用，如腺苷增效作用[2]、扩血管作用[3]、改善血液流变学[4]，广泛用于心心治疗脑血管疾病[5～9]，1970年由法国Sanofi-Anentis公司最先生产，并在欧洲、日本等发达国家广泛应用，2002年在中国上市[1]。
马来酸桂哌齐特的合成路线主要有四条，其主流使用的合成方法中均用到了(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯作为中间反应的原料[10，11]，而(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯有基因毒性警示结构，结构式见式1。
式1(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯结构式
对马来酸桂哌齐特中(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的限量控制的研究十分重要，有关痕量酰氯类化合物的检测方法主要有液相色谱法[12，13]、气相色谱法[14，15]等，由于酰氯的高反应活性，它能与正相色谱柱和反相色谱柱流动相中的水或醇发生酯化或水解分析，关于(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的检测报道仅有刘华祥[16]通过衍生反应建立了反高效液相色谱法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯原料纯度的方法，衍生反应式见方程式1。
方程式1(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的合成反应式
参照欧洲药品管理局(EMA)、美国食品药品管理局(FDA)及人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)颁布的基因毒性杂质控制的指导文件，推荐以毒理学关注阈值(TTC，1.5μg/天)来控制用药风险。在EMA关于基因毒性杂质限度指南的问答中指出，在结构相似的情况下，基因毒性杂质的作用模式一致，并具有相同的分子靶向，在这种情况下，建议基因毒性杂质的总和为1.5μg/天，以马来酸桂哌齐特日剂量320mg/天计算，(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的限度＝1.5ug/天/320mg/天＝4.6mg/kg，EMA关于基因毒性杂质限度指南的问答中同时指出，如果在最后一步合成前，实际生成或引入了一个(潜在)基因毒性杂质，可以不将其纳入原料药质量标准中，但是必须保证该杂质在合成中间体中有合理的控制限度并且在原料药检测结果中明确其含量不超过来源于TTC或其他认可标准的30％，即4.6mg/kg×30％＝1.38mg/kg。
然而，现有对于检测桂哌齐特中残留的痕量(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯达不到检出限要求，不能达到质量监控的目的。
参考文献
[1]张晓霞，韩培红.马来酸桂哌齐特的药理作用及临床应用研究[J]中国药房，2007，18(26)：2060-2062.
[2]MORITOKI H，TAKEI M，FUJITA，et al.Interaction of Cinepazide withAdenosine on GuineaPig Atria.Arch Int Pharmacodyn Ther，1980，248(2)：212.
[3]耿洪业，王少华.实用药物治疗学.北京：人民卫生出版社，2006：1060-1061.
[4]GRONSTEIN BN.Adenosine，Enendogenous Ant Inflammatory Agent.JAPPLPhhysiol，1999，96(1)：5
[5]冯怡墨，孙晓川，张晓冬，等.依达拉奉联合马来酸桂哌齐特治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的临床观察[J]中国药房，2017，28(2)：230-232.
[6]朱思源，闫盈盈，易湛苗，等.马来酸桂哌齐特注射剂治疗急性缺血性脑卒中有效性的分析[J].中国临床药理学杂志，2017，33(20)：2081-2083.
[7]郭代红，胡鹏洲，王啸宇，等.马来酸桂哌齐特用药患者11665例的血液系统药品不良反应自动监测研究[J]中国临床药理学杂志，2017，33(15)：1484-1487.
[8]史楠，余波，于伟红，等.马来酸桂哌齐特对高血压性脑出血的临床研究[J]中国临床药理学杂志，2016(3)：270-272.
[9]刘佰运，李欢，李京生，等.马来酸桂哌齐特在颅脑损伤患者的治疗效果观察[J]中华神经外科杂志，2006，22(11)：663-665.
[10]侯媛芳.马来酸桂哌齐特的合成方法研究进展[J]临床医药文献电子杂志，2017(73).
[11]刘文涛，郑德强，李帅，等.马来酸桂哌齐特的合成工艺改进[J]食品与药品，2012，14(1)：35-37.
[12]林娟，戚争春，钱丽娜，等.采用高效液相色谱法分析烷基酰氯类化合物的方法：，CN105301137A[P].2016.
[13]李瑞明，任斌，张志豪，等.9-芴甲氧羰酰氯柱前衍生高效液相色谱法测定克拉霉素血药浓度[J]中国药物经济学，2013(5)：22-24.
[14]金迁，徐茹梦，陈卿卿，等.邻、间、对氯苯甲酰氯异构体的气相色谱检测[J]广东化工，2018(2)：177-178.
[15]付磊，张桃芝.2，4-二氯苯氧乙酰氯的气相色谱分析[J]分析测试学报，2003，22(6)：104-105.
[16]刘华祥.马来酸桂哌齐特的制备及其光致顺反异构研究[D].大连理工大学，2009.
发明内容
为解决(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的分析方法检测限不达标的不足，本发明提供了一种LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，旨在改善(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的检测限。
为了解决现有桂哌齐特中(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯杂质测试方法难于达到检测限要求的不足，本发明创新地提供了一种LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，将疑似含有(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的待测样品与二乙胺发生衍生反应，得到衍生后的待测样品，随后采用LC-MS/MS进行测定：
LC-MS/MS测定过程中，
色谱测试条件为：
色谱柱：C18反相柱，
流动相：甲醇和0.1％甲酸水溶液的等体积混合溶液；
洗脱方式：等度洗脱；
流速：0.4ml/min；
质谱测试条件为：
离子源：电喷雾离子源ESI；
检测方式：正离子多反应监测模式；
雾化器压力：15psi；
离子喷雾电压：4000V；
干燥器温度：300℃；
干燥器流速：11L/min。
本发明在衍生反应的基础上建立了(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的残留量的液相色谱串联质谱法，取得了检出限低、稳定性好、专属性强、回收率高的良好效果，可以用于桂哌齐特生产过程中(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯残留量的质量控制。
作为优选，色谱柱为Agilent Poroshell120EC-C18(100×2.1mm，2.7μm)。
作为优选，色谱测试过程中，柱温：35℃；进样体积：5μl。
作为优选，所述的方法，监测离子对分别为m/s294.0/221.0和294.0/190.0。
作为优选，衍生反应中，预先将待测样品用二氯甲烷经旋涡混匀、随后添加二乙胺，再在超声条件下进行所述的衍生反应。
衍生反应中，二乙胺在衍生反应的起始溶液中的浓度为1～25(v/v)％，也即是，10mL的起始溶液中，乙二胺的体积为0.1～2.5mL，优选为0.1～0.5mL。
作为优选，衍生反应中，超声反应的时间为20～30min；进一步优选为25～30min。
作为优选，所述的方法，取(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺，用二氯甲烷溶解并稀释至浓度依次为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的溶液，采用所述的LC-MS/MS的条件进行测定，以各溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制得到线性回归曲线；
待测样品经所述的衍生反应后利用所述的LC-MS/MS方法测定待测样品的目的物的峰面积，再利用该线性回归曲线，换算出待测样品中的(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯含量。
作为优选，所述的方法，采用外标法，向待测样品中添加3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯，经所述的衍生反应后再经所述的LC-MS/MS的条件进行测定，通过所述的线性回归曲线得到测试结果，扣除外标添加量，获得待测样品中的(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯含量。
作为优选，所述的方法，所述的待测样品为桂哌齐特及其药学上可接受的盐。
作为优选，所述的方法，所述的待测样品为包含有桂哌齐特及其药学上可接受的盐的制剂。
有益效果
本发明所述的方法，检出限低至0.0153mg/kg，明显低于桂哌齐特对(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的限量为1.38mg/kg的要求。此外还具有稳定性好、专属性强、回收率高的良好效果。
附图说明
图1为溶剂空白的色谱图；
图2为对照溶液重复性测试色谱图；
图3为专属性测试色谱图；
色谱图从上至下依次为空白溶剂色谱图，对照品溶液色谱图和马来酸桂哌齐特的色谱图
图4为全扫描的总离子流图；
图5为m/z221的子离子扫描图。
具体实施方式
1仪器与试剂
1.1仪器
液相色谱-串联质谱仪：Agilent 1290-6460，带电喷雾离子源，配AgilentPoroshell 120EC-C18(100×2.1mm，2.7μm)色谱柱，毕克氮气发生器。
1.2试剂
甲醇(色谱纯，德国默克公司)；甲酸(色谱纯，国药集团)；乙二胺(优级纯，国药集团)；超纯水(18.25MΩ×cm，中沃水务)；对照品(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯(纯度≥99％，谷川医药科技(湖南)有限公司提供)；对照品(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺(纯度≥99％，谷川医药科技(湖南)有限公司提供)；样品批号(20170901，20170902，2017090，谷川医药科技(湖南)有限公司提供)。
2方法与结果
2.1检测条件
2.1.1色谱条件流动相：甲醇-0.1％甲酸(V/V，50：50)，运行时间：7min；色谱柱：Agilent Poroshell 120EC-C18(100×2.1mm，2.7μm)流速：0.4ml/min；柱温：35℃；进样体积：5μl。
2.1.2质谱条件离子源：电喷雾离子源ESI；检测方式：正离子多反应监测(MRM)模式；雾化器压力：15psi；离子喷雾电压：4000V；干燥器温度：300℃；干燥器流速：11L/min；监测的离子对及碰撞能和碎解电压设置如下表1。
表1多反应监测参数设置
Tab.1 The setting of MRM
2.2、样品前处理过程的设计(衍生条件筛查)
2.2.1溶液的配制
2.2.1.1 3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯储备液(1000μg/mL)：称取10mg3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯，用二氯甲烷溶解并定容至10mL；
2.2.1.2 3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯使用液(100μg/mL)：取1.00mL2.1.1的储备液定容至10mL；
2.2.2衍生反应二乙胺量的确定
分别称取100mg样品于10mL棕色容量瓶中，加5mL二氯甲烷旋涡混匀1min，0.1mL100μg/mL3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯，再依次分别加入不不同体积的二乙胺，超声反应10min，立即用二氯甲烷定容至10mL，上机测试，结果见表2，从表中结果可以看出，随着二乙胺衍生剂的加入增加测试结果目标峰的峰面积增加，当加入量为0.10mL时，有最大峰面积，之后随着衍生剂的增加，目标峰面积开始缓慢下降，由此确定衍生剂加入最佳加入量为0.10mL。
表2
试验序号 二乙胺加入量mL 保留时间min 峰面积
1 0 / 0
2 0.01 3.313 42220
3 0.05 3.312 122415
4 0.10 3.308 130910
5 0.50 3.296 128233
6 1.00 3.317 118844
7 1.50 3.307 125381
8 2.00 3.339 115505
9 2.50 3.320 114804
2.2.3衍生反应时间的确定
分别称取100mg样品于10mL棕色容量瓶中，加5mL二氯甲烷旋涡混匀1min，0.1mL100μg/mL3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯，0.10mL的二乙胺，旋涡混匀，分别设计不同的超声反应时间，立即用二氯甲烷定容至10mL，上机测试，结果见表3，从表中结果可以看出，随着超声反应时间的增加，目标峰峰面积增加，达到25min后保留时间开始趋向于平稳，考虑到试验效率，确定最佳反应时间为25min。
表3
试验序号 超声反应时间min 保留时间min 峰面积
1 5 3.326 117608
2 10 3.329 120103
3 15 3.357 122981
4 20 3.362 125301
5 25 3.354 130814
6 30 3.378 130535
7 35 3.348 129417
8 40 3.386 128764
2.2.4衍生转化率的研究
精确称取3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯标准物质9mg，置于10mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容，配制浓度为900μg/mL，精密移取该溶液0.10mL，置于10mL棕色容量瓶中，加5.00mL二氯甲烷混匀，加0.10mL二乙胺，混匀超声反应25min，用二氯甲烷定容至10mL，上机测试，以外标法计算可以得到(E)-N，N-二乙基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰酰胺的量。样品测试液转化后的(E)-N，N-二乙基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺理论浓度为
通过测试浓度与理论浓度的比值计算转化率，结果见表4。
表4
2.3溶液配制
2.3.1对照品溶液取(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺10mg，用二氯甲烷溶解定容至10mL作为对照品储备液，浓度为1000ng/mL，准确移取对照品储备液用二氯甲烷稀释制成每1mL中含0.005μg的溶液，作为对照品溶液。
2.3.2供试品溶液称取100mg样品于10ml棕色容量瓶中，加5ml二氯甲烷旋涡混匀1min，加0.1ml二乙胺，超声反应25min，用二氯甲烷定容至10ml。
2.3.3 3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯溶液：取称定3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯适量，精密称定，加二氯甲烷溶解并定量稀释制成每1ml中含1000μg的溶液。
2.4系统适用性
分别取溶剂空白、对照品溶液进样样测试，其中空白进样1次，对照溶液重复进样5次，记录色谱图的保留时间、峰面积，并计算峰面积的相对标准偏差，结果见表5，溶剂空白见图1，对照液重复性见图2，从图表中结果可以看出，空白溶液无干扰峰，峰面积的RSD为1.10％，色谱峰型对称，表明该方法系统适用性较好。
表5系统适应性测试结果
Tab.5 Results of system adaptability test
2.5专属性
分别取空白溶剂、对照品溶液、供测试品溶液进样测试，结果见图3，从图中结果可以看出，在目标物和供测试样品出峰处空白溶剂没有色谱峰，表明该方法专属性良好。
2.6检测限
取对照品溶液，逐级稀释进样分析，稀释至信噪比S/N＝3的浓度为检测限浓度。(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺检测限浓度为0.2ng/ml，以称取100mg样品计算相当于供试品溶液0.0175mg/kg，折算成(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯为0.0153mg/kg。而该杂质的限量为1.38mg/kg，检测限完全满足质量控制的要求。
2.7溶液稳定性考察
取对照品溶液、供试品溶液分别在0小时、2小时、4小时、6小时，8小时，每个时间点进样一次，记录对照品溶液和供试品溶液中(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的保留时间、峰面积；计算平均值及相对标准偏差。其对照品溶液的保留时间和峰面积的RSD分别为0.50％和3.25％，供测试品溶液的保留时间和峰面积的RSD分别为0.40％和2.73％。结果表明对照品和供试品溶液在室温下放置8个小时基本稳定。
2.8线性关系考察
分别取对照品储备液适量，用二氯甲烷稀释成对照品标准系列，浓度依次为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL，分别进样，以对照浓度为横坐标(X，ng/mL)，峰面积为纵坐标(Y，峰面积)，绘制线性回归曲线，其方程式为：Y＝397.942351X+24.963974，相关系数R＝0.9997。结果表明目标物在质量浓度范围1ng/mL～50ng/mL内有很好的线性关系。
2.9重复性与加标回收试验
平行配制6份供测试品溶液(批号20170901)，上样分析，外标法计算含量，6分供测试样的平均浓度为0.039mg/kg，RSD＝1.20％。结果表明重复性良好。
称取100mg样品(批号20170901)于10ml棕色容量瓶中，精密移取0.10mL1000ng/mL的(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯溶液于该溶液中，加5mL二氯甲烷旋涡混匀1min，加0.50ml二乙胺，混匀超声反应30min，用二氯甲烷定容至10ml，上机测试，外标法计算浓度，(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的理论(1.1423为(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯完全转化为(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的转化系数)，根据回收率＝(测得浓度-本底浓度)/添加量×100％，结果见表6，同时计算6次结果的RSD值，从表中结果可以看出，该方法回收率高，重复性好RSD值仅为1.5％，回收率平均值在98.0％。
表6重复性与加标回收率测试结果
Tab.6Results of repeatability and recovery rate test
2.10样品测试
取3个批次的马来酸桂哌齐特的样品进行测试，记录峰面积，标准曲线法计算样品中(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的残留量，结果分别为0.039mg/kg、0.045mg/kg、0.054mg/kg。
3讨论
3.1分析方法的选择
(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯能与正相色谱固定相，流动相中的醇或水发生酯化反应，因此不能直接用色谱法进行分析，要先进行衍生化反应生成稳定的化合物才能进行色谱分析，利用(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯与二乙胺反应定量生成(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的原理，对衍生化后的生成物进行色谱分析。在实验室中发现，液相色谱紫外检测器检测该样品，检出限达不到质量控制的要求，本发明创新地采用液相色谱串联质谱法进行检测，检出限能达到0.20ng/mL，达到了质量控制的要求。
3.2衍生条件的选择
本发明人在前人研究的基础上对衍生反应进行了验证，添加10μg(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯于样品中，对衍生剂二乙胺的添加量和反应时间进行了正交试验，发现在二乙胺加入量为0.10mL，超声反应时间为30min的时候反应最完全，转化率能达到99.7％。
3.3测试条件的优化
通过分析(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺(相对分子质量为293)的分子结构及化学性质，确定胺类物质容易加氢得正离子，所以选择酸性流动相，正离子模式进行条件优化，在正离子模式下选择全扫描(MS2Scan)，绘制总离子流图，结果见图4，从图中结果可以看出丰度最高的峰为(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的加氢峰，选择此离子作为母离子，选择选择性离子监测(MS2SIM)，优化碎解电压(Fragmentor)，找到母离子丰度最大时候的碎解电压值，结果为110V，选择子离子扫描(Product Ion)，寻找子离子，结果见图5，从图中选择丰度最大的两个特征子离子221和190分别作为定量离子和定性离子，选择多反应监测(MRM)，寻找子离子221和190最大丰度时候的碰撞能，结果分别为12V和25V。
3.4溶剂的选择
由于(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯反应活性很强，能与水和醇类物质反生反应，所以不能使用流动相作为溶剂，本发明在选择溶剂的时候发现(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯及其衍生物均能在二氯甲烷中能稳定存在，并且在二氯甲烷中溶解度大，二氯甲烷在以甲醇和甲酸水作为流动相的体系中不产生溶剂效应空白无干扰信号，故本发明在配制标准溶液和样品处理的时候均选择了二氯甲烷作为溶剂。

Claims (10)

1.一种LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，将疑似含有(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的待测样品与二乙胺发生衍生反应，得到衍生后的待测样品，随后采用LC-MS/MS进行测定：
LC-MS/MS测定过程中，
色谱测试条件为
色谱柱：C18反相柱，
流动相：甲醇和0.1％甲酸水溶液的等体积混合溶液；
洗脱方式：等度洗脱；
流速：0.4ml/min；
质谱测试条件为：
离子源：电喷雾离子源ESI；
检测方式：正离子多反应监测模式；
雾化器压力：15psi；
离子喷雾电压：4000V；
干燥器温度：300℃；
干燥器流速：11L/min。
2.如权利要求1所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18(100×2.1mm，2.7μm)。
3.如权利要求1所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，色谱测试过程中，柱温：35℃；进样体积：5μl。
4.如权利要求1所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，监测离子对分别为m/s 294.0/221.0和294.0/190.0。
5.如权利要求1所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，衍生反应中，预先将待测样品用二氯甲烷经旋涡混匀、随后添加二乙胺，再在超声条件下进行所述的衍生反应；
其中，二乙胺在衍生反应的起始溶液中的浓度为1～25(v/v)％。
6.如权利要求1所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，超声反应的时间为20～30min。
7.如权利要求1所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，取(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺，用二氯甲烷溶解并稀释至浓度依次为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的溶液，采用所述的LC-MS/MS的条件进行测定，以各溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制得到线性回归曲线；
待测样品经所述的衍生反应后利用所述的LC-MS/MS方法测定待测样品的目的物的峰面积，再利用该线性回归曲线，换算出待测样品中的(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯含量。
8.如权利要求7所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，采用外标法，向待测样品中添加3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯，经所述的衍生反应后再经所述的LC-MS/MS的条件进行测定，通过所述的线性回归曲线得到测试结果，扣除外标添加量，获得待测样品中的(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯含量。
9.如权利要求1～8任一项所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，所述的待测样品为桂哌齐特及其药学上可接受的盐。
10.如权利要求9所述的LC-MS/MS法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的方法，其特征在于，所述的待测样品为包含有桂哌齐特及其药学上可接受的盐的制剂。
CN201810774292.2A 2018-07-13 2018-07-13 Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法 Pending CN109115900A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810774292.2A CN109115900A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810774292.2A CN109115900A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109115900A true CN109115900A (zh) 2019-01-01

Family

ID=64862593

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810774292.2A Pending CN109115900A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109115900A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115201342A (zh) * 2021-04-08 2022-10-18 四川科瑞德制药股份有限公司 一种盐酸米那普仑中二乙胺的检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000095690A (ja) * 1998-09-24 2000-04-04 Kissei Pharmaceut Co Ltd 血管新生阻害剤
CN101723918A (zh) * 2008-10-24 2010-06-09 重庆医科大学医药研究所 马来酸桂哌齐特的制备工艺
CN102100695A (zh) * 2009-08-17 2011-06-22 北京四环制药有限公司 一种安全性高的桂哌齐特药用组合物及其制备方法和其应用
CN103239453A (zh) * 2012-11-16 2013-08-14 辽宁亿灵科创生物医药科技有限公司 一种马来酸桂哌齐特组合物
CN107632088A (zh) * 2017-09-12 2018-01-26 河北智恒医药科技股份有限公司 一种马来酸桂哌齐特及其制剂中桂哌齐特氮氧化物的测定方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000095690A (ja) * 1998-09-24 2000-04-04 Kissei Pharmaceut Co Ltd 血管新生阻害剤
CN101723918A (zh) * 2008-10-24 2010-06-09 重庆医科大学医药研究所 马来酸桂哌齐特的制备工艺
CN102100695A (zh) * 2009-08-17 2011-06-22 北京四环制药有限公司 一种安全性高的桂哌齐特药用组合物及其制备方法和其应用
CN103239453A (zh) * 2012-11-16 2013-08-14 辽宁亿灵科创生物医药科技有限公司 一种马来酸桂哌齐特组合物
CN107632088A (zh) * 2017-09-12 2018-01-26 河北智恒医药科技股份有限公司 一种马来酸桂哌齐特及其制剂中桂哌齐特氮氧化物的测定方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XINGUI LIU 等: "Senolytic activity of piperlongumine analogues: Synthesis and biological evaluation", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 *
冯国龙 等: "马来酸桂哌齐特的研究进展", 《河北化工》 *
刘华祥: "马来酸桂哌齐特的制备及其光致顺反异构研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 *
徐力昆 等: "LC-MS/MS测定马来酸桂哌齐特原料合成中间体残留", 《中国现代应用药学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115201342A (zh) * 2021-04-08 2022-10-18 四川科瑞德制药股份有限公司 一种盐酸米那普仑中二乙胺的检测方法
CN115201342B (zh) * 2021-04-08 2024-02-20 四川科瑞德制药股份有限公司 一种盐酸米那普仑中二乙胺的检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhao et al. Stable isotope labeling derivatization and magnetic dispersive solid phase extraction coupled with UHPLC-MS/MS for the measurement of brain neurotransmitters in post-stroke depression rats administrated with gastrodin
CN102702008B (zh) 阿戈美拉汀硫酸复合物及其制备方法
CN105136957B (zh) 一种同时测定人血浆中oxc以及代谢产物mhd和mhd-g的检测方法
CN110082440A (zh) 超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法
CN108918722B (zh) 一种基于hplc-ms/ms技术检测nmda受体拮抗剂jcc-02血药浓度的方法
CN107064350A (zh) 一种枸橼酸托法替布疑似基因毒性杂质的检测方法
CN110243963A (zh) 一种人血浆中卡托普利的lc-ms/ms检测方法
CN106153798B (zh) 一种用于分析依鲁替尼及依鲁替尼制剂有关物质的hplc方法以及这些杂质做参比标准的用途
CN106338564B (zh) 一种用于检测维格列汀中间体中对映异构体的方法
CN106153797B (zh) 一种依鲁替尼及依鲁替尼制剂有关物质分析方法
CN109115900A (zh) Lc-ms/ms法测定（e）3,4,5-三甲氧基肉桂酰氯的方法
CN108872431B (zh) 一种检测4-(1-(2,5-二甲基苯基)乙基)-1h-咪唑或/和其盐酸盐的方法
CN114264745A (zh) 甲磺酸伊马替尼有关物质及其制剂有关物质的检测方法
CN110261531A (zh) 一种洛索洛芬或其钠盐中有关物质的检测方法
CN105004803B (zh) 一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法
Huang et al. Liquid chromatography with electrospray ionization mass spectrometry method for the assay of glucosamine sulfate in human plasma: validation and application to a pharmacokinetic study
CN114324642B (zh) 一种氢溴酸右美沙芬有关物质的测定方法
Wang et al. Microdialysis sampling combined with ultra‐high‐performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry for the determination of geniposide in dialysate of joint cavities in adjuvant arthritis rats
CN114689767A (zh) 一种阿立哌唑原料及其制剂有关物质的检测方法
CN105572264A (zh) Uplc-ms/ms法测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物scr868的浓度
CN109134601A (zh) 一种硼替佐米的杂质及其制备方法
Mallavarapu et al. A Development and Validation of RP-HPLC Method for the Determination of Degradation Impurities in Anagrelide Dosage Form
CN109298081A (zh) 一种新利司他中杂质a生物样品的测定方法
CN109270178A (zh) 一种高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法
CN111751469B (zh) 一种液相色谱串联质谱测定血浆中教酒菌素浓度的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190101