CN109090033A - 粪便移植实验仔猪模型的构建方法 - Google Patents
粪便移植实验仔猪模型的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109090033A CN109090033A CN201811024719.3A CN201811024719A CN109090033A CN 109090033 A CN109090033 A CN 109090033A CN 201811024719 A CN201811024719 A CN 201811024719A CN 109090033 A CN109090033 A CN 109090033A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- piglet
- caprophyl
- sterile
- transplantation experiments
- excrement
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000013310 pig model Methods 0.000 claims abstract description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 12
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 7
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 39
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical compound CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 26
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 26
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 25
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 abstract description 18
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 abstract description 13
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 abstract description 12
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 12
- 102000003940 Occludin Human genes 0.000 abstract description 11
- 108090000304 Occludin Proteins 0.000 abstract description 11
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 10
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 9
- 102000011154 Tight junction protein ZO-1 Human genes 0.000 abstract description 8
- 108050001370 Tight junction protein ZO-1 Proteins 0.000 abstract description 8
- -1 n-butyric acie Chemical compound 0.000 abstract description 7
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 abstract description 6
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 abstract description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 abstract description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 62
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 23
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 description 4
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 2
- 244000153665 Ficus glomerata Species 0.000 description 2
- 235000012571 Ficus glomerata Nutrition 0.000 description 2
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 230000013370 mutualism Effects 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 2
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 description 1
- QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 2-Oxohexane Chemical compound CCCCC(C)=O QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 208000033962 Fontaine progeroid syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000283207 Indigofera tinctoria Species 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000033822 gland development Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000012109 statistical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于含氨无机化合物的医用配制品技术领域，具体涉及一种粪便移植实验仔猪模型的构建方法，其对无菌新生仔猪进行粪菌移植，即得。本发明的方法避免了抗生素或其他杀菌药物处理，构建出的粪菌移植猪模型效果良好，无药物残留，能够更真实可靠反映供体菌群功能；能够提高仔猪空肠内紧密连接蛋白ZO‑1和Occludin的表达水平；能够促进仔猪肠壁肌肉层和腺体的发育；提高了仔猪肠道内乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量。
Description
技术领域
本发明属于含氨无机化合物的医用配制品技术领域，具体涉及一种粪便移植实验仔猪模型的构建方法。
背景技术
肠道菌群不仅数量庞大，在功能上也尤为重要。肠道菌群不仅参与人体的能量代谢，并且在免疫系统的调节机制中也承担着至关重要的生理功能(“Host-bacterialmutualism in the human intestine”,Bckhed F.et al.，Science，2005，307(5717)：1915-1920，公开日2005年12月31日)。因此，将肠道菌群作为人体的一个独立且密不可分的器官来看一点也不为过。菌群的各个群落也并非都对人体的健康有益，健康的肠道菌群有着自己独特的调节方式，维持着正常的动态平衡，内在的复杂菌落，作为一个整体，呈现出健康的工作模式，承担着重要的生理功能(“An ecological and evolutionaryperspective on human-microbe mutualism and disease”，Dethlefsen L.et al.,Nature，2007，449(7164)：811-818，公开日2007年12月31日)。然而，在过去的数年里，抗生素的滥用破坏了肠道菌群的正常结构，打破了肠道菌群自我调节的动态平衡，导致多种肠道疾病发生(“Fecal microbiota transplantation broadening its applicationbeyond intestinal disorders”，Xu M.Q.et a1,world J.Gastroenterol，2015，21(1)：102-l11，公开日2015年12月31日)。菌群受到破坏，恢复到健康的结构非常困难，也使得与菌群紊乱导致的疾病难以治疗，如便秘、肠易激综合征、炎症性肠病、神经系统疾病、心血管疾病、肥胖、代谢综合征、过敏性疾病和自身免疫性疾病等(“Inducible Foxp3 regulatoryT-cell development by a commensal bacterium of the intestina1mierobiota”，Round J.L.et a1,Proc Nat1Acad Sci U S A，2010，107(27)：12204-12209，公开日2010年12月31日；“Therapeutic potential of fecal microbiota transplantation”，LoekP.S.et a1.，Gastroenterology，2013，145(5)：946-953，公开日2013年12月31日；“Theprogress in research of constipation-related gut microbes”，ZHAO Xian-ping eta1.，Chin J.Mieroecol，2014，26(10)：1236-1240，公开日2014年12月31日)。在这种背景下，粪菌移植的概念应运而生。
粪菌移植(Fecal Microbiota Transplantation，英文简称FMT)又名粪便移植、粪菌治疗、肠菌移植或肠微生态移植，是将健康人体粪便中的正常功能菌群，分离移植到患者胃肠道内，重建新的肠道菌群，从而实现肠道及肠道外疾病的治疗。迄今，全世界已有约3万余例患者接受粪菌移植治疗(“Fecal microbiota transplantation for severeenterocolonic fistulizing Crohn's disease”，FaMing Zhang et al.，WorldJ.Gastroenterol，2013，19(41)，7213-7216，公开日2013年12月31日)。
FMT治疗研究目前正处于起步阶段，相关供体的筛选标准、菌液制备的质量和安全性、移植流程的规范操作等需要进一步研究确定。FMT对肠道菌群的重建机制目前仍不清楚，肠道宏基因组研究计划的开展，分析治疗前后患者肠道菌群结构和功能的变化，明确具体的功能菌群，探索疾病相关的靶菌群及相关的微生物产物，可能会为FMT在临床的应用提供更多有效的理论基础(“粪菌移植的应用研究进展”，张碧碧等，中国全科医学，2016年第19卷第5期，第611-615页，公开日2016年02月29日)。因此，有必要构建粪菌移植模型进行深入研究和分析(公开号为CN107349225A，公开日为2017年11月17日)。
目前，粪菌移植实验模型以粪菌移植鼠模型为主，如公开号为CN107349225A的专利文献公开了一种粪菌移植的实验小鼠模型，其先对小鼠灌胃注射抗生素溶液，再让小鼠以泻药溶液为水源进行饮用，最后进行粪菌移植。然而，利用抗生素或泻药等净化处理手段，来获得SPF级或以上的实验动物并开展粪菌移植等实验时，其药物残留易造成模型效果差，或者影响肠道菌群研究结果，难以反映菌群定植或机体免疫或发育的真实情况。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种粪便移植实验仔猪模型的构建方法。以该方法构建粪便移植实验仔猪模型，无药物残留，模型效果好，能够真实可靠反映菌群定植或机体免疫或发育的真实情况。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
粪便移植实验仔猪模型的构建方法，对无菌新生仔猪进行粪菌移植，即得。
发明人意外发现，采用以下方法构建粪便移植实验仔猪模型：对无菌新生仔猪进行粪菌移植。无药物残留，得到的模型效果好，能够真实可靠反映菌群定植或机体免疫或发育的真实情况。
此外，发明人还发现，以啮齿类动物(如小鼠)来构建、模拟大型动物(如猪)或人类肠道菌群定植特征，双歧杆菌属、乳杆菌属和梭菌属中的某些菌种，无法在小鼠肠道内定植，导致结果并不可靠。
进一步，所述无菌新生仔猪肠道内未检出微生物。
在本发明中，以肠道内未检出微生物无菌新生仔猪进行粪菌移植构建得到的粪便移植实验仔猪模型结果可靠，能够更加真实可靠的反映菌群定植或机体免疫或发育的真实情况。
进一步，所述的粪便移植实验仔猪模型的构建方法，具体包括以下步骤：
A.无菌剖腹产获取无菌新生仔猪；
B.对无菌仔猪进行粪菌移植，即得。
在本发明中，具体包括以下步骤：A.无菌剖腹产获取无菌新生仔猪；B.对无菌仔猪进行粪菌移植，即得；的方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型能够提高仔猪空肠内紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平。
进一步，步骤B所述粪菌移植具体为：收集粪菌供体猪新鲜粪便，将新鲜粪便与4-10℃灭菌水在无菌条件下按照质量比1:3-1:10混合均匀，过滤，得粪菌溶液；再将粪菌溶液与灭菌甘油按照体积比8-9:1-2混合，立即使用或者冻存；然后将冻存或新制的粪菌溶液移植到受体无菌仔猪，即构建得到粪菌移植实验猪模型。
在本发明中，具体包括以下步骤：A.无菌剖腹产获取无菌新生仔猪；B.收集粪菌供体猪新鲜粪便，将新鲜粪便与4-10℃灭菌水在无菌条件下按照质量比1:3-1:10混合均匀，过滤，得粪菌溶液；再将粪菌溶液与灭菌甘油按照体积比8-9:1-2混合，立即使用或者冻存；然后将冻存或新制的粪菌溶液移植到受体无菌仔猪；的方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型能够促进仔猪肠壁肌肉层和腺体的发育；同时，提高了仔猪肠道内乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量。
本发明的目的之二在于保护上述方法得到的粪便移植实验仔猪模型。
采用上述方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型无药物残留，得到的模型效果好，能够真实可靠反映菌群定植或机体免疫或发育的真实情况。
本发明的目的还在于保护无菌仔猪在构建粪便移植实验动物模型中的应用。将无菌仔猪用于构建粪便移植实验动物模型，得到的粪便移植实验动物模型无药物残留，得到的模型效果好，能够真实可靠反映菌群定植或机体免疫或发育的真实情况。
本发明的有益效果在于：
本发明的方法效果良好，适用于肠道菌群相关科学研究。
本发明的方法得到的粪便移植实验仔猪模型能够真实可靠反映供体菌群功能，粪菌移植实验猪肠道菌群组成与供体粪菌悬液中菌群组成的相似度在门水平超过96％，在属水平达到91.13％。
本发明的方法避免了抗生素或其他杀菌药物处理，构建出的粪菌移植猪模型效果良好，无药物残留，粪菌移植实验猪肠道菌群组成与供体粪菌悬液中菌群组成的相似度在门水平超过96％，在属水平达到91.13％。
本发明的方法得到的粪便移植实验仔猪模型能够提高仔猪空肠内紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平。
本发明的方法得到的粪便移植实验仔猪模型能够促进仔猪肠壁肌肉层和腺体的发育。
本发明的方法得到的粪便移植实验仔猪模型提高了仔猪肠道内乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量，与对照组猪相比，实验组猪结肠内乙酸含量提高了66.15％，结肠内正丙酸含量提高了95.52％，结肠内异丁酸含量提高了4.26倍，结肠内正丁酸含量提高了2.04倍，结肠内异戊酸含量提高了8.22倍，结肠内正戊酸含量提高了3.74倍。
附图说明
图1为供体粪菌悬液(供体组)和粪菌移植实验猪(受体组)粪便中微生物组成相似性情况图，其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，FB为供体粪菌组(供体组)，图1A为粪菌移植组和供体粪菌组多样本的聚类树图，图1B为粪菌移植猪和供体粪菌移植组多样本的维恩图；
图2为粪菌移植实验猪空肠内紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平图；其中，其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，GF为没有接种粪菌悬液的对照猪组，图2A为Western-blot法对猪空肠组织紧密连接蛋白ZO-1(闭合小环蛋白1)进行蛋白杂交后的结果图，图2B为猪空肠组织紧密连接蛋白ZO-1(闭合小环蛋白1)条带灰度分析图，图2C为Western-blot法对猪空肠组织紧密连接蛋白Occludin(咬合蛋白)进行蛋白杂交后的结果图，图2D对猪空肠组织紧密连接蛋白Occludin(咬合蛋白)条带灰度分析图；
图3为粪菌移植实验猪空肠肠道组织学HE染色图；其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，GF为没有接种粪菌悬液的对照猪组，图3A为FMT组实验猪空肠肠道组织学HE染色图，图3B为GF组实验猪空肠肠道组织学HE染色图；
图4为粪菌移植实验猪结肠内短链脂肪酸的含量测试结果图；其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，GF为没有接种粪菌悬液的对照猪组，图4A为猪结肠内乙酸含量测试结果图；图4B为猪结肠内正丙酸含量测试结果图；图4C为猪结肠内异丁酸含量测试结果图；图4D为猪结肠内正丁酸含量测试结果图；图4E为猪结肠内异戊酸含量测试结果图；图4F为粪菌移植实验猪结肠内正戊酸含量测试结果图。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
粪便移植实验仔猪模型的构建方法，具体步骤为：
A.对健康母猪进行无菌剖腹产手术，子宫剖除术或者子宫剖开术，将新生无菌仔猪饲养于隔离器内，保持空气洁净度；仔猪所用的饮水、饲料灭菌处理；
B.取10g供体猪新鲜粪便，加入60g灭菌水并混合均匀，用4层灭菌纱布过滤，得粪菌溶液，再将粪菌溶液与灭菌甘油(分析纯)按照体积比为8.5:1.5混合，于4℃冷冻15min后，转入-80℃冷冻保存，再移植至受体实验无菌仔猪。
对比例1
粪便移植实验仔猪模型的构建方法，具体步骤为：
A.对健康母猪进行无菌剖腹产手术，子宫剖除术或者子宫剖开术，将新生无菌仔猪饲养于隔离器内，保持空气洁净度；仔猪所用的饮水、饲料灭菌处理。
除未经步骤B处理外，以上对比例1和实施例1的其他管理方式完全相同，实施例1和对比例1的无菌仔猪在不同的隔离器内饲养，空气，饮水和饲料都互不干扰。
性能检测
按照实施例1所述方法制备5个批次的实验猪粪菌悬液，各取5mL，分别进行宏基因组测序(分别命名为FB_1、FB_2、FB_3、FB_1和FB_5)；使用时，5个批次的粪菌悬液混合后备用。
按照《GBT 14926.41-2001实验动物无菌动物生活环境及粪便标本的检测方法》检测实施例1中步骤A饲养的仔猪肠道内微生物含量，经检测未检出。
检测实施例1中供体粪菌悬液(供体组)与粪菌移植受体试验仔猪(即受体组)中粪便微生物组成相似性情况，检测方法为：
(1)无菌剖腹产获取的无菌仔猪共10头，在3日龄时分别接种粪菌悬液；每头7mL/次，连续3天；隔离环境下饲喂到21日龄时，收集这10头粪菌移植实验猪的新鲜粪便，液氮速冻后，提取细菌基因组，并进行宏基因组测序；
(2)细菌基因组提取
使用FastDNA Stool Mini Kit(50)细菌DNA提取试剂盒提取[QIAGENGmbH,QIAGEN Strasse1,40724 Hilden,Germany]。提取步骤：在经预处理的标本中加200μL含溶菌酶的TE(溶菌酶浓度20mg/mL)，用移液枪混匀。室温下孵育40min加入试剂盒中提供的消化缓冲液400μL，混匀；再加入3uL蛋白酶K，混匀后55℃保温2-3h。加入260μL无水乙醇，混匀后将样品全部转移至UNIQ-10柱中。8000rpm室温离心1min。取下UNIQ-10柱，弃去收集管中的废液。将柱放回收集管中，加入500uL洗液，10000rpm室温离心30s。此步骤重复两次。取下UNIQ-10柱，弃去收集管中的全部废液。将柱放回收集管中，10000rpm室温离心1min，以除去残留洗液。将柱放入新的Eppendorf管中，在柱中央加入50uL洗脱缓冲液，室温或37℃放置2min。10000rpm室温离心1min。离心管中收集的液体即为细菌基因组DNA。
(3)细菌基因组样本的检测与文库构建
1％琼脂糖凝胶电泳检测抽屉的基因组DNA。检测仪器：Covaris M220。构建PE文库后进行桥式PCR，之后利用Illumina Hiseq测序平台进行宏基因组测序。
(4)测序序列分析
利用Illumina测序平台第二代测序技术，对上述15个样本进行宏基因组测序。经测序序列质控、组装拼接。利用Venne图统计所有样本中共有和独有的微生物物种。对样本进行层级聚类，利用树枝结构描述和比较供体粪菌样本和粪菌移植猪粪菌样本中微生物组成的相似性。计算方法：利用Qiime计算beta多样性距离矩阵，再用R语言作图画树，结果如图1所示；
其中；FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，FB为供体粪菌组(供体组)，图1A为粪菌移植组和供体粪菌组多样本的聚类树图，图1B为粪菌移植猪和供体粪菌移植组多样本的维恩图。
由图1可知，在细菌属(Genus)分类水平上，供体粪便悬液中共2508种细菌属分类成功定植到了实验猪肠道内，粪菌移植实验猪肠道菌群组成与供体粪菌悬液中菌群组成的相似度在门水平超过96％，在属水平达到91.13％。
检测实施例1中粪菌移植受体试验仔猪(实验组猪)及对比例1中无菌仔猪(对照组猪)空肠内紧密连接蛋白ZO-1和Occludin蛋白的表达水平，检测方法为：
(1)蛋白质提取
用RIPA裂解液(150mM NaCl、1％Triton X-100、0.5％脱氧胆酸、0.1％SDS、50mMTris-HCl，pH 7.4，Beyotime公司，中国)提取动物试验中仔猪的空肠黏液中的蛋白质。简要步骤为：吸取200uL左右的空肠黏液于无菌EP管中，加入含混合蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，置于冰上裂解30min，离心得到上清液即为蛋白质提取物。随后，用BCA法(Thermo公司，美国)测定蛋白质提取物的总蛋白质的含量。
(2)Western-blot检测
用样品将4×Loading Buffer稀释为1×Loading Buffer并充分混匀，随后将样品放入水中煮沸5min，进行蛋白变性。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中进行跑胶，120V，2h。随后进行转膜(PVDF膜，Millipore公司，美国)，30V，1h。转膜后的PVDF膜用5％脱脂奶粉溶液室温封闭1h后，加入一抗anti-Occludin(Thermo公司，美国)或者anti-ZO-1(Thermo公司，美国)，4℃慢摇过夜，PBST缓冲液洗3次，每次5min，加入荧光标记的驴抗兔-IgG抗体(lifetechnologies，美国)，室温孵育1h，PBST缓冲液洗3次，每次5min，。以同样品管家蛋白GDPH(Abcam，英国)作为内参，应用成像系统(Alpha，美国)的密度分析功能进行灰度分析。
(3)统计学处理
采用SPSS19.0软件对试验数据统计分析：各时间点之间采用单因素方差分析对数据进行处理，确定P<0.05为显著差异，每个试验重复3次，结果如图2和表1所示；
其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，GF为没有接种粪菌悬液的对照猪组，图2A为Western-blot法对猪空肠组织紧密连接蛋白ZO-1(闭合小环蛋白1)进行蛋白杂交后的结果图，图2B为对猪空肠组织紧密连接蛋白ZO-1(闭合小环蛋白1)条带灰度分析图，图2C为Western-blot法对猪空肠组织紧密连接蛋白Occludin(咬合蛋白)进行蛋白杂交后的结果图，图2D为对猪空肠组织紧密连接蛋白Occludin(咬合蛋白)条带灰度分析图。
由图2可知，与对照组猪相比，实验组猪肠道内紧密连接蛋白ZO-1和Occludin蛋白的表达水平得到了提高。由此证明，本发明的方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型提高了仔猪空肠组织中ZO-1和Occludin蛋白表达量。
对实施例1中粪菌移植受体试验仔猪(实验组猪)及对比例1中无菌仔猪(对照组猪)空肠进行肠道苏木素·伊红染色分析，具体为：将空肠组织修整成小块，常规梯度酒精脱水、透明，浸蜡，石蜡包埋，切片。再进行H&E染色：十二指肠、空肠的石蜡切片浸入二甲苯脱蜡，接着梯度酒精脱二甲苯，苏木精染色10-20min，自来水冲洗1-3min，盐酸酒精分化5-10s，自来水冲洗1-3min，放入50℃的温水中或弱碱性水溶液返蓝，直到出现蓝色为止；自来水冲洗1-3min，放入85％的酒精3-5min，伊红染色3-5min，水洗3-5s，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用数码三目摄像显微镜观察空肠形态结构，结果如图3所示，其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，GF为没有接种粪菌悬液的对照猪组，图3A为FMT组实验猪空肠肠道组织学HE染色图，图3B为GF组实验猪空肠肠道组织学HE染色图。
由图3可知，实验组猪空肠的外环肌、肉纵肌厚度均高于对照组猪；实验组猪空肠的内腺体数量明显高于对照组猪，且与对照组猪相比，实验组猪空肠的黏膜更发达。由此证明，本发明的方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型促进了仔猪肠壁肌肉层和腺体的发育。
检测实施例1中粪菌移植受体试验仔猪(实验组猪)及对比例1中无菌仔猪(对照组猪)结肠内乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量，检测方法为：
(1)样品前处理
取样品加入2mL水，涡旋均浆2min，加入1mL乙醚萃取10min 4000转/min离心20min(做低温处理，放置于冰水浴中离心)；再加入1mL乙醚萃取10min4000转/min离心分离；将两次萃取液合并挥发至1mL以内，加入0.1mL 1000mg/L乙醚内标液，然后定容至1mL。进样分析。
(2)标准品的配制：
分别取0.2000g的乙酸，正丙酸，异丁酸，正丁酸，异戊酸，正戊酸，0.01g内标物(环己酮)，与100mL容量瓶中加入乙醚定容。
(3)上机测定
选用赛默飞世尔，型号GCMS ISQ LT作为测试仪器。短链脂肪酸气质联用条件如下：柱温：140℃(6min)-5℃/min-160℃(6min)；进样器：180℃；流速：0.8ml/min；质谱：EI源SIM扫描；离子源温度：200℃
(4)定量分析结果的计算
以气相色谱分析挥发性短链脂肪酸(SCFAs)浓度的原理是根据比较标准溶液中各组分和样品中相应组分的峰高和峰面积计算。但现代的气相色谱仪带有微机对个组分的峰面积进行自动积分，并与标准溶液中的相应组分的峰面积进行比较，同时根据样品的稀释倍数计算出个组分的浓度并计算结果；
(5)统计学分析，
采用SPSS19.0软件对试验数据统计分析：各时间点之间采用单因素方差分析对数据进行处理，确定P<0.05为显著差异，每个试验重复3次，结果如图4和表1所示；其中，FMT为接种了粪菌悬液的实验猪组，GF为没有接种粪菌悬液的对照猪组，图4A为猪结肠内乙酸含量测试结果图；图4B为猪结肠内正丙酸含量测试结果图；图4C为猪结肠内异丁酸含量测试结果图；图4D为猪结肠内正丁酸含量测试结果图；图4E为猪结肠内异戊酸含量测试结果图；图4F为猪结肠内正戊酸含量测试结果图。
由图4可知，实验组猪结肠内容物中乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量明显高于对照组猪(P<0.05)。由此证明，本发明的方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型提高了仔猪肠道内乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量。
表1挥发性短链脂肪酸含量测试结果
| 对照猪组(GF) | 实验猪组(FMT) | |
| 结肠内乙酸含量/(μg/g) | 514.39±138.48 | 854.65±25.30 |
| 结肠内正丙酸含量/(μg/g) | 46.28±8.69 | 90.33±31.72 |
| 结肠内异丁酸含量/(μg/g) | 62.24±32.41 | 327.38±46.79 |
| 结肠内正丁酸含量/(μg/g) | 14.23±2.08 | 43.33±4.57 |
| 结肠内异戊酸含量/(μg/g) | 2.42±0.12 | 22.31±9.52 |
| 结肠内正戊酸含量/(μg/g) | 8.78±1.35 | 41.65±5.96 |
由表1可知，与对照组猪相比，实验组猪结肠内乙酸含量提高了66.15％，结肠内正丙酸含量提高了95.52％，结肠内异丁酸含量提高了4.26倍，结肠内正丁酸含量提高了2.04倍，结肠内异戊酸含量提高了8.22倍，结肠内正戊酸含量提高了3.74倍。由此证明，本发明的方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型提高了仔猪肠道内乙酸、正丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸等多种挥发性短链脂肪酸的含量。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (6)
1.粪便移植实验仔猪模型的构建方法，其特征在于，对无菌新生仔猪进行粪菌移植，即得。
2.根据权利要求1所述的粪便移植实验仔猪模型的构建方法，其特征在于，所述无菌新生仔猪肠道内未检出微生物。
3.根据权利要求1或2所述的粪便移植实验仔猪模型的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
A. 无菌剖腹产获取无菌仔猪；
B.对无菌仔猪进行粪菌移植，即得。
4.根据权利要求3所述的粪便移植实验仔猪模型的构建方法，其特征在于，步骤B所述粪菌移植具体为：
收集粪菌供体猪新鲜粪便，将新鲜粪便与4-10℃灭菌水在无菌条件下按照质量比1:3-1:10混合均匀，过滤，得粪菌溶液；再将粪菌溶液与灭菌甘油按照体积比8-9:1-2混合，立即使用或者冻存；然后将冻存或新制的粪菌溶液移植到受体无菌仔猪，即构建得到粪菌移植实验猪模型。
5.权利要求1-4任一项方法构建得到的粪便移植实验仔猪模型。
6.无菌仔猪在构建粪便移植实验动物模型中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811024719.3A CN109090033A (zh) | 2018-09-04 | 2018-09-04 | 粪便移植实验仔猪模型的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811024719.3A CN109090033A (zh) | 2018-09-04 | 2018-09-04 | 粪便移植实验仔猪模型的构建方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109090033A true CN109090033A (zh) | 2018-12-28 |
Family
ID=64864976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811024719.3A Pending CN109090033A (zh) | 2018-09-04 | 2018-09-04 | 粪便移植实验仔猪模型的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109090033A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110045040A (zh) * | 2019-05-17 | 2019-07-23 | 江南大学 | 一种测定肠道内容物或粪便中短链脂肪酸含量的方法 |
| CN110189827A (zh) * | 2019-05-24 | 2019-08-30 | 天益健康科学研究院（镇江）有限公司 | 一种获得肠道菌群测序报告的方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN2824561Y (zh) * | 2005-08-19 | 2006-10-11 | 浙江大学 | 无菌大鼠人工哺乳用装置 |
| JP2009209492A (ja) * | 2008-03-05 | 2009-09-17 | San Nopco Ltd | 塗工液 |
| CN104548093A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-29 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种用于治疗仔猪腹泻的组合物及其制备方法 |
| CN205727536U (zh) * | 2016-06-27 | 2016-11-30 | 重庆市畜牧科学院 | 一种猪用无菌饲养隔离器 |
| CN205727520U (zh) * | 2016-06-27 | 2016-11-30 | 重庆市畜牧科学院 | 一种无菌仔猪运输隔离器 |
| CN107182925A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-09-22 | 浙江大学 | 粪便菌群移植技术及其应用 |
| US20180030403A1 (en) * | 2016-07-28 | 2018-02-01 | Bobban Subhadra | Devices, systems and methods for the production of humanized gut commensal microbiota |
| CN108207791A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-06-29 | 武汉轻工大学 | 新生仔猪肠道正常健康功能菌群早期建立方法 |
-
2018
- 2018-09-04 CN CN201811024719.3A patent/CN109090033A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN2824561Y (zh) * | 2005-08-19 | 2006-10-11 | 浙江大学 | 无菌大鼠人工哺乳用装置 |
| JP2009209492A (ja) * | 2008-03-05 | 2009-09-17 | San Nopco Ltd | 塗工液 |
| CN104548093A (zh) * | 2014-12-22 | 2015-04-29 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种用于治疗仔猪腹泻的组合物及其制备方法 |
| CN205727536U (zh) * | 2016-06-27 | 2016-11-30 | 重庆市畜牧科学院 | 一种猪用无菌饲养隔离器 |
| CN205727520U (zh) * | 2016-06-27 | 2016-11-30 | 重庆市畜牧科学院 | 一种无菌仔猪运输隔离器 |
| US20180030403A1 (en) * | 2016-07-28 | 2018-02-01 | Bobban Subhadra | Devices, systems and methods for the production of humanized gut commensal microbiota |
| CN107182925A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-09-22 | 浙江大学 | 粪便菌群移植技术及其应用 |
| CN108207791A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-06-29 | 武汉轻工大学 | 新生仔猪肠道正常健康功能菌群早期建立方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 郝光荣: "《实验动物学》", 31 October 2002, 第二军医大学出版社（上海） * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110045040A (zh) * | 2019-05-17 | 2019-07-23 | 江南大学 | 一种测定肠道内容物或粪便中短链脂肪酸含量的方法 |
| CN110189827A (zh) * | 2019-05-24 | 2019-08-30 | 天益健康科学研究院（镇江）有限公司 | 一种获得肠道菌群测序报告的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Trott et al. | The prevalence of Serpulina pilosicoli in humans and domestic animals in the Eastern Highlands of Papua New Guinea | |
| Savage | Microbial biota of the human intestine: a tribute to some pioneering scientists | |
| Tannock | What immunologists should know about bacterial communities of the human bowel | |
| Lei et al. | Intestinal microbiota regulate certain meat quality parameters in chicken | |
| CN110079637B (zh) | 一种牛轮状病毒、冠状病毒、病毒性腹泻病毒多联rt-pcr检测方法 | |
| Licois et al. | 3.4. Epizootic rabbit enteropathy | |
| CN105407872A (zh) | 噬菌体疗法 | |
| Ushijima et al. | Selected faecal bacteria and nutrients essential for antagonism of Salmonella typhimurium in anaerobic continuous flow cultures | |
| CN111020001A (zh) | 一种新型唾液保存液及其制备方法和应用 | |
| Orieux et al. | Prevalence of Flavobacterium psychrophilum bacterial cells in farmed rainbow trout: characterization of metallothionein A and interleukin1-β genes as markers overexpressed in spleen and kidney of diseased fish | |
| Tannock | The search for disease-associated compositional shifts in bowel bacterial communities of humans | |
| Gałęcki et al. | Treatment of cryptosporidiosis in captive green iguanas (Iguana iguana) | |
| CN109090033A (zh) | 粪便移植实验仔猪模型的构建方法 | |
| Jung et al. | Colonization patterns of Enterococcus cecorum in two different broiler production cycles detected with a newly developed quantitative real-time PCR | |
| Orioles et al. | Effect of temperature on transfer of Midichloria-like organism and development of red mark syndrome in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) | |
| CN106387314A (zh) | 脆弱拟杆菌在动物养殖中的应用 | |
| He et al. | Influence of colonic dialysis using Chinese medicine on creatinine decomposition by intestinal bacteria in uremia rats | |
| Ajaz-ul-Haq et al. | Isolation of Clostridium perfringens from Goats and Sheep of the Khuzdar district of Balochistan, Pakistan | |
| CN105132555B (zh) | 一种中国大鲵的感染肺炎克雷伯氏菌的pcr检测试剂盒及检测方法 | |
| Bi et al. | Early social contact alters the community structure and functions of the faecal microbiome in suckling-growing piglets | |
| Cao et al. | Characterization, estimation of virulence and drug resistance of diarrheagenic escherichia coli (DEC) isolated from Tibetan pigs | |
| CN111097044A (zh) | 犬型钩端螺旋体、黄疸出血型钩端螺旋体、犬冠状病毒三联灭活疫苗 | |
| Czinn et al. | Characterization and therapy for experimental infection by Helicobacter mustelae in ferrets | |
| CN110129423A (zh) | 一种利用高通量基因测序评估生殖道菌群健康的方法 | |
| Ownagh et al. | Identification of Salmonella carriers by amplification of FimA, Stn and InvA genes and bacterial culture methods in fecal samples of buffalo |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181228 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |