CN109044979A - 缓释微球、蛋白质糖基化抑制剂缓释体系及其制备和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及缓释微球技术领域，具体涉及缓释微球、蛋白质糖基化抑制剂缓释体系及其制备和应用，所述缓释微球包括从里到外依次为核心球以及包覆在所述核心球表面的至少两层缓释层，组成核壳结构，根据蛋白质糖基化进程不同阶段的特点，利用缓释微球，在不同的缓释层包埋针对不同阶段的抑制剂，所述缓释微球包覆紧密合理，包埋量大，形态规则均一，分散性好，缓释过程稳定，防止突释现象，针对早、中、晚期阶段的抑制剂从外到里包埋进缓释微球内，进一步提高了抑制效果，延长了缓释时间，其制备方法采用物理混合、高压电场、高压均质等方式，不引入不必要的化学试剂，且方法简便，包埋效果好，实用性强，可用于食品、医药或化妆品领域。

Description

缓释微球、蛋白质糖基化抑制剂缓释体系及其制备和应用
技术领域
本发明涉及缓释微球技术领域，具体涉及缓释微球、蛋白质糖基化抑制剂缓释体系及其制备和应用。
背景技术
蛋白质糖基化是在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质，和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键。蛋白质经过糖基化作用，形成糖蛋白，同时产生副产物。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用，有调节蛋白质功能作用，但是在食品的加工和保存过程中，蛋白质糖基化不仅影响食品的性状、营养价值，还会产生对人体有害的物质，是使得食品变质的一个主要因素，因此抑制蛋白质糖基化对于食品的保存和质量保证具有重要的意义。
蛋白质糖基化进程中，在不同的阶段有特异性的表现，早期阶段产生Amadori产物，中间阶段产生一些醛类物质和自由基，晚期阶段发生高级糖基化，产生一些不溶于水的聚合物，现有技术使用糖基化抑制剂作为一种食品添加剂，抑制糖基化的过程，常用的蛋白质糖基化抑制剂有维生素C、维生素E、芦丁、硒代蛋氨酸、茶多酚、儿茶素、表儿茶素等，但是单独使用这些物质，在复杂的蛋白质糖基化过程中，往往只在某一阶段发生作用，或者开始阶段发生抑制作用，短时间后迅速失效，而使用不同抑制剂的混合物，也并不会使作用时间得到有效延长，而食品从加工生产到存储、售卖、使用，需要一个较长的时间，不同蛋白质糖基化抑制剂的混合物的作用效果不够理想。
缓释技术能有效地延长活性成分的作用时间，缓释技术在医药行业中应用最为广泛，而且常将具有协同作用的药物制成缓释体系，例如中国专利文献CN 108465104 A公开了一种生长激素控释包衣及其制备方法，按照人体消化道的结构以及反应规律有针对性地设置了最外层超疏水涂层、中间层丝素肽涂层以及最内层生长激素控释微球的三层结构，显著提高了生长激素控释包衣的药效稳定性与长效性，有效避免药物突释现象的发生，但是这种技术针对性的应用于人体消化系统，并不能应用于蛋白质糖基化抑制过程中。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术蛋白质糖基化抑制效果差时间短等问题，提供一种分散均一、抑制过程稳定、效果好、抑制时间长的缓释微球，应用缓释微球的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系及其制备方法和应用。
本发明提供了一种缓释微球，包括从里到外依次为核心球以及包覆在所述核心球表面的至少两层缓释层，组成核壳结构的缓释微球，所述两层缓释层包括第一缓释层和第二缓释层；
所述核心球为内部带有孔洞结构的纳米微球，所述纳米微球表面圆滑，带有正电荷；
所述第一缓释层为带有负电荷的包覆剂，包覆于所述核心球外层；
所述第二缓释层为水包油纳米乳液，包覆于所述第一缓释层的外层；
所述核心球、第一缓释层或第二缓释层包埋有至少一种活性物质。
优选的，所述纳米微球采用鱼骨微球、抗性淀粉微球或大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球中的一种；
优选的，所述纳米微球粒径为300-600nm，孔隙率为25-50％，孔径为15-30nm；
优选的，所述包覆剂选自卡拉胶或海藻酸钠中的一种；
优选的，所述水包油纳米乳液的壁材和芯材的原料组合选自乳清分离蛋白和玫瑰籽油组合、酪蛋白酸钠和牡丹籽油组合或辛烯基琥珀酸淀粉酯和月见草油组合中的一种。
本发明还提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括上述缓释微球，其中，活性物质为蛋白质糖基化抑制剂，所述蛋白质糖基化抑制剂包括：
包埋于第二缓释层内的抑制剂Ⅲ，针对性地抑制蛋白质糖基化进程的早期阶段；
包埋于第一缓释层内的抑制剂Ⅱ，针对性地抑制蛋白质糖基化进程的中期阶段；和/或
包埋于核心球内的抑制剂Ⅰ，针对性地抑制蛋白质糖基化进程的晚期阶段。
优选的，所述抑制剂Ⅰ采用表儿茶素或硒代蛋氨酸中的一种或两种；
优选的，所述抑制剂Ⅱ采用硒代蛋氨酸、儿茶素、维生素C或芦丁中的至少一种；
优选的，所述抑制剂Ⅲ采用维生素E。
本发明还提供了一种上述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法，包括以下步骤：
(1)将抑制剂Ⅰ与核心球混合，溶解在磷酸盐缓冲溶液中，使抑制剂Ⅰ进入核心球内，然后进行过滤，截留液备用；
(2)将包覆剂、抑制剂Ⅱ，溶解在磷酸盐缓冲溶液中，加热搅拌使混合均匀形成溶液，然后将步骤(1)所得的包埋有抑制剂Ⅰ的核心球注入到上述溶液中，用高压脉冲电场处理；
(3)在制备水包油纳米乳液的过程中包埋抑制剂Ⅲ；
(4)将步骤(2)所得产物与步骤(3)所得产物充分混合，调节pH值为3-4，搅拌；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)制得的产物冷冻干燥。
优选的，在步骤(1)中，所述抑制剂Ⅰ、所述核心球和所述磷酸盐缓冲液的混合比例为1重量份:(0.5-2)重量份：100体积份，所述重量份/体积份的比值关系为g/ml；优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0，浓度为10mM；
优选的，所述抑制剂Ⅰ包埋进所述核心球的过程中采用超声引导真空技术进行促进，超声功率为400-600W，真空度为0.05-0.15MPa，作用时间为20-30min；
优选的，所述过滤操作采用的滤膜截留分子量为5000Da。
优选的，在步骤(2)中，所述抑制剂Ⅱ、所述包覆剂和所述磷酸盐缓冲溶液的溶解比例为1重量份：(0.5-2)重量份：300-800体积份，重量份/体积份的比值关系为g/ml；
优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为10mM，pH值为7.0；
优选的，将包埋有抑制剂Ⅰ的所述核心球注入到抑制剂Ⅱ和包覆剂的混合溶液中的操作过程中采用的设备是包封机；
优选的，所述高压脉冲电场强度为20-30kV/cm，电极板间距0.3-0.5cm，流速为20-30mL/s，脉冲电场处理3-5次。
优选的，在步骤(3)中，将0.2-4重量份的壁材均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100体积份的磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，将(0.5-2)重量份的抑制剂Ⅲ与10-20体积份的芯材混合作为油相，将水相和油相通过双通道射流的方式相进行混合，再高压均质3-5次制备水包油纳米乳液；重量份/体积份的比值关系为g/ml；
优选的，将0.2-4g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，将10-20ml玫瑰籽油和0.5-2g维生素E混合作为油相，将水相和油相通过双通道射流的方式相进行混合，再高压均质3-5次制备水包油纳米乳液；
优选的，所述水相和所述油相通过双通道射流的方式进行混合时，所述油相流速为200-300mL/min，所述水相流速为300-600mL/min；
优选的，所述高压均质压强为800-1000bar。
优选的，在所述步骤(4)中，步骤(2)所得产物与步骤(3)所得产物混合的质量比是1:(0.5-2)。
本发明还提供了上述缓释微球、蛋白质糖基化抑制剂缓释体系或上述制备方法制备的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系在食品、医药或化妆品领域的用途。
本发明具有以下有益效果：
1.本发明所述的缓释微球，包括从里到外依次为核心球以及包覆在所述核心球表面的至少两层缓释层，组成核壳结构的缓释微球，所述核心球为内部带有孔洞结构的纳米微球，纳米微球内的孔洞结构可以大量包埋活性物质缓释微球表面圆滑，形态规则，有利于后续的包覆，并且制成的缓释微球均一性和分散性好，表面带有正电荷，有利于带有负电荷的包覆剂的静电吸引包覆，最外层的水包油纳米乳液可以更好地与水溶性液体和原料油溶性物质相容，利于在食品、药品和化妆品中使用，所述缓释微球包覆紧密合理，包埋量大，形态规则均一，分散性好，缓释过程稳定，不会产生突释现象，增加缓释时间，改善缓释效果。
2.本发明所述缓释微球第一缓释层的包覆剂使用海藻酸钠或卡拉胶，因为核心球为表面带有阳离子正电荷的纳米微球，而海藻酸钠和卡拉胶带有阴离子基团，因此能很好地促进包覆剂包覆核心球。
3.本发明所述核心球使用带有孔洞结构的纳米微球作为载体，所述纳米微球采用的鱼骨微孔纳米球、抗性淀粉微球或大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球中的一种，粒径为300-600nm，形貌圆滑完整，粒径均一，因此能很好地接受进一步的包覆，制成均一的缓释体系，易于分散，缓释稳定，因而作用效果长；其孔径为15-30nm，而且孔径表面具有亲水基团，能大量且牢固地吸附亲水性活性物质；其孔隙率为25-50％，与孔径的配合形成了巨大的比表面积，增加吸附性能，大量的活性物质包埋进缓释载体内能显著延长缓释体系的作用时间。
4.本发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系使用的抑制剂分别抑制蛋白质糖基化反应过程中的早期阶段、中期阶段和晚期阶段，根据抑制剂的抑制活性和溶解性的不同进行三层缓释层的设计，三个抑制剂缓释层相辅相成，进行合理包埋，从外到里分别依次抑制蛋白质糖基化的早期阶段、中间阶段和晚期阶段，可以大大提高糖基化反应的抑制程度，而且有效地延长了蛋白质糖基化的作用时间；另外，本发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系如果不均一，会造成反应的早期阶段释放出大量中期阶段抑制剂，而在不断贮藏过程中，当中期阶段反应剧烈时期，抑制剂不足，从而影响抑制效果和作用时间，而利用上述的缓释微球，因其具有负载量大、均一性、分散性好、缓释稳定和缓释时间长的优势，可以有效地避免这个缺陷，实现对蛋白质糖基化进行有效和超长抑制。
5.本发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系使用的抑制剂Ⅰ采用表儿茶素或硒代蛋氨酸中的一种或两种，所述表儿茶素对蛋白质糖基化晚期阶段的抑制率为72％，硒代蛋氨酸对晚期阶段的抑制率为70％，属于对蛋白质糖基化晚期阶段抑制效果好的抑制剂，而且分子大小合适，可以被大量地包埋进核心球的孔洞结构内；所述抑制剂Ⅱ选自硒代蛋氨酸、儿茶素、维生素C、芦丁中的至少一种，这几种抑制剂对蛋白质糖基化抑制过程的中间阶段产生的醛类物质和自由基具有较好的特异性，硒代蛋氨酸的抑制率达到82％，维生素C的抑制率达到77％，芦丁的抑制率达到71％，儿茶素的抑制率达到69％，因此使用这几种抑制剂作为抑制剂Ⅱ，包埋于海藻酸钠和卡拉胶中，包覆于核心球外；所述抑制剂Ⅲ选用维生素E，维生素E对于蛋白质糖基化的早期阶段Amadori产物的抑制率达到86％。
6.本发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系中，由于抑制剂Ⅲ为维生素E，维生素E为疏水物质，与芯材玫瑰籽油、牡丹籽油或月见草油混合，和壁材乳清分离蛋白、酪蛋白酸钠或辛烯基琥珀酸淀粉酯共同组成了纳米乳液，这种水包油纳米乳液可以更好地与水溶性液体和原料油溶性物质相容，利于在食品、药品和化妆品中使用，具有良好的包覆性和稳定性，促进维生素E在蛋白质糖基化过程中缓慢稳定地释放，乳清分离蛋白和玫瑰籽油均为可食用的物质，使得本发明所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系可以用于医药和食品领域，对人体不产生不良影响。
7.本发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法中，采用物理混合、高压电场、高压均质等处理方式，不引入不必要的化学试剂，制成均一稳定的蛋白质糖基化抑制缓释体系，且方法简便，包埋效果好，实用性强。
8.本发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法使用超声引导真空技术促进抑制剂Ⅰ表儿茶素、硒代蛋氨酸包埋进纳米微球内，可以使微孔内的气泡充分导出，使活性物质进入微孔，达到包埋效果，包埋率大大增加，达到2.5％，而不使用超声引导真空技术的包埋率只有0.05％左右，而且超声引导真空技术不破坏纳米微球的形貌，使之形貌完整，不影响后续的进一步包覆。
9.发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法使用高压脉冲技术促进卡拉胶或海藻酸钠与抑制剂Ⅱ的混合物在核心球表面形成均一的一层膜，避免胶状团聚物的出现，制成了均一稳定的分散体系，有利于抑制体系稳定长效地发挥抑制效果。
10.发明所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法使用双通道射流的方式制备最外层的纳米乳液，使得乳滴足够小，充分混合，缓释效果好。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。
下述实施例中涉及到的鱼骨微球采用下述方法制备：选用草鱼鱼骨作为原料进行以下操作：
(1)用石油醚对鱼骨进行脱脂处理，先通过以15000-20000转/分钟超微粉碎将鱼骨粉碎3-10min，再用球磨仪以球磨转速为80-100转/分钟，将鱼骨粉碎3-10h，过500目筛，得到纳米鱼骨粉；
(2)将10g纳米鱼骨粉溶解在水中，添加3000-5000U的疏水性复合风味蛋白酶进行酶解，反应条件为：pH值为8.0，温度为45-60℃，反应时间为1-4h，期间不断搅拌，使其反应均匀，制得鱼骨纳米材料，即得所述鱼骨微球。
下述实施例中的抗性淀粉微球或大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球均为市售产品。
实施例1
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为300nm，孔隙率为25％，孔径为15nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
本实施例的制备方法为：
(1)取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.1MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g硒代蛋氨酸和1g卡拉胶混合，溶解在500ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.4cm，流速为25mL/s；
(3)将1g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml玫瑰籽油和2g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为250mL/min，水相流速为250mL/min，再用压强为900bar的高压均质3次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为3.5，搅拌1.5h，然后将产物冷冻干燥。
实施例2
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：硒代蛋氨酸和抗性淀粉微球；微球的粒径为600nm，孔隙率为50％，孔径为35nm；
第一缓释层：儿茶素和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取1g硒代蛋氨酸和0.5g抗性淀粉微球，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为400W，真空度为0.05MPa，作用时间为20min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g儿茶素和0.5g卡拉胶混合，溶解在300ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理5次，高压脉冲电场强度为20kV/cm，电极板间距0.3cm，流速为20mL/s；
(3)将0.2g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，10ml玫瑰籽油和1g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为200mL/min，水相流速为300mL/min，再用压强为800bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与0.5g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为3，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例3
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素、硒代蛋氨酸和大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球；微球的粒径为280nm，孔隙率为22％，孔径为14nm；
第一缓释层：维生素C和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取0.5g表儿茶素、0.5g硒代蛋氨酸和1.5g大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素和硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.15MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g维生素C和1.5g海藻酸钠混合，溶解在800ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3次，高压脉冲电场强度为30kV/cm，电极板间距0.5cm，流速为30mL/s；
(3)将0.5g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，15ml玫瑰籽油和1.5g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为600mL/min，再用压强为1000bar的高压均质3次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为3-4，搅拌1-2h，然后将产物冷冻干燥。
实施例4
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为450nm，孔隙率为45％，孔径为20nm；
第一缓释层：芦丁和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取1g表儿茶素和1.5g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.1MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g芦丁和1.5g海藻酸钠混合，溶解在400ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3-5次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.4cm，流速为26mL/s；
(3)将0.8g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，10ml玫瑰籽油和0.5g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为250mL/min，水相流速为500mL/min，再用压强为850bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1.5g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为3-4，搅拌1-2h，然后将产物冷冻干燥。
实施例5
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：硒代蛋氨酸和抗性淀粉微球；微球的粒径为600nm，孔隙率为25％，孔径为30nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸、儿茶素和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、牡丹籽油和酪蛋白酸钠；
(1)本实施例的制备方法为：取1g硒代蛋氨酸和2g抗性淀粉微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.75MPa，作用时间为28min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.5g硒代蛋氨酸、0.5g儿茶素和2g卡拉胶混合，溶解在600ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3-5次，高压脉冲电场强度为23kV/cm，电极板间距0.35cm，流速为25mL/s；
(3)将0.2g酪蛋白酸钠均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml牡丹籽油和2g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为230mL/min，水相流速为350mL/min，再用压强为950bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与2g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例6
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：硒代蛋氨酸、表儿茶素和大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球；微球的粒径为600nm，孔隙率为25％，孔径为30nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸、维生素C和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取0.5g表儿茶素、0.5g硒代蛋氨酸和0.5g大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素和硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.1MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.5g硒代蛋氨酸、0.5g维生素C和0.5g海藻酸钠混合，溶解在500ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理4次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.4cm，流速为25mL/s；
(3)将1.4g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml玫瑰籽油和1g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为250mL/min，水相流速为400mL/min，再用压强为800bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与0.5g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
实施例7
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为600nm，孔隙率为25％，孔径为30nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸、芦丁和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、牡丹籽油和酪蛋白酸钠；
(1)本实施例的制备方法为：取1g表儿茶素和0.75g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.1MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.5g硒代蛋氨酸、0.5g芦丁和0.75g卡拉胶混合，溶解在600ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理4次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.4cm，流速为25mL/s；
(3)将2g酪蛋白酸钠均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，10ml牡丹籽油和1.5g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为250mL/min，水相流速为450mL/min，再用压强为950bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例8
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：硒代蛋氨酸和抗性淀粉微球；微球的粒径为300nm，孔隙率为50％，孔径为15nm；
第一缓释层：儿茶素、维生素C和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、牡丹籽油和酪蛋白酸钠；
(1)本实施例的制备方法为：取1g硒代蛋氨酸和1g抗性淀粉微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.12MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.5g儿茶素、0.5g维生素C和1g海藻酸钠混合，溶解在600ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理4次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.4cm，流速为25mL/s；
(3)将4g酪蛋白酸钠均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，15ml牡丹籽油和1.8g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为300mL/min，再用压强为1000bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1.5g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
实施例9
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素、硒代蛋氨酸和大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球；微球的粒径为300nm，孔隙率为50％，孔径为15nm；
第一缓释层：儿茶素、芦丁和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、月见草油和辛烯基琥珀酸淀粉酯；
(1)本实施例的制备方法为：取0.5g表儿茶素、0.5g硒代蛋氨酸和1.5g大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素和硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为450W，真空度为0.08MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.5g儿茶素、0.5g芦丁和1.5g卡拉胶混合，溶解在500ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3次，高压脉冲电场强度为20kV/cm，电极板间距0.3cm，流速为30mL/s；
(3)将0.2g辛烯基琥珀酸淀粉酯均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，10ml月见草油和2g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为600mL/min，再用压强为1000bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与2g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例10
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为300nm，孔隙率为50％，孔径为15nm；
第一缓释层：维生素C、芦丁和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、月见草油和辛烯基琥珀酸淀粉酯；
(1)本实施例的制备方法为：取1g表儿茶素和2g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为500W，真空度为0.13MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.5g维生素C、0.5g芦丁和2g海藻酸钠混合，溶解在400ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理4次，高压脉冲电场强度为30kV/cm，电极板间距0.3cm，流速为30mL/s；
(3)将4g辛烯基琥珀酸淀粉酯均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml月见草油和1.2g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为550mL/min，再用压强为850bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与0.5g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为3，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
实施例11
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：硒代蛋氨酸素和抗性淀粉微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸、表儿茶素、维生素C和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、月见草油和辛烯基琥珀酸淀粉酯；
(1)本实施例的制备方法为：取1g硒代蛋氨酸和0.5g抗性淀粉微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.15MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.33g硒代蛋氨酸、0.33g表儿茶素、0.33g维生素C和0.5g卡拉胶混合，溶解在800ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理5次，高压脉冲电场强度为30kV/cm，电极板间距0.5cm，流速为20mL/s；
(3)将3g辛烯基琥珀酸淀粉酯均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，15ml月见草油和0.8g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为300mL/min，再用压强为1000bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例12
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素、硒代蛋氨酸和大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸、芦丁、维生素C和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取0.5g表儿茶素、0.5g硒代蛋氨酸和0.75g大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球；混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素和硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.15MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.33g硒代蛋氨酸、0.33g维生素C、0.33g芦丁和0.75g海藻酸钠混合，溶解在300ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理5次，高压脉冲电场强度为20kV/cm，电极板间距0.5cm，流速为20mL/s；
(3)将3.3g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，14ml玫瑰籽油和0.9g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为600mL/min，再用压强为800bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1.5g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例13
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸、儿茶素、芦丁和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.05MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.33g硒代蛋氨酸、0.33g儿茶素、0.33g芦丁和1g卡拉胶混合，溶解在800ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理5次，高压脉冲电场强度为30kV/cm，电极板间距0.5cm，流速为30mL/s；
(3)将2.5g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，15ml玫瑰籽油和1g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为600mL/min，再用压强为1000bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与2g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
实施例14
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：硒代蛋氨酸和抗性淀粉微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：维生素C、儿茶素、芦丁和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取1g硒代蛋氨酸和1.5g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.12MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.2g儿茶素、0.3g维生素C、0.5g芦丁和1.5g卡拉胶混合，溶解在700ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理5次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.35cm，流速为27mL/s；
(3)将3.8g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，16ml玫瑰籽油和0.6g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为260mL/min，水相流速为480mL/min，再用压强为950bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
实施例15
本实施例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素、硒代蛋氨酸和大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：维生素C、儿茶素、芦丁、硒代蛋氨酸和海藻酸钠；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本实施例的制备方法为：取0.3g表儿茶素、0.7g硒代蛋氨酸和2g大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素和硒代蛋氨酸包埋进鱼骨微球，超声功率为450W，真空度为0.13MPa，作用时间为25min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取0.1g维生素C、0.2g儿茶素、0.3g芦丁、0.4g硒代蛋氨酸和2g海藻酸钠混合，溶解在600ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理4次，高压脉冲电场强度为25kV/cm，电极板间距0.35cm，流速为22mL/s；
(3)将4g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，17ml玫瑰籽油和0.8g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为230mL/min，水相流速为460mL/min，再用压强为1000bar的高压均质4次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与2g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
对比例1
本对比例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸和卡拉胶；
(1)本对比例的制备方法为：取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.15MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g硒代蛋氨酸和1g卡拉胶混合，溶解在500ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3-5次，高压脉冲电场强度为30kV/cm，电极板间距0.5cm，流速为30mL/s；然后将产物冷冻干燥。
对比例2
本对比例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
本对比例的制备方法为：取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为1600W，真空度为0.05MPa，作用时间为20min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用。
对比例3
本对比例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(1)本对比例的制备方法为：取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为1600W，真空度为0.051MPa，作用时间为201min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g硒代蛋氨酸和1g卡拉胶混合，溶解在300-800ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3-5次，高压脉冲电场强度为20-30kV/cm，电极板间距0.3-0.5cm，流速为20-30mL/s；
(3)将2g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml玫瑰籽油和1g维生素E混合物作为油相，将水相和油相直接混合，采用高速分散机8000转/分钟分散2分钟，制备水包油乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
对比例4
本对比例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
本对比例的制备方法为：
(1)取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声引导真空技术促进表儿茶素包埋进鱼骨微球，超声功率为600W，真空度为0.05MPa，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(2)取1g硒代蛋氨酸和1g卡拉胶混合，溶解在500ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，混合均匀，采用高速分散机8000转/分钟分散2分钟。
(3)将2g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml玫瑰籽油和1g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为300mL/min，再用压强为1000bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(4)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为4，搅拌2h，然后将产物冷冻干燥。
对比例5
本对比例例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
核心球：表儿茶素和鱼骨微球；微球的粒径为500nm，孔隙率为35％，孔径为23nm；
第一缓释层：硒代蛋氨酸和卡拉胶；
第二缓释层：维生素E、玫瑰籽油和乳清分离蛋白；
(5)本对比例的制备方法为：取1g表儿茶素和1g鱼骨微球混合，溶解在pH值为7，浓度为10mM的100ml磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，采用超声处理促进包埋，超声功率为600W，作用时间为30min，采用截留分子量为5000Da的滤膜过滤，截留液备用；
(6)取1g硒代蛋氨酸和1g卡拉胶混合，溶解在500ml浓度为10mM，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中加热搅拌混合均匀形成溶液；采用包封机将步骤(1)中的截留液注入到上述的溶液中，高压脉冲电场处理3-5次，高压脉冲电场强度为30kV/cm，电极板间距0.5cm，流速为30mL/s；
(7)将2g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，20ml玫瑰籽油和2g维生素E混合物作为油相，将水相和油通过双通道射流的方式进行混合，二者速度分别为油相流速为300mL/min，水相流速为600mL/min，再用压强为1000bar的高压均质5次制备水包油纳米乳液；
(8)将1g步骤(2)所得物与1g步骤(3)所得物充分混合，调节pH值为3，搅拌1h，然后将产物冷冻干燥。
对比例6
本对比例提供了一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，包括：
表儿茶素、硒代蛋氨酸和维生素E的混合物1g，三者质量比为1：1：1。
本对比例的制备方法为：将表儿茶素、硒代蛋氨酸和维生素E混合均匀。
评价例1核心球的抑制剂包埋率
测试方法：
在步骤(1)中，抑制剂溶解于体积为V1磷酸盐缓冲溶液中，抑制剂浓度为C1，然后添加质量为M的纳米微球，通过超声引导真空技术使抑制剂包埋于纳米微球中，经过滤后溶液体积为V2，采用香荚兰素-盐酸分光光度法进行抑制剂含量的测定，其中抑制剂浓度C2。
抑制剂包埋率的按照如下方法进行计算：
T1＝(C1V1-C2V2)/M
T1——抑制剂的包埋率％
C1——原液抑制剂浓度mg/mL
V1——原液抑制剂溶液体积mL
C2——过滤液抑制剂浓度mg/mL
V1——过滤液抑制剂溶液体积mL
M——添加入抑制剂溶液中的纳米微球的质量g
表1：实施例1-15、对比例1-6中蛋白质糖基化抑制剂缓释体系核心球抑制剂包埋率。
表1续
表1续
评价例2蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的表征
溶解性的测试方法：将1g的制备好的蛋白质抑制剂缓释体系溶解在10mL的超纯水中，充分搅拌均匀，在8000转/分钟的离心机中离心10min，测定上清液中缓释体系的含量。
分散性的测定方法：将1g的缓释微球溶解在10mL的超纯水中，充分搅拌均匀，静置2h，然后测定上清液中固形物含量。
尺寸的测试方法：采用纳米激光粒度仪进行溶液粒度的分析，测定其平均粒径。
均一性和外观：采用电镜技术进行外观形貌和均一性的测定。
其中，对比例6为活性物质混合物，未做表征测试。
表2：实施例1-15、对比例1-5表征结果。
评价例3蛋白质糖基化抑制剂缓释体系抑制率
蛋白质糖基化抑制剂缓释体系模型：
将1g的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系分散在100ml磷酸盐缓冲溶液中(10mM,pH值为8.0)，溶液中含有1g的牛血清白蛋白葡萄糖糖混合溶液，然后分装到50离心管中，冷冻干燥，同时不加糖基化抑制剂的样品作为空白。然后在65℃，湿度65％的条件下进行糖基化反应，每隔0.5小时监测蛋白质的糖基化抑制率。
抑制率测定方法：采用295nm条件下的吸光度值表示蛋白质的糖基化修饰程度，糖基化抑制率用V表示，按照如下公式进行计算：
V＝(Ac-At)/(Ac-A0)
At——不同时间糖基化修饰程度
A0——不同时间糖基化修饰程度
Ac——不同时间空白样品的糖基化修饰程度
测试标准：相比空白而言的糖基化抑制率
表3：实施例1-15，对比例1-6的不同时间段的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系抑制率
表3续
表3续
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种缓释微球，其特征在于，包括从里到外依次为核心球以及包覆在所述核心球表面的至少两层缓释层，组成核壳结构的缓释微球，所述两层缓释层包括第一缓释层和第二缓释层；
所述核心球为内部带有孔洞结构的纳米微球，所述纳米微球表面圆滑，带有正电荷；
所述第一缓释层为带有负电荷的包覆剂，包覆于所述核心球外层；
所述第二缓释层为水包油纳米乳液，包覆于所述第一缓释层的外层；
所述核心球、第一缓释层或第二缓释层包埋有至少一种活性物质。
2.根据权利要求1所述的缓释微球，其特征在于，
所述纳米微球采用鱼骨微球、抗性淀粉微球或大豆分离蛋白和鱼明胶混合制微球中的一种；
优选的，所述纳米微球粒径为300-600nm，孔隙率为25-50％，孔径为15-30nm；
所述包覆剂选自卡拉胶或海藻酸钠中的一种；
所述水包油纳米乳液的壁材和芯材的原料组合选自乳清分离蛋白和玫瑰籽油组合、酪蛋白酸钠和牡丹籽油组合或辛烯基琥珀酸淀粉酯和月见草油组合中的一种。
3.一种蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，其特征在于，包括权利要求1或2所述的缓释微球，其中，活性物质为蛋白质糖基化抑制剂，所述蛋白质糖基化抑制剂包括：
包埋于第二缓释层内的抑制剂Ⅲ，针对性地抑制蛋白质糖基化进程的早期阶段；
包埋于第一缓释层内的抑制剂Ⅱ，针对性地抑制蛋白质糖基化进程的中期阶段；和/或
包埋于核心球内的抑制剂Ⅰ，针对性地抑制蛋白质糖基化进程的晚期阶段。
4.根据权利要求3所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系，其特征在于，
所述抑制剂Ⅰ采用表儿茶素或硒代蛋氨酸中的一种或两种；
所述抑制剂Ⅱ采用硒代蛋氨酸、儿茶素、维生素C或芦丁中的至少一种；
所述抑制剂Ⅲ采用维生素E。
5.一种权利要求3或4所述蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将抑制剂Ⅰ与核心球混合，溶解在磷酸盐缓冲溶液中，使抑制剂Ⅰ进入核心球内，然后进行过滤，截留液备用；
(2)将包覆剂、抑制剂Ⅱ，溶解在磷酸盐缓冲溶液中，加热搅拌使混合均匀形成溶液，然后将步骤(1)所得的包埋有抑制剂Ⅰ的核心球注入到上述溶液中，用高压脉冲电场处理；
(3)在制备水包油纳米乳液的过程中包埋抑制剂Ⅲ；
(4)将步骤(2)所得产物与步骤(3)所得产物充分混合，调节pH值为3-4，搅拌；
(5)冷冻干燥：将步骤(4)制得的产物冷冻干燥。
6.根据权利要求5所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，
所述抑制剂Ⅰ、所述核心球和所述磷酸盐缓冲液的混合比例为1重量份:(0.5-2)重量份：100体积份，所述重量份/体积份的比值关系为g/ml；优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0，浓度为10mM；
优选的，所述抑制剂Ⅰ包埋进所述核心球的过程中采用超声引导真空技术进行促进，超声功率为400-600W，真空度为0.05-0.15MPa，作用时间为20-30min；
优选的，所述过滤操作采用的滤膜截留分子量为5000Da。
7.根据权利要求5所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中
所述抑制剂Ⅱ、所述包覆剂和所述磷酸盐缓冲溶液的溶解比例为1重量份：(0.5-2)重量份：300-800体积份，重量份/体积份的比值关系为g/ml；
优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为10mM，pH值为7.0；
优选的，将包埋有抑制剂Ⅰ的所述核心球注入到抑制剂Ⅱ和包覆剂的混合溶液中的操作过程中采用的设备是包封机；
优选的，所述高压脉冲电场强度为20-30kV/cm，电极板间距0.3-0.5cm，流速为20-30mL/s，脉冲电场处理3-5次。
8.根据权利要求5所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，
将0.2-4重量份的壁材均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100体积份的磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，将(0.5-2)重量份的抑制剂Ⅲ与10-20体积份的芯材混合作为油相，将水相和油相通过双通道射流的方式相进行混合，再高压均质3-5次制备水包油纳米乳液；重量份/体积份的比值关系为g/ml；
优选的，将0.2-4g乳清分离蛋白均匀分散到浓度为5mM，pH值为7的100ml磷酸盐缓冲溶液中搅拌均匀作为水相，将10-20ml玫瑰籽油和0.5-2g维生素E混合作为油相，将水相和油相通过双通道射流的方式相进行混合，再高压均质3-5次制备水包油纳米乳液；
优选的，所述水相和所述油相通过双通道射流的方式进行混合时，所述油相流速为200-300mL/min，所述水相流速为300-600mL/min；
优选的，所述高压均质压强为800-1000bar。
9.根据权利要求5所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系的制备方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，步骤(2)所得产物与步骤(3)所得产物混合的质量比是1:(0.5-2)。
10.权利要求1或2所述的缓释微球、权利要求3或4所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系或权利要求5-9任一项制备的所述的蛋白质糖基化抑制剂缓释体系在食品、医药或化妆品领域的用途。
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