CN109030607A - 一种多排高通量聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法 - Google Patents

一种多排高通量聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法，包括：凝胶缓冲液和分离凝胶；凝胶缓冲液包括电泳阳离子和电泳阴离子；电泳阳离子的浓度为25mM‑200mM；电泳阴离子的浓度为25mM‑200mM。通过使用上述的聚丙烯酰胺凝胶以及连续电泳系统，可以同时检测的蛋白样品数多达几百个，上样量可低至0.4μl，蛋白样品分子量在12kDa‑130kDa范围内均可以进行有效性分离，获得可以接受的较高的条带分辨率和各个水平排电泳迁移的一致性，上述的聚丙烯酰胺凝胶及其连续电泳系统可与现有常规的水平电泳设备兼容，凝胶染色或者免疫印迹检测方法与常规方法一致，具有广泛的应用性。

Description

一种多排高通量聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法
技术领域
本发明属于生物检测分析领域，具体涉及一种多排的高通量水平连续电泳聚丙稀酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法。
背景技术
蛋白质作为生物体的基本组成物质，是各个生命过程的功能执行者。对于蛋白质种类以及含量的分析检测，在基础研究和临床诊断上均具有很重要的意义和价值。其中蛋白质凝胶电泳技术是应用于蛋白质分析测定的最普及和最有效的方法，在电泳时，添加导电缓冲液并且施加一定强度的电场，蛋白质样品在具有不同孔径的凝胶介质中进行迁移，不同的蛋白质迁移速率不同从而得到分离，是进一步进行蛋白质分析检测的基础。
蛋白质凝胶电泳最常用的系统是以网状结构的聚丙烯酰胺凝胶为支持介质的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。一般与蛋白质变性剂十二烷基磺酸钠(SDS)共同使用，即SDS-PAGE。结合十二烷基磺酸钠(SDS)之后的不同的蛋白质样品，均会带有均匀密度的负电荷，并且发生变性呈现长杆状，在电场作用下，依据其不同的分子量，在聚丙烯酰胺凝胶中以不同的速度进行迁移从而得到分离，进一步通过染色或者特异的免疫印迹方法等来检测位于不同迁移位置的蛋白质样品条带，从而进行蛋白质种类或者含量的分析。为了得到较高的分离分辨率，聚丙烯酰胺凝胶通常由两种不同浓度的下层分离胶和上层浓缩胶共同组成，凝胶在两块玻璃或者塑料板中进行垂直配制，配好后进行垂直电泳。同时常用的凝胶电泳系统均为不连续缓冲系统，即最初凝胶缓冲液中的阴离子不同于(或者不连续)电泳缓冲液中最初的阴离子。最常用的凝胶电泳缓冲液系统为Laemnli缓冲系统(Laemmli,1970,Nature 227,680-686)，分离胶由pH 8.8的0.375M三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，浓缩胶由pH 6.8的0.125M三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，阳极和阴极电泳缓冲液由0.025M Tris、0.25M甘氨酸、0.1％SDS组成。制样缓冲液通常含有由盐酸(HCl)滴定到pH 6.8的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、十二烷基磺酸钠(SDS)、甘油、示踪染料和(或)还原剂组成。
SDS-PAGE提供了一种可靠的方法来分析蛋白质分子量的大小、含量以及组成。目前，上述通用的SDS-PAGE凝胶电泳系统，由于其垂直的配胶形式以及不连续的缓冲系统，导致一块常规尺寸的凝胶(8cm×10cm)能够同时检测的蛋白质样品数量非常有限，由于只能电泳一横排样品，因此一块胶可以同时检测的样品数目一般不超过20个。目前通用的凝胶电泳系统通量低的缺点严重限制了凝胶电泳在蛋白质定量(需要重复样品、标准样品)、多个样品平行比较、大规模筛选和检测方面的应用，因此也较难满足科研和临床检测的需要。
为了克服凝胶电泳系统电泳蛋白质通量低的缺陷，有研究人员通过扩大常用的凝胶尺寸，以此增加单次检测的样品数，虽然在一定程度上提高了通量，但提高的通量非常有限，不能满足几十甚至是几百个样品的同时检测，而且非常不利于后续进一步的染色或者免疫印迹的操作。也有研究人员提出采用水平聚丙烯酰胺凝胶电泳的方式，进行平行多排样品的电泳，这一办法可以大大增加样品密度，增加样品的检测通量。但是要进行多排水平聚丙烯酰胺凝胶电泳，由于其平行多排上样和水平跑胶形式的限制，无法使用已有的不连续电泳缓冲系统，即无法利用不同配方的凝胶缓冲液和电泳缓冲液来完成蛋白样品的有效分离。同时多排水平凝胶无法配置上下两层的浓缩胶和分离胶，而且多排样品同时电泳时，能够进行电泳迁移的距离也远远短于垂直的凝胶电泳系统，因此实际上，多排蛋白质样品进行水平电泳时非常难以得到各排一致的、较高的甚至是可以接受的样品分辨率。现有的垂直凝胶配制系统和电泳系统无法适用于水平多排的聚丙烯酰胺凝胶，无法达到各排电泳迁移情况较一致、同时分辨范围较宽分辨率较好的效果。目前，只有赛默飞公司市售的EPAGE预制胶可以进行单次同时检测96个蛋白质样品。EPAGE预制胶采用水平多排交错上样孔(美国专利文献US6562213B)，使得样品的电泳迁移距离可以达到两排的长度(约1.6cm)，利用其独家的电泳缓冲体系配置凝胶，并且需要使用特有的制样缓冲液以及与凝胶配合使用的特殊的电泳设备(E-Base)，在约8.6cm×13.5cm的尺寸下，可以完成96个样品的同时电泳。利用EPAGE预制胶单次也只能检测96个样品，并且需要购置特殊的电泳设备，使用成本非常高，导致无法较好的满足科研和临床检测的高通量需求。因此，提供一种单次可以同时检测上百甚至上千个样品的、可以利用现有电泳设备进行电泳的高通量凝胶以及电泳系统和电泳方法，对于解决目前常规电泳系统应用局限具有非常重要的意义。然而，目前仍没有提出一种在常规的凝胶尺寸范围内可同时检测几百个样品，并且与现有电泳设备兼容、成本极低的高通量凝胶及电泳系统和电泳方法。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种多排的高通量水平连续电泳聚丙稀酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法，可以单次检测几百甚至上千个样品，并且可以利用现有的电泳设备来完成。
本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：凝胶缓冲液和分离凝胶；所述凝胶缓冲液包括电泳阳离子和电泳阴离子；所述电泳阳离子的浓度为25mM-200mM；所述电泳阴离子的浓度为25mM-200mM。
优选的，所述电泳阳离子的浓度为50mM-160mM；所述电泳阴离子的浓度为40mM-150mM。
优选的，所述电泳阳离子的浓度为60mM-140mM；所述电泳阴离子的浓度为60mM-140mM。
优选的，所述电泳阳离子的浓度为65mM-120mM；所述电泳阴离子的浓度为70mM-120mM。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值为6.5-9.5。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)、双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺和碳酸氢铵中的至少一种；
所述电泳阴离子选自甘氨酸(Glycine)、N-(三羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、硼酸、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)(PIPES)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、N-环己基－2-氨基乙磺酸(CHES)、3-(环己氨基-1-丙磺酸(Caps)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-羟基丙磺酸(HEPPSO)和碳酸氢铵中的至少一种。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述电泳阳离子与电泳阴离子的pKa值相差不大于2.2个pKa单位。
优选的，所述电泳阳离子与电泳阴离子的pKa值相差不大于1.5个pKa单位。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述的凝胶缓冲液中还包括蛋白质变性剂；优选的，所述蛋白质变性剂为十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为0.08-0.12％。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述的凝胶缓冲液中还包括甘油，体积比浓度为0％-15％，且不为0％。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述的分离凝胶包含质量体积比为5％-15％的丙烯酰胺。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述的分离凝胶包含质量体积比为0.1％-1.5％的甲叉双丙烯酰胺。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述的分离凝胶包含质量体积比为0.05％-0.1％的过硫酸铵。
所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述的分离凝胶包含体积比浓度为0.1％-0.4％的四甲基乙二胺。
本发明提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶。
所述多排的高通量水平连续电泳系统，还包括电泳缓冲液，所述电泳缓冲液与凝胶缓冲液相同。
所述多排的高通量水平连续电泳系统，还包括制样缓冲液，所述的制样缓冲液的pH值为6.6-7.0，通过添加酸而调节所述pH。
所述多排的高通量水平连续电泳系统，所述的制样缓冲液包含：三羟甲基氨基甲烷(Tris)或者双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为10mM-100mM；十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％-2％；甘油，体积比浓度为5％-15％；示踪染料和/或还原剂，当所述的制样缓冲液包含示踪染料时，所述示踪染料的质量体积比为0.08-0.12％，当所述的制样缓冲液包含还原剂时，所述还原剂浓度为80-120mM；优选的，所述示踪染料为溴酚蓝，质量体积比为0.1％；优选的，所述还原剂为二硫苏糖醇，浓度为100mM。
所述多排的高通量水平连续电泳系统，所述的制样缓冲液中甘油浓度大于凝胶缓冲液中的甘油浓度。
所述多排的高通量水平连续电泳系统，所述制样缓冲液中还包括辅助添加剂，所述辅助添加剂选自聚乙二醇、果聚糖、聚蔗糖、葡甘露聚糖、葡聚糖或者聚乙烯吡咯烷酮(PVP40)。优选的，所述辅助添加剂的质量体积比为0％-10％，且不为0％。
本发明提供了一种多排的高通量蛋白质水平连续电泳方法，包括利用所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶和/或所述多排的高通量水平连续电泳系统进行水平连续电泳系统进行水平电泳。
所述的方法，上样体积为0.4μl-2μl，电泳时的电压为50V-150V，电泳时间为15分钟-60分钟。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：凝胶缓冲液和分离凝胶；所述凝胶缓冲液包括电泳阳离子和电泳阴离子；所述电泳阳离子的浓度为25mM-200mM；所述电泳阴离子的浓度为25mM-200mM。通过使用上述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶可以进行水平多排的蛋白质电泳，可以同时检测的样品数多达几百个，并且所需上样量可低至0.4μl(常规的垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳约需要5-20μl样品)。利用不同浓度的相应凝胶，蛋白质样品分子量在12kDa-130kDa范围内均可以得到分离，可获得可接受的较高的分辨率。同时所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶可与已有的水平制胶设备和常规的电泳设备兼容，如可以使用美国专利US006071396A提供的制胶装置，可以使用常用于核酸电泳的水平电泳槽进行电泳，电泳时间短，后续的染色或者免疫印迹检测方法与目前常规所用的方法一致，无多余的操作步骤，所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶具有广泛的应用性。
2.本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述电泳阳离子的浓度为50mM-160mM；所述电泳阴离子的浓度为40mM-150mM；优选的，所述电泳阳离子的浓度为60mM-140mM；所述电泳阴离子的浓度为60mM-140mM；优选的，所述电泳阳离子的浓度为65mM-120mM；所述电泳阴离子的浓度为70mM-120mM；通过进一步控制所述凝胶缓冲液中电泳阳离子和电泳阴离子各自的浓度，使得所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶可以保证进行高通量的蛋白质样品上样和电泳分析，并获得能够接受的较高的分辨率。
3.本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)、双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺和碳酸氢铵中的至少一种；所述电泳阴离子选自甘氨酸(Glycine)、N-(三羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、硼酸、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)(PIPES)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、N-环己基－2-氨基乙磺酸(CHES)、3-(环己氨基-1-丙磺酸(Caps)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-羟基丙磺酸(HEPPSO)和碳酸氢铵中的至少一种；电泳阳离子与电泳阴离子，两者的pKa值相差不大于2.2个pKa单位；通过选择使用相应的电泳阳离子和电泳阴离子制备多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，可以保证进行高通量的蛋白质电泳分析，并获得能够接受的较高的分辨率。
4.本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括制样缓冲液；所述的制样缓冲液包含：三羟甲基氨基甲烷(Tris)或者双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为10mM-100mM；十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％-2％；甘油，体积比浓度为5％-15％；示踪染料和/或还原剂，当所述的制样缓冲液包含示踪染料时，所述示踪染料的质量体积比为0.08-0.12％，当所述的制样缓冲液包含还原剂时，所述还原剂浓度为80-120mM；优选的，所述示踪染料为溴酚蓝，质量体积比为0.1％；优选的，所述还原剂为二硫苏糖醇，浓度为100mM；所述的制样缓冲液中甘油浓度需大于凝胶缓冲液中的甘油浓度；所述的制样缓冲液的pH值为6.6-7.0；通过选择使用上述的制样缓冲液可以保证进行高通量的蛋白质样品上样和电泳分析，并获得能够接受的较高的分辨率。
5.本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其中所述的制样缓冲液还包括辅助添加剂，所述辅助添加剂选自聚乙二醇、果聚糖、聚蔗糖、葡甘露聚糖、葡聚糖或者聚乙烯吡咯烷酮(PVP40)中的至少一种，其中所述辅助添加剂的质量体积比为0％-10％；通过选择使用上述的辅助添加剂可以保证进行高通量的蛋白质样品上样和电泳分析，并获得能够接受的较高的分辨率。
6.本发明提供的一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括电泳缓冲液，其中所述的电泳缓冲液与上述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶中的凝胶缓冲液的成份和浓度相同，作为连续缓冲体系；通过使用上述连续电泳体系可以保证进行水平多排的高通量蛋白质电泳分析，并获得能够接受的较高的分辨率。
7.本发明提供的一种多排的高通量蛋白质水平连续电泳方法，包括利用所述多排的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶和所述的电泳缓冲液、制样缓冲液进行电泳；上述的高通量蛋白质电泳方法可以进行高通量的蛋白质电泳，可以同时检测的样品数多达几百个甚至上千个不同的样品，并且所需上样量可低至0.4μl，非常节约样品。蛋白质样品分子量在12kDa-130kDa范围内均可以得到分离，获得能够接受的较高的分辨率。同时多个平行的横排之间，电泳迁移的一致性较好，并且所述的多排的高通量水平连续电泳系统可与现有常规的水平电泳设备兼容，使用成本低，兼容性好，后续的染色或者免疫印迹检测方法与常规所用的方法一致，具有广泛的应用性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1的电泳检测结果图；
图2是本发明实施例2的电泳检测结果图；
图3是本发明实施例3的电泳检测结果图；
图4是本发明实施例4的电泳检测结果图；
图5是本发明实施例5的电泳检测结果图；
图6是本发明实施例6的电泳检测结果图。
具体实施方式
下述实施例中涉及到的术语“质量体积比”表示：溶液中，溶质的质量与溶液的体积之比，即：溶质的质量除以溶液的体积，单位常用：g/L或g/mL或mg/mL。如在多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶中，丙烯酰胺的质量体积比为5％，即表示每毫升的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶中含有0.05g丙烯酰胺。用两种液体的体积比表示浓度，称做“体积比浓度”。如在多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶中，四甲基乙二胺体积比浓度为0.1％，即表示0.1体积的四甲基乙二胺与100体积的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的比例。
下述实施例中涉及到的电泳槽为北京六一生物科技有限公司的DYCP-32C，电泳电源为北京六一生物科技有限公司的DYY-7C，转膜仪为北京六一生物科技有限公司的DYCP-40C半干式碳板转印仪。
下述实施例中所使用的配制多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的装置可以使用美国专利US006071396A提供的制胶装置或文献Microplate-array diagonal-gelelectrophoresis(MADGE)systems for high-throughput electrophoresis.RosalindH.Ganderton,Sandra D.O’Dell,Tom R.Gaunt,Xiao-he Chen,Lesley J.Hinks,EmmanuelSpanakis and Ian N.M.Day提供的制胶装置。为了在常规的凝胶尺寸下检测更多的样品，下述实施例参考上述文献中的配制凝胶的装置，调整了其中齿状突起的数量，相邻的齿状突起之间的距离，以及齿状突起的排列方式，其他设置均相同。
实施例1
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为12％；
甲叉双丙烯酰胺，质量体积比为0.32％；
电泳阳离子，选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为100mM；
电泳阴离子，选自3-(环己氨基)-1-丙磺酸(Caps)，浓度为80mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，浓度为0.1％；
过硫酸铵，质量体积比为0.1％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为10mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为2％；
甘油，体积比浓度为15％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为Thermo Scientific公司的标准蛋白样品(PageRuler Prestained Protein Ladder，货号26616)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为150V，电泳时间为40分钟。检测结果如图1所示，共上样检测了120个样品，蛋白样品分子量分别为26kDa,34kDa,43kDa,55kDa,72kDa,95kDa和130kDa，凝胶的尺寸为6cm×4cm。
实施例2
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为12％；
甲叉双丙烯酰胺，质量体积比为0.6％；
电泳阳离子，选自二乙醇胺，浓度为110mM；
电泳阴离子，选自甘氨酸和3-(环己氨基)-1-丙磺酸(Caps)，浓度为40mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为0.1％；
甘油，体积比浓度8％；
过硫酸铵，质量体积比为0.08％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.3％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.4μl，电泳时的电压为120V，电泳时间为30分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色，检测结果如图2所示，共上样检测了175个样品，蛋白样品分子量分别为20kDa,30kDa,40kDa,60kDa和80kDa，凝胶的尺寸为5cm×7cm。
实施例3
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
甲叉双丙烯酰胺，质量体积比为0.2％；
电泳阳离子，选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为60mM；
电泳阴离子，选自N-(三羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，浓度为140mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为0.1％；
甘油，体积比浓度10％；
过硫酸铵，质量体积比为0.06％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.3％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为7.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为20mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为2％；
甘油，体积比浓度为12％；
聚蔗糖，质量体积比为1％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，样品为大肠杆菌裂解物，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为80V，电泳时间为32分钟。电泳后，凝胶通过转膜，利用大肠杆菌FtsZ蛋白的抗体进行免疫印迹的检测，检测结果如图3所示，FtsZ蛋白对应43kDa处的蛋白条带，62kDa处的蛋白条带为FtsZ抗体所识别出来的非特异性蛋白产物。共上样检测384个样品，凝胶的尺寸为8cm×10cm。
实施例4
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为13％；
甲叉双丙烯酰胺，质量体积比为0.8％；
电泳阳离子，选自双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为100mM；
电泳阴离子，选自羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)，浓度分别为80mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，浓度为0.1％；
甘油，体积比浓度5％；
过硫酸铵，质量体积比为0.09％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为7.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.01％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为97V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色，检测结果如图4所示，共上样检测315个样品，蛋白样品分子量分别为12kDa,20kDa,30kDa,40kDa和60kDa，凝胶的尺寸为7cm×9cm。
实施例5
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为10％；
甲叉双丙烯酰胺，质量体积比为0.66％；
电泳阳离子，选自碳酸氢铵，浓度为60mM；
电泳阴离子，选自碳酸氢铵，浓度为60mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为0.1％；
甘油，体积比浓度4％；
过硫酸铵，质量体积比为0.1％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为6.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为60mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为2％；
甘油，体积比浓度为15％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为0.5mg/ml的牛血清白蛋白(BSA)，上样体积为0.45μl，电泳时的电压为60V，电泳时间为20分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色，检测结果如图5所示，共上样检测688个样品，牛血清白蛋白的分子量分别为66kDa，凝胶的尺寸为8cm×9cm。
实施例6
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为10％；
甲叉双丙烯酰胺，质量体积比为0.6％；
电泳阳离子，选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)和双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度分别为30mM和20mM；
电泳阴离子，选自N-(三羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，浓度为40mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为0.1％；
过硫酸铵，质量体积比为0.085％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.25％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为8.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为60mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，样品为大肠杆菌裂解物，上样体积为0.4μl，电泳时的电压为100V，电泳时间为20分钟。电泳后，凝胶通过转膜，利用大肠杆菌FtsZ蛋白的抗体进行免疫印迹的检测，检测结果如图6所示，FtsZ蛋白对应43kDa处的蛋白条带，62kDa处的蛋白条带为FtsZ抗体所识别出来的非特异性蛋白产物。共上样检测768个样品，凝胶的尺寸为8cm×10cm。
实施例7
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为15％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.1％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自乙醇胺，浓度为25mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自甘氨酸，浓度为25mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.05％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.1％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为100mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1.5％；
甘油，体积比浓度为5％；
溴酚蓝，质量体积比为0.08％；
二硫苏糖醇，浓度为120mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为2μl，电泳时的电压为50V，电泳时间为60分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例8
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为10％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为1％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为200mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自3-吗啉丙磺酸(MOPS)，浓度为200mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.1％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.4％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为7.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为70mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为8％；
聚乙二醇，质量体积比为1％；
溴酚蓝，质量体积比为0.12％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为1μl，电泳时的电压为97V，电泳时间为15分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例9
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为7％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为1.5％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉双丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自二乙醇胺，浓度为50mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自甘氨酸(Glycine)，浓度为150mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.08％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.1％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
果聚糖，质量体积比为5％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为80mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为97V，电泳时间为15分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例10
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为10％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.7％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉双丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自乙醇胺，浓度为160mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自3-环己氨基-1-丙磺酸(Caps)和N-环己基－2-氨基乙磺酸(CHES)，两者的浓度分别为20mM和20mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.07％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.1％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
聚蔗糖，质量体积比为3％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为65V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例11
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.5％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)和三乙醇胺，两者的浓度分别为25mM和35mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自硼酸，浓度为140mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.09％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.4％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为8.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为97V，电泳时间为30分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例12
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为12％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.2％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)和二乙醇胺，两者的浓度分别为100mM和40mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自N-环己基－2-氨基乙磺酸(CHES)，浓度为60mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.07％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.3％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为1.5μl，电泳时的电压为85V，电泳时间为30分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例13
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.4％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自二乙醇胺和三羟甲基氨基甲烷(Tris)，两者的浓度分别为25mM和40mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自3-(环己氨基-1-丙磺酸(Caps)，浓度为120mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.08％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
葡甘露聚糖，质量体积比为8％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为100V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例14
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.9％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为120mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自N-环己基－2-氨基乙磺酸(CHES)，浓度为70mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.09％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.3％；
SDS，质量体积比为0.1％；
甘油，体积比为10％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为15％；
葡聚糖，质量体积比为2％；
聚乙烯吡咯烷酮(PVP40)，质量体积比为1％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为90V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例15
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.1％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自二乙醇胺，浓度为80mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自甘氨酸和碳酸氢铵，浓度分别为50mM和20mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.09％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为90V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例16
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为1％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)、三乙醇胺和碳酸氢铵，浓度分别为100mM、20mM和28mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自N-(三羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)和碳酸氢铵，浓度分别为12mM和28mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.06％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为8.5。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为90V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例17
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.3％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)和二乙醇胺，浓度分别为100mM和100mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自甘氨酸和硼酸，浓度分别为15mM和50mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.05％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.1％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为90V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例18
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.5％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)、双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)和三乙醇胺，浓度依次为30mM、8mM和12mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自N-(三羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，浓度为40mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.08％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.3％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为8.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，浓度为50mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为1％；
甘油，体积比浓度为10％；
聚蔗糖，质量体积比为4％；
葡甘露聚糖，质量体积比为2％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为97V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例19
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.2％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为80mM；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自3-吗啉丙磺酸(MOPS)和N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-羟基丙磺酸(HEPPSO)，浓度分别为7mM和80mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.07％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为7.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为20mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为2％；
甘油，体积比浓度为12％；
聚蔗糖，质量体积比为4％；
葡甘露聚糖，质量体积比为2％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为90V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
实施例20
本实施例提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，包括：
丙烯酰胺，质量体积比为8％；
丙烯酰胺交联剂，质量体积比为0.4％，所述丙烯酰胺交联剂选自甲叉丙烯酰胺；
电泳阳离子，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)和二乙醇胺，浓度分别为50mM和30mM，；
电泳阴离子，所述电泳阴离子选自甘氨酸和N-环己基－2-氨基乙磺酸(CHES)，浓度分别为35mM和50mM；
过硫酸铵，质量体积比为0.09％；
四甲基乙二胺，体积比浓度为0.2％；
SDS，质量体积比为0.1％；所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值约为9.0。
本实施例还提供了一种多排的高通量水平连续电泳系统，包括上述的多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，以及制样缓冲液和电泳缓冲液；
所述电泳系统中，制样缓冲液的组成如下：
双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷(Bis-tris)，浓度为20mM；
十二烷基磺酸钠(SDS)，质量体积比为2％；
甘油，体积比浓度为12％；
果聚糖，质量体积比为4％；
葡甘露聚糖，质量体积比为2％；
溴酚蓝，质量体积比为0.1％；
二硫苏糖醇，浓度为100mM；
使用盐酸调整pH至6.8。
所述电泳系统中，电泳缓冲液的成份和浓度与本实施例中所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的凝胶缓冲液相同。
利用上述的多排的高通量水平连续电泳系统进行高通量蛋白质电泳，检测样品为北京全式金生物技术有限公司的标准蛋白样品(ProteinRuler I，货号DR101-01)，上样体积为0.5μl，电泳时的电压为90V，电泳时间为25分钟。电泳后，利用考马斯亮蓝染液(购自碧云天生物技术有限公司)进行染色。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (19)

1.一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于：包括：凝胶缓冲液和分离凝胶；所述凝胶缓冲液包括电泳阳离子和电泳阴离子；所述电泳阳离子的浓度为25mM-200mM；所述电泳阴离子的浓度为25mM-200mM。
2.根据权利要求1所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述电泳阳离子的浓度为50mM-160mM；所述电泳阴离子的浓度为40mM-150mM；优选的，所述电泳阳离子的浓度为60mM-140mM；所述电泳阴离子的浓度为60mM-140mM；优选的，所述电泳阳离子的浓度为65mM-120mM；所述电泳阴离子的浓度为70mM-120mM。
3.根据权利要求1或2所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶的pH值为6.5-9.5。
4.根据权利要求1-3任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述电泳阳离子选自三羟甲基氨基甲烷、双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺和碳酸氢铵中的至少一种；
所述电泳阴离子选自甘氨酸、N-(三羟甲基)甲基甘氨酸、硼酸、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸、3-吗啉丙磺酸、N-环己基－2-氨基乙磺酸、3-(环己氨基-1-丙磺酸)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-羟基丙磺酸)和碳酸氢铵中的至少一种。
5.根据权利要求1-4任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述电泳阳离子与电泳阴离子的pKa值相差不大于2.2个pKa单位；优选的，电泳阳离子与电泳阴离子的pKa值相差不大于1.5个pKa单位。
6.根据权利要求1-5任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述的凝胶缓冲液中还包括蛋白质变性剂；优选的，所述蛋白质变性剂为十二烷基磺酸钠，质量体积比为0.08-0.12％。
7.根据权利要求1-6任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述的凝胶缓冲液中还包括甘油，体积比浓度为0％-15％，且不为0％。
8.根据权利要求1-7任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述的分离凝胶包含质量体积比为5％-15％的丙烯酰胺。
9.根据权利要求1-8任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述的分离凝胶包含丙烯酰胺交联剂；优选的，丙烯酰胺交联剂为质量体积比为0.1％-1.5％的甲叉双丙烯酰胺。
10.根据权利要求1-9任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述的分离凝胶包含质量体积比为0.05％-0.1％的过硫酸铵。
11.根据权利要求1-10任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶，其特征在于，所述的分离凝胶包含体积比浓度为0.1％-0.4％的四甲基乙二胺。
12.一种多排的高通量水平连续电泳系统，其特征在于，包括权利要求1-11任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶。
13.根据权利要求12所述多排的高通量水平连续电泳系统，其特征在于，还包括电泳缓冲液，所述电泳缓冲液与凝胶缓冲液相同。
14.根据权利要求12或13所述多排的高通量水平连续电泳系统，其特征在于，还包括制样缓冲液，所述的制样缓冲液的pH值为6.6-7.0。
15.根据权利要求12-14任一项所述多排的高通量水平连续电泳系统，其特征在于，所述的制样缓冲液包含：三羟甲基氨基甲烷或者双(2-羟基乙胺基)三(羟甲基)甲烷，浓度为10mM-100mM；十二烷基磺酸钠，质量体积比为1％-2％；甘油，体积比浓度为5％-15％；示踪染料和/或还原剂，当所述的制样缓冲液包含示踪染料时，所述示踪染料的质量体积比为0.08-0.12％，当所述的制样缓冲液包含还原剂时，所述还原剂浓度为80-120mM；优选的，所述示踪染料为溴酚蓝，质量体积比为0.1％；优选的，所述还原剂为二硫苏糖醇，浓度为100mM。
16.根据权利要求12-15任一项所述多排的高通量水平连续电泳系统，其特征在于，所述的制样缓冲液中甘油浓度大于凝胶缓冲液中的甘油浓度。
17.根据权利要求12-16任一项所述的高通量水平连续电泳系统，其特征在于，所述制样缓冲液中还包括辅助添加剂，所述辅助添加剂选自聚乙二醇、果聚糖、聚蔗糖、葡甘露聚糖、葡聚糖或者聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种；优选的，所述辅助添加剂的质量体积比为0％-10％，且不为0％。
18.一种多排的高通量蛋白质水平连续电泳方法，其特征在于，包括利用权利要求1-11任一项所述多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶和/或权利要求12-17任一项所述多排的高通量水平连续电泳系统进行水平连续电泳。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，上样体积为0.4μl-2μl，电泳时的电压为50V-150V，电泳时间为15分钟-60分钟。
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