CN109022574A - Mycbp2-as1在制备诊疗宫颈癌产品上的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了MYCBP2‑AS1在制备诊疗宫颈癌产品上的应用，并进一步证实MYCBP2‑AS1在宫颈癌组织中表达上调。本发明进一步公开了MYCBP2‑AS1用于制备检测宫颈癌的诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增宫颈癌相关lncRNA的引物和说明书，所述宫颈癌相关lncRNA是MYCBP2‑AS1。本发明还公开了一种MYCBP2‑AS1抑制剂，所述抑制剂包括MYCBP2‑AS1的siRNA。利用MYCBP2‑AS1检测宫颈癌不仅能够快速有效的做到早期检测，而且为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。

Description

MYCBP2-AS1在制备诊疗宫颈癌产品上的应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及MYCBP2-AS1在制备诊断或治疗宫颈癌的产品上的应用。
背景技术
宫颈癌是出现在子宫颈移行带或阴道部的子宫颈管内膜上皮细胞与鳞状上皮细胞交会处的恶性肿瘤。宫颈癌在女性中的发病率仅次于乳腺癌位居第二，死亡率则居于妇科恶性肿瘤之首，是威胁女性健康和生命的最常见的恶性肿瘤之一。近年来，由于环境污染、社会工作压力加大以及生活中的不良卫生习惯等因素，宫颈癌发病率有明显上升的趋势，且患者年轻化趋势越来越明显。
宫颈癌的发生、发展与转归是一个复杂的多阶段的过程。1974年，德国病毒学家Zur Hausen首先提出人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV) 可能与宫颈癌的发生有关[1]([1]Durst M，Gissmann L，lkenberg，et a1.A papillomavirus DNA from acervicalcarcinoma and its prevalence in cancer biopsy samples from differentgeographic regions[J].Prec Natl Acad Sci USA， 1983，80(12)：3812～3815.)。随着对HPV与宫颈癌的关系的深入研究，目前认为HPV是导致宫颈癌发生的重要因素。然而，仅高危型HPV感染尚不足以导致宫颈癌的发生，多种异常调控的基因和遗传学因素的改变亦是肿瘤发展过程中至关重要的环节。
近年来，非编码RNA在肿瘤细胞增殖、分化、转移和凋亡等生物学过程中发挥的调节作用是研究者们关心的焦点问题。其中长链非编码RNA (long noncoding RNA，lncRNA是一类转录本长度大于200nt(nucleotide)，并且不翻译成蛋白质的功能性RNA分子[2]([2]Carninci P，Kasukawa T， Katayama T，et al.The transcriptional landscape of themammalian genome[J]. Science，2005，309(5740)：1559-1563.)。近年来研究表明，lncRNA与许多癌症的发生和发展密切相关，如膀胱癌、乳腺癌、肝癌和宫颈癌等[3-4] ([3]Zhu Y Y，Yu M，Li Z H，et al.lncRNA，a newly identified long noncoding RNA，enhances humanbladder tumor growth，invasion，and sur vival[J].Urology，2010，77(2)：510.e1-510.e5.[4]Gupta R A，Shan N， Wang K C，et al.Long non-coding RNA HOTAIRreprograms chromatin state to promote cancer metastasis[J].Nature，2010，464(7291)：1071-107 6.)。但是关于lncRNA在宫颈癌发生过程中的作用尚鲜有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的标记物在诊断宫颈癌产品上的应用。
为实现上述目的，本发明提供了MYCBP2-AS1作为分子标记物在制备诊断宫颈癌的产品上的应用。
进一步地，所述MYCBP2-AS1在宫颈癌生物学样品中表达上调。
又进一步地，所述标记物包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
更进一步地，所述产品为检测个体患有宫颈癌可能性的试剂盒。
优选地，所述试剂盒包括特异性扩增宫颈癌相关的lncRNA的引物和说明书。
更优选地，所述说明书中注明以下内容：
当检测对象的宫颈癌细胞或组织中MYCBP2-AS1表达量E1与正常前列腺细胞或组织的MYCBP2-AS1表达量E2之比≥2，则提示该检测对象宫颈癌的几率高于普通人群。所述的E1是检测对象的宫颈癌细胞或组织的 MYCBP2-AS1表达量；所述的E2是正常人群的正常前宫颈癌细胞或组织的 MYCBP2-AS1表达量。所述的正常前列腺细胞或组织包括癌旁的宫颈细胞或组织。所述的表达量是相对于对照基因(如GAPDH)的相对表达量。
优选地，所述宫颈癌相关的lncRNA为MYCBP2-AS1。
优选地，所述引物序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
优选地，所述试剂盒还包括10×Buffer、dNTP、MgCl2、Taq酶和SYBR Green荧光染料。
本发明还提供一种MYCBP2-AS1抑制剂，所述抑制剂包括起到降低 MYCBP2-AS1表达作用的siRNA。
优选地，所述siRNA序列为：SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，SEQ ID NO.8 和SEQ IDNO.9。
进一步地，上述抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗前列腺癌的生物制剂中的应用。
进一步地，本发明提供了一种治疗前列腺癌的药物，所述药物包括上述的抑制剂。优选地，所述的药物还包括药学上可接受的载体。所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体。
优选地，所述的药物通过选自下组的用药方式进行给药：口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、舌下含化、直肠灌注、鼻腔喷雾、口腔喷雾、皮肤局部或全身经皮用药。所述的药物的制剂选自下组：片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂、喷雾剂。所述的MYCBP2-AS1抑制剂以0.01-20mg/kg体重的剂量(每次或每天)施用于哺乳动物。所述的哺乳动物包括人、小鼠、大鼠，更佳地，为人。
本发明的药物可以是单方制剂，也可以是复方制剂。在复方制剂中，除了含有MYCBP2-AS1抑制剂之外，还可包含其他抗肿瘤化合物，例如化疗剂。代表性的化疗剂，包括但并不限于，烷化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物以及相关抑制剂、长春花碱类、抗生素、L-天冬酞胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位复合物、大黄素取代的脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素以及促性腺激素-释放激素类似物。优选的化疗剂包括：5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨、紫杉醇和多西紫杉醇。
本发明的有益效果如下：
本发明首次公开了MYCBP2-AS1与宫颈癌相关，并进一步证实了该 lncRNA在宫颈癌组织中表达上调，利用该lncRNA检测宫颈癌，不仅能够快速有效的做到早期检测，还为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。
附图说明
图1MYCBP2-AS1在宫颈癌组织样本中的表达情况。
图2未转染正常细胞的对照组、转染非特异性siRNA-NC组、转染 MYCBP2-AS1-siRNA2的实验组在0h、24h、48h的光吸收值变化。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社， 2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。
本发明使用的宫颈癌临床组织样本均来自2013年11月至2015年11 月于吉林大学中日联谊医院妇产科治疗的宫颈癌患者，每对标本包含手术切除的宫颈癌组织和配对的癌旁组织。所有标本的使用均由患者或其委托人签署知情同意书。本研究中所用的临床样本，均对患者进行知情告知并经本院伦理委员会通过。
本发明的发明人对宫颈癌样本及癌旁组织样本进行高通量转录组测序，通过生物信息学方法进行基因筛选，挑选出差异表达明显的lncRNA MYCBP2-AS1，现有研究中并没有MYCBP2-AS1和宫颈癌相关的报道，进一步，发明人进行了分子生物学方法验证，证实了MYCBP2-AS1在宫颈癌组织中表达上调。
本发明的MYCBP2-AS1是在本发明之前的已知lncRNA，其基本信息如下：
来源于已公开的人类基因组序列，位于人类13号染色体上，具体位置为chr13:76990659-77327044。
本文使用的术语“表达上调”指对应于所表达基因的序列，其中序列量的测量证明，与从正常个体或从通过宫颈癌分期确定与宫颈癌不同的已鉴定疾病状态的个体中分离的生物学样品中的同一基因相比，所述基因在从患宫颈癌或通过宫颈癌分期确定的宫颈癌已鉴定疾病状态的个体中分离的生物学样品中的表达水平增加。根据本发明，“表达上调”是指通过本发明方法杂交强度测量的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更高的表达增加，例如20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高或者高于1倍，最高为2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100 倍或更高。
本文使用的术语“表达水平”指通过本领域技术人员已知和本文所述的方法测定的给定核酸或蛋白质的可测量。涉及本发明分子标记物对应的 lncRNA时，表达水平可以通过杂交或更多定量测量来测定，如包括使用 SYBR绿、TaqMan和定量实时RT-PCR。
实施例1高通量测序筛选差异表达基因
1、取样
取2013年11月到2015年11月期间在于吉林大学中日联谊医院妇产科治疗的宫颈癌患者组织标本25例癌旁组织标本9例，所有标本均经病理学检查证实，编号后置-80℃低温冰箱保存。
2、对组织样本进行总RNA提取
采用 Reagent(invitrogen，货号15596-018)进行样本RNA提取，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：
收集样本后冻存于液氮，取出后把组织放入已预冷的研钵中进行研磨，待组织样本成粉末状后：
①加入Trizol，室温保存5分钟；
②加氯仿0.2mL，用力振荡离心管，充分混匀，室温下放置5分钟-10 分钟；
③12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(吸70％)到另一新离心管管中，注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质。移入新管，加入等体积的-20℃预冷异丙醇，充分颠倒混匀，置于冰上10分钟；
④12000rpm高速离15分钟后小心弃掉上清液，按1mL/mL Trizol的比例加入75％DEPC乙醇洗漆沉淀(4℃保存)，洗漆沉淀物，振荡混合，4℃下 12000rpm高速离心5分钟；
⑤弃去乙醇液体，室温下放置5分钟以充分晾干沉淀，加入DEPC处理过的水溶解沉淀；
⑥用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度，冻存于 -80℃。RNA质量判定标准：RNA样本的OD260/OD280值为1.7-2.2之间；总 RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带；70℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。
3、RNA样品的质量分析
RNA提取后琼脂糖凝胶电泳，从电泳结果可以初步判定提取的RNA样品质量合格与否，是否可以用于进一步的转录组分析。进而通过 NanoDrop1000分光光度计检测RNA样品的提取情况，RNA-seq测序的样品要求：OD260/OD280为1.8-2.2。
4、高通量测序
测序平台为Illumina公司的HiSeq 2500高通量测序平台，进行高通量转录组深度测序，测序后我们运用Fast-QC(http://www.bioinformatics.babraha m.ac.uk/projects/fastqc/)软件对测序数据的质量进行整体评估，包括碱基的质量值分布，质量值的位置分布，GC含量，PCR duplication含量，kmer的fr equency等。在差异基因表达分析时，根据得到的FPKM值，采用国际公认算法EBSeq进行差异筛选。其中，筛选时，Log2(FC)>1或<-1，FDR<0.0 5。为了更好的理解差异表达基因的功能，我们对差异表达基因进行了GeneOntology和信号通路分析，并对差异表达基因进行功能注释，鉴于以上数据分析的结果，结合文献我们筛选了差异表达的MYCBP2-AS1，该lncRNA在宫颈癌组织样本中表达上调。
实施例2 RT-PCR验证宫颈癌组织MYCBP2-AS1表达情况
1、材料
20例宫颈癌组织样本和8例癌旁组织样本取自吉林大学中日联谊医院妇产科2013年11月到2015年11月期间宫颈癌手术中，对其进行分组及编号。所有样本均经过病理学检查证实。所有样本编号后置-80℃低温冰箱保存。
2、方法
2.1对组织样本进行总RNA提取，同实施例1的提取方法。
2.2逆转录合成cDNA
采用 III Reverse Transcriptase(invitrogen，货号18080-044)进行cDNA反转录，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：
使用逆转录试剂盒，用逆转录缓冲液对lμg总RNA进行逆转录合成 cDNA。采用25μL反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA。将获得的cDNA样品稀释10倍后保存在-20℃冰箱备用。
2.3Real-Time PCR
2.3.1仪器及分析方法
用ABI 7500型荧光定量PCR仪，采用2-ΔΔCt法进行数据相对定量分析。
2.3.2引物设计
采用在线引物设计软件，基因序列参照chr13:76990659-77327044 (MYCBP2-AS1)，内参选GAPDH，引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如下：
表1引物序列
操作过程如下：
表2 Real Time反应体系
组分 加入量
2×mix 10μL
上游引物(10μM) 0.5μL
下游引物(10μM) 0.5μL
模板 2μL
加入灭菌蒸馏水 至25μL
用Power Green PCR Master Mix(invitrogen，货号4367659)分别对目的基因引物和内参基因引物进行扩增。实验操作按产品说明书进行。扩增程序为：95℃5min，(95℃15sec，60℃45sec，72℃35sec)×40个循环。同时在60-95℃进行溶解曲线分析。反应结束后，取5ul的PCR产物进行2％琼脂糖电泳，用快速胶回收试剂盒(invitrogen公司)将大小为227bp 的片段进行切胶回收并测序，结果用blast软件进行同源性分析。
3、实验结果
实时定量PCR扩增曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，表明各反应管的扩增效率相近，基线平而无上扬现象，曲线指数期斜率较大，说明扩增效率较高；样本扩增产物溶解曲线都是单峰，说明扩增产物只有一条，为特异性扩增；根据qRT-PCR的相对定量公式：2-ΔΔCt×100％，比较MYCBP2-AS1 在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达水平。结果显示：qRT-PCR扩增结果稳定，其中MYCBP2-AS1在宫颈癌组织中的表达水平为癌旁组织的5倍(见图1)，以上结果验证了高通量转录组表达数据的整合分析MYCBP2-AS1在宫颈癌患者中表达上调的结果；RT-PCR产物经回收后，在ABI3730全自动测序仪上测序，该227bp的片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。用Vector NTI advance 10软件(Invitrogen公司)将该序列与MYCBP2-AS1整个lncRNA 序列进行比对，比对结果显示，如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列为 MYCBP2-AS1基因的一部分序列，符合率为100％。
实施例3 RNAi干扰MYCBP2-AS1表达及对宫颈癌细胞的影响
一、材料
1、细胞来源
人子宫颈癌细胞C-33A(购自ATCC细胞库)；
2、siRNA设计与合成
依据在线设计软件siDirect version 2.0(http://design.rnai.jp/)，根据基因序列参照chr13:76990659-77327044，设计相应的siRNA，具体序列见表3。设计后送往合成公司合成。
表3 siRNA序列列表
二、实验方法
1、细胞分组
C组：空白对照组；C1组：转染脂质体组；C2组：转染非特异性的 siRNA-NC组；S1，S2组：转染特异性的siRNA组。
2、转染
按照LipofectamineTM2000Transfection Reagent提供的步骤进行。
(1)将C-33A细胞系接种在6孔板上，使得24小时内细胞汇合达到70％；
(2)准备siRNA-LipofectamineTM 2000复合物:
a.以250μL Opti-MEM稀释5μL LipofectamineTM 2000，轻轻混匀，室温下孵育5分钟。
b.实验各组分别取7.5μL siRNA加入250μL Opti-MEMI中进行稀释，并轻轻摇动将其混匀；
c.孵育5分钟后，将稀释的siRNA和LipofectamineTM 2000混合后在室温下孵育20分钟。
(3)在培养板中的每个孔中都加入细胞、培养基及siRNA-LipofectamineTM 2000复合物。然后轻轻摇动培养板，使他们充分混合；
(4)放置在37℃，CO2培养箱内孵育48小时，在荧光显微镜下观察细胞转染数量，检测转染效率；
(5)转染效率为荧光镜与光镜视野中的细胞数量的比值，细胞的转染效率均达到90％以上，方可以进行后续的实验。计算公式如下：
转染效率＝发荧光细胞的数量/相同视野下的细胞数量×100％
3、应用Real-time PCR方法检测转染前后MYCBP2-AS1表达的变化
(1)标准曲线的构建：选取在50mL培养瓶中正常培养的宫颈癌细胞1瓶，提取RNA，测定RNA浓度和纯度，进行逆转录反应，将反应生成的DNA 模板十倍稀释，得到相当于104-101copies/μL的DNA模板，分别加入 MYCBP2-AS1引物和内参引物，配制25μL反应体系，使用Real-time PCR 扩增仪，进行PCR扩增反应。得到MYCBP2-AS1和内参的标准曲线。
(2)Real-time PCR方法检测转染前后MYCBP2-AS1表达的变化：提取各组细胞的RNA，测定RNA浓度和纯度，进行逆转录反应，每组DNA模板同时进MYCBP2-AS1和内参的Real-time PCR反应，实验重复三次。
(3)对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。
三、实验结果
分别用2条MYCBP2-AS1的siRNA及对照siRNA转染第一代宫颈癌细胞，结果显示在大量宫颈癌细胞内发现绿色荧光，证明宫颈癌细胞内已经得到了siRNA的转染，然后在荧光镜和光镜下观察癌细胞数量，进行转染效率的检测，结果显示转染率均达到90％以上。Real-time PCR结果显示，转染非特异性的siRNA-NC组对宫颈癌细胞中MYCBP2-AS1表达无明显抑制作用，和空白对照组无统计学差异，转染的2个MYCBP2-AS1-siRNA组都对宫颈癌细胞中MYCBP2-AS1表达起到一定抑制作用，MYCBP2-AS1-siRNA1和 MYCBP2-AS1-siRNA2抑制率分别为58％和65％。
实施例4 MTT法检测宫颈癌细胞的增殖情况
一、MTT法实验步骤
1、在96孔板中，按照每孔加入约1×104细胞，然后在37℃5％CO2的条件下培养24小时；
2、按照实验分组(以未转染正常细胞为对照组，转染非特异性siRNA-NC 组、转染MYCBP2-AS1-siRNA2组为实验组，以只加培养基不加细胞的空白对照孔调零，每组6个重复)继续培养直至适合检测；
3、细胞的siRNA转染，转染方法同实施例3。
4、接着在37℃，5％CO2及100％湿度的条件下继续孵育适当时间；
5、同时用Dilution Buffer将5×MTT稀释成1×MTT；
6、接种0h、24h、48h后，在每孔中加入50μL 1×MTT，并在37℃条件下孵育4小时；
7、吸出上清液后，在每孔中还需加入150μL DMSO，并将其放置在平板摇床上进行摇匀；
8、将酶标仪波长设定为570nm，检测每个孔的光密度(OD值)。
9、以各孔光吸收值减去空白孔光吸收值的平均值作为实际光吸收值，取平均值，以0h、24h、48h时间点光吸收值作曲线，反映细胞的增殖情况。
二、实验结果
与未转染对照组相比，转染siRNA-NC对细胞增殖无明显影响，转染MYCBP2-AS1-siRNA2可以明显抑制宫颈癌细胞增殖，可用于宫颈癌药物的制备，抑制率随时间的延长而增加，结果见图2所示。
实施例5宫颈癌检测试剂盒
基于实施例2得到的引物组，组装本发明所述的用于宫颈癌的试剂盒，所述试剂盒包括特异扩增MYCBP2-AS1的引物对如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，和特异扩增内参基因(GAPDH)的引物对如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示；还包括SYBR Green聚合酶链式反应体系，如PCR缓冲液、 SYBR Green荧光染料、dNTPs。所述PCR缓冲液的成分为25mM KCL，2.5mM MgCL2，200mM(NH4)2SO4。
通过对引物浓度和退火温度的优化，确定最佳反应体系如表5所示：
表5 PCR反应体系
组分 加入量
SYBR Green聚合酶链式反应体系 12.5μL
上游引物(10μM) 0.5μL
下游引物(10μM) 0.5μL
模板cDNA 2.0μL
加入灭菌蒸馏水 至25μL
最佳反应条件为：
95℃预变性5min，(95℃变性15sec，60℃退火45sec，72℃延伸35sec) ×40个循环，72℃延伸15min。
取30例待检测宫颈癌病人的少量宫颈癌细胞，待检宫颈癌病人为吉林大学中日联谊医院妇产科就诊宫颈癌患者。使用常规方法(或使用特定的试剂盒)从宫颈癌细胞中提取RNA，使用试剂盒中试剂，按照最佳反应体系与条件进行PCR反应，使用试剂盒中正常组织cDNA作为Real-Time PCR定量检测中的对照cDNA，检测组织样本的MYCBP2-AS1相对正常组织表达量变化，分析检测结果，样本和对照间比较采用t检验，P<0.05为差异显著，判为检测样本阳性。
检测结果显示，在30例待检测病人中，有24例病人的MYCBP2-AS1 在宫颈癌细胞表达水平为正常组织中的3-5倍。经临床进一步检测，该24 例病人确定患有宫颈癌，其他6例没有患有宫颈癌，临床检测结果与本发明制备的试剂盒检测结果一致。据此推断，本发明宫颈癌的诊断试剂盒可以明确区分出宫颈癌患者，并以此为临床提供诊断线索。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 吉林大学
<120> MYCBP2-AS1在制备诊疗宫颈癌产品上的应用
<130> P18029
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 227
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
ccactccagg gcacaatgat ctcaaggttc agcatctcca gagatgagct ttccaaatac 60
ctgatgaaga tatgcatgtg agaaggaatt aatgacaggc attaacacta tattggccag 120
aggactcatt agctgattcc gcaggtttta taatatgcta ctcttgctaa tatacaccac 180
tatttttctt aattacaaat gcaacatgga actcaggtgt ttagggc 227
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ccactccagg gcacaatgat 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gccctaaaca cctgagttcc a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ggagcgagat ccctccaaaa t 21
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ggctgttgtc atacttctca tgg 23
<210> 6
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 6
aucuucauca gguauuugga a 21
<210> 7
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 7
ccaaauaccu gaugaagaua u 21
<210> 8
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 8
uaucuucauc agguauuugg a 21
<210> 9
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 9
caaauaccug augaagauau g 21
<210> 10
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 10
uuaaugacgu ccuugauggg c 21
<210> 11
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 11
ccaucaagga cgucauuaag a 21

Claims (9)

1.MYCBP2-AS1作为分子标记物在制备诊断宫颈癌产品上的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述MYCBP2-AS1在宫颈癌生物学样品中表达上调。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标记物包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为检测个体患有宫颈癌可能性的试剂盒。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括特异性扩增宫颈癌相关的lncRNA的引物和说明书。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括10×Buffer、dNTP、MgCl2、Taq酶和SYBR Green荧光染料。
8.一种MYCBP2-AS1抑制剂，其特征在于，所述抑制剂包括起到降低MYCBP2-AS1表达作用的siRNA。
9.如权利要求8所述的抑制剂，其特征在于，所述siRNA序列为：SEQ ID NO.6和SEQ IDNO.7，SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN105219844A (zh) * 2015-06-08 2016-01-06 刘宗正 一种谱筛查十一种疾病的基因标志物组合、试剂盒以及疾病风险预测模型

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Title
NCBI: "Homo sapiens MYCBP2 antisense RNA 1(MYCBP2-AS1),long non-coding", 《GENEBANK》 *
PUBCHEM: "Lincode siRNA reagent for MYCBP2-AS1", 《HTTPS://PUBCHEM.NCBI.NLM.NIH.GOV/SUBSTANCE/250245837》 *

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