CN108977517A - 一种遗传性耳聋基因的检测方法及检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种遗传性耳聋基因的检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物；遗传性耳聋基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对遗传性耳聋基因筛查，帮助个体充分了解自己的遗传状况，提前采取相应的健康管理措施，能有效预防或延缓耳聋的发生。本发明还涉及一种遗传性耳聋基因的检测试剂盒。

Description

一种遗传性耳聋基因的检测方法及检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物医学领域，尤其是涉及一种遗传性耳聋基因的检测方法及检测试剂盒。
背景技术
有60％的耳聋与遗传因素有关，这其中又有70％为非综合征性耳聋。常染色体基因有两个等位基因，一个来自父方，一个来自母方，其中一个等位基因突变，称“(单)杂合突变”；两个等位基因突变，称“复合杂合突变”或“纯合突变”。与常染色基因线性结构不同，线粒体基因是环性结构，故线粒体基因突变表达方法也不同，常表示为“均质突变”或“异质突变”，前者可理解为纯合突变，后者可理解为单杂合突变。基因碱基缺失(用Del，即delete表示)或替换(用“>”表示)构成病理性变异，称为突变，导致基因功能异常，从而造成耳聋。
因缺乏精准的、高通量的基因突变筛查技术，进而阻碍了精准治疗药物的研发及临床研究。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种遗传性耳聋基因的检测方法和检测试剂盒。
本发明的目的采用以下技术方案实现：
一种遗传性耳聋基因的检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物；遗传性耳聋基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量所述目标DNA序列。
进一步地，所述遗传性耳聋基因片段包括GJB2片段、SLC26A4片段、线粒体12srRNA片段。
进一步地，所述用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述GJB2片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：1，反向引物为SEQ ID Nos：2；用于扩增所述SLC26A4片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQ ID Nos：4；用于扩增所述线粒体12s rRNA片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQ ID Nos：4。
进一步地，所述用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物包括：用于所述GJB2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；用于所述SLC26A4片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：62；用于所述线粒体12s rRNA片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ IDNos：62。
进一步地，所述利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。
进一步地，所述Taq酶激活时温度为95℃。
进一步地，所述Taq酶激活时间为15分钟。
进一步地，所述DNA变性时温度为95℃。
进一步地，DNA变性时间为15秒。
一种遗传性耳聋基因的检测试剂盒，包括：用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物，所述特异性引物包括SEQ ID Nos：1、SEQ ID Nos：2、SEQ ID Nos：3、SEQ ID Nos：4；用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物，所述单碱基延伸引物包括SEQ ID Nos：61、SEQ ID Nos：62。
相比现有技术，本发明通过设计特异性引物扩增遗传性耳聋基因片段，设计单碱基延伸引物使遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸，再通过核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对遗传性耳聋基因筛查，帮助个体充分了解自己的遗传状况，提前采取相应的健康管理措施，能有效预防或延缓耳聋的发生。
附图说明
图1为本发明一种遗传性耳聋基因的检测方法的流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，当组件被称为“固定于”另一个组件，它可以直接在另一个组件上或者也可以存在居中的组件。当一个组件被认为是“连接”另一个组件，它可以是直接连接到另一个组件或者可能同时存在居中组件。当一个组件被认为是“设置于”另一个组件，它可以是直接设置在另一个组件上或者可能同时存在居中组件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
请参阅图1，本发明涉及一种遗传性耳聋基因的检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物；遗传性耳聋基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量所述目标DNA序列。
遗传性耳聋基因片段包括GJB2片段、SLC26A4片段、线粒体12s rRNA片段。
用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述GJB2片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：1，反向引物为SEQ ID Nos：2；用于扩增所述SLC26A4片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQ ID Nos：4；用于扩增所述线粒体12s rRNA片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQ ID Nos：4。
GJB2基因的正向引物SEQ ID Nos：1的序列为：TTGAACGTGTGATTGGCAGAAAC，
GJB2基因的反向引物SEQ ID Nos：2的序列为：GGAATGAGATAGTTTCTG，
SLC26A4基因的正向引物SEQ ID Nos：3的序列为：TCTCCCTCATGACGCTGCGGAA，
SLC26A4基因的反向引物SEQ ID Nos：4的序列为：ATATGGAGTAGGGTCACCCACCC，
线粒体12srRNA基因的正向引物SEQ ID Nos：3的序列为：TCTCCCTCATGACGCTGCGGAA，
线粒体12srRNA基因的反向引物SEQ ID Nos：4的序列为：ATATGGAGTAGGGTCACCCACCC。
用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物包括：用于所述GJB2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；用于所述SLC26A4片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ IDNos：62；用于所述线粒体12s rRNA片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：62。
GJB2基因的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：61的序列为：ACGTTGGATGTCTTCATGAAGACCTCACAG，
SLC26A4基因的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：62的序列为：ACGTTGGATGCCACTAAATCGAGATTTCAC，
线粒体12srRNA基因的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：62的序列为：ACGTTGGATGCCACTAAATCGAGATTTCAC。
利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。Taq酶激活时温度为95℃。Taq酶激活时间为15分钟。DNA变性时温度为95℃。DNA变性时间为15秒。
下表为遗传性耳聋基因片段的引物序列表
本发明还涉及上述遗传性耳聋基因的检测方法中使用的一种遗传性耳聋基因的检测试剂盒，包括：用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物，所述特异性引物包括SEQID Nos：1、SEQ ID Nos：2、SEQ ID Nos：3、SEQ ID Nos：4；用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物，所述单碱基延伸引物包括SEQ ID Nos：61、SEQ ID Nos：62。
本发明通过设计特异性引物扩增遗传性耳聋基因片段，设计单碱基延伸引物使遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸，再通过核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对遗传性耳聋基因筛查，帮助个体充分了解自己的遗传状况，提前采取相应的健康管理措施，能有效预防或延缓耳聋的发生。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
提取样本DNA；
设计用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物；
利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；
设计用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物；
遗传性耳聋基因片段单碱基延伸；
核酸质谱分析测量所述目标DNA序列。
2.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述遗传性耳聋基因片段包括GJB2片段、SLC26A4片段、线粒体12s rRNA片段。
3.根据权利要求2所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物包括：
用于扩增所述GJB2片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：1，反向引物为SEQ IDNos：2；
用于扩增所述SLC26A4片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQID Nos：4；
用于扩增所述线粒体12s rRNA片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQ ID Nos：4。
4.根据权利要求2所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物包括：
用于所述GJB2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；
用于所述SLC26A4片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：62；
用于所述线粒体12s rRNA片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：62。
5.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。
6.根据权利要求5所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述Taq酶激活时温度为95℃。
7.根据权利要求5所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述Taq酶激活时间为15分钟。
8.根据权利要求5所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述DNA变性时温度为95℃。
9.根据权利要求5所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：DNA变性时间为15秒。
10.一种遗传性耳聋基因的检测试剂盒，其特征在于，包括：
用于扩增遗传性耳聋基因片段的特异性引物，所述特异性引物包括SEQ ID Nos：1、SEQID Nos：2、SEQ ID Nos：3、SEQ ID Nos：4；
用于遗传性耳聋基因片段的单碱基延伸引物，所述单碱基延伸引物包括SEQ ID Nos：61、SEQ ID Nos：62。
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