CN1089654A - 1，6-二磷酸果糖的生产方法 - Google Patents
1，6-二磷酸果糖的生产方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1089654A CN1089654A CN 93110528 CN93110528A CN1089654A CN 1089654 A CN1089654 A CN 1089654A CN 93110528 CN93110528 CN 93110528 CN 93110528 A CN93110528 A CN 93110528A CN 1089654 A CN1089654 A CN 1089654A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fdp
- production method
- present
- transformation efficiency
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明是一种生化药品的生产方法，特别涉及
1，6—二磷酸果糖(又称FDP)的生产方法。本方法
以高活性干酵母作底物，采用适当的酶激活剂和抑制
剂调控酶反应，改变细胞壁透性，使FDP通过细胞
膜进入到溶液中，使FDP不断积累，获得FDP对无
机磷高达90％以上的转化率。解决了国内外目前生
产FDP的方法中酶流失过大、副产品过多、工艺流
程复杂过长、操作繁琐以及转化率过低的缺陷。
Description
本发明是一种生化药品的生产方法，特别涉及1，6-二磷酸果糖的生产方法。
1，6-二磷酸果糖，又称FDP（Fructose-1，6-diphosphate），是一种重要的有机磷药物。目前，国际上普遍采用葡萄糖的磷酸化进行FDP的商业化生产，利用有机溶剂甲苯处理酵母细胞，增强其透性，通过Harden-Young发酵法合成FDP;德国《生物化学》杂志1986年8月期上公开了一种“用戊二醛交联酵母细胞连续化生产FDP”，它是在上述生产方法基础上作了适当改进，利用戊二醛把酶固定在酵母上，以防止酶的渗漏，另外，国际上也有用中空纤维超滤分离可渗透的底物，以利连续化生产FDP。
但是，在用上述这些方法生产FDP的过程中，酶流失过大，副产品也多，且工艺流程复杂、过长，操作繁琐。最致命的是FDP的转化率太低，最高只有55%。
本发明的目的就是采用适当的酶激活剂和抑制剂调控酶反应，提高葡萄糖和无机磷的转化率以及发酵单位，简化工艺流程，稳定质量，提高FDP的转化率并降低工业化生产FDP的成本。
本发明的其它目的和优点将在下面的说明中作进一步的阐述。
本发明的基本原理就是改变细胞壁透性，使FDP通过细胞膜进入到溶液中，选择适当的金属离子和AMP/ATP的比例，提高果糖激酶的活性，使FDP不断积累。
根据这一原理及技术方案，制定出如下的生产方法并得以实现。
实施例1：
在150升敞口式发酵罐或摇瓶里加入100升混合液，该混合液由
0.5M 葡萄糖
0.2M NaH2PO4
0.2M Na2HPO4
4g/l 酵母膏
组成，加热并保温在35°-37℃，此时以高活性干酵母12.5kg作底物加入到该混合液中，开动搅拌机搅拌并保温在36°-38℃;待搅拌均匀后加入1升6%的胞质分离剂甲苯，破坏细胞壁，使FDP从细胞内流到溶液中，溶液成细胞悬浮液，再加入8g/l氯化镁，继续搅拌，激活酶的活性，使FDP累积速度加快，3小时30分钟后停止反应，加热至80℃，灭酶;然后将反应液倒入离心机内离心后，得到FDP清液87升，其中含208mMFDP和36mM无机磷，FDP对无机磷的得率为90.5%，大大高于其他方法。
实施例2：
在150升反应罐中加入100升混合液，由
0.40M 葡萄糖
0.15M 磷酸氢二钠
0.25M 磷二氢钠
4g/l 酵母膏
组成，加热并保温在35°-37℃，加入高活性干酵母13Kg作底物，搅拌均匀后再加入6-10g/l氯化镁，搅拌均匀后加入4.5%的Triton X-300，在36°-38℃温度下搅拌，3小时后中止反应，再加温至80℃灭酶，离心后得86升FDP清液，每升含有214.5mMFDP和30mM无机磷，FDP对无机磷的转化率为92%。
Claims (1)
1、1，6--二磷酸果糖的生产方法，其特征在于：
(1)在敞口式发酵罐或摇瓶里加入混合液，由
0.5M 葡萄糖
0.2M Na2HPO4
0.2M NaH2PO4
4g/l 发酵膏
组成，加温在35°-38℃；
(2)在上述混合液中加入干酵母，一边缓慢搅拌，保温在35-39℃；
(3)加入5-6%的胞质分离剂甲苯或Triton-X100，使之成细胞悬浮液；
(4)以6-10g/l的Mg离子作酶激活剂加入到细胞悬浮液中；
(5)保持反应时间2小时45分至3小时45分；
(6)停止反应并加热至80℃，灭酶；
(7)将反应液送入离心机里离心，得到FDP清液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 93110528 CN1089654A (zh) | 1993-01-11 | 1993-01-11 | 1，6-二磷酸果糖的生产方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 93110528 CN1089654A (zh) | 1993-01-11 | 1993-01-11 | 1，6-二磷酸果糖的生产方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1089654A true CN1089654A (zh) | 1994-07-20 |
Family
ID=4988385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 93110528 Pending CN1089654A (zh) | 1993-01-11 | 1993-01-11 | 1，6-二磷酸果糖的生产方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1089654A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0814087A2 (en) | 1996-05-08 | 1997-12-29 | Cypros Pharmaceutical Corporation | Partially lyophilized fructose-1,6-diphosphate (FDP) for injection into humans |
| US5731291A (en) * | 1996-05-08 | 1998-03-24 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Partially lyophilized fructose-1,6-diphosphate (FDP) for injection into humans |
| US5944020A (en) * | 1997-02-25 | 1999-08-31 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Use of fructose-1 6-diphosphate as an inotrope drug after cardiopulmonary bypass surgery |
| US6074658A (en) * | 1997-10-03 | 2000-06-13 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Treatment of sickle cell anemia crises with fructose-1, 6-diphosphate as an analgesic drug |
| US6076528A (en) * | 1996-05-09 | 2000-06-20 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Injection of fructose-1,6-diphosphate (FDP) prior to coronary artery bypass grafting surgery |
| CN1322000C (zh) * | 2003-01-20 | 2007-06-20 | 赵建安 | 果糖－1，6－二磷酸及其制备方法和用途 |
| CN101691566B (zh) * | 2009-09-02 | 2010-09-01 | 赵军 | 果糖二磷酸钠(fdp)含量测定专用固体复合酶(ald、tim、gdh)试剂 |
| CN104497060A (zh) * | 2014-12-26 | 2015-04-08 | 精晶药业股份有限公司 | 一种制备无菌果糖二磷酸精氨酸盐的方法 |
| CN109223709A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-01-18 | 北京华靳制药有限公司 | 一种果糖二磷酸钠注射液的制备方法 |
-
1993
- 1993-01-11 CN CN 93110528 patent/CN1089654A/zh active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0814087A2 (en) | 1996-05-08 | 1997-12-29 | Cypros Pharmaceutical Corporation | Partially lyophilized fructose-1,6-diphosphate (FDP) for injection into humans |
| US5731291A (en) * | 1996-05-08 | 1998-03-24 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Partially lyophilized fructose-1,6-diphosphate (FDP) for injection into humans |
| US6076528A (en) * | 1996-05-09 | 2000-06-20 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Injection of fructose-1,6-diphosphate (FDP) prior to coronary artery bypass grafting surgery |
| US5944020A (en) * | 1997-02-25 | 1999-08-31 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Use of fructose-1 6-diphosphate as an inotrope drug after cardiopulmonary bypass surgery |
| US6074658A (en) * | 1997-10-03 | 2000-06-13 | Cypros Pharmaceutical Corp. | Treatment of sickle cell anemia crises with fructose-1, 6-diphosphate as an analgesic drug |
| US6312707B1 (en) | 1997-10-03 | 2001-11-06 | Questcor Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of sickle cell anemia crises with fructose-1,6-diphosphate as an analgesic drug |
| CN1322000C (zh) * | 2003-01-20 | 2007-06-20 | 赵建安 | 果糖－1，6－二磷酸及其制备方法和用途 |
| CN101691566B (zh) * | 2009-09-02 | 2010-09-01 | 赵军 | 果糖二磷酸钠(fdp)含量测定专用固体复合酶(ald、tim、gdh)试剂 |
| CN104497060A (zh) * | 2014-12-26 | 2015-04-08 | 精晶药业股份有限公司 | 一种制备无菌果糖二磷酸精氨酸盐的方法 |
| CN109223709A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-01-18 | 北京华靳制药有限公司 | 一种果糖二磷酸钠注射液的制备方法 |
| WO2020083341A1 (zh) * | 2018-10-25 | 2020-04-30 | 北京华靳制药有限公司 | 制备含有果糖二磷酸钠的溶液的方法和应用、制备果糖二磷酸钠注射液的方法 |
| CN109223709B (zh) * | 2018-10-25 | 2020-12-08 | 北京华靳制药有限公司 | 一种果糖二磷酸钠注射液的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4451566A (en) | Methods and apparatus for enzymatically producing ethanol | |
| Langer et al. | Enzymatic regeneration of ATP. I. Alternative routes | |
| CN1089654A (zh) | 1，6-二磷酸果糖的生产方法 | |
| Yu et al. | Mechanistic studies of the biosynthesis of 3, 6-dideoxyhexoses in Yersinia pseudotuberculosis. Purification and stereochemical analysis of CDP-D-glucose oxidoreductase. | |
| Campbell et al. | Enzymatic recycling of coenzymes by a multi-enzyme system immobilized within semipermeable collodion microcapsules | |
| US4935360A (en) | Process for the microbial anaerobic production of acetic acid | |
| Fessner et al. | 6-deoxy-L-lyxo-and 6-deoxy-L-arabino-hexulose 1-phosphates. Enzymatic syntheses by antagonistic metabolic pathways | |
| CN105925643A (zh) | 酶法催化制备肌醇的方法及其产物 | |
| WO2023273960A1 (zh) | 一种腺苷参与的nmn半合成方法 | |
| Wong et al. | Regeneration of NAD (P) H using glucose-6-sulfate and glucose-6-phosphate dehydrogenase | |
| US5094947A (en) | Process for producing fructose-1,6-diphosphate | |
| Jin et al. | Enzymatic production of enantiopure ketoprofen in a solvent-free two-phase system | |
| HÄggström et al. | Continuous production of butanol with immobilized cells of Clostridium acetobutylicum | |
| ES2174082T3 (es) | Procedimiento de preparacion de acido lactico puro. | |
| ES2004774A6 (es) | Proceso y planta para la produccion continua de bifosfato de fructosa-1,6 mediante empleo de levadura inmovilizada | |
| Kim et al. | Enzyme-catalyzed synthesis of nucleoside triphosphates from nucleoside monophosphates: ATP from AMP and Ribavirin 5′-triphosphate from Ribavirin 5′-monophosphate | |
| CN101503432B (zh) | 5'-脱氧核苷单磷酸的制备方法 | |
| CN114262726A (zh) | 一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法 | |
| Kotani et al. | Asymmetric hydrolysis of prochiral dimethyl 3-benzyloxycarbonylaminoglutarate with microorganisms. Preparation of (S)-3-amino-4-methoxycarbonylbutyric acid for the synthesis of carbapenem and negamycin antibiotics | |
| CN110923275B (zh) | 谷氨酸的发酵和提取工艺 | |
| CN101012469A (zh) | 一种利用麦芽根复合磷酸酯酶制备5’－核苷酸的方法 | |
| CN113249372A (zh) | 一种用于甘露糖生产的固定化细胞的制备方法及其应用 | |
| CN1124349C (zh) | 酵母细胞转化葡萄糖制备阿拉伯糖醇的方法 | |
| CN114457133B (zh) | 一种以n-乙酰葡萄糖胺发酵液为底物全细胞催化生产n-乙酰神经氨酸的方法 | |
| CN1089655A (zh) | 果糖二磷酸钠发酵生产方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C01 | Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |